前列腺癌组织中凋亡抑制基因Livin的表达研究

目的：探讨前列腺癌组织中凋亡抑制基因Livin的表达及其与临床病理特征的关系。方法：应用RT-PCR和免疫组化（SP）法，检测Livin在62例PCa组织中的表达情况，其中高分化癌14例，中分化癌30例，低分化癌18例，正常前列腺组织10例。结果：62例PCa组织中Livin基因高表达，正常的前列腺组织中Livin均无明显表达。62例PCa组织中Livin蛋白阳性表达共有37例（59．7％），低分化组Livin蛋白阳性表达率（83．3％）明显高于高分化组（28．6％），其差异有统计学意义（P〈0．05），中、高分化组间及低、中分化组间Livin蛋白阳性表达率无统计学差异（P〉0．05）。Livin蛋白阳性表达与PCa的临床分期比较，T1-T2 65．0％，T3-T4 77．3％，亦有统计学意义（P〈0．05），临床分期愈晚，Livin蛋白阳性表达率愈高。结论：Livin与PCa的发生、发展有关，检测PCa组织中Livin表达可能对判断PCa预后有一定意义。     

脆性组氨酸三体和血管内皮生长因子在前列腺癌组织中的表达

目的探讨脆性组氨酸三体（FHIT）与血管内皮生长因子（VEGF）在前列腺癌中的表达及意义。方法选取不同分级的前列腺癌组织和前列腺增生组织,采用免疫组织化学SP法染色,检测FHIT及VEGF的表达情况。结果64例前列腺癌组织中病理分级（按Gleason分级系统）分化良好癌（Gleason2～4分）、中等分化癌（Gleason5～7分）、分化不良癌（Gleason8～10分）中FHIT的蛋白表达率分别为84．2％（16／19）、45．4％（10／22）、17．4Y00（4／23）。随着Gleason评分增加,FHIT蛋白表达率显著下降（P〈0．05）。病理分级中分化良好癌、中等分化癌、分化不良癌VEGF的蛋白表达率分别为42．0％（8／19）、63．6％（14／22）、86．9％（20／23）,随着Gleason评分增加,VEGF蛋白表达率显著升高（P〈0．05）。结论FHIT的表达与前列腺癌的Gleason评分、VEGF的表达负相关;VEGF的表达与Gleason评分正相关。     

脂肪酸合成酶在前列腺癌中的表达及临床意义

目的 研究前列腺癌中脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FASE）的表达及其临床意义。方法对68例前列腺癌手术或穿刺活检患者的石蜡标本进行FASE的免疫组织化学染色和半定量分析，并与良性前列腺增生进行对照。结果FASE在良性前列腺增生组织中的阳性表达率（12.8％）明显低于前列腺癌组织（47．1％，P〈0．05）。FASE表达与临床分期、病理分级、骨转移有关（P〈0．05）；与年龄、淋巴结转移、远处转移无关（P〉0．05）。FASE阳性和阴性患者的生存率有显著性差异（P=0．002）。结论FASE在前列腺癌组织中表达增高，酶活性增强；FASE在前列腺癌组织中表达增高有提示不良预后的作用。     

转化生长因子β受体工及Smad4蛋白在肾癌中的表达及意义

目的：探讨转化生长因子β受体I（TGF-βRI）及Smad4在肾透明细胞癌（RCCC）及癌旁组织中的蛋白表达情况及临床意义。方法：采用免疫组织化学P—V法分别检测58例RCCC组织、36例癌旁组织中TGF—βRI和Smad4蛋白表达情况,并分析其表达水平与RCCC临床病理特征的关系。结果：①TGF—βRI蛋白在RC—CC、癌旁组织的阳性表达率分别为51．7％、80．6％,差异有统计学意义（P〈0．05）;Smad4蛋白在RCCC、癌旁组织的阳性表达率分别为56．9％、86．1％,差异有统计学意义（P〈0．05）。②TGF-βRI和Smad4蛋白在RCCC组织中的表达均与性别、年龄无关（P〉0．05）,而与肿瘤病理分级及临床分期相关（P〈0．05）。③TGF-βRI和Smad4蛋白表达呈正相关。结论：①TGF-βRI、Smad4在RCCC中的表达降低,提示TGF-βRI、Smad4的表达缺失可能参与了RCCC的发生、发展。②TGF—βRI与Smad4之间存在正相关,说明这两种因子在TGF—β信号通路中相互作用,共同参与了RCCC的发生、发展及转移。     

