Western印迹技术研究神经管发育和神经管畸形鼠胚Bcl-2蛋白的表达

目的:探讨转染外源性bcl-2基因后,能否通过Bcl-2蛋白表达抑制凋亡,从而减轻和改善鼠胚神经管缺陷的程度。方法:分别取维甲酸致神经管缺陷鼠胚、转染正义bcl-2DNA的神经管缺陷鼠胚、正常鼠胚、转染反义bcl-2DNA的正常鼠胚神经管组织,用Western免疫印迹实验技术检测Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达情况。结果:经转染外源性bcl-2后,神经管缺陷鼠胚的Bcl-2蛋白表达升高,神经管缺陷程度得到改善。结论:维甲酸对内源性bcl-2的抑制包括了mRNA水平和蛋白水平。本实验从蛋白表达水平证实了外源性bcl-2转染成功并有表达。     

正常神经管发育和神经管缺陷中转染重组bcl-2的作用

目的：探讨bcl-2在正常神经管发育和异常神经管缺陷中的作用。方法：构建了重组bcl-2的真核表达载体，建立了维A酸致小鼠神经管缺陷(neural tube defects，NTD)模型。用全胚胎培养结合显微注射技术将重组的正义bcl-2表达质粒导入NTD鼠胚后，观察神经管缺陷的改善程度。结果：经转染bcl-2基因后，前脑的关闭率由原来的34％增至80％，中脑的关闭率由原来的17％增至70％，后脑的关闭率也由原来的25％，增至增加了70％，脊神经管的关闭率达到100％。结论：RA介导的神经管缺陷可部分被重组的bcl-2基因缓解。     

大肠侧向发育型肿瘤Bcl-2和Caspase9蛋白的表达研究

目的探讨大肠侧向发育型肿瘤Bcl-2和Caspase9的基因表达改变,及其与大肠腺癌的关系。方法应用免疫组化SP法测定大肠腺癌、大肠腺瘤、大肠侧向发育型肿瘤的Bcl-2和Caspase9的表达。结果正常粘膜中Bcl-2表面上皮表达阴性,在腺癌组明显低于腺瘤组和LST良性组(P0.05),而LST良性组与腺瘤组相比没有统计学差别。正常粘膜中Caspase9广泛表达于胞浆中,在腺癌组明显低于腺瘤组和LST良性组(P0.05),而LST良性组与腺瘤组相比没有统计学差别。结论 LST良性组与大肠腺瘤组在Bcl-2、Caspase9等基因的改变上没有统计学差异,同样是癌前病变,Caspase-9和bcl-2同样参与细胞凋亡的调节,在大肠肿瘤的恶变中发挥作用。     

正常神经管发育和神经管缺陷中转染重组bcl-2的作用

目的:探讨bcl-2在正常神经管发育和异常神经管缺陷中的作用。方法:构建了重组bcl-2的真核表达载体,建立了维A酸致小鼠神经管缺陷(neuraltubedefects,NTD)模型。用全胚胎培养结合显微注射技术将重组的正义bcl-2表达质粒导入NTD鼠胚后,观察神经管缺陷的改善程度。结果:经转染bcl-2基因后,前脑的关闭率由原来的34%增至80%,中脑的关闭率由原来的17%增至70%,后脑的关闭率也由原来的25%增至增加了70%,脊神经管的关闭率达到100%。结论:RA介导的神经管缺陷可部分被重组的bcl-2基因缓解。     

高压氧对脑缺血再灌注海马神经元Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 观察高压氧(HB0)作用下脑缺血再灌注海马CA，区神经元Bcl-2和Bax蛋白表达的变化情况，进一步研讨高压氧治疗脑缺血再灌注损伤、减轻神经元凋亡从而发挥保护作用的机制。方法 沙土鼠20只，采用随机数字法将实验动物分为正常对照组、缺血组、0．15MPaHBO治疗组、0．25MPaHBO治疗组，0．25MPa压力空气(hyperbaric air，HBA)对照组，每组4只动物。采用“双侧颈总动脉阻断法”前脑缺血模型，缺血20min后再灌注3d，并用0．15MPa和0．25MPa压力的高压氧治疗(60min／d，连续3d)后，应用免疫组化LSAB方法，观察高压氧对海马CA1区神经元凋亡相关基因Bcl-2和Bax的蛋白表达的影响。结果 沙土鼠脑缺血再灌注3d组海马CA1区大量神经元表达Bax蛋白，并且神经元发生凋亡，未见神经元表达Bcl-2蛋白；高压氧治疗组则大量神经元表达Bcl-2蛋白。并且0．25MPa高压氧治疗组比0．15MPa高压氧治疗组变化更显，而各组表达Bax蛋白的神经元数目无明显变化。但高压氧治疗组Bax蛋白阳性的神经元形态正常。结论 HBO暴露可诱导大量神经元表达Bcl-2蛋白，对Bax蛋白表达则无明显作用，使Bcl-2和Bax蛋白表达的比值增高，从而起到保护神经元的作用，这可视为HBO治疗脑缺血性损伤减少神经元凋亡的机制之一。     

