眼镜蛇毒因子引起内皮细胞损伤

目的　研究用眼镜蛇毒因子 (CVF)激活补体对培养内皮细胞 (EC)形态和功能的影响。方法　用M 199培养基培养猪主动脉EC ,了解补体引起EC损伤用台盼蓝染色法 ,通过光镜和电镜观察EC损伤的形态结构 ,用免疫组化显示内皮素 1(ET 1)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) ,用发色底物检测法测定组织型纤溶酶原激活物 (t PA)活性。结果　免疫组化染色显示培养细胞胞质中有Ⅷ因子阳性物质 ,确认为EC。在新鲜血清存在下 ,CVF对EC损伤有明显的量效和时效关系 ,作用在 6h达峰值。损伤EC发生变形 ,表现为收缩变圆 ,突起及连接减少 ,胞膜及核膜缺损 ,胞质空泡增多。EC分泌ET 1及bFGF增多 ,而分泌t PA减少。CD5 9有明显的保护作用。结论　CVF激活补体能引起浓度和时间依赖性EC损伤 ,其形态和功能改变有利于凝血 ,可能通过补体攻膜复合物的损伤所致。     

补体激活对血小板聚集的影响

本文用电脑控制的血小板聚集仪研究了来源于中华眼镜蛇的眼镜蛇毒因子（ＣＶＦ）对多种动物与人的富血小板血浆（ＰＲＰ）及大鼠凝胶过滤的血小板悬液（ＧＦＰ）的诱导血小板聚集活性。ＣＶＦ（１９５ｎｍｏｌ·Ｌ１）引起大鼠ＰＲＰ的血小板明显变形继之以缓慢的血小板聚集，仅能引起豚鼠、家兔、狗和人ＰＲＰ的血小板变形，但不引起聚集。ＣＶＦ（１９５ｎｍｏｌ·Ｌ１）不引起大鼠ＧＦＰ的血小板聚集，但可被新鲜血浆恢复，而经５６℃３０分钟处理血浆则无此作用。ＣＶＦ诱导的大鼠血小板聚集依赖于细胞外Ｃａ２＋而不受吲哚美辛（１００ｍｍｏｌ·Ｌ１）影响。Ｎｉ２＋（３ｍｍｏｌ·Ｌ１）和河豚毒素（４０ｍｍｏｌ·Ｌ１）分别抑制ＣＶＦ引起的血小板聚集曲线最大斜率和聚集率。本实验提示ＣＶＦ能诱导大鼠血小板聚集，此作用依赖于补体和细胞外Ｃａ２＋，并与Ｃａ２＋、Ｎａ＋内流有关，而与血栓烷（ＴＸＡ２）通路无关     

眼镜蛇毒因子引起的大白鼠胸膜渗出性炎症

目的　建立旁路激活补体引起渗出性胸膜炎的模型。方法　纯化的眼镜蛇毒因子 (CVF)胸膜腔内注射 ,一定时间后检测渗出液容积、总白细胞数、蛋白浓度和组胺浓度。预先给予各种抗炎药或同时给予眼镜蛇毒另一种毒性成分直接溶血因子 (DLF) ,观察对上述指标的影响。结果　CVF0 0 8～ 2mg·kg-1注入大白鼠胸膜腔能引起有明显量效关系和时效关系的渗出性炎症 ,表现和角叉菜胶 1mg·kg-1作用类似。苯海拉明和异丙肾上腺素都能显著减少上述模型的渗出液容积、总白细胞数、蛋白含量和组胺浓度 ;吲哚美辛、地塞米松和环磷酰胺虽不影响组胺释放 ,但也可减少渗出液容积、总白细胞数和蛋白含量 ;但细胞膜补体调节蛋白CD5 9对上述的渗出性炎症无明显影响 ;而DLF能增强CVF引起的渗出性炎症。结论　CVF胸膜腔内注射能引起对常用的抗炎药敏感的渗出性胸膜炎。其作用能被DLF增强     

眼镜蛇毒因子激活补体对大鼠外周血白细胞数目和功能的影响

目的：观察眼镜蛇毒因子（ＣＶＦ）激活补体对大鼠外周血白细胞数目和功能的影响。方法：采用吞噬金葡菌法、玻璃血球计数板法分析测定白细胞的吞噬和粘附功能。结果：ＣＶＦ１．０ｍｇ·ｋｇ－１ｉｐ，能使外周血白细胞吞噬和粘附功能显著升高，白细胞的吞噬率从２０．７％±４．９％上升至４２．５％±５．５％，粘附率从７３．４％±８．３％上升至９３．６％±９．８％；同时外周血白细胞数目短暂下降后显著增多。结论：ＣＶＦ激活补体可使外周血白细胞数明显改变并显著增强其功能，提示补体可能参与白细胞功能的调节。     

