Rous病毒感染鸡胚尿囊绒毛膜后引起瘤性生长的核酸及酸性粘多糖的组织化学观察

一、序言利用鸡胚尿囊绒毛膜(CAM)繁殖Rous肉瘤病毒和作生物学分析过去已累积了不少资料。Murphy和Rous第一个将Rous肉瘤组织及上清液接种至鸡胚胚膜和胚内,发现病毒主要作用于中胚层细胞而引起瘤性生长。以后Keogh报导以Rous肉瘤活细胞匀浆及其上清液分别接种于CAM,在第四天引起CAM出现病变,在第七天长成瘤块,指出Rous病毒较一般传染性病毒的潜伏期为长。Harris,Lo,Groupe和     

癌基因激活的机制及其可能机理

1910年Rous证明用鸡肉瘤的无细胞滤液能在鸡体内致癌。1970年初Baltimore等发现了鸡肉瘤病毒的反转录酶,同时Martin发现了一类“有条件突变”的     

用鸡胚研究肿瘤移植与转移的模型

鸡胚是免疫缺损动物、易接受异种组织移植并能形成转移。根据这一特点,用鸡胚作为研究恶性肿瘤移植与转移模型,具有周期短、价廉等优点,国外已有工作,但国内尚未见报道。本文报道用我国诱发的宫颈癌14(U14)瘤细胞接种至鸡胚绒毛尿囊膜CAM或注射到CAM静脉内后的生长过程,并探讨其影响因素。材料和方法: 鸡胚用白色、纯系Leighorn受精卵,按照常规孵育,每天观察并记录鸡胚及其上血管的生长与发育。孵育至8～9天,取瘤细胞或上一代带瘤鸡胚肺组织在无菌条件下作成匀浆,参考Humbergen操作法移植瘤细胞或肺组织匀浆于CAM上,或仿照Clarkson法注射瘤细胞至鸡胚CAM静脉     

人骨肉瘤细胞系OS-732与血管生成的相关作用

一、材料与方法1 细胞株和细胞培养 :人骨肉瘤细胞株ＯＳ 732 ,购自北京积水潭医院骨科实验室 ,常规培养于含 10 %新生小牛血清的ＲＰＭＩ 16 40培养液中。2 鸡胚绒毛尿囊膜 (ＣＡＭ)制备及瘤细胞接种 :选取孵育至 9ｄ的胚蛋 ,参考付生法[1] 的方法制备ＣＡＭ ,选择近胚头1ｃｍ处的两条前卵黄静脉间的相对无血管区接种对数生长期ＯＳ 732细胞 ,每只 5× 10 6/ 10 0 μｌ,共接种 10只。另 10只设为空白对照组。于接种第 2天至接种第 9天在解剖显微镜下逐日观察接种区 5ｍｍ范围内血管数目及形态学变化。3 细胞标本及组织切片制备 :将培养的…     

并用免疫增强剂和致敏淋巴细胞在裸鼠体内抑制瘤细胞生长机制的研究

本实验旨在分析活体内参与抑制瘤细胞生长的效应细胞的种类及其作用机制,以期建立防治肿瘤的动物模型。实验动物用BALB/C棵鼠和BALB/C小鼠;瘤细胞采用Rous肉瘤病毒(RSV)诱发的瘤细胞7株、甲基胆蒽(MC)诱发的瘤细胞5株;免疫增强剂为N.rubra细胞壁、OK_(432)(乙型链球菌制剂)和WPG     

SARS病毒对乳鼠和鸡胚致病性的初步观察

目的　建立SARS病毒的动物模型。方法　选用 1～ 5日龄的BALB c乳鼠和昆明种乳鼠 ,通过脑内、腹腔和鼻腔 3种途径 ,分别接种自广州和北京地区非典型肺炎病人中分离的SARS病毒BJ0 1和GZ0 1株 ,观察该病毒对不同种系小鼠的致病性。同时 ,选用 8～ 10日龄鸡胚经尿囊腔接种这 2株病毒 ,观察对鸡胚的致病性。结果与结论　采用SARS病毒BJ0 1和GZ0 1株经脑内接种 ,均可使BALB c乳鼠和昆明种乳鼠发病或死亡 ,但这种致病性不规律 ;而从腹腔和鼻腔途径接种病毒均不能使乳鼠发病。鸡胚对该病毒不敏感。     