过表达Bcl-2雪旺细胞抗凋亡能力的实验研究

目的：探讨凋亡相关基因Bcl-2过表达对抗过氧化氢诱导的雪旺细胞凋亡的影响。方法：构建含有人Bcl-2 cDNA的逆转录病毒真核表达载体PLXSN，脂质体法将重组质粒转染PA317细胞，G418筛选阳性克隆，鉴定后浓缩收集病毒液，感染人雪旺细胞株系Schwann’s cells，采用western法检测Bcl-2蛋白表达情况。5mM H2O2作用并诱导细胞凋亡后，流式细胞仪检测细胞凋亡发生变化。结果：成功构建出含目的基因Bcl-2的逆转录病毒表达载体pLBcl-2SN。5mMH2O2成功的诱导雪旺细胞凋亡。Bcl-2逆转录病毒感染雪旺细胞后，Bcl-2蛋白水平呈过高表达，并能显著对抗H2O2诱导的雪旺细胞凋亡。结论：Bc1-2蛋白过表达能够抑制氧化剂诱导的雪旺细胞凋亡。     

脂多糖致新生鼠脑白质损伤后Bcl-2和P53蛋白表达的变化

目的探讨脂多糖致新生鼠脑白质损伤(PVL)后Bcl-2、P53蛋白的变化。方法新生2日龄Wistar大鼠100只,随机分为2组:对照组和PVL组,每组50只。对照组给予生理盐水5mg/kg腹腔注射,PVL组给予脂多糖5mg/kg腹腔注射。免疫组化染色观察术后6h、12h、24h、48hBcl-2及P53蛋白的变化。结果 PVL组Bcl-2蛋白表达6h升高,12h明显升高,48h达高峰,与对照组同一时间点比较均有非常显著性差异(P<0.01);P53蛋白表达6h明显升高,12h达高峰,与对照组同一时间点比较均有非常显著性差异(P<0.01)。结论脂多糖致早期新生鼠脑白质损伤增加Bcl-2和P53的表达。     

人参和氯沙坦对缺血-再灌注心肌细胞Bcl-2表达的研究

目的　探讨人参和氯沙坦对缺血 再灌注心肌细胞Bcl- 2基因表达的影响。方法　用原位杂交和免疫组化分别检测人参和氯沙坦治疗后的大鼠缺血 再灌注心肌细胞内Bcl- 2mRNA和蛋白质含量 ,并与对照组比较。结果　氯沙坦组与对照组心肌细胞内Bcl- 2mRNA、蛋白含量无明显差别 (P >0 0 5 ) ,人参组Bcl- 2mRNA含量增加 (P <0 0 5 ) ;Bcl- 2蛋白表达增多 (P <0 0 1)。结论　人参能明显增加缺血 -再灌注心肌细胞内Bcl- 2基因表达     

Bcl-2蛋白在精索静脉曲张大鼠睾丸中的表达及意义

目的 :探讨Bcl 2基因蛋白在精索静脉曲张大鼠生精细胞中的表达及意义。方法 :采用成年雄性Wistar大鼠复制左精索静脉曲张模型 ;应用免疫组化SP法检测睾丸组织中Bcl 2蛋白表达。结果 :实验组左侧睾丸Bcl 2蛋白表达率 ( 65 3 2± 2 1 3 3 ) %较对照组 ( 83 48± 2 0 78) %显著降低 (P <0 0 5 )。结论 :精索静脉曲张大鼠生精细胞Bcl 2蛋白表达降低 ,睾丸生长减缓 ,提示精索静脉曲张症生精细胞凋亡可能是通过Bcl 2蛋白通道的负向调节实现的     