眼镜蛇毒因子对大鼠油酸型肺损伤的保护作用

采用大鼠油酸型呼吸窘迫综合征的病理模型（ｉｖ油酸０．１ｍＬｋｇ－１）．实验前２４ｈｉｐ眼镜蛇毒因子（ＣＶＦ）１．０ｍｇｋｇ－１耗竭体内补体，能显著对抗油酸引起的肺损伤：使支气管肺泡灌洗液中的细胞计数从（１５±１１）×１０１０Ｌ－１下降至（６±４）×１０１０Ｌ－１，蛋白质含量从５．２±１．９ｇＬ－１降至２．４±１．３ｇＬ－１；减少氧自由基的产生，血清超氧化物歧化酶活性下降和丙二醛含量升高明显受到抑制；降低溶酶体酶的释放，表现为血清β－葡萄糖醛酸酶活性降低；肺病理形态学的改变减轻，其中肺水肿程度，透明膜和肺动脉血栓形成均明显减轻．结果表明补体可能在油酸性肺损伤中起着重要作用，ＣＶＦ耗竭补体能显著减轻肺损伤．     

眼镜蛇毒因子的研究进展

目的：介绍眼镜蛇毒因子的性质,应用现状及发展前景,方法：参考国内外的文献,介绍眼镜蛇毒因子的理化性质,分子生物学特性,免疫学作用机制及其临床应用。结果与结论：眼镜毒因子的一种强效的补体抑制剂,具有突出的优点和特异的临床应用范围,有广阔的开发前景。     

眼镜蛇毒因子抑制小鼠疼痛反应

<正>疼痛是诸多病征共有的症状,是动物的神经系统对伤害刺激的感觉。疼痛研究的焦点在于疼痛发生的机制以及干预治疗的策略和药物研究~([1-2])。补体旁路激活会导致炎症和组织损伤~([3])。有研究表明,补体与某些神经病理性疼痛关系密切~([4-5]),但其与非神经性疼痛的关系尚不清楚。本研究用眼镜蛇毒因子(cobra venom factor,CVF)特异抑制补体旁路途径,观察小鼠对疼痛的反应。1材料与方法     

眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin水解纤维蛋白原的特性及对人血小板聚集的

AIM: To study the fibrinogenolytic properties of natrahagin and its effect on platelet aggregation. METHOD: SDS-PAGE, fibrinogenolytic activity assay, platelet aggregation. RESULTS: Upon incubation of fibrinogen with natrahagin at the ratio of 50:1 (w/w), A alpha-chains of fibrinogen were almost completely hydrolyzed in 5 min; however, at least 6 h was needed for the complete degradation of gamma-chains. Fibrinogenolytic activity of natrahagin was 0.349 +/- 0.044 g.min-1.g-1 as determined by its ability to reduce the clottable fibrinogen. On the other hand, natrahagin concentration-dependently inhibited platelet aggregation induced by ristocetin in platelet-rich plasma and thrombin (80 U.L-1) in washed platelets with IC50 (95% confidence limit) of 56 (40-79) and 3.3 (1.4-8.0) mg.L-1. No inhibitory effect was found on collagen- and ADP-induced platelet aggregation even when the dose of natrahagin reached 200 mg.L-1. CONCLUSION: Natrahagin is an alpha, gamma-fibrinogenase with an inhibitory effect on platelet membrane glycoprotein Ib (GPIb)-dependent platelet aggregation.     

眼镜蛇毒因子的研究进展

目的:介绍眼镜蛇毒因子的性质,应用现状及发展前景。方法:参考国内外的文献,介绍眼镜蛇毒因子的理化性质、分子生物学特性、免疫学作用机制及其临床应用。结果与结论:眼镜蛇毒因子作为一种强效的补体抑制剂,具有突出的优点和特异的临床应用范围,有广阔的开发前景     

补体旁路激活导致内皮细胞活化和损伤

目的研究补体替代途径的激活对血管内皮细胞活化和损伤的作用。方法采用眼镜蛇毒因子(CVF)与人血清孵育,特异激活补体替代途径。将孵育物作用于人微血管内皮细胞,采用ELISA检测内皮细胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1、MCP-1和IL-8的表达,采用酶活性测定法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,化学发光法检测内皮细胞caspase-8活化信号,MTT法检测内皮细胞增殖活性,并检测内皮细胞释放NO的变化。结果补体旁路激活导致内皮细胞瞬时表达P-selectin,并进而使内皮细胞上调表达E-selectin、ICAM-1、MCP-1和IL-8。内皮细胞经补体激活物刺激后,LDH释放增加、凋亡信号caspase-8活化上调以及NO释放下调,同时,细胞增殖也受到抑制。结论补体旁路激活能诱导内皮细胞活化和损伤,介导血管内皮的生理结构与功能发生变化,从而可能导致相应的炎症和组织损伤。     

