血链素的提纯和初步鉴定

目的　提纯血链素 ,为进一步从分子水平研究血链球菌及血链素对牙周可疑致病菌的作用机理提供实验基础。方法　利用 DEAE- Sepharose梯度洗脱和葡聚糖凝胶过滤相结合的方法 ,将 4 72 g/L 硫酸铵沉淀的血链素粗提物进一步提纯 ,测定其抑菌活性 ,并进行初步鉴定。结果　提纯获得了纯化的血链素 ,初步鉴定显示其具有蛋白质的性质 ,SDS- PAGE电泳结果显示主要区带一条 ,相对分子质量为 6 5× 1 0 3。体外抑菌试验显示提纯物对牙龈卟啉单胞菌、中间普雷沃菌和具核梭杆菌具有较强抑菌能力。结论　纯化血链素具有拮抗牙周可疑致病菌的重要作用 ,在牙周微生态防治方面具有良好的应用前景     

车前草超氧化物歧化酶的分离纯化及种类鉴定

目的从车前草中分离纯化超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)。方法采用40%乙醇作为提取液,经过丙酮沉淀,CM-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-75柱层析,收集活性峰,冷冻干燥后即得。结果纯化的SOD经SDS-PAGE显示单一条带,亚基分子量为20.1 KDa;抑制试验显示为Fe-SOD。结论通过两步柱层析从新鲜车前草提取液中纯化得到Fe-SOD,其亚基分子量、颜色、紫外吸收与文献报道相近。     

刺糖多糖的分离纯化与基础结构分析

目的分离纯化刺糖多糖,并对刺糖多糖的结构进行基础性分析。方法采用水提醇沉法提取刺糖多糖,联合使用大孔吸附树脂、纤维素和葡聚糖凝胶柱色谱对刺糖多糖进行分离纯化,采用凝胶过滤法测定其纯度和相对分子量,气相色谱法分析其单糖组成,对含量较高的刺糖多糖组分进行部分酸水解、高碘酸氧化和Smith降解分析。结果经分离纯化得到11个精制多糖组分,相对分子量为2～10kDa,单糖组成多为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。AP1-3的主链单糖残基为鼠李糖、甘露糖和半乳糖,末端残基和分支单糖残基为葡萄糖;AP2-3的主链单糖残基为鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖,末端残基和分支单糖残基为鼠李糖、阿拉伯糖和甘露糖。结论采取的分离纯化方法切实可行。经结构分析可知刺糖多糖各组分多为有分枝的杂多糖。     

广西眼镜蛇毒中Natrin蛋白的分离及纯化

目的:从广西眼镜蛇毒中分离出Natrin蛋白.方法:广西眼镜蛇毒经SephadexG75凝胶、CM Sepharose CL-6B离子交换层析及FPLC mono-S柱层析分离纯化出Natrin蛋白.结果:从广西眼镜蛇蛇毒中分离纯化得到的Natrin蛋白,经SDS-PAGE电泳测定其分子量为25 ku,质谱测定其分子量...     

带鱼过敏原的分离、鉴定与纯化

目的分离、鉴定和纯化带鱼特异性过敏原。方法采用Coca’s提取液提取带鱼蛋白；十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和Western—blotting分析其中的过敏原；阴离子交换层析对过敏原进行分离纯化。结果带鱼粗浸液蛋白分子量在8～130kDa之间；Western—blotting检测到分子量为12、18、25、27、29、34、38、54和60kDa的过敏原蛋白；通过离子交换层析分离得到较纯的分子量为18、38kDa的过敏原蛋白，且具有免疫活性。结论发现了带鱼中多种过敏原，并对2种过敏原分离纯化，为带鱼过敏的诊断和治疗奠定了理论基础。     

