旱莲草对老年痴呆模型大鼠空间学习记忆及海马神经元突触可塑性的影响

目的:观察旱莲草对D-半乳糖联合β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)致老年痴呆(Alzheimer’s disease,AD)模型大鼠空间学习记忆及海马神经元突触可塑性的影响。方法:选用健康成年SD大鼠,随机分为对照组、模型组、药物低剂量组、高剂量组,每组11只。采用皮下注射D-半乳糖联合双侧海马注射Aβ25-35构建痴呆模型大鼠,同时每天给予低剂量(8 g/kg)或高剂量(24 g/kg)的旱莲草水提物灌胃治疗8周。用药结束后,用Morris水迷宫测试大鼠空间学习记忆功能,采用高频刺激(HFS)Schaffer侧支,在同侧海马CA1区诱导长时程增强(LTP)的方法检测大鼠海马神经元突触可塑性的变化。结果:Morris水迷宫实验结果显示:与对照组相比,模型组大鼠的逃避潜伏期(EL)明显延长(P<0.01)、平台所在象限的距离百分比明显减低(P<0.01);药物低剂量组、高剂量组的EL与模型组相比有明显缩短(P<0.05),平台所在象限的距离百分比明显增多(P<0.01);药物高剂量组的EL较低剂量组缩短(P<0.05),平台所在象限的距离百分比增多(P<0.05)。模型组与对照组相比海马CA1区LTP幅度显著降低(P<0.01);药物低剂量组与模型组比较,PS幅度差异不明显(P>0.05);而药物高剂量组PS幅度明显高于模型组和低剂量组,能减轻D-半乳糖联合Aβ25-35对海马CA1区LTP的抑制作用,改善突触功能的可塑性(P<0.01)。结论:旱莲草对老年痴呆模型大鼠空间学习记忆功能具有改善作用,其机制之一可能与提高大鼠海马CA1区的LTP,明显改善突触的可塑性有关。     

D-半乳糖联合染铝大鼠海马结构Aβ及相关蛋白的表达

目的:探讨D-半乳糖联合染铝的阿尔茨海默病大鼠海马结构Aβ及其相关蛋白的表达及其分布。方法:30只雄性SD大鼠随机分为2组,即:对照组和模型组(n=15)。模型组每日腹腔注射D-半乳糖60 mg/kg和灌胃三氯化铝500 mg/kg,连用60 d;对照组给予等量生理盐水进行腹腔注射和灌胃。铃木镀银法观察神经原纤维缠结的形成,确定模型是否成功。免疫组织化学法观察海马结构三个亚区的Aβ、β分泌酶(BACE)和早老素-1(PS-1)蛋白的表达。结果:铃木镀银染色可见模型组大鼠颞叶、顶叶皮层及海马神经元内的神经原纤维缠结。模型组大鼠海马CA1、CA3区及齿状回Aβ表达较强,与对照组相比差异显著(P<0.01);模型组海马CA3区神经元的BACE和PS-1蛋白表达量较对照组明显增加(P<0.01)。结论:D-半乳糖联合染铝的阿尔茨海默病大鼠海马结构Aβ、BACE及PS-1表达均明显上调,可能是导致AD大鼠功能障碍的主要原因。     

氯胺酮上调GSK-3β活性加重Aβ25-35诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨氯胺酮对凝聚态Aβ<,25-35>诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)Tau蛋白过度磷酸化的影响及可能作用的机制.方法 将培养的PC12细胞随机分为对照组(C)、10 μmol/L Aβ<,25-35>(A组)、1 mmol/L氯胺酮(K组)、氯胺酮和Aβ<,25-35>(AK组),作用时间均为6 h....     

