瘦素对大鼠关节软骨IGF-I表达的影响

目的 探讨瘦素(leptin)对大鼠膝关节软骨的外周作用.方法 在SD大鼠膝关节腔内注射瘦素100μg后,取胫骨平台,分别用RT-PCR法及免疫组织化学法检测胫骨平台软骨中瘦素及胰岛素样生长因子I(IGF-I)的变化.结果 瘦素无论在RNA水平或蛋白水平都可诱导正常关节软骨IGF-I合成.结论 瘦素在外周对关节软骨有保护作用,并在骨关节炎的病理生理过程中起到重要的作用.     

舒筋健腰丸对骨关节炎大鼠关节软骨和血清中细胞因子的影响

目的研究舒筋健腰丸对骨关节炎大鼠的关节软骨和血清中细胞因子的影响。方法 90只SD大鼠随机编号,分为6组,每组15只：将双醋瑞因组,舒筋健腰丸低剂量组（0.75 g/kg）、中剂量组（1.5 g/kg）和高剂量组（3.0 g/kg）大鼠双膝关节腔均注射4%木瓜蛋白酶溶液0.2 m L,每隔3 d注射1次,连续注射3次即成模型。空白组和模型组给予等体积的生理盐水,4周后取材,检测血清中IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-13的含量;切取关节,光镜下观察软骨组织。结果舒筋健腰丸各组均能降低大鼠血清中IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-13的含量,且含量显著低于模型组（P〈0.05）;可显著的减缓骨关节炎所致的关节软骨损伤,促进软骨修复。结论舒筋健腰丸能够抑制血清中IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-13的升高,达到治疗骨关节炎的作用。     

阿仑膦酸钠对骨质疏松大鼠关节软骨的影响

目的评价阿仑膦酸钠对骨质疏松大鼠关节软骨的保护作用。方法选取36只6月龄的SD雌鼠随机分为3组(每组12只):假手术组(SHAM)仅手术,不切除卵巢;去卵巢+生理盐水(OVX+NS)组和OVX+阿仑膦酸钠(ALEN)组切除双侧卵巢,其中OVX+ALEN组给予阿仑膦酸钠液(3mg/ml)每周36mg/kg剂量灌胃,SHAM组和OVX+NS组给予同等剂量0.9%生理盐水灌胃,于灌胃后4、8、12周时取大鼠近端胫骨常规脱钙,苏木素-伊红(HE)染色切片测量软骨厚度,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,切片用图像分析仪测量平均灰度值。结果4周时各组的软骨厚度相近;8、12周时OVX+NS组与OVX+ALEN组及SHAM组相比软骨厚度变薄(P<0.05);12周时OVX+NS组Ⅱ型胶原免疫组织化学染色灰度值低于OVX+ALEN组和SHAM组(P<0.05)。结论骨质疏松情况下关节软骨的结构、代谢会发生改变,服用阿仑膦酸钠对关节软骨具有保护作用。     

瘦素对大鼠关节软骨IGF-Ⅰ表达的影响

目的探讨瘦素（1eptin）对大鼠膝关节软骨的外周作用。方法在SD大鼠膝关节腔内注射瘦素100腿后，取胫骨平台，分别用RT-PCR法及免疫组织化学法检测胫骨平台软骨中瘦素及胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）的变化。结果瘦素无论在RNA水平或蛋白水平都可诱导正常关节软骨IGF-Ⅰ合成。结论瘦素在外周对关节软骨有保护作用，并在骨关节炎的病理生理过程中起到重要的作用。     