E2F3在前列腺癌中的表达及意义

目的探讨E2F3在前列腺癌中的表达及临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组化技术检测26例前列腺癌、20例良性前列腺增生和10例正常前列腺组织中E2F3 mRNA及蛋白的表达。结果E2F3 mRNA及蛋白的表达与临床分期有关,晚期（C＋D期）E2F3 mRNA及蛋白的表达水平明显高于早期（A＋B期,P〈0．05）,低分化癌E2F3 mRNA及蛋白的表达明显高于高中分化癌（P〈0．05）。前列腺癌中E2F3表达水平明显高于良性前列腺增生（P〈0．05）及正常前列腺组织（P〈0．05）。结论E2F3表达可能与前列腺癌的恶性程度有关,E2F3在前列腺癌的发生发展中起到促进作用。     

TRPC6在人良性与恶性前列腺组织中的表达

观察瞬时受体电位通道C6（TRPC6）在人良性与恶性前列腺组织及前列腺癌细胞系中的表达,进一步探讨TRPC6的表达与前列腺癌分期、分级及激素依赖性的关系。利用免疫组织化学技术,检测发现45．0％的前列腺增生和86．6％的前列腺癌病例表达TRPC6,两者比较有显著性差异沪〈0．01）。TRPC6的表达与前列腺癌分级和前列腺外转移有关（P〈0．01）。前列腺癌分期增高,TRPC6表达增多,但在T2、T3和DT4期肿瘤病例中,TRPC6表达无显著差异。此外TRPC6在激素依赖性前列腺癌与激素非依赖性前列腺癌中的表达也无显著差异。应用RT-PCR及Westernblot,检测到TRPC6在前列腺癌细胞系中的表达。本研究发现,TRPC6在良性与恶性前列腺组织及前列腺癌细胞系中表达。TRPC6的表达与前列腺癌的组织分级、Gleason评分及前列腺外转移有关。     

AMACR和p63表达在前列腺癌临床诊断中的价值

目的 探讨前列腺癌组织中α-甲基酰基辅酶A消旋酶（AMACR）和p63表达及其在临床诊断中的价值。方法 采用免疫组织化学方法检测39例前列腺癌和24例朗性前列腺增生组织标本中AMACR和p63的表达，分析其与前列腺癌组织分化程度、临床分期的关系。结果 AMACR和p63在前列腺癌中阳性表达率分别为85％（33／39）和10％（4／39），在前列腺增生组织中阳性表达率分别为21％（5／24）和88％（21／24），比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。AMACR高表达和p63低表达与前列腺癌分化程度、临床病理分期无相关性（P〉0．05）。结论 AMACR高表达和p63低表达可能是前列腺癌形成的早期事件，AMACR和p63可能作为前列腺癌的早期诊断指标和治疗新靶点。     

PARP-1及其活性产物PAR在人前列腺癌组织中的表达及意义

目的探讨多聚（腺苷二磷酸核糖）聚合酶[Poly（ADP—ribose）polymerases,PARP]亚型PARP1及其活性产物聚腺苷二磷酸核糖[Poly（ADP—ribose）,PAR]在前列腺增生和前列腺癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法检测并比较PARP1和PAR在19例前列腺增生和38例前列腺癌组织中的表达,及其在高分化前列腺癌（Gleason评分≤6分）和低分化前列腺癌（Gleason评分≥9分）组织中的表达差异。结果与前列腺增生相比,PARP-1和PAR在前列腺癌组织中的表达阳性率均明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;虽然在高分化与低分化前列腺癌组织中的表达阳性率无明显差异（P〉0．05）,但在低分化前列腺癌组织中的表达强阳性率明显低于高分化前列腺癌（P〈0．05）。结论PARP-1和PAR存前列腺癌组织的表达明显增加,为前列腺癌的诊断提供了参考,其与前列腺癌进展的相关性有待进一步研究。     