人大肠癌细胞系HR-8348在鸡胚体内侵袭和转移的连续性观察

目的：模拟体内情况，研究大肠癌细胞对上皮层、间质、血管壁的连续性侵袭过程及转移特性。方法：将人大肠癌细胞系ＨＲ－８３４８接种至鸡胚绒毛尿囊膜上，分别在接种后的６、１２、２４ｈ及第２、３、５、７、９天对生长良好的瘤体组织及鸡胚有关器官取材，同时进行组织学、透射电镜、冷冻割断扫描电镜系列观察。结果：癌细胞对上皮层的侵袭是依其主动变形运动为基础，以团块（巢）状、弥散状和混合型３种方式进行的；在对间质的侵袭过程中，条索状较弥散状侵袭更常见；瘤细胞经血管壁进入血流的方式有两种：单个释放入血和以瘤细胞群的方式侵入血流。瘤细胞胞体高度变形后，伸向周围组织内、长而不规则的胞浆突起，对侵袭具有重要意义。结论：用此模型可理想地研究大肠癌对上皮层、间质和血管壁的连续侵袭过程、方式和机制     

不同鼻咽癌细胞株对鸡胚尿囊膜模型血管生成影响的比较研究

目的比较不同鼻咽癌细胞株在鸡胚尿囊膜模型上促进血管生成能力的差异。方法选用6日龄鸡胚,开窗后分别种植5-8F、6-10B及CNE-2三种鼻咽癌细胞株,三种细胞株细胞数为2×106/鸡胚者各一组,细胞数为5×105/鸡胚者各一组,另一组为对照组（PBS）,每组10个鸡胚。孵育6日后,统计分析新生血管数及血管面积/鸡胚面积比。结果种植细胞数为5×105/鸡胚时,5-8F、6-10B细胞部分鸡胚有移植瘤形成,CNE-2细胞鸡胚均未见成瘤。种植细胞数为2×106/鸡胚时,三种鼻咽癌细胞株均可100%成瘤,其新生血管数依次递减,分别为（38.7±2.50）、（33.5±4.43）、（29.7±2.71）,差异有统计学意义（P〈0.05）;血管面积/鸡胚面积比分别为（22.2±2.18）%、（18.7±2.45）%、（16.9±2.62）%,均高于对照组的（9.5±1.86）%,差异有统计学意义（P〈0.05）,且5-8F面积比高于其他两种细胞株（P〈0.05）。结论鼻咽癌5-8F、6-10B及CNE-2三种细胞株在鸡胚尿囊膜模型上血管生成能力依次减弱,实验研究可根据实际情况选用。     

鸡胚在生物医学研究中的应用*

背景：近年来应用鸡胚培养组织细胞研究广泛,但应用鸡胚培养神经细胞尚无文献报道。 目的：综述了应用鸡胚进行组织细胞培养的研究进展,以便找到一种方便价廉的神经细胞培养手段。 方法：应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中1998-01/2011-06关于鸡胚培养模型及神经细胞培养的文章,以“鸡胚绒毛尿囊膜模型;神经细胞培养”或“chicken embryo chorioallantoic membrane model; neuronal culture”为检索词进行检索。选择文章内容与鸡胚培养模型相关,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到205篇文献,根据纳入标准选择34篇文章进行综述。 结果与结论：鸡胚在病毒的分离、培养、疫苗制备,肿瘤生物学机制和药物筛选等方面均有广泛应用。与其他培养方法相比具有价廉,方便,快速等优点。充分正确的利用该培养体系可为多领域的研究提供科学可行的方法和思路。 关键词：鸡胚培养;模型;生物医学;应用;神经细胞培养 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.11.039     

C—myc癌基因的激活与扩增

前言癌基因就是能导致癌变的一类基因,它是从相应的正常结构基因(原癌基因protooncogene)转化而来。自1977年Bishop从Rous肉瘤病毒中分离出病毒癌基因以来,相继从病毒和哺乳动物等细胞内分离出许多癌基因。截止1987年已在脊椎动物细胞基因组内发现有20余种细胞癌基因与肿瘤形成有     

