RNA沉默Slug基因对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭及血管生成的影响

目的:研究Slug-shRNA-1干扰Slug基因对MCF-7侵袭潜力及诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法:通过体外侵袭模型,测定MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后穿透Matrigel的潜力;应用MCF-7与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响。结果:siRNA-Slug作用于Slug基因后能明显降低MCF-7穿透Matrigel的能力(P<0.05),抑制MCF-7诱导HUVEC形成管腔样结构的能力(P<0.05)。结论:Slug-shRNA-1作用于Slug基因后能明显降低MCF-7的侵袭潜力,抑制MCF-7诱导管腔形成能力。     

环境雌激素对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡作用的影响

[目的] 通过观察对-壬基酚(nonylphenol,NP)、双酚A(bisphenol A,BisA)和邻苯二甲酸二丁酯(dibutylphthalate,DBP)对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响,探讨环境雌激素促进MCF-7细胞增殖的生物学机制.[方法] 将在DMEM培养液(含10%小牛血清)中的MCF-7细胞采用开放式单层贴壁培养,加受试物前5 d将培养细胞用PBS洗涤后改为在无酚红DMEM(含5%经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清,CDT-FBS)中培养连续5 d,其目的是耗尽细胞内储存的雌激素.实验设溶剂对照组、雌激素对照组、抗雌激素(它莫西芬)对照组及三个实验组,采用流式细胞术、DNA片段凝胶电泳和细胞苏木素染色(HE),观察环境雌激素对雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用的影响.[结果] 3.2×10-6 mol/L NP和3.2×10-5 mol/L BisA对MCF-7细胞处理72 h,与对照组相比,流式细胞仪分析结果表明,二倍体细胞(G1期细胞)明显增加,亚二倍体细胞峰(即细胞凋亡率)消失,DNA凋亡片段凝胶电泳不显示典型的凋亡DNA片段梯带,细胞苏木素染色结果也显示凋亡细胞明显减少.[结论] 与溶剂对照组相比,NP和BisA均能够抑制MCF-7细胞的凋亡作用,而3.2×10-4 mol/L DBP对细胞凋亡的影响作用不明显.这一结果提示,该类物质有可能是通过抑制细胞凋亡而发挥其促进MCF-7细胞增殖作用的.     

芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖及迁移和凋亡的影响

目的：探讨芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法：将MCF-7乳腺癌细胞分为6组,正常对照组（C组）,芬太尼组（F1组、F2组、F3组、F4组、F5组）,芬太尼的终浓度分别为1、O．1、0．01、0．001、0．0001μmol／L,在含去激素新生小牛血清的无酚红培养基培养条件下,分别采用MTr法、划痕实验、AnnexinV—FITC细胞凋亡检测试剂盒结合流式细胞仪观察芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果：芬太尼组各组OD值、迁移距离和凋亡率与C组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：在含去激素新生小牛血清的无酚红培养基培养条件下,芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡无明显影响。     

紫杉醇同步放化疗对乳腺癌患者MCF-7细胞增殖的影响

目的探讨紫杉醇同步放化疗对乳腺癌患者MCF-7细胞增殖的影响。方法选取2017年6月至2019年5月江西省赣州市人民医院收治的乳腺癌患者84例作为研究对象,按随机数字表法分为两组,各42例。对照组接受常规放射治疗,试验组接受紫杉醇同步放化疗,比较疾病控制率,并分析两组MCF-7细胞p53、BaxmRNA表达及不良反应。结果试验组疾病控制率(90.48%)高于对照组(71.43%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,试验组MCF-7细胞p53(0.84±0.10)、BaxmRNA(0.96±0.12),均高于对照组的(0.56±0.07)、(0.61±0.05),差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌患者接受紫杉醇同步放化疗的安全性、有效性均较高,利于抑制MCF-7细胞增殖,提高疾病控制率。     

热疗对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响

目的探讨加热对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法以正常培养状态下的MCF-7细胞为对照，应用MTT、Hoechst—PI染色方法分析不同的热处理条件（41℃，42℃，43℃）对MCF-7细胞生长状况的影响，采用细胞荧光免疫法检测热处理前后MCF-7细胞中Bcl-2基因和Bax基因的表达变化。结果热处理后肿瘤细胞凋亡数量明显增多，MCF-7细胞的最佳热处理温度为42℃，热疗使细胞中Bcl-2基因的表达水平降低，Bax基因的表达水平明显升高。结论热疗能够调节Bcl-2基因和Bax基因的表达水平，诱导肿瘤细胞凋亡。     