乙硫氨酸对神经管畸形胎鼠脑组织Fos和Cyp2e1基因表达的影响

目的 采用乙硫氨酸诱导小鼠胚胎神经管畸形(neural tube defects, NTDs),观察乙硫氨酸对NTDs小鼠胚胎脑组织基因表达的影响。方法 SPF级C57BL/6J孕鼠80只,随机分为模型组42只和对照组38只。孕7.5 d时,模型组孕鼠腹腔注射乙硫氨酸500 mg/kg,对照组腹腔注射等剂量磷酸盐缓冲液。孕10.5 d时体视显微镜下分离胚胎并行HE染色,观察胚胎及神经管发育情况。取模型组NTDs胚胎脑组织和对照组正常胚胎脑组织进行转录组测序,并对差异表达基因进行GO功能注释分析、KEGG通路富集分析、蛋白质互作网络分析。采用实时荧光定量PCR法检测差异表达基因mRNA相对表达量,采用Western blot法检测差异表达基因的蛋白相对表达量,对差异表达基因进行验证。结果 模型组吸收胎、生长缓慢、NTDs发生率(10.3%、19.5%、56.0%)均高于对照组(2.4%、4.5%、0)(P<0.05),正常胚胎发生率(12.6%)低于对照组(93.1%)(χ²=353.690,P<0.001),其他畸形发生率(1.6%)与对照组(0)比较...     

小鼠神经管发生中抑凋亡基因bcl-2的表达及其对细胞生长的作用

目的：研究小鼠神经管形成过程中原癌基因bcl-2表达及与程序性细胞死亡(programed cell death，PCD)的关系。方法：分别取交配后7．5，8．5，9．0，9．5，10．5d鼠胚做全胚胎交实验。结果：交配后7．5d鼠胚，Bcl-2mRNA杂交信号弥散分布于整个胚体，但胚体前1／2的杂交信号较弱，后1／2则相对较强。交配后8．5d鼠胚Bcl-2mRNA有较强的杂交信号沿逐渐升高的神经褶分布(权重为19)。到交配后9．0d，随着神经管的关闭，Bcl-2mRNA在神经褶的表达下降(权重为8)。到交配后9．5dBcl-2mRNA的表达开始回升(权重为14)，到交配后10．5dBcl-2mRNA的表达在胚胎颅神经管升高(权重为19)。结论：Bcl-2在早期神经管发生中的作用是多方面的，参与对细胞凋亡的调节和促进细胞的生长和分化。     

FasL和Bcl-2在肾癌组织中的表达及意义

目的：探讨FasL和Bcl-2在肾癌发生中的作用及与转移、预后的关系。方法：应用免疫组化法检测50例肾癌组织和50例正常肾组织FasL和Bcl-2的表达，与肾癌病理分级、临床分期、淋巴结转移和随访相比较。结果：FasL和Bcl-2在肾癌组织中的阳性表达分别为4l例(82．0％)和39例(78．0％)，而在正常肾组织中分别为6例(12．0％)和5例(10．0％)；G／G2中均为16例(76．2％)，G3 G4中为25例(89．2％)和23例(82．1％)；在Ⅰ Ⅱ期中分别为23例(74．2％)和20例(64．5％)，Ⅲ Ⅳ期为18例(94．7％)和19例(100％)；有淋巴结转移者为17例(100％)．无淋巴结转移者为24例(72．7％)及22例(66．7％)；生存率大于5年组为29例(74．3％)和27例(69．2%)．小于5年组则均为12例(100．0％)。均有显著性差异(P＜0．05)。结论：FasL和Bcl-2的异常表达与肾癌的发生、发展、病理分级、临床分期等有一定关系，可作为判断恶性程度和预后的指标。     

P53和c-mye及Bcl-2基因蛋白的表达对子宫平滑肌肿瘤发生与预后的影响

目的：研究P53，c-myc，Bcl-2基因蛋白在子宫平滑肌肿瘤中的表达状况，以探讨上述基因与子宫平滑肌肿瘤发生与预后的关系。方法：根据术后肿瘤病理组织学类型，65例子宫平滑肌肿瘤患者分为平滑肌瘤组、平滑肌交界性肿瘤组、平滑肌肉瘤组。选取20例功能失调性子宫出血患者切除的子宫组织作为正常子宫平滑肌组。应用免疫组织化学染色方法检测肿瘤组织及正常平滑肌组织中P53，c-mye，Bcl-2基因蛋白的表达状况。结果：P53基因蛋白的表达阳性率正常子宫平滑肌组无，子宫平滑肌瘤组为10％，子宫平滑肌交界性肿瘤组为39．3％，子宫平滑肌肉瘤组为85．7％，正常子宫平滑肌组与子宫平滑肌瘤组比较差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，其余各组比较差异均有显著性意义(X^2=4．83～22．04，P&;lt;0．01～0．05)。c-mye基因蛋白的表达阳性率正常子宫平滑肌组无．子宫平滑肌瘤组为6．7％，子宫平滑肌交界性肿瘤组为35．7％，子宫平滑肌肉瘤组为71．4％，正常子宫平滑肌组与子宫平滑肌瘤组比较差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，其余各组比较差异均有显著性意义(X^2=3．89～17．53，P&;lt;0．01—0．05)。Bcl-2基因蛋白表达阳性率子宫平滑肌瘤组为63．3％，子宫平滑肌交界性肿瘤组为21．4％，子宫平滑肌肉瘤组为14．3％，正常子宫平滑肌组为35％，正常子宫平滑肌组与子宫平滑肌瘤组比较差异有显著性意义(X^2=3．85，P&;lt;0．05)，子宫平滑肌交界性肿瘤组和子宫平滑肌肉瘤组与子宫平滑肌瘤组比较差异均有显著性意义(X^2=10．37，X^2=8．56，P&;lt;0．01)。结论：①P53，c-mye基因蛋白其含量随平滑肌肿瘤恶性程度升高而增加，对平滑肌肿瘤的发生有促进作用，可评估预后。②Bcl-2基因蛋白影响子宫平滑肌肿瘤的凋亡，是肿瘤发展的早期事件。     