数字图像分析技术在鸡胚卵黄囊膜血管形成模型中的应用

目的应用数字图像处理技术客观、准确和快速地对鸡胚卵黄囊膜(chick embryo yolk sac membrane,YSM)血管图像进行定量分析,为促血管和抗血管生成药物的评价和筛选提供有效可靠的技术支持。方法应用OPTPRO2007图像采集系统和Image-proplus6.0图像分析软件对鸡胚卵黄囊膜血管图像背景处理和血管面积及血管密度等参数进行客观、准确地测量。结果建立了有效的鸡胚卵黄囊膜数字图像血管自动分析方法和步骤并通过药物实验对鸡胚卵黄囊膜血管图像进行了参数检测和统计分析。结论应用OPTPRO2007图像采集系统和Image-proplus6.0图像处理分析软件对鸡胚卵黄囊膜图像血管进行自动分析的方法不仅操作简便而且可较准确、快速、客观地反映鸡胚血管新生情况,优于鸡胚尿囊膜血管发生模型的常规人工目测血管计数方法。     

鸡干扰素基因的分子克隆与序列测定

目的：从接种新城疫Ｆ４８Ｅ９病毒的Ｌａ Ｓｏｔａ疫苗免疫鸡体外有丝分裂原刺激的脾淋巴细胞中克隆鸡干扰素基因。方法：应用逆转录多聚酶链式反应技术扩增,常规平端连接、转化及序列测定技术进行验证。结果：研究表明克隆得到的基因与国外报道的鸡胚成纤维细胞干扰素基因。结论：鸡在该状态下其脾淋巴细胞表达鸡胚成纤维细胞干扰素ｍＲＮＡ。     

Rous肉瘤病毒、Harvey肉瘤病毒和Abelson病毒的转化蛋白含有紧密结合的脂质

Rous肉瘤病毒(RSV)、Abelson肉瘤病毒和Harvey肉瘤病毒(HaSV)对细胞转化都受一条病毒多肽的调节,RSV转化蛋白p60~(src)是对酪氨酸残基有严格特异性的蛋白激酶,Abelson病毒的转化蛋白P120对含酪氨酸蛋白有激酶活性,HaSV的转化基因编码一条多肽p21,它对鸟嘌呤核苷酸有惊人的亲和力。这些有激酶活性的转化蛋白对细胞成份多肽的磷酸化可能在细胞被病毒感染后的恶性转化中起重要作用。作者用免疫荧光、免疫电镜和细胞分级离析等方法研究指出p60~(src)及其底物广泛分     

可移植性小鼠淋巴肉瘤白血病(L7710)的实验研究

可移植性小鼠淋巴肉瘤白血病(L7710)是在615系小鼠上建立的一个新瘤株,现已传至107代,其生长特性已基本稳定,在615系小鼠中用瘤细胞移植,发病率为100％,无自行消退,平均存活时间为21.2±5.2天,为国内迄今所报导的细胞移植性小鼠白血病瘤株中平均存活期最长的。于局部皮下接种L7710白血病细胞后能长出较大的实体瘤,并向全身播散,逐渐发展为典型的白血病,故属肉瘤白血病。根据其病理形态特征、细胞化学和某些膜标志的观察,似乎可以将它初步定为T细胞性淋巴肉瘤白血病。L7710对抗癌药的敏感谱较广,     

发展中的新型病毒性疫苗

疫苗早已成为人类预防传染病的重要手段 ,其中病毒疫苗 ,对人类预防控制疾病的贡献尤其显著。比如曾经在全球严重威胁人类生命的天花 ,依靠牛痘苗的广泛预防接种已经被彻底消灭 ;对儿童造成数以万计的麻痹症而至终生残疾的脊髓灰质炎病 ,依靠脊灰疫苗的大面积儿童接种已经接近消灭。疫苗生产技术 ,传统方法主要有两种 :一是将病毒大量培养出来 ,加入适量的灭活剂制成灭活疫苗 (最早是用动物或鸡胚培养病毒 ,6 0年代开始用体外细胞培养繁殖病毒 )。另一种方法是将病毒在动物或细胞培养内长期传代 ,使病毒毒力发生变化而减弱到对敏感动物和人…     

1994～1997年深圳地区流感病毒活动及H3N2亚型毒 …

目的 了解几年流感病毒在深圳地区活动的特点及甲３（Ｈ３Ｎ２）亚型毒株ＨＡ１基因演变概况。方法 病毒分离采用常规的鸡胚双腔接种,毒株检和常量半加敏ＨＩ测定。新鲜收获含病毒粒的鸡胚尿囊液用来提取ＲＮＡ,经逆转录合成ｃＤＮＡ,经聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增,产物纯化采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定。结果 近几年来深圳地区流感活动概况与全国情况相一致;在人群中仍同时流行Ｈ３Ｎ２,Ｈ１Ｎ１ 型和乙型毒     

