新的成人腹泻轮状病毒J19株NSP4和NSP5基因克隆和序列分析

目的克隆新的成人腹泻轮状病毒J19株NSP4和NSP5基因,并分析其基因序列.方法利用一种改进的非依赖核酸序列的单引物扩增方法扩增J19株NSP4和NSP5基因,克隆到pMD18-T载体中并进行测序.在此基础上,将J19株NSP4和NSP5的蛋白序列与其他轮状病毒蛋白序列进行比较分析和种系进化分析.结果J19株NSP4和NSP5基因为基因10和11,全长为739 bp和649 bp,它们分别编码213个和176个氨基酸.与J19株NSP4和NSP5蛋白序列一致性较高的分别是B组成人腹泻轮状病毒Bang373株（20.3%）和B组猪轮状病毒db101株（29.5%）.对J19株的NSP4和NSP5的遗传进化分析表明,J19株在进化树上的位置都靠近A、B和C组轮状病毒分支的根部,而且它比较偏向B组轮状病毒的分支.结论J19株的NSP4和NSP5与其他轮状病毒的相应蛋白序列存在显著差异.J19株NSP4和NSP5的蛋白序列比较和遗传进化分析表明新的成人腹泻轮状病毒与成人腹泻轮状病毒可能有共同起源;但是新的成人腹泻轮状病毒与成人腹泻轮状病毒存在显著差异.     

成人腹泻轮状病毒J19株依赖RNA的RNA聚合酶基因序列分析

目的 进一步了解新的成人腹泻轮状病毒J19株依赖RNA的RNA聚合酶基因特征。方法 利用一种改良的非依赖核酸序列的单引物扩增方法扩增新的成人腹泻轮状病毒J19株的VP1基因，克隆至pMD18-T中并进行测序。利用DNAStar和PHYLIP软件包进行序列之间的比较分析并绘制系统发生树。结果 J19株的VP1基因为基因1，全长3538个核苷酸，编码1167个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明J19株的VP1蛋白序列对B组轮状病毒IDIR株的一致性为55．7％，对A组轮状病毒SA11株和C组轮状病毒Bristol株的一致性分别为20．4％、19．2％。对J19株的VP1蛋白序列的遗传进化分析表明，J19株在系统发生树上的位置是靠近外群蛋白并靠近A、B和C组轮状病毒分支的根部，而且它比较偏向于B组轮状病毒的分支。结论 J19株的VP1蛋白序列与其他轮状病毒的VP1蛋白序列存在显著差异。J19株可能是一个与B组轮状病毒的起源和进化密切相关的毒株之一。     

新成人腹泻轮状病毒J19株NSP1、NSP2和NSP3基因序列分析

目的 克隆新成人腹泻轮状病毒J19株三个非结构蛋白NSP1、NSP2和NSP3基因，并分析其基因序列。方法 利用一种改进的非依赖核酸序列的单引物扩增方法扩增J19株三个基因，克隆到pMD18-T载体中并进行测序。在此基础上，将J19株的NSP1、NSP2和NSP3的蛋白序列与其他轮状病毒蛋白序列进行比较分析和种系进化分析。结果J19株的NSP1、NSP2和NSP3基因为基因5、7和8，它们的全长1307个、1004个和932个核苷酸，编码395个、297个和262个氨基酸。与J19株的NSP1、NSP2和NSP3蛋白序列一致性较高的分别是B组轮状病毒KB63株（26．3％）、WH1株（46．6％）和IDIR株（29．6％）。对J19株的NSP1、NSP2和NSP3的遗传进化分析表明，J19株在进化树上的位置都靠近A、B和C组轮状病毒分支的根部，而且它比较偏向于B组轮状病毒的分支。结论 J19株的NSPI、NSP2和NSP3与其他轮状病毒的相应蛋白序列存在显著差异。J19株NSP1、NSP2、NSP3的蛋白序列比较和遗传进化分析表明新成人腹泻轮状病毒与成人腹泻轮状病毒可能有共同起源；但是新成人腹泻轮状病毒与成人腹泻轮状病毒存在显著差异。     