共轭亚油酸诱导人乳腺癌细胞(MCF-7)凋亡的作用

目的　为了研究共轭亚油酸单体 (c9,t11 CLA)对人乳腺癌细胞 (MCF 7)凋亡的影响。方法　采用细胞生长曲线 ,凋亡细胞的荧光显微镜和电镜观察、流式细胞光度术的检测以及p5 3蛋白表达的方法 ,观察了用不同浓度c9,t11 CLA(2 5、5 0、10 0和 2 0 0 μmol L)诱导MCF 7细胞凋亡作用。结果　c9,t11 CLA可明显抑制MCF 7细胞生长 ,8天的抑制率分别为 -6 0 %、4 5 2 %、99 0 %和 99 4 %。通过荧光显微镜和电镜技术观察到了发生凋亡的MCF 7细胞 ;用流式细胞光度术也检测到c9,t11 CLA可诱导MCF 7细胞产生凋亡 ,并随着c9,t11 CLA浓度的增加 ,细胞凋亡率逐渐增加 ;而p5 3蛋白表达则随着c9,t11 CLA浓度的增加呈现逐渐降低的趋势。结论　c9,t11 CLA可诱导MCF 7细胞产生凋亡 ,这可能是c9,t11 CLA抑制肿瘤细胞生长的机制之一。     

5b对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7ADR的耐药逆转作用

目的研究板蓝根活性单体-5b逆转乳腺癌耐药株MCF-7/ADR细胞的作用及逆转机理。方法选取人乳腺癌MCF-7细胞及耐药株MCF-7/ADR细胞作为主要研究细胞,在2种细胞中加入活性单体-5b,采用MTT法观察活性单体-5b对多药耐药(MDR)逆转作用;采用FCM法观察阿霉素对2种细胞的抑制浓度及倍数。结果当活性单体-5b的剂量低于150μmol/L时,其对2种细胞无毒性作用;活性单体-5b能提高MCF-7/ADR细胞的凋亡率;活性单体-5b能增加阿霉素在体内的积累。结论活性单体-5b对MCF-7/ADR细胞的MDR具有一定的逆转作用,是一种有效的乳腺癌化疗增敏剂。     

双酚A和邻苯二甲酸二丁酯对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖的影响

目的 研究环境内分泌干扰物双酚A、邻苯二甲酸二丁酯在经大鼠肝微粒体酶混合物(S9)作用后对雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株MCF-7增殖作用的影响。方法分别将不同浓度的阳性对照物(17β-雌二醇)以及受试物双酚A、邻苯二甲酸二丁酯经大鼠肝S9酶系作用后,用其代谢产物刺激体外培养的MCF-7细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖的量。结果 17β-雌二醇和邻苯二甲酸二丁酯经S9代谢后,其促进MCF-7细胞增殖的活性降低,而经S9代谢后的双酚A则表现为较强的促进MCF-7细胞增殖的活性。结论 17β-雌二醇和邻苯二甲酸二丁酯经S9代谢后雌激素活性减弱,而双酚A经S9代谢后雌激素活性增强。     

芬太尼对MCF-7细胞增殖和细胞周期影响研究

目的　探讨芬太尼对MCF -7细胞增殖和细胞周期的影响及其机制。方法　MCF -7细胞在不同浓度芬太尼、纳洛酮和两药联合干预后 ,采用MTT法检测细胞增殖活性 ;流式细胞术检测细胞周期 ;免疫细胞化学染色SP法检测p5 3、p2 1/WAF1的表达。结果　芬太尼浓度≥ 0 1μmol/L时 ,细胞增殖活性较对照组显著下降 (P <0 0 5 ) ,其效应与时间和浓度均呈正相关 (P <0 0 1) ,72h半数抑制浓度 (IC50 )为 0 81± 0 0 2 μmol/L。随着芬太尼浓度增加 ,G0 /G1期比例逐渐增加 ,(S +G2 /M )期比例逐渐减少。芬太尼组浓度≥ 0 1μmol/L时 ,细胞增殖活性较对照组显著下降 (P <0 0 5 ) ,较纳洛酮和芬太尼联合给药组差异无显著性。给予芬太尼 10 μmol/L后胞核内p5 3、p2 1/WAF1AOD显著增加 (P <0 0 5 )。结论　芬太尼浓度和时间依赖性抑制MCF -7细胞增殖 ,主要是将细胞阻滞在G1期 ;其机制可能是上调野生型p5 3和p2 1/WAF1的表达。     