日本血吸虫多价分子疫苗的制备及其抗原性的研究

目的:为了制备足量、高纯度的供血吸虫保护性免疫力研究的多价分子疫苗。方法:通过制备型SDS-PAGE和电渗方法从日本血吸虫成虫分离纯化出28KD、31/32KD及97KD蛋白。经BCA法检测蛋白含量,SDS-PAGE检测蛋白纯度和分子量,Western-blot及ELISA检测其抗原活性。结果:日本血吸虫成虫28KD、31/32KD及97KD三种纯化蛋白经SDS-PAGE检测均为单一条带并与所分离的蛋白分子量相符;其蛋白含量分别为0.35mg/ml、0.4mg/ml和0.3mg/ml;West-ern-blot均为单一反应区带;ELISA反应滴度分别为1:640、1:1280和1:320。结论:由制备型SDS-PAGE和电渗析方法制备的日本血吸虫成虫28KD、31/32KD及97KD蛋白多价分子疫苗,具有纯度高、制备快、回收率高等优点,而且不影响所纯化的抗原活性。     

豚草花粉过敏原的分析、鉴定与纯化

目的：对豚草花粉变应原蛋白进行分析、鉴定与纯化。 方法：提取豚草花粉粗提液,SDS-PAGE分离其蛋白组份并测定分子量,Western-blotting鉴定其变应原组份,通过离子交换层析对花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。 结果：豚草花粉有30条蛋白带,其中主要条带有9条,70kDa、40kDa为其特异性变应原。经离子交换层析纯化出豚草花粉相对分子量为40 kDa的变应原主要分布在Ⅰ峰。 结论：豚草花粉粗提液中主要变应原为 70 kDa、40kDa蛋白组份。     

中国龙虾过敏原的分离纯化研究

目的:分离、纯化和鉴定中国龙虾的主要过敏原。方法:利用传统的硫酸铵分级沉淀和等电点沉淀方法对过敏原粗提夜进行初分,在蛋白核酸检测仪检测控制下,用DEAE-52离子交换层析柱进行阶段洗脱和Sepha-dex G-100凝胶柱层析,免疫斑点法(Dot-ELISA)确定其免疫活性部分。结果:中国龙虾过敏原蛋白的硫酸铵沉淀范围在35%～60%之间,pH=4.7、4.5时的等电点沉淀蛋白质有明显的过敏原活性;离子交换层析中的具过敏原活性蛋白峰的蛋白条带分子量为15 000、20 700、34 000、60 000和83 200;Sephadex G-100凝胶层析后具过敏原活性蛋白峰SDS-PAGE显示只有34 000分子量的蛋白条带,纯度为91.5%。结论:分离、纯化鉴定出中国龙虾分子量为34 000的主要过敏原,对于过敏原的标准化、提高过敏性疾病诊治水平具有重要的意义。     

人血浆低分子量激肽原的分离与纯化

血浆低分子量激肽原是舒缓激肽前体之一。本文报道应用四柱层析纯化法,分离两种高纯化低分子量激肽原。纯化的低分子量激肽原Ⅰ的分子量为50000,低分子量激肽原Ⅱ分子量为55000。并测定其等电点分别为4.7与4.6。     

百合多糖的分离纯化及结构表征

目的:从新鲜百合中提取多糖,通过理化性质及结构分析,为百合多糖生物活性研究提供基础。方法:将新鲜百合洗净切碎,石油醚回流脱脂,经水提醇沉得到多糖粗品,采用DEAE-52纤维素柱层析、SephadexG-100凝胶柱层析纯化分离得到三种多糖。将纯化后的多糖进行初步理化性质鉴定,采用HPLC测定分子量、红外光谱对其结构进行表征。结果:百合多糖I为浅黄色晶体,糖醛酸含量为13.64%,平均分子量为97000;百合多糖II为浅黄色晶体,其糖醛酸含量为10.98%,平均分子量范围220000-465000;百合多糖III为浅黄色粉末,含淀粉,糖醛酸含量14.55%,平均分子量为94000;三种多糖都有C=O、C-O-C、-OH等多糖的特征吸收。结论:通过对百合多糖的理化性质及结构进行研究,为百合多糖药理活性的深入研究和功能性食品的开发提供理论依据。     