红景天素改善D-半乳糖-Aβ脑内注射老年痴呆模型鼠的行为障碍

健康Wister雄性大鼠连续 6周腹腔内注射D 半乳糖 ,双侧海马内注射Aβ1-40 造成老年痴呆 (AD)模型。以Y 型迷宫实验检测大鼠的学习记忆行为 ,测定大脑皮层脂褐素含量以及海马线粒体膜流动性、SOD活性、MDA含量 ,电镜观察海马超微结构 ,了解观察褪黑素及红景天素对老年性痴呆模型大鼠的治疗作用。结果显示 ,褪黑素、红景天素均能显著改善痴呆大鼠的学习记忆障碍 ,使大鼠在Y 型迷宫中的训练次数减少 ,对照组 (C组 )、痴呆组 (D组 )、红景天治疗组 (R)组、褪黑素治疗组 (M组 )及联合治疗组 (RM组 )达到学会标准的训练次数分别是 2 7 92± 7 2 9,39 14± 12 35 ,2 8 15± 10 34,2 9 78± 15 74和 2 6 71± 14 70 ,明显逆转痴呆大鼠海马SOD活性的代偿性升高 (R组、M组、RM组中SOD分别降低 4 3 8%、6 1 2 %、5 8 2 % )、减少MDA含量及皮层脂褐素含量 (R组、M组和RM组中MDA分别降低 2 5 9%、2 9 6 %、5 8 5 % ;脂褐素含量减少百分数分别为 36 %、32 %和 5 2 % ) ,防止海马神经元的变性及凋亡。结果提示 ,褪黑素、红景天素治疗后的大鼠与痴呆组相比 ,行为障碍明显改善 ,自由基含量显著下降 ,海马锥体细胞的变性和凋亡现象明显好转。提示两种药物对AD模型大鼠均有一定的防治作用 ,但两者的协同效果不明显     

抗阿尔茨海默症单链抗体的制备与体外活性研究

目的:制备靶向β-淀粉样蛋白(Aβ)的单链抗体(scFv),探究其体外活性。方法:原核表达系统对scFv进行表达。ELISA、免疫组化法检测scFv与Aβ的结合活性;Western blot、硫黄素-T法检测scFv对Aβ寡聚体、纤维形成的抑制作用;MTT法检测scFv对Aβ寡聚体产生细胞毒性的保护作用。结果:成功获得12B4-scFv,该抗体能与各种形式的Aβ结合,并有效抑制Aβ寡聚体及纤维的形成,对Aβ寡聚体产生的细胞毒性起到保护作用。结论:成功制备靶向Aβ的scFv具有良好的生物活性。     

碱性成纤维细胞生长因子对AD细胞模型ERK1/2活性的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对阿尔茨海默病(AD)细胞模型中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)表达影响.方法 经体外培养的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)分正常对照组(常规培养液)、Aβ损伤组(即AD细胞模型,加入Aβ25-35)、bFGF组(加入bFGF及Aβ25-35)和抑制剂组(加入MEK抑制剂PD98059、bFGF和老化Aβ25-35).MTT怯检测不同处理组PC12细胞存活率,Western Blot免疫印迹法分析P-ERK1/2蛋白表达变化.结果 Aβ损伤组PC12细胞存活率低于正常对照组(P＜0.05),bFGF组细胞存活率高于A β损伤组(P＜0.01).Western Blot结果显示,Aβ损伤组p-ERK1/2相对表达值较对照组显著下降,A β损伤组在加入不同浓度的bFGF后p-ERK1/2的相对表达值较A β损伤组显著增强,抑制剂组在加入不同浓度的PD98059后p-ERK1/2的相对表达值较bFGF组p-ERK1/2显著下降.结论 bFGF对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有一定保护作用,可能与增强PC12细胞ERK1/2活性有关.     