岩大戟内酯B诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究

目的：探讨岩大戟内酯B 对MCF-7 乳腺癌细胞生长抑制作用及其机理.方法：通过MTT 法观察各组细胞增殖能力;采用流式检测技术分析细胞周期;利用Annexin V/PI 双染检测细胞凋亡情况;电镜观察细胞形态.结果：随着岩大戟内酯B 浓度增加对MCF-7 的抑瘤率增高;G2/M 期细胞减少,S 期细胞增多,出现S 期阻滞;晚期凋亡和死亡的细胞增加;电镜显示加药后细胞出现核固缩,细胞器空泡变性,凋亡小体形成,甚至出现坏死.结论：岩大戟内酯B 对乳腺癌MCF-7 细胞生长明显抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡,为临床开发新药提供理论依据.     

小檗胺下调MCF7及MCF7/ADR细胞Suivivin表达

目的探讨钙调蛋白拮抗剂小檗胺(BBM)下调抗凋亡基因Survivin表达的可能性。方法采用人乳腺癌细胞MCF7及其耐阿霉素(ADR)MCF7/ADR细胞与不同浓度BBM培养72h后,采用半定量RT-PCR法检测SurvivinmRNA表达。结果20μmol/LBBM使MCF7和MCF7/ADR细胞SurvivinmRNA表达分别由0.43±0.02下降至0.21±0.04和0.57±0.05下降至0.45±0.04(P值均<0.01)。结论BBM可下调MCF7和MCF7/ADR细胞SurvivinmRNA表达。     

甲基硒酸对乳腺癌细胞体外凋亡和细胞周期的影响

目的:观察甲基硒酸(MSA)对乳腺癌细胞系MCF-7凋亡和细胞周期的影响。方法:以不同浓度的MSA作用乳腺癌细胞系MCF-7,在不同时间内,观察不同浓度MSA对乳腺癌细胞凋亡率和细胞周期的影响。流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果:①MSA可诱导乳腺癌细胞体外凋亡,随着药物浓度及作用时间的增加,乳腺癌细胞凋亡率逐渐增加。②MSA可改变乳腺癌的细胞周期,将乳腺癌细胞周期阻断在G1期,并且减少S期细胞的比例。结论:MSA可诱导乳腺癌细胞体外凋亡、调控乳腺癌细胞周期。MSA有望成为预防和治疗乳腺癌的一种新方法。     

人乳腺癌hTERT RNA干扰靶序列筛选方法研究

目的:筛选针对乳腺癌有效的hTERT siRNA,为应用RNAi技术在乳腺癌中敲除hTERT基因研究提供实验基础。方法:采用化学合成法合成3段针对hTERT的siRNA、应用脂质体转染试剂分别转染人乳腺癌MCF-7细胞、实时荧光定量RT-PCR技术检测hTERT mRNA表达水平以确定干扰效果。结果:3段hTERT siRNA中有2段siRNA可有效降低hTERT mR-NA表达。结论:利用化学合成法合成siRNA,应用实时荧光定量PCR技术检测目的基因干扰效果,可快速、高效筛选特异性抑制基因表达的siRNA。     

大豆异黄酮抑制人乳腺癌细胞生长及作用机制研究

采用体外细胞培养的方法 ,探讨大豆异黄酮对体外培养的人乳腺癌MCF - 7细胞生长的作用及作用机制。结果表明 ,大豆异黄酮抑制MCF - 7细胞生长 ,诱导MCF - 7细胞凋亡。蛋白水平检测表明大豆异黄酮可使MCF - 7细胞iNOS表达升高。结果提示大豆异黄酮抑制MCF - 7细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,并主要是通过调节iNOS基因表达实现的     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察三羟异黄酮对体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB—435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法 用噻唑蓝(MTT)法观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞生长的影响；流式细胞仪观察三羟异黄酮处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应；吖啶橙／溴乙锭染色法在荧光显微镜下观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞的凋亡作用。结果 随剂量增大和作用时间延长，三羟异黄酮对细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2—M期，而且随剂量的增大，作用时间的延长，阻滞作用也增强。经吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见，随三羟异黄酮剂量增大，细胞凋亡也逐渐明显。结论 三羟异黄酮可抑制人乳腺癌细胞的增殖，其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2—M期阻滞。     