GST-颗粒溶解素融合蛋白的纯化及其抗菌活性分析

目的: 纯化大肠埃希菌表达的GST-颗粒溶解素融合蛋白,并分析其体外抗菌活性。方法: 将IPTG诱导处理后的细菌破碎,分离含有可溶性GST-颗粒溶解素融合蛋白的细菌裂解液,并通过GSH-琼脂糖珠亲和层析柱纯化。同时采用MTT法分析该纯化蛋白的抗菌活性。结果: GST-颗粒溶解素融合蛋白能以可溶性形式在大肠埃希菌中表达,采用亲和层析法可获得分子量为44kDa的单一蛋白条带。经抗菌活性分析,表明纯化产物对金黄色葡萄球菌和甲型溶血性链球菌具有显著抑制作用,而对伤寒沙门菌和大肠埃希菌BL21的抗菌活性不明显。结论: 成功纯化GST-颗粒溶解素融合蛋白,该蛋白对革兰阳性菌具有高效抗菌活性。     

Rhodoaggregin:a novel multimeric platelet agonist from the venom of Calloselasma rhodostoma (Malayan Pit Viper)

By means of Superdex 75 gel filtration and Mono Q ion exchange chromatography, we have isolated a novel platelet aggregation inducer, termed rhodoaggregin, from the crude venom of Calloselasma rhodostoma (Malayan pit viper). The native molecular mass of rhodoaggregin (as estimated by gel filtration chromatography) was 66 kDa while its isoelectric point (pI) was determined to be 3.45. Under reducing conditions of SDS-PAGE, rhodoaggregin exhibited two distinctive bands with molecular masses of 18 kDa (α subunit) and 15 kDa (β subunit). In the absence of reducing agents, however, two bands were also observed, but with apparent molecular masses of 28 (major) and 52 (minor) kDa, respectively. Furthermore, mass spectrometric analysis also showed that rhodoaggregin had a molecular mass of 30155.39±3.25. These molecular weight data suggest that rhodoaggregin probably exists as a tetrameric structure consisting of two disulfide-linked heterodimers. N-terminal amino acid sequence analysis showed that the two subunits of rhodoaggregin exhibit a high degree of homology with each other and with those of the C-type lectin related proteins (CLPs) from other snake venoms. Functional platelet assays showed that rhodoaggregin induced platelet aggregation in rabbit and human whole blood, platelet-rich-plasma (PRP) and washed platelets with a lag period and in an all-or-none manner. The concentration of rhodoaggregin that induced maximal aggregation is estimated at about 0.04 μg/ml (or 0.7 nM).     

抗凝组分Acoagulatin的纯化鉴定及其抗凝特性

目的 从蝮蛇毒中分离纯化一种组分acoagulatin并进行鉴定。观察其抗凝作用。方法 经DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow离子交换柱层析，从蝮蛇毒中分离、纯化得到acoagulatin，分别采用Biosep-sec-S2000型HPLC分子筛柱层析、还原性SDS-PAGE(5％浓缩胶，12％分离胶)电泳进行纯度和相对分子质量测定，将不同浓度acoagulatin与抗凝兔血混合，测定凝血时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)。结果 Acoagulatin的相对分子质量为31400，由两个亚基组成，相对分子质量分别为14400和17000，能显著地延长PT和APTT，对TT没有影响。结论 采用DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow两种离子交换柱层析分离蛇毒，能分离出纯度高的组分acoagulatin，该组分具有抗凝活性。     