P63蛋白在肾盂移行上皮细胞癌和肾细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨P63基因在肾盂移行细胞癌（renal transitional cell carcinoma，RTCC）和肾细胞癌（renal cell carcinoma，RCC）组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学SP法检测40例RTCC、50例RCC、10例正常肾组织中P63的表达，并分析P63表达与RTCC及RCC病理分级、临床分期、病理类型间的关系。结果正常。肾组织、RTCC、RCC中P63的阳性表达率分别为30％（3／10）、95％（38／40）、0％（0／50），组间差异有统计学意义（P〈0．01）；RTCC组中G1级与G2级P63的强阳性、中度阳性表达率显著高于G3级（P〈0．05）；Ta-T1期以P63强阳性为主（66．7％），随RTCC浸润程度的增加，P63染色强度逐渐减弱；T2期P63强阳性表达率为42．9％，T3-T4期降至0；RCC组中，所有肿瘤无论组织类型、级别、分期，P63表达均呈阴性。结论P63在RTCC中高表达，与RTCC病理分级、临床分期密切相关；P63可能参与RTCC的发生、发展，是评估RTCC预后的潜在因素之一；P63在RCC中不表达，可作为将RTCC从RCC中鉴别出来的有用指标之一。     

PTEN蛋白和VEGF在前列腺癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）与血管内皮生长因子（VEGF）在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学S-P法检测39例前列腺癌（Pca组）组织和20例BPH（对照组）组织中PTEN和VEGF的表达。结果：PTEN蛋白在PCa组和BPH组中阳性率分别为38．46％（15／39）和100％（20／20），两组差异有统计学意义（P〈0．01）；VEGF在PCa组和BPH组中阳性率分别为56．41％（22／39）和25％（5／20），两组差异有统计学意义（P〈0．05）；PTEN蛋白的表达与前列腺癌患者临床分期和病理分级呈负相关（P％0．05），与年龄无显著相关性；而VEGF的表达则与前述临床、病理特征呈正相关（P〈0．05），前列腺癌组织中PTEN蛋白与VEGF表达呈密切负相关（r=-0．735，P〈0．01）。结论：PTEN蛋白低表达和VEGF高表达在前列腺癌的发生、发展中起重要作用。PTEN蛋白和VEGF可作为判断前列腺癌生物学行为的重要指标，联合检测PTEN蛋白和VEGF的表达水平有助于前列腺癌患者病情判断及预后评估。     

Smad与骨质疏松症

骨质疏松症(osteoporosis,OP)是由成骨细胞(osteoblast,OB)负责的骨形成和破骨细胞(osteoclast,OC)负责的骨吸收之间的平衡被打破所致。已有大量研究证实转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)通路和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)通路能调控骨形成与骨吸收的平衡,而Smad蛋白家族(Smad)直接介导TGF-β通路和BMP通路下游的信号转导,在调节骨代谢过程中扮演重要的角色。本文针对OP,主要从Smad影响OB与OC的作用方面进行综述。     

TGF-βRⅠ、Smad2、Smad 3及Smad7在瘢痕疙瘩中的表达

目的 观察比较瘢痕疙瘩、正常瘢痕及正常皮肤中转化生长因子β1型受体（TGFβRⅠ）、Smad2、3、7的表达情况，探讨以上信号传导分子在瘢痕疙瘩形成过程中的作用。方法 运用免疫组化技术检测上述4种蛋白在3种不同组织44例标本中的表达，寻找其规律。结果 与正常瘢痕及正常皮肤相比，瘢痕疙瘩中TGF-βRⅠ表达增强，Smad7表达减弱（P〈0．05），Smad2及Smad3表达增强不显著，但在核内积聚较为明显。结论 瘢痕疙瘩中TGF-βRⅠ表达增强，Smad2、3核内持久积聚及抑制性因子Smad7表达减少，可能是瘢痕疙瘩形成的重要原因。     

Expression and localization of Smad1, Smad2 and Smad4 proteins in rat testis during postnatal development