枫叶黄酮对老年痴呆动物模型的抗氧化作用及分子机制

目的:构建β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)联合D-半乳糖(D-gal)致痴呆模型,探讨枫叶黄酮抗氧化作用的分子机制。方法:36只成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、治疗组。采用侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)联合腹腔注射D半乳糖(D-gal)构建SD大鼠痴呆模型后经枫叶黄酮治疗,采用Morris水迷宫实验(MWM)检测大鼠学习记忆能力;用化学比色法检测大脑皮质丙二醛(MDA)和内源性巯醇抗氧化物(酶):谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量;免疫印迹法检测大脑皮质中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族相关蛋白:细胞外信号调节蛋白激酶(extra-cellular signal-regulated protein kinase,ERK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化水平。结果:模型组与假手术组比较:大鼠的逃避潜伏期明显延长(P<0.05),在第Ш象限逗留的时间明显减少(P<0.05),跨越平台次数明显减少(P<0.05);大脑皮质MDA含量增加(P<0.05),GR、GSH-PX的含量降低(P<0.05);p38、JNK磷酸化增强,ERK磷酸化水平降低。而枫叶黄酮治疗后:大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),在第Ⅲ象限逗留的时间明显增加(P<0.05),跨越平台次数明显增加(P<0.05);大脑皮质MDA含量降低(P<0.05),GR、GSH-PX的含量升高(P<0.05);p38、JNK磷酸化被抑制,ERK的磷酸化增加。结论:枫叶黄酮能改善学习记忆能力,对抗大鼠神经系统衰老。其作用可能是通过上调痴呆模型大鼠大脑皮质内源性巯醇抗氧化物(酶)GR和GSH-PX的含量,抑制p38、JNK磷酸化并增强ERK磷酸化而实现的。     

碱性成纤维细胞生长因子对AD细胞模型ERK1/2活性的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对阿尔茨海默病(AD)细胞模型中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)表达影响。方法经体外培养的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)分正常对照组(常规培养液)、Aβ损伤组(即AD细胞模型,加入Aβ)、bFGF组(加入bFGF及Aβ)和抑制剂组(加25-3525-35入MEK抑制剂PD98059、bFGF和老化Aβ)。MTT法检测不同处理组PC12细胞存活率,WesternBlot免疫印迹25-35法分析p-ERK1/2蛋白表达变化。结果 Aβ损伤组PC12细胞存活率低于正常对照组(P<0.05),bFGF组细胞存活率高于Aβ损伤组(P<0.01)。WesternBlot结果显示,Aβ损伤组p-ERK1/2相对表达值较对照组显著下降,Aβ损伤组在加入不同浓度的bFGF后p-ERK1/2的相对表达值较Aβ损伤组显著增强,抑制剂组在加入不同浓度的PD98059后p-ERK1/2的相对表达值较bFGF组p-ERK1/2显著下降。结论 bFGF对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有一定保护作用,可能与增强PC12细胞ERK1/2活性有关。     

碘乙酰胺对Aβ海马注射AD模型大鼠认知及生化作用的研究

目的:探讨胰岛素降解酶激动剂碘乙酰胺对AD模型大鼠认知、病理及生化指标的影响。 方法:采用立体定向海马CA3区注射Aβ42建立AD大鼠模型，外周皮下注射碘乙酰胺干预，观察大鼠morris水迷宫逃避潜伏期和穿越平台次数的变化，同时进行Aβ免疫组化和ELISA定量测定。 结果:Aβ+碘乙酰胺组海马Aβ沉积明显少于Aβ组（23.9%），Aβ含量亦少（24%），水迷宫认知测试表现优于Aβ组。 结论:碘乙酰胺可显著减少AD模型大鼠的脑内Aβ沉积，改善其认知水平。     

Aβ_((31-35))和ApoE_4对培养大鼠海马神经元的存活和生长的影响

为探讨β-淀粉样蛋白 ( Aβ)和载脂蛋白 E4( Apo E4)对培养大鼠海马神经元的作用 ,本文采用了神经细胞培养、MTT比色法、免疫组化及图象分析等技术进行了研究。结果显示 :( 1) MTT法测得 Aβ( 3 1 - 3 5) ( 10 μmol/ L) +Apo E4( 10 μg/ ml)和 Aβ( 3 1 - 3 5)( 2 0μmol/ L ) +Apo E4( 10μg/ ml)的 OD值 ,分别为 0 .197± 0 .0 2 1和 0 .191± 0 .0 2 4,明显低于对照组 ( 0 .2 2 9± 0 .0 3,P<0 .0 5 )。( 2 )这两组神经元胞体的最长径分别为 ( 10 .0 7± 1.98)μm和 ( 10 .0 1± 1.6 8)μm;最短径分别为 ( 6 .40± 0 .77)μm和 ( 6 .2 8± 0 .89) μm,明显低于对照组、Apo E4组、Aβ( 3 1 - 3 5) 组的最长径和最短径 ( P<0 .0 5 ) ;其突起平均长度分别为 ( 2 6 .36± 7.73) μm和 ( 2 3.86± 7.2 9)μm,明显低于对照组 ( 30 .88± 9.79)μm、Apo E4组 ( 30 .6 0± 7.30 )μm以及 Aβ( 3 1 - 3 5) ( 10μmol/ L )组 ( 2 8.34± 4.40 )μm( P<0 .0 5 )。 ( 3) Aβ( 3 1 - 3 5) ( 2 0 μmol/ L)组的突起平均长度为 ( 2 6 .81± 5 .42 ) μm,也明显低于对照组 ( 30 .88± 9.79) μm和Apo E4组 ( 30 .6 0± 7.30 )μm ( P<0 .0 5 )。本研究结果提示 ,Aβ( 3 1 - 3 5) +Apo E4对神经元的抑制作用较 Aβ(     