金雀异黄素对MCF乳腺癌细胞NOS、GSH-Px活性及NO、GSH和MDA含量的影响

目的　探讨金雀异黄素对MCF乳腺癌细胞抑制作用的机理。方法　在体外培养的MCF乳腺癌细胞中加入不同浓度的金雀异黄素 ,2 4h后收集细胞和培养液 ,分别采用酶法和分光光度法测定了细胞匀浆液和培养液中一氧化氮合酶 (NOS)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活性及一氧化氮 (NO)、还原性谷胱甘肽(GSH)及丙二醛 (MDA)含量。结果　加入金雀异黄素作用后 ,细胞匀浆液和培养液中NOS、GSH PX活性及NO含量明显升高 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 )。GSH、MDA含量则明显降低 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 )。结论　金雀异黄素可影响MCF乳腺癌细胞NO生成系统和抗氧化系统 ,这可能是金雀异黄素抑制乳腺癌作用机理之一     

-紫罗兰酮诱导人乳腺癌细胞(ER+)凋亡作用

目的 为了研究β-紫罗兰酮对雌激素阳性的人乳腺癌细胞(MCF-7)凋亡诱导作用的影响。方法 采用细胞生长曲线,凋亡细胞的荧光显微镜和电镜观察,TUNEL方法及流式细胞光度术以及Western blot的检测方法,观察了用不同浓度β-紫罗兰酮(25、50、100 和200 μmol/L)对MCF-7细胞的抑制作用及诱导该细胞产生凋亡情况。结果 β-紫罗兰酮可明显抑制MCF-7细胞生长,抑制率分别为6.57%、34.58%、65.22%和81.87%。通过荧光显微镜和电镜技术观察到了MCF-7细胞有凋亡的形态特征;TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶缺口末端标记)方法和流式细胞光度术均检测到β-紫罗兰酮可诱导MCF-7细胞产生凋亡,并随着β-紫罗兰酮浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加。TUNEL凋亡指数(AI)分别为20.74%(24h)和33.15%(48h);流式细胞光度术的凋亡指数(AI)分别为27.96%(24h)和38.59%(48h)。通过Western blotting方法观察到β-紫罗兰酮可对MCF-7的细胞增殖相关蛋白PCNA及bcl-2蛋白表达有明显地抑制作用,呈现明显地剂量-反应关系。结论 β-紫罗兰酮可明显地抑制雌激素阳性(ER⁺)人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并诱导该细胞产生凋亡,其作用机制需要进一步探讨。     

靶向hTERT的siRNA对卵巢癌SKOV3细胞增殖及化疗敏感性的影响

目的:探讨RNA干扰沉默人端粒酶反转录酶(hTERT)的表达后对卵巢癌SKOV3细胞增殖及化疗药物敏感性的影响。方法:化学合成hTERT siRNA及Control siRNA,用EntransterTM-R转染试剂将hTERT siRNA转染入卵巢癌SKOV3细胞。采用Real time-PCR法及Western blot法检测SKOV3细胞中hTERT mRNA及对应蛋白的表达;流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡率;并分别用顺铂、阿霉素作用于SKOV3细胞,WST-1法检测细胞存活率及两种化疗药物的IC50。结果:与对照组相比,转染hTERT siRNA后,hTERT mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05),同时该组细胞的顺铂、阿霉素IC50显著下降。结论:hTERT siRNA不仅可以显著抑制卵巢癌SKOV3细胞中hTERT基因的表达,同时提高细胞对化疗药物的敏感性。     

异汉防己碱增强阿霉素诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨异汉防己碱增强阿霉素诱导耐阿霉素乳腺癌细胞系MCF-7/DOX凋亡的效应和机制。方法:采用MTT法检测异汉防己碱、阿霉素及两者联合对MCF-7/DOX细胞增殖的抑制作用,用流式细胞术定量分析MCF-7/DOX细胞的凋亡率,用Westem blot技术检测Bax及Bcl-2表达。结果:异汉防己碱可增强阿霉素对MCF-7/DOX细胞增殖的抑制作用,并可诱导细胞凋亡;异汉防己碱联合阿霉素可上调Bax表达,降低Bcl-2表达。结论:异汉防己碱联合阿霉素是通过上调Bax/Bcl-2比值而增强阿霉素诱导癌细胞凋亡的作用。