Aim：To study the expression and regulation of Smad1,Smad2 and Smad4 proteins(intracellular signaling molecules of transforming growth factor-β family)in rat testis during postnatal development.Methods:The whole testes were collected from SD rats aged 3,7,14,28 and 90(adults)days.The cellular localization and developmental changes were examined by immunohistochemistry ABC method with the glucose oxidase-DAB-nickel enhancement technique.Quantitative analysis of the immunostaining was made by the image analysis system.The Smads proteins coexistence in the adult rat testis was tested by the double immune staining for CD14-Smad4 and Smad2-Smad4.The protein expression of Smad during rat testicular development was examined by means of Western blots.Results: Smadl,Smad2 and Smad4 were present throughout testicular development.The immunostaining of Smad1 and Smad2 were present in spermatogenic cells.A positive immunoreactivity was located at the cytoplasm,but the nucleus was negative,Smadl was immunolocalized at the d14,d28 and adult testes,while Smad2,at the d7,d14,d28 and adult testis.There was positive immunoreaction in the Sertoli cells and Leydig cells as well.The immunolocalization of Smad4 was exclusively at the cytoplasm of Leydig cells and the nuclei were negative throughout the testicular development.No expression was detected in the germ cells.The results of image and statistical analysis showed that generally the expression of Smad1,Smad2 and Smad4 in the testis tended to increase gradually with the growth of the rat.Conclusion;The present data provide direct evidences for the molecular mechanism of TGF-β action in rat testes during postnatal development and spermatogenesis.     

Developmental and stage-specific expression of Smad2 and Smad3 in rat testis

Members of the transforming growth factor beta type (TGFbeta) superfamily and their receptors are expressed in the testis, and are believed to play important paracrine and autocrine roles during testicular development and spermatogenesis. The Smad proteins are downstream mediators for the family of TGFbeta growth factors. Smad2 and Smad3 are associated with both TGFbeta and activin signaling. However, very little is known about the expression and regulation of the Smad signaling proteins in the testis. In the present study, we have determined that Smad2 and Smad3 proteins are expressed in the postnatal testes of rats from 5 days to 60 days of age. Expression levels for both proteins are higher in young rats than in sexually mature rats. Smad2 and Smad3 messenger RNA levels parallel protein expression. Smad2 and Smad3 proteins are mainly localized in the cytoplasm of meiotic germ cells, Sertoli cells, and Leydig cells. Smad3 protein is localized to the nucleus of preleptotene to zygotene primary spermatocytes in young rats. Both proteins are expressed throughout all stages of the cycle of seminiferous tubules but are expressed at their lowest levels at stages VII-VIII in the seminiferous epithelium of adult rats. The presence of these downstream mediators in these cell types supports a role for TGFbeta and activin during spermatogenesis. The difference between the expression of Smad2 and Smad3 suggests that they may have different functions within the testis.     

成年大鼠睾丸Smad1和Smad5的免疫组织化学研究

目的 :探讨骨形态形成蛋白的细胞内信号传导分子Smad1和Smad5蛋白在成年大鼠睾丸内的表达。　方法 :应用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶 DAB 硫酸镍铵增强技术 ,检测成年大鼠睾丸Smad1和Smad5蛋白的表达和定位。　结果 :Smad1蛋白表达于大鼠睾丸精曲小管的各级生精细胞的胞质内 ,呈淡染的紫蓝色颗粒 ,胞核为阴性 ,免疫染色阳性细胞主要包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞 ;而Smad5蛋白阳性染色不明显 ,只有睾丸间质细胞呈弱阳性反应 ,免疫反应阳性物质主要定位于细胞质。　结论 :Smad1蛋白主要表达于睾丸精曲小管各级生精细胞 ,Smad5蛋白表达于间质细胞 ,为揭示TGF β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据。     

Smad4、7在增生前列腺组织中的表达及意义

目的 探讨增生前列腺组织中Smad4和Smad7的表达及意义.方法 采用免疫组化SABC法检测30例增生前列腺组织及10例正常前列腺组织中Smad4和Smad7的表达.结果 在正常前列腺组织中,Smad4和Smad7的平均面密度值分别为0.1013±0.0326,0.0997±0.0467;在BPH组织中,Smad4和Smad7的平均面密度值分别为0.0601±0.0485,0.0354±0.0267,表达水平均下调,不论Smad4还是Smad7,其在BPH组织中.的平均面密度值与正常前列腺组织中的平均面密度值比较,差别有显著意义(P＜O.05).但不具有显著的相关性,r=0.138,P＞O.05.结论 Smad4和Smad7在前列腺增生组织中的表达下调,提示其参与了前列腺增生的病理过程.     

瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3、7mRNA表达的调控机制

目的研究转化生长因子-β1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)Smad3、7mRNA表达的调控机制。方法用放线菌酮(CHX)和放线菌素D预处理KFB,以分别阻断KFB内源性蛋白质的合成及mRNA合成。采用逆转录PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3、7mRNA表达水平。结果经CHX预处理后,KFB的Smad3mRNA表达轻度上调,并完全抑制了TGF-β1对KFBSmad3mRNA的下调作用(P<0.01);而CHX预处理对KFB的Smad7mRNA表达及TGF-β1上调Smad7mRNA的作用并无明显影响。经放线菌素D预处理后,随TGF-β1作用时间延长,KFB的Smad3mRNA表达水平无明显下降。结论TGF-β1对KFBSmad3mRNA表达的调控过程可能还需要细胞合成其他蛋白的参与;但对Smad7mRNA表达的调控则不需要细胞合成其他蛋白参与,KFB细胞中的Smad7可能也是活化的SMADs的直接靶基因。     

Altered levels of Smad2 and Smad4 are associated with human prostate carcinogenesis

Alterations have been demonstrated in ligand and cognate receptor system of the transforming growth factor beta (TGF-beta) pathway in prostate cancer (PC). Still, little is known about changes in the activity of the intracellular Smad cascade of TGF-beta signaling during prostate carcinogenesis. We used immunohistochemistry to analyze phosphorylated Smad2 (p-Smad2), nuclear Smad4 and inhibitory-Smad7 in epithelial cells of normal, hyperplastic and malignant prostate. Specimens comprised 49 tissue cores of PC, 10 benign prostate hypertrophies and three normal prostates. Nuclear p-Smad2 (P<0.001) and nuclear Smad4 (P=0.023) were significantly decreased in PC with remarkable variations in cytoplasmic Smad7 levels. Substantial decreases in p-Smad2 and Smad4 levels were found in specimens with primary Gleason grades 3 and 4, whereas in grade 5, levels were markedly higher. Our results provide the first evidence for changes and reversible attenuation in the Smad system of the TGF-beta pathway during prostate carcinogenesis.     

Immunolocalisation and expression of Smad2 and Smad4 proteins in dog testis during postnatal development

The expression and localisation of downstream signalling molecules of transforming growth factor beta superfamily, Smad2 and Smad4 proteins, was investigated in immature and mature dog testis. Cellular localisation of Smad2 and Smad4 proteins was examined using immunohistochemistry. Quantitative analysis of immunostaining was determined by the image analysis system. The specificity of the antibodies was examined using Western blotting assay. Smad2 and Smad4 were widely expressed in the testes, mainly immunolocalised in the cytoplasm of gonocytes, Leydig cells and Sertoli cells of immature testes, and Leydig cells and Sertoli cells of mature testes. At the same time, the expression levels for both proteins were different between immature and mature age groups: the expression of Smad2 and Smad4 proteins in the Sertoli cells of mature testis was higher than in the immature group (P < 0.05), but the expression of these two proteins in Leydig cells of mature testis was weaker than that seen in immature stage (P < 0.05). The temporospatial distribution of Smad2 and Smad4 proteins in testicular cells suggests that these two signalling molecules may play an important role in specific stages of testicular development and spermatogenesis, thus providing direct evidences for transforming growth factor beta action in the dog testis.     

乙型肝炎病毒X蛋白对卵圆细胞中Smad2、Smad3、Smad4基因表达的调控作用

目的 观察乙型肝炎病毒编码X蛋白(HBX)对肝脏卵圆细胞中转化生长因子-β(TGF-β)/Smad中核心元件Smad2、Smad3、Smad4表达的调控作用。方法 稳定转染HBX基因的大鼠卵圆细胞株HBX-EGFP-LE/6作为实验组,转染绿色荧光蛋白标记空载体的大鼠卵圆细胞株EGFP-LE/6,大鼠卵圆细胞株LE/6作为对照组。Real-time聚合酶链反应(PCR)与Western blot分别检测3种细胞株中Smad2、Smad3、Smad4的mRNA和蛋白表达。结果 对照组Smad3的mRNA表达量分别是实验组的(4.56±0.79)倍和(4.14±0.38)倍,差异有统计学意义(P＜0.01)。对照组Smad4的mRNA表达量分别是实验组的(1.41±0.04)倍和(1.63±0.43)倍,差异有统计学意义(P＜0.01)。实验组Smad3蛋白表达水平有一定程度降低。结论 HBX可以在卵圆细胞中影响TGF-β/Smad信号通路中的核心元件Smad3的转录及蛋白合成,对Smad4的转录有一定影响。