苯妥英钠致大鼠骨质疏松模型的建立及维生素D预防作用的观察

目的：研究苯妥英钠致骨质疏松作用及维生素D的预防作用。方法：将40只SD雄性大鼠随机分为4组(苯妥英钠模型组、D–半乳糖模型组、维生素D预防组、正常对照组),每组10只。其中,用苯妥英钠对苯妥英钠模型组及维生素D预防组大鼠连续灌胃60 d [54 mg/(kg?d)]。60 d后,对苯妥英钠模型组、D–半乳糖模型组、维生素D预防组和正常对照组的相关指标进行检测及比较组间差异。结果：苯妥英钠模型组骨钙[(592.87±120.89)μg]、磷[(173.88±15.98)μg]及血清钙[(2.65±0.09) mmol/L]、磷[(2.13±0.29) mmol/L]、超氧化物歧化酶[(104.40±3.58) NU/mgPro]含量均比正常对照组显著降低(P<0.01),血清碱性磷酸转移酶[(136.00±1.82) U/L]与正常对照组相比有显著升高(P<0.01),骨羟脯氨酸含量[(1128.974±460.77)μg],虽缺乏统计意义但相比于正常对照组仍有所降低,上述变化与D–半乳糖模型组的变化趋势相同,并比后者的变化更加显著。结论：长期大量摄入苯妥英钠可以导致大鼠发生骨质疏松的可能性增加,维生素D可以阻止或减缓这种变化趋势。     

阿尔茨海默病模型大鼠海马结构Akt磷酸化与caspase 3表达的相关性研究

目的探讨Aβ所致阿尔茨海默病（AD）模型大鼠Akt的磷酸化水平与caspase 3在海马结构神经元的表达及其分布。方法选用24只3月龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组和模型组（侧脑室注射10μg Aβ25-35）。免疫组化方法观察caspase-3在海马结构神经元（海马CA1、CA3和齿状回）的表达;Western blot方法检测海马结构神经元Akt的磷酸化水平。结果模型组海马结构3个亚区神经元的caspase-3的平均光密度值均较对照组明显增高（P〈0.01）;模型组P-Akt的表达量较对照组明显下调（P〈0.05）。结论 Aβ25-35可能是通过下调Akt的磷酸化水平促进caspase-3的表达,进而导致海马结构神经元的凋亡。     

Focusing on the structure and the function of Pin1: New insights into the opposite effects of fever on cancers and Alzheimer’s disease

A new molecular mechanism is proposed to explain the opposite effects of fever on cancers and Alzheimer’s disease (AD). The proposal is based on the experimental discovery that the fever stress interferes the structure and the activity of Pin1, which plays uniquely opposite roles in the pathogenesis of cancers and AD. Pin1 is the only known cis–trans isomerase that specifically isomerizes the pSer/pThr-Pro motifs in proteins, facilitating kinds of signaling pathways. The up-regulation of Pin1 can amplify multiple oncogenic signaling pathways, resulting in cancers, while the down-regulation of Pin1 can cause many pathological characteristics of AD. Recently, we found that Pin1 is sensitive to heat treatment, and heating can gradually damage both of the structure and the function of Pin1. So, we hypothesize that the fever stress, which is usually induced by febrile diseases or hyperthermia treatment, may lead to the damaged structure of Pin1 and the decreased activity of it in vivo, resulting in the decreased risk of cancers and the increased risk of AD. Numerous epidemiological and experimental researches on cancers and AD support the hypothesis. The hypothesis not only provides new insights into the opposite effects of fever on cancers and AD, but also gives new clues for understanding the interacting effects of the environmental and the genetic factors in the complicated pathogenesis of cancers and AD.     