豆腐果苷对骨关节炎大鼠软骨和滑膜组织影响

目的研究豆腐果苷对骨关节炎大鼠软骨结构和滑膜组织的影响。方法碘乙酸钠注射 SD雄性大鼠膝关节造模成功后,随机区组分组法分为三组,即假手术组、模型组、豆腐果苷 50 mg·kg.1·d.1组。豆腐果苷灌胃 21 d后,取大鼠膝关节制成组织切片, HE染色观察膝关节软骨和滑膜病理变化,并进行评分;番红固绿染色观察大鼠膝关节软骨病理变化,并进行 Mankin评分。研究起止时间为 2019年 12月至 2020年 7月。结果相对于假手术组,模型组大鼠膝关节软骨和滑膜均受到不同程度损伤,滑膜病理评分显著升高［( 6.88±0.83)分比( 0.50±0.53)分］(P<0.01)且软骨结构、软骨细胞和番红固绿染色的 Mankin评分也显著升高［分别是( 3.88±0.83)分比( 0.50±0.53)分,(1.75±0.46)分比(0,.25±0.46)分,(2.38±0.74)分比( 0.38±0.52)分］(P<0.01)。然而,连续给予豆腐果苷灌胃 21 d后,相对于模型组,大鼠的关节软骨结构和滑膜组织损伤程度均有显著改善,膝关滑膜病理评分显著降低［(3.50±0.53)分比(6.88±0.83)分］(P<0.01)且软骨结构、软骨细胞和番红固绿染色的 Mankin评分也显著降低［分别为( 1.63±0.52)分,(1.13±0.64)分,(0.88±0.64)分］(P<0.0,5)。结论豆腐果苷可减轻骨关节炎大鼠膝关节软     

中药对膝骨关节炎小鼠关节软骨IL-1、iNOS基因表达的影响

目的 :比较益肾壮骨、健脾利湿和养血柔肝中药对原发 OA黑鼠关节软骨内几种细胞因子基因转录水平的影响。方法 :以运动负荷造成 C5 7黑鼠 OA模型 ,以 RT- PCR方法测定各组动物关节软骨内 IL- 1β、IL- 6、i NOS m RNA基因转录水平。结果 :C5 7黑鼠关节软骨 IL- 1β、i NOS m RNA表达随增龄逐渐增强 ,OA中期最明显 ,晚期下降。在 OA早、中期 ,益肾方可轻度下调关节软骨 IL- 1β、i NOS的基因表达 ,对 IL- 6有轻度上调作用 ;健脾方和柔肝方可明显下调 IL- 1β、i NOS的基因表达 ,与芬必得比较 ,有显著性差异 ,对 IL- 6无明显影响。结论 :不同治则方药对关节软骨细胞因子的基因表达影响不一 ;健脾方和柔肝方可明显下调鼠关节软骨 IL - 1、i NOSm RNA表达。     

祖师麻熏洗液对兔膝骨关节炎模型细胞因子和关节软骨的影响

目的为观察祖师麻熏洗液对兔膝骨关节炎模型关节软骨及关节冲冼液中IL-1β和TNF-α水平的影响。方法以参照Vandman法建立兔膝骨关节炎模型,随机分为模型对照组,扶他林软膏组,祖师麻熏洗液组,另取同龄正常兔为正常对照组。正常和模型对照组于膝关节处用热水熏洗,其余各组以相应的药物熏洗和涂抹。未次熏洗后24h,参照毕胜等方法抽取各组动物膝关节冲洗液,取上清液测TNF-α、IL-1β;空气栓塞处死动物,取股骨内髁组织块,HE染色及Safronin O-Fastgreen染色,光镜观察软骨的形态学变化。结果祖师麻熏洗液能显著降低关节冲冼液中TNF-α、IL-1β水平(P<0.05或0.01),减轻关节软骨损伤。结论祖师麻熏洗液可通过抑制炎性细胞因子(IL-1β、TNF-α)的水平,保护关节软骨而对骨关节炎起防治作用。     

苍术内酯对骨关节炎大鼠软骨损伤修复和软骨细胞凋亡的影响

目的 探讨苍术内酯（AT）对骨关节炎大鼠软骨损伤修复和软骨细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法 60只7～8周龄SPF级雄性SD大鼠,48只大鼠采用前后交叉韧带断离术建立骨关节炎（OA）模型,造模成功大鼠采用随机分为模型组、AT低、中、高剂量组,各12只,另设对照组（12只）。AT低、中、高剂量组腹腔注射5、10、20 mg/kg AT,对照组及模型组给予等量生理盐水,连续30 d。观察大鼠软骨组织形态计算Mankin’s评分;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平;苏木精-伊红（HE）染色观察软骨组织病理学变化;TUNEL法检测大鼠软骨组织细胞凋亡情况;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测大鼠软骨组织中微RNA-98-5p(miR-98-5p)表达、高迁移率族蛋白2(HMGA2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)mRNA表达;蛋白质印迹法（Western blotting）检测大鼠HMGA2、GSK-3β、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关...     