溃疡性结肠炎患者周围血中性粒细胞凋亡和Bcl-2基因的表达

目的　观察溃疡性结肠炎 (UC)患者周围血中性粒细胞 (PMN)凋亡及Bcl 2基因表达的变化。方法　采用流式细胞术检测 18例UC患者周围血PMN凋亡及Bcl 2基因的表达。结果　活动期UC患者PMN凋亡率明显低于健康人对照组和缓解期UC患者 (P <0 .0 1) ,Bcl 2基因的表达明显高于对照组和缓解期患者 (P <0 .0 1)。缓解期UC患者PMN凋亡率与对照组无差别 ,但Bcl 2基因的表达与正常人对照组比较差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。不同病情活动期UC患者PMN凋亡及Bcl 2的表达有显著性差异 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。结论　活动期UC患者周围血PMN凋亡延迟 ,且与病情及疗效密切相关。PMNBcl 2基因表达上调可能是其凋亡延迟的重要分子机制之一。     

Bcl-2和Bax蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

本文采用免疫组织化学技术,对60例上皮性卵巢癌中Bcl-2和Bax蛋白的表达状况进行检测,并对相关的临床病理因素进行分析,探讨Bcl-2和Bax蛋白在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用及相互关系。1资料与方法1．1材料和标本来源收集2002年3月至2006年12月在本院妇科住院患者手术切除的卵巢标本60例。均用常规10％甲醛固定,石蜡包埋组织。按国际妇产科联盟（FIGO）标准（1973年）进行临床分期以及《妇产科病理学》中的卵巢肿瘤分级方法进行病理分级。60例标本中Ⅰ／Ⅱ期36例,Ⅲ／Ⅳ期24例;高分化22例,中分化20例,低分化18例。     

发育性髋脱位早期髋臼软骨细胞凋亡与Caspase-3、Bcl-2表达的相关性研究

目的探讨发育性髋关节脱位（development dislocation of the hip,DDH）早期髋臼软骨细胞凋亡与Caspase-3、Bcl-2表达的相关性。方法选取32只4周龄新西兰大白兔,采用兔后肢屈髋伸膝位管型石膏固定制作DDH动物模型。对24只成功模型兔采用TUNEL法检测髋臼软骨细胞凋亡情况;免疫组化法检测软骨细胞中Caspase-3和Bcl-2的表达。Spearman等级相关分析法进行细胞凋亡与Caspase-3、Bcl-2表达的相关性分析。结果实验进行至8周时,显示实验侧髋臼软骨细胞凋亡率（45.23±10．42）％,高于对照侧（8．04±4.35）％,差异有统计学意义（P〈0．05）,但随着实验时间的延长,实验侧髋臼软骨细胞凋亡变化不明显;免疫组化结果显示实验侧髋臼软骨细胞Caspase-3和Bcl-2表达的平均灰度值分别为（56．73±7．85）％与（56．73±7．85）％,二者表达高于对照侧（61．45±5．47）％与（52.32±7．99）％,差异有统计学意义（P〈0．05）,但随着实验时间的延长,实验侧髋臼软骨细胞凋亡情况变化不明显。相关性分析得Caspase-3表达的灰度值与软骨细胞凋亡率呈负相关（r=-0．896,P〈0．05）,Bcl-2表达的灰度值与软骨细胞凋亡率呈正相关（r=0．939,P〈0．05）。结论凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2可能在髋臼发育不良和髋臼软骨退变中参与调控。     