比较跨膜型和分泌型TNF-α的体内杀瘤效应及其机制

目的比较跨膜型和分泌型TNF-α在体内的抗瘤作用及机制.方法在小鼠接种肿瘤细胞H22第3天,于肿瘤接种部位分别皮下注射插入TNF-α及其突变体基因的质粒DNA(分泌型TNF突变体、跨膜型TNF突变体和野生型TNF-α),观察肿瘤的生长情况,并用TUNEL检测肿瘤细胞是否发生凋亡;用免疫组化检测肿瘤局部淋巴细胞浸润和肿瘤组织表达的Fas和CD44V3.结果TNF-α及其突变体均可被肿瘤细胞有效表达,并都可明显抑制肿瘤的生长(P<0.01),其中跨膜型TNF突变体抑瘤作用最强,可促进肿瘤表达Fas,引起肿瘤细胞发生明显凋亡,同时抑制其表达CD44V3(P<0.01);而分泌型TNF则可诱导肿瘤局部大量淋巴细胞(CD4+、CD8+)浸润(P<0.01),并引起肿瘤组织出血坏死.结论直接注射跨膜型和分泌型TNF-α裸DNA均可在体内有效杀瘤.跨膜型TNF的体内杀瘤机制可能不同于分泌型TNF,前者可直接和通过Fas途径间接诱导瘤细胞凋亡;后者则可能通过募集和激活淋巴细胞发挥抗瘤作用.     

用小白鼠骨髓细胞离体培养的升白模型测试鸡胚肝RNA等药物的升白效果,并探讨升白的作用机理

我们前一阶段的工作初步证明:食用鸡胚蛋可以升高白血球降低病患者的白血球;鸡胚胎和鸡胚肝可以使升白模型的小白鼠升高白血球;鸡胚肝提纯的RNA可以使升白模型的小白鼠升高白血球。同时发现3′-核苷酸与RNA也有同样的作用,为了进一步     

肝未分化（胚胎性）肉瘤的临床病理分析

目的：探讨肝未分化（胚胎性）肉瘤的临床病理特征及其鉴别诊断。方法：对2例肝未分化（胚胎性）肉瘤标本通过光镜、电镜及免疫组织化学等方法进行病理组织学观察。结果：组织学特征为：肿瘤与正常肝组织之间隔以纤维性假包膜;肿瘤细胞大小不等,形态多样,呈星芒状和（或）梭形,细胞界限不清,有明显的黏液样背景;在肿瘤外周可见卷入的胆管样结构;瘤细胞内外可见一些PAS阳性的嗜酸性球形小体;有明显的出血、坏死及囊性变、免疫组化及超微结构没有明显的形态学分化特征。结论：肝未分化（胚胎性）肉瘤的组织发生仍然不清楚,免疫组化和电镜研究支持是间叶起源,但没有一定的分化模式,是一种罕见的肝原发肿瘤,根据其组织学和病理形态学特征,结合腹部包块、CT等临床表现,可以作为明确的病理诊断。     

新城疫病毒体外感染胃癌细胞诱导HSP70的表达及意义

我们通过新城疫病毒 (NDV)感染诱导胃癌细胞HSP70 (热休克蛋白 )蛋白的表达 ,观察其在体外抗瘤活性 ,进一步探讨NDV的抗瘤机制 ,为未来肿瘤的生物治疗提供试验资料。“选用NDV F株 Ⅲ系 ,接种于SPF鸡胚尿囊腔复制增殖后 ,测其血凝效价为 1∶12 80 ,将NDV接种于铺成单层的人胃癌BGC 82 3细胞 (2× 10 6 ) ,试验组加入 1× 10 - 6 ml的NDV尿囊液 ,对照组加入等量正常尿囊液。分别于培养 8h、12h、18h、2 4h、30h、36h、4 2h、4 8h细胞用PBS轻轻洗去非贴壁细胞和细胞残渣 ,加 1%戊二醛固定 10min ,用结晶紫染色观察细胞病变 (CPE…