透明质酸对关节软骨蛋白聚糖aggrecan的影响

目的研究关节腔注射透明质酸对兔骨关节炎软骨基质的保护作用。方法关节滑液用软骨素酶ABC降解,丹磺酰肼柱前衍生。采用NH2色谱柱,流动相为乙腈-10 mmol/L醋酸溶液-10 mmol/L醋酸钠溶液(76∶16∶8),荧光检测器检测,激发波长350 nm,发射波长530 nm,流速为1 mL/min。结果透明质酸可减少兔关节滑液中C4S、C6S的含量。结论关节腔注射透明质酸可抑制兔软骨蛋白聚糖的降解或上调蛋白聚糖的合成,维持关节软骨正常的新陈代谢。     

电针治疗对兔膝骨关节炎软骨的影响

目的：初步探讨电针对兔膝骨关节炎（osteoarthritis,OA）模型软骨细胞修复的影响及作用机制。方法健康新西兰大白兔（雄性）60只,随机分为正常对照组,模型组和电针治疗组,每组20只,模型组和电针治疗组均采用伸直位管型石膏固定左膝关节,正常对照组和模型组于喂养6周后取内侧髁软骨观察造模后相关指标变化,治疗组在进行电针治疗15 d后以同样方法观察治疗后相关指标改变情况：软骨细胞形态、蛋白多糖和胶原等基质含量变化。结果正常对照组左膝关节无明显关节积液;模型组左膝关节大部分出现关节积液;电针治疗组大部分动物出现关节积液及滑膜增生。正常对照组软骨表面平整;模型组软骨表层出现溃烂缺失,甲苯胺蓝染色明显减退;电针治疗组软骨细胞数明显增多,甲苯胺蓝染色轻度减退。模型组软骨结构,软骨细胞和潮线完整性评分与电针治疗组比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。正常对照组Mankin＇s甲苯胺蓝评分与模型组比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）,模型组与电针治疗组比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论采用伸直位管型石膏固定法制作兔膝OA模型能较好地模拟OA 的发病过程。电针能有效治疗膝OA,有利于软骨细胞的修复。     

闹羊花毒素Ⅲ介导氧化应激途径对创伤后骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的 探讨闹羊花毒素Ⅲ对创伤后骨关节炎大鼠软骨损伤的影响及其作用机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组(根据交叉韧带切断法建模)、低剂量实验组(建模后灌胃给予0.12 mg·kg^-1闹羊花毒素Ⅲ)、高剂量实验组(建模后灌胃给予0.24 mg·kg^-1闹羊花毒素Ⅲ)、阳性药物组(建模后灌胃给予2 mL/100 g的硫酸氨基葡萄糖),每组10只大鼠,连续灌胃28 d后,心脏采血并处死大鼠取软骨组织备用。以Mankin’s评分法分析各组大鼠软骨组织情况,以蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达水平,以酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清骨形成指标及软骨组织中相关因子表达水平,以试剂盒法检测氧化应激相关指标的表达水平。结果 假手术组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和阳性药物组的Mankin’s评分分别为(0.10±0.30)、(5.30±0.46)、(4.00±0.63)、(3.10±0.54)和(1.50±0.81)分,骨钙素(BGP)水平分别为(10.25±0.77)、(2.39±0.34)、(4.87±0.27)、(7.99±0.5...     