蛇毒抗补体蛋白atrase B抑制补体活化引起的血小板聚集

目的观察眼镜蛇毒抗补体蛋白atrase B抑制补体活化引起的血小板聚集。方法采用眼镜蛇毒因子激活补体诱导血小板聚集,观察atrase B对补体活化引起人凝胶过滤血小板聚集的影响,并采用流式细胞仪测定血小板膜P-选择素和GPⅡb/Ⅲa表达情况。结果Atrase B能抑制补体激活引起的血小板聚集和P-选择素、GPⅡb/Ⅲa在血小板膜上的表达。结论眼镜蛇毒抗补体蛋白atrase B能有效抑制补体激活引起的血小板活化、聚集。     

眼镜蛇毒因子对实验性家犬呼吸窘迫综合征的保护作用

目的：观察从中华眼镜蛇（Naja naja atra)蛇毒中分离纯化的眼镜蛇因子对油酸型呼吸窘迫综合征的保护作用。方法：利用质谱仪、呼吸流量计和压力换能器分别连续监测麻醉狗的主要呼吸功能参数，实验后取肺组织作病理学检查。结果：预先用足量眼镜蛇毒因子使体内补体耗竭95％以上，可显减轻油酸引起的肺功能障碍，组织学检查发现在透明膜形成、肺泡内出血及肺小动脉栓塞等方面均有显改善。结论：活化的补体在油酸引起的肺损伤的发展过程中发挥着重要作用，眼镜蛇毒因子通过耗竭血清补体可抑制呼吸窘迫综合征的发展。     

眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin水解纤维蛋白原的特性及对人血小板聚集的影响(英文)

目的:研究natrahagin水解纤维蛋白原的特性及其对血小板聚集的影响。方法:SDS-PAGE,水解纤维蛋白原活性测定,血小板聚集实验。结果:Natrahagin与纤维蛋白原以1:50(w/w)孵育,5min内A_α-链几乎完全降解,γ-链的完全降解则至少需6h;其水解可凝固纤维蛋白原的活性为0.349±0.044g·min~(-1)·g~(-1)。Natrahagin浓度依赖性地抑制利托菌素对富血小板血浆和凝血酶(80U·L~(-1))对洗涤血小板的聚集反应,IC_(50)(95％可信限)分别为56(40-79)和3.3(1.4-8.0)mg·L~(-1)。但即使natrahagin达200mg·L~(-1),对ADP和胶原诱导的血小板聚集仍无抑制作用。结论:Natrahagin是一种α,γ-纤维蛋白原溶解酶,可选择性抑制血小板膜糖蛋白Ib介导的血小板聚集。     

眼镜蛇毒因子对大鼠血小板的激活作用(英文)

目的:研究补体激活剂眼镜蛇毒因子(CVF)对大鼠血小板的作用及其细胞机制。方法:比浊法测富血小板血浆内血小板聚集并同步记录ATP释放;生色底物法测血小板表面凝血酶原酶活性;用钙离子荧光指示剂Fura-2 AM负载血小板测细胞内游离钙;放免法测细胞内cAMP含量。结果:CVF在19.5-617nmol·L~(-1)范围内浓度依赖性地诱导血小板聚集和ATP释放,195nmol·L~(-1)诱导的ATP释放不依赖于聚集,且明显弱于凝血酶1U/ml的作用。CVF195nmol·L~(-1)时间依赖性地增加血小板表面凝血酶原酶活性。抗血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ、Ⅲa、Ⅱb的单克隆抗体SZ-1、SZ-21、SZ-22抑制CVF诱导的血小板聚集。CVF 195nmol·L~(-1)使血小板内游离钙从静息态的(141±46)nmol·L~(-1)升高到(240±64)nmol·L~(-1),在61.7-617nmol·L~(-1)范围内轻度降低血小板内的cAMP。结论:补体激活剂CVF能诱导大鼠血小板聚集、ATP释放,增加血小板表面凝血酶原酶活性,其激活血小板的作用与血小板表面纤维蛋白原受体及血小板内游离钙升高、cAMP下降有关。     

脂多糖激活补体诱导内皮细胞释放黏附分子和凋亡

目的在细胞水平上研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活血清补体对内皮细胞的作用和影响。方法研究LPS激活血清补体的作用方式和特点,观察LPS激活补体对内皮细胞表达黏附分子和凋亡的影响。采用ELISA检测内皮细胞释放P-selectin、E-selectin和ICAM-1的变化,化学发光法检测Caspase-3/7活化情况,SRB法检测LPS激活补体对内皮细胞生长的影响。结果 LPS能够激活血清补体,这种激活呈现量效、时效性。LPS激活血清补体可诱导内皮细胞瞬时明显释放P-selectin,E-selectin和ICAM-1表达也明显上调,同时可导致Caspase-3/7活化。在本实验条件下,LPS激活血清补体对内皮细胞生长未产生抑制。结论 LPS激活血清补体可损伤内皮细胞,导致内皮细胞明显表达黏附分子以及发生凋亡。     

眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A诱导人内皮细胞释放炎症介质及凋亡

目的研究眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对人内皮细胞的作用。方法采用MTT法、SRB法、形态学观察分别检测atrase A对人微血管内皮细胞生长的影响;内皮细胞经at-rase A处理后,ELISA法检测内皮细胞释放IL-8、ICAM-1、MCP-1、E-selectin的变化,萤光发光法检测各组caspase-8、caspase-3/7的表达情况。经尾静脉给予大鼠atrase A后,检测大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α的变化情况。结果At-rase A(400、40 mg.L-1)对内皮细胞的生长具有明显的抑制作用。而MTT法结果显示,atrase A对高接种密度的内皮细胞基本上没有影响;镜检结果显示,atrase A(400、40 mg.L-1)可使贴壁生长的内皮细胞解离悬浮。而4 mg.L-1的atrase A对内皮细胞的生长没有影响。高剂量atrase A(400mg.L-1)可诱导内皮细胞IL-8、ICAM-1、MCP-1释放增加,而低剂量atrase A(4 mg.L-1)对各炎症介质的表达没有影响。Atrase A还可诱导内皮细胞caspase-8、caspase-3/7的表达,12 h达峰值。经尾静脉分别给予2 240μg.kg-1和400μg.kg-1的atrase A后,高剂量组SD大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α表达增加;而低剂量组中没有明显变化。结论眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A可抑制内皮细胞生长,诱导内皮细胞释放炎症介质和凋亡。     

眼镜蛇毒因子对实验性家犬呼吸窘迫综合征的保护作用

观察从中华眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒中分离纯化的眼镜蛇因子对油酸型呼吸窘迫综合征的保护作用。方法利用质谱仪、呼吸流量计和压力换能器分别连续监测麻醉狗的主要呼吸功能参数 ,实验后取肺组织作病理学检查。结果预先用足量眼镜蛇毒因子使体内补体耗竭95 %以上 ,可显著减轻油酸引起的肺功能障碍 ,组织学检查发现在透明膜形成、肺泡内出血及肺小动脉栓塞等方面均有显著改善。结论活化的补体在油酸引起的肺损伤的发展过程中发挥着重要作用 ,眼镜蛇毒因子通过耗竭血清补体可抑制呼吸窘迫综合征的发展目的观察从中华眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒中分离纯化的眼镜蛇因子对油酸型呼吸窘迫综合征的保护作用。方法利用质谱仪、呼吸流量计和压力换能器分别连续监测麻醉狗的主要呼吸功能参数 ,实验后取肺组织作病理学检查。结果预先用足量眼镜蛇毒因子使体内补体耗竭95 %以上 ,可显著减轻油酸引起的肺功能障碍 ,组织学检查发现在透明膜形成、肺泡内出血及肺小动脉栓塞等方面均有显著改善。结论活化的补体在油酸引起的肺损伤的发展过程中发挥着重要作用 ,眼镜蛇毒因子通过耗竭血清补体可抑制呼吸窘迫综合征的发展     

短毛五加总皂苷在体外抑制人血小板聚集和血小板因子4释放

目的：研究短毛五加总皂苷（ＡＧＶＰＳ）在体外对人血小板聚集和血小板因子４（ＰＦ４）释放反应的影响。 方法：采用比浊法测定人血小板聚集，肝素凝血酶凝集时间（ＨＴＣＴ）法测定人ＰＦ４释放反应。 结果：ＡＧＶＰＳ浓度依赖性地抑制血小板ＡＲｍａｘ，其ＩＣ５０分别为１．３３（ＡＤＰ诱导），１．６６（肾上腺素诱导）和４．２ｇ·Ｌ＾－１（胶原诱导）。同时提高ＤＲ５ｍｉｎ（ＡＤＰ诱导）及延长诱导延缓期（胶原诱导）     

补体旁路激活对内皮细胞纤溶功能的影响

<正>补体对机体防御和免疫功能有重要的作用,然而其过度激活会造成炎症和损伤[1]。旁路激活是补体激活的一条重要途径,很多疾病的发生与补体的旁路激活密切相关[2]。激活的补体会对内皮细胞产生作用和影响。内皮细胞具有多种重要的分泌调节功能,而补体旁路激活对内皮细胞纤溶功能影响的研究极少见报道。为进一步探讨炎症相关病征中补体激活与凝血功能异常的相关性,本文开展了补体旁路激活对内皮细胞纤溶功能影响的研究。