Estrogenic effects on behavioral thermoregulation and body temperature of rats

Estradiol benzoate increases responding for heat reinforcement of ovariectomized female and intact and castrate male rats placed in the cold. In females, both pre- and postsession rectal temperatures are depressed by the steroid. The maintenance of low temperatures despite increased heat intake suggests that body temperature is regulated at a lower level as a result of estradiol-induced increases in heat loss or decreases in heat production.     

Delayed effects of 1,2-epoxypropyltrimethylammonium chloride on behavioral reactions in rats

We studied immediate and delayed effects of intraventricular injection of 1,2-epoxypropyltrimethylammonium chloride on behavioral reactions in rats. Apomorphine-induced yawning increased and orientation and exploratory activity was improved 144 h postinjection, which indicates activation of the brain dopaminergic system during this period.     

三七皂苷Rg1调控SD大鼠海马抗氧化物(酶)抗衰老的作用研究

目的:探讨三七皂苷Rg1(notoginsenoside,Rg1)抗衰老的分子机制。方法:将90只SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、治疗组。采用侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)联合腹腔注射D-半乳糖(D-gal)构建SD大鼠衰老模型,并同时给予三七皂苷Rg1预防性治疗,采用Morris水迷宫实验(MWM)进行空间学习记忆能力检测;用化学比色法检测海马谷胱甘肽还原酶(GR)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)的含量;用免疫组织化学法和免疫印迹法(Western Blot)检测海马中caspase-3前体蛋白和Bcl-2的含量。结果:衰老模型组与假手术组比较:逃避潜伏期明显延长(P0.05),在第Ⅲ象限逗留的时间明显减少(P0.05),跨越平台次数明显减少(P0.05);海马GR和T-SOD的含量降低(P0.05),caspase-3前体蛋白阳性神经元数明显减少(P0.05),caspase-3前体蛋白活化切割增加(P0.05);而三七皂苷Rg1处理后:大鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05),在第III象限逗留的时间明显增加(P0.05),跨越平台次数明显增加(P0.05),海马GR和T-SOD的含量升高(P0.05),caspase-3前体蛋白阳性神经元数明显增加(P0.05),caspase-3前体蛋白活化切割减少(P0.05)。而Bcl-2阳性神经元数及表达在三组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论:三七皂苷Rg1能通过上调衰老模型大鼠海马抗氧化物(酶)GR和T-SOD的含量、抑制凋亡相关蛋白caspase-3前体蛋白的活化切割,而改善学习记忆能力,对抗大鼠神经系统衰老。     

The effects of dentate granule cell destruction on behavioral activity and Fos protein expression induced by systemic MDMA in rats

In this study, we examined the effect of the s.c. administration of (+/-) 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA) or saline on locomotor activity and Fos expression following the bilateral destruction of hippocampal dentate granule cells by colchicine in rats. The lesioned animals, when administered s.c. saline, showed a significantly greater increase in locomotor activity compared to the intact animals, and revealed a marginally significant level of increased locomotor activity compared to the sham-lesioned animals. In addition, when the lesioned animals were given s.c. saline or MDMA, there was a significant increase in Fos expression in the nucleus accumbens core, but not in the medial prefrontal cortex, dorsolateral prefrontal cortex, anterior cingulate cortex, piriform cortex, dorsal striatum, or nucleus accumbens shell, compared to the intact and sham-lesioned animals. Overall, these results suggest that the nucleus accumbens core may be involved in the enhancement of locomotor activity induced by the injection of saline alone (stress loading) or MDMA following bilateral destruction of hippocampal dentate granule cells by colchicine.