环丙沙星对幼龄大鼠软骨的影响

随着喹诺酮类 (QNS)药物的广泛应用 ,QNS药物引起的不良反应也越来越引人们的重视 ,其中QNS类药物对儿童的软骨是否有损伤 ,是否会影响儿童的生长发育 ,至今还是一个争议较大的问题。在动物实验中 ,发现 QNS药物确实对幼龄动物的关节软骨引起损伤 ,主要见于负重关节 ,而且年龄越小损害程度越严重 ,并具有种属特异性。为确实 QNS药物对幼龄动物软骨的损伤、损伤的程度及损伤是否可逆 ,我们用微生物单层琼脂扩散法来监测环丙沙星 (CPL X)三个剂量组 [10 0 0、5 0 0、5 0 mg/ (kg· d) ]每天分 2次给药及空白组连续给药 10 d,停药后不同时间的膝关节的药物浓度及血中药物浓度 ,并对膝关节的软骨组织作了光、电镜观察。结果表明 ,环丙沙星对幼龄大鼠 (2 1d)的膝关节软骨有特异的亲和力 ,停药 2 4h后三个不同剂量组的软骨内的浓度均高于血药浓度 ,停药 6周后在膝软骨中还能测到药物浓度 ,三个不同剂量的膝软骨组织在光、电镜下均可见有明显的损伤 ,此病理损伤在停药 6周后还可见到。本实验再次表明 ,CPL X对幼龄动物软骨组织有明显的损伤作用。     

循环牵张应力对人骨关节炎软骨细胞增殖的影响

【摘要】目的探讨循环牵张应力对体外培养的人骨关节炎患者软骨细胞增殖的影响。方法退变软骨来源于1例66岁骨关节炎患者的手术取材,病理学诊断评估其退变程度。无菌条件下酶消化法原代培养退变软骨细胞,并用甲苯胺蓝、番红O和Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行鉴定。将第3代细胞接种于硅橡胶膜载体上,用Electro?Force3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应仓对其施加0、5%、10%和15%的应变作用3h,受力完成后继续培养24h,用流式细胞仪测定不同力学环境下细胞的增殖活性。结果随着牵张应力的增加,S期细胞百分比和增殖指数（PI）呈缓慢上升趋势,10%时达到峰值,之后开始下降。结论体外培养的人骨关节炎软骨细胞的增殖活性与受力大小有关,且存在细胞增殖的最适应力条件;超过此应力范围其增殖活性将会降低。     

酸敏感离子通道阻断剂amiloride对佐剂性关节炎大鼠关节软骨损伤的影响

目的探讨酸敏感离子通道(ASICs)阻断剂amiloride对佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨损伤的影响。方法将大鼠随机分成正常组,AA模型组,amiloride50、100、150mg·kg-1组,地塞米松(0.2mg·kg-1)对照组。弗氏完全佐剂(CFA)致炎后第10天起,AA大鼠出现继发性炎症,此时腹腔注射amiloride、地塞米松,正常组与模型组灌胃等容量的无菌注射用水,连续7d。实验结束后,体外用激光共聚焦显微镜检测细胞Ca2+浓度,分析胞外低pH值和ASICs阻断剂amiloride对关节软骨细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响;用足容积法测量继发侧足肿胀度,用免疫组织化学方法分析大鼠关节软骨Ⅱ型胶原的表达,用alcian蓝染色检测大鼠关节软骨蛋白多糖的变化。结果细胞外pH(pH6.5)可使关节软骨细胞内Ca2+水平短暂性升高,amiloride能明显抑制pH6.5诱导的关节软骨胞内Ca2+水平;各用药组能明显升高AA大鼠关节软骨细胞基质成分Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达量。结论amiloride可能通过阻断酸敏感离子通道减轻AA大鼠关节软骨破坏,发挥关节保护作用。     