鼠肺表面活性物质结合蛋白D提取方法的改良及鉴定

目的：提取及纯化SD大鼠肺灌洗液中表面活性物质结合蛋白D（SP-D）。方法：取SD大鼠肺泡灌洗液,经Tris-HCl-EDTA法提取和maltose-agarose亲和层析法纯化SP-D,用SDS-PAGE电泳及SP-D与幽门螺杆菌的玻片凝集试验鉴定。结果：从SD大鼠肺灌洗液中提取出较高浓度的蛋白,经SDS-PAGE电泳检测,分子量约43 kD,提取的蛋白可与幽门螺杆菌发生明显凝集。结论：采用maltose-agarose亲和层析法可以从SD大鼠肺灌洗液中获得较高纯度的SP-D。     

小鼠脑Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ的鉴定及苄普地尔对其酶活力的抑制作用

用DE_(52)、磷酸纤维素和Sephaery S—300柱层析从小白鼠脑中提纯了Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ并进行了鉴定。凝胶过滤法测定全酶分子量为55万,在SDS-PAGE中显示出两条区带,其亚基分子量分别为5万和5.7万。该酶活力依赖于Ca~(2+)和CaM,AC_(50)分别为28μmol/L和2.2μmol/L。苄普地尔对酶有抑制作用,IC_(50)约为250μmol/L。     

孕妇血清中早孕因子的分离与纯化

目的：建立一条从妊娠早期妇女血清中分离纯化早孕因子的技术路线，获得高纯度的早孕因子。方法：采用依次经过DEAE 52阴离子交换层析、SP Sepharose F．F阳离子交换层析、ConA Sepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl-6B亲和层析分离纯化的方案，最终得到具有早孕因子活性的Heparin-Ⅱ成分，早孕因子活性采用活性玫瑰花环抑制实验检测。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯化物。结果：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示有一条电泳区带，相对分子量为10．91kDa。结论：这条分离纯化早孕因子的技术路线是可行的，得到的相对分子量为10．91kDa的蛋白质为电泳纯的早孕因子。     

免疫活性地龙肽的制备及其对小鼠NK细胞活性的影响

目的:提取低分子量免疫活性地龙肽,并就其对自然杀伤(NK)细胞活性的影响进行体外研究。方法:采用粗分离、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等方法分离纯化地龙肽;采用乳酸脱氢酶法测定NK细胞活性。结果:用凝胶过滤层析分离得到地龙肽T(分子量8000～20000,含有7种蛋白)。用离子交换层析又将地龙肽T分为A、B两部分,地龙肽A由5种蛋白组成,其中有4种分子量在13000以下;地龙肽B仅由一种蛋白构成,分子量约11000;地龙肽A和T可明显提高NK细胞的活性;地龙肽A、B和T皆可减弱环磷酰胺和地塞米松的免疫抑制作用,提高NK细胞的杀伤率。结论:地龙肽T、A单独应用即可以增强NK细胞的活性,并与IL-2具有协同作用;地龙肽T、A和B还可以拮抗地塞米松、环磷酰胺等免疫抑制剂。     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

目的：从蝮亚科尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non—hemonrrhagic fibrinolytic enzyme,NHFLE)并对其理化性质进行研究。方法：应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFLE，用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定其相对分子质量，用皮内出血实验测定其出血活性。结果：从短亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶，它的相对分子质量为25000，没有出血活性，在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白，相对活性为粗毒的3．2倍。结论：从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为25000的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性，而无出血活性的单一的纤维蛋白溶解酶。     

兔血清白蛋白和IgG的分离纯化与鉴定

目的：以兔血清白蛋白和IgG的分离纯化与鉴定实验为例，阐述了血清蛋白制备与分析的过程。方法：使用了硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析、DEAE离子交换层析、亲和层析、醋酸纤维薄膜电泳、SDS—PAGE、HPLC等分离纯化鉴定蛋白质的方法。结果：制备了兔血清白蛋白和γ-球蛋白（IgG），测定被分离物质的相对分子量，鉴定纯化产品的均一性。结论：该实验作为一门生物综合性大型实验，非常有利于培养学生掌握蛋白质制备与分析的综合技能。