B 组轮状病毒ADRV 与RDRV 主要基因的克隆及其相关性的初步研究

目的　对２ 株 Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 图型相似的 Ｂ 组轮状病毒———成人腹泻轮状病毒（ａｄｕｌｔ ｄｉａｒｒｈｅａｒｏｔａｖｉｒｕｓ， Ａ Ｄ Ｒ Ｖ） 和大白鼠乳鼠腹泻轮状病毒（ｒａｔ ｄｉａｒｒｈｅａ ｒｏｔａｖｉｒｕｓ， Ｒ Ｄ Ｒ Ｖ） 主要基因的相关性进行研究。方法　 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ 第４ 、５ 、９ 三个基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 全长拷贝，并获其ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆。用 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ第９ 基因末端引物 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 成功扩增了 Ｒ Ｄ Ｒ Ｖｄｓ Ｒ Ｎ Ａ，获得相对分子质量与 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ 第９ 基因 Ｐ Ｃ Ｒ产物８１４ｂｐ 相等条带（ 暂称该 Ｒ Ｎ Ａ 模板为 Ｒ Ｄ Ｒ Ｖ 第９ 片段） 及其克隆。经 Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ 标记制备 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ 第４ 、５ 、９ 及 Ｒ Ｄ Ｒ Ｖ 第９ 基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针。用核酸点杂交、 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交进行同源性比较。结果　获得 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ 第４ 、５ 、９ 三个基因及 Ｒ Ｄ Ｒ Ｖ 第９ 基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆；用 Ａ Ｄ Ｒ Ｖ 第４ 、５ 、９ 及 Ｒ Ｄ Ｒ Ｖ第９ 基因４ 个ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针进行的点杂交和 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交结果显示，在两病毒 Ｒ Ｎ Ａ 相应点和相应片段的位置上杂交信号都为阳性，阴性对照都为阴性。     

Human rotavirus in an adult population with travelers' diarrhea and its relationship to the location of food consumption.

The role of human rotavirus in adult diarrhea was evaluated in 164 newly arrived US students attending summer school at an urban Mexican university. Rotavirus was identified in stool samples by electron microscopy. Rotavirus was found in 26 of 109 students with diarrhea (24%) and in 8 of 55 asymptomatic control students (15%). Although bacterial pathogens were recovered from virus positive students with diarrhea, viral shedding also occurred independently of other agents. Clinical disease in students excreting only rotavirus tended to be mild and was accompanied by a low density of viral shedding. Food consumption in the home and at public eating establishments was examined the week before illness. While the location of food consumption was found to be important in the acquisition of diarrhea, there was no apparent relationship of the site where meals were eaten and the acquisition of rotavirus by students newly arrived in Mexico. These data support our previous study in a US student population residing in a rural setting in Mexico and implicate rotavirus as a cause of diarrhea among students traveling to Mexico from the United States. The present study offers additional evidence that rotavirus infection in this population might be spread by a nonfood vehicle of transmission which differs from spread of enterotoxigenic E coli, Shigella, or Salmonella strains in the same population.     

Dual infection due to simian G3--human reassortant and human G9 strains of rotavirus in a child and subsequent spread of serotype G9, leading to diarrhea among grandparents

Cultivation of rotavirus from day 1 and 3 fecal specimens of a child yielded simian SA11-human reassortant, G3P[8] and AU32 like G9P[8] rotavirus strains, respectively. Diarrhea developed in the grandfather by sheer hospital visits, and in the grandmother, after wiping the vomit of the grandfather. AU32 like G9 strains were isolated from the grandparents also. Rotavirus specific IgM developed in all the three patients. A fourfold rise in G9 neutralizing antibodies was observed in the child and grandmother. The child's mother had asymptomatic rotavirus infection. The study highlights the potential of G9 serotype to spread from children to adults.