β-蜕皮甾酮介导β链蛋白信号转导通路对膝骨关节炎小鼠关节软骨损伤的影响

目的研究β-蜕皮甾酮(β-Ecd)介导β-catenin信号转导通路对膝骨关节炎小鼠的作用及其机制。方法按体重将3月龄雄性C57小鼠随机分为3组:假手术组、模型组和实验组,每组10只。用手术方法制备骨关节炎小鼠模型。于造模2个月后,实验组皮下注射β-Ecd 5 mg·kg^-1,假手术组和模型组给予0.9%NaCl,每天2次,连续2个月。以实时定量-聚合酶链反应检测关节软骨组织基质金属蛋白酶13(MMP13)、X形胶原(Col X)和骨钙素(OC)基因表达水平。结果假手术组、模型组和实验组的MMP13基因相对表达量分别为1.00±0.02,1.87±0.03和1.22±0.04;这3组的Col X相对表达量分别为1.01±0.04,2.92±0.21和1.61±0.10;这3组的OC相对表达量分别为1.00±0.05,1.72±0.03和1.19±0.02;模型组与假手术组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论β-Ecd介导β-catenin信号转导通路可延缓关节软骨退变,其作用机制可能是通过调控关节软骨组织的相关基因表达而实现的。     

ASIC1a对大鼠关节软骨细胞基质代谢及MAPK信号通路表达的影响

目的研究ASIC1a(acid-sensing ion channel 1a)对大鼠关节软骨细胞基质代谢及MAPK信号通路表达的影响。方法 SD大鼠关节软骨细胞分离、培养与鉴定,建立软骨细胞ASIC1a表达沉默模型。将软骨细胞分为正常组(pH7.4)、pH 6.0酸化组、以及ASIC1a特异性阻滞剂PcTx-1、表达沉默组和非特异性阻滞剂Amiloride处理的酸化组,对二甲基亚甲蓝分光法检测大鼠关节软骨细胞培养上清中GAG的含量,氯胺T法检测Hyp的含量,ELISA法检测MMP-2、TIMP-2的含量,Western blot法检测酸化及阻断ASIC1a后ERK1/2、p38 MAPK磷酸化蛋白的表达。结果激活ASIC1a明显抑制大鼠关节软骨细胞GAG、Hyp和TIMP-2代谢水平(P<0.01),对MMP-2的代谢水平降低抑制作用较弱(P<0.01),且ASIC1a能引起ERK1/2、p38 MAPK磷酸化水平升高,阻断ASIC1a后,磷酸化水平升高受到明显抑制(P<0.01)。结论 ASIC1a参与了酸诱导的大鼠关节软骨细胞基质代谢的失衡,其机制可能与激活ERK1/2和p38MAPK磷酸化有关。     

骨关节炎患者关节软骨TIMP-3启动子区甲基化水平的初步研究

目的探讨关节软骨中组织金属蛋白酶抑制因子-3（TIMP～3）基因启动子区甲基化与其蛋白表达的相关性,并分析TIMP一3基因CpG岛异常甲基化与骨关节炎（OA）的关联性。方法应用甲基化特异性的聚合酶链反应（MSP）技术和免疫组织化学SP法分别检测14例健康人的正常关节软骨细胞和35例骨关节炎（OA）患者软骨细胞TIMP-3基因启动子区甲基化和蛋白表达情况。结果OA患者和健康人关节软骨中TIMP-3基因启动子区均有甲基化修饰,其阳性率分别为74.3％（26／35）和35．7％（5／14）,0A组TIMP-3基因启动子区甲基化率明显高于健康组（P〈0．05）。14例健康人中,软骨细胞TIMP-3蛋白表达阳性10例（71．4％）,而35例OA患者中,软骨细胞TIMP-3蛋白表达阳性11例（31．4％）。24例OA患者软骨细胞蛋白表达阴性的标本中．TIMP-3启动子区甲基化阳性21例（87．5％）;26例TIMP-3启动子区甲基化阳性的标本中,蛋白表达阴性21例（80．8％）,TIMP-3启动子区甲基化与蛋白表达呈显著负相关（P〈0．05）。结论启动子区CpG岛高甲基化是OA患者关节软骨细胞TIMP-3表达失活的主要机制之一,其可能参与了OA的发生和发展。