Survivin蛋白和Bcl-2蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及相关性

目的：探讨Survivin蛋白和Bcl-2蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及相关性。方法：应用免疫组织化学SABC法检测20例正常卵巢组织、40例良性上皮性卵巢肿瘤、49例上皮性卵巢癌组织中的Survivin蛋白和Bcl-2蛋白的表达情况,分析其表达与不同临床病理特征的表达关系。结果：（1）在正常卵巢组织及良性上皮性卵巢肿瘤中,Survivin蛋白和Bcl-2蛋白的表达差异均无显著性意义（P〉0.05）,在良性、恶性上皮性卵巢肿瘤中,Survivin蛋白和Bcl-2蛋白的表达差异有显著性（P〈0.01）。（2）在不同的类型的上皮性卵巢癌中,Survivin蛋白和Bcl-2蛋白的表达差异均无显著性意义（P〉0.05）。在不同的组织学分级,Survivin蛋白差异有显著性（P〈0.05）。而Bcl-2蛋白的表达差异无显著性意义（P〉0.05）,在不同的临床分期中,Survivin蛋白和Bcl-2蛋白的阳性表达差异均有显著性（P〈0.01）。（3）Survivin蛋白表达和Bcl-2蛋白表达呈正相关。结论：（1）Survivin蛋白和Bcl-2蛋白可能参与了卵巢肿瘤的发生发展过程。（2）Survivin蛋白和Bcl-2蛋白在卵巢癌的发生、发展中可能起协同作用。     

骨髓干细胞移植后Western blot免疫印迹分析鼠抗肌萎缩蛋白表达的变化

目的:Western blot免疫印迹分析骨髓干细胞移植后mdx鼠抗肌萎缩蛋白表达的变化。方法:实验于2004-09/12在中山大学附属第一医院神经科实验室完成。①选取7～8周龄mdx鼠25只,随机数字表法分为骨髓移植4,8,12,16周组、空白对照组,5只/组。另选取4～6周龄C57鼠20只作为供体鼠,10周龄C57鼠5只作为阳性对照组。②各组在移植前均给予照射剂量为7Gy的放疗预处理。放疗完毕后,骨髓移植4,8,12,16周组均进行尾静脉细胞移植,移植细胞数为2×107/只,0.3～0.5mL;空白对照组、阳性对照组尾静脉输入0.3mL磷酸盐缓冲液。③骨髓移植4,8,12,16周组分别于对应时间点处死,取其腓肠肌,制备抗肌萎缩蛋白样品,进行抗肌萎缩蛋白Western blot免疫印迹分析,以GAPDH作为内参。结果:25只7～8周龄mdx鼠、5只10周龄C57鼠全部进入结果分析。骨髓干细胞移植后抗肌萎缩蛋白Western Blot免疫印迹分析结果:空白对照组无抗肌萎缩蛋白的表达;骨髓移植4周组仅可见抗肌萎缩蛋白的微弱表达,dystrophin/GAPDH灰度比值约为0.095±0.267;骨髓移植12周组约为0.218±0.338;随骨髓移植时间的延长抗肌萎缩蛋白表达量逐渐增加,移植后16周的表达量较移植后8周明显增加(0.393±0.385,0.173±0.284;t=6.062,P<0.05),但仍明显低于阳性对照组1.172±0.328(t=3.14,P<0.05)。结论:骨髓干细胞移植mdx鼠后应用WesternBlot免疫印迹分析可于不同时间检测到抗肌萎缩蛋白的表达,且随移植时间延长表达量增多,提示骨髓干细胞移植可长久持续参与受损骨骼肌的修复与再生。     

p21、Bcl-2蛋白在大肠癌中表达的意义

目的 :探讨 p2 1、Bcl- 2蛋白在大肠癌及息肉中的表达 ,了解其对大肠癌早期诊断的意义。方法 :采用免疫组化 (SP)法检测大肠癌及息肉中的 p2 1、Bcl- 2。结果 :p2 1、Bcl- 2在大肠癌及腺瘤性息肉中的阳性率明显高于大肠炎性息肉 (P<0 .0 1) ,腺癌与腺瘤性息肉之间二者阳性率则无明显差异 (P>0 .0 5 )。结论 :p2 1、Bcl- 2二者阳性表达可作为大肠粘膜癌变的高危诊断指标和 (或 )腺癌早期诊断指标。     

丹参酮ⅡA对鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2和caspase-3表达的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对缺血再灌注损伤大鼠Bel-2及caspase-3蛋白表达的影响.方法:将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、TanⅡA低剂量治疗组和TanⅡA高剂星治疗组.线栓法建立局灶性脯缺血再灌注模型.Tan ⅡA高、低剂量治疗组于术前连续灌胃给予高、低剂量Tan ⅡA 3d,每天1次.用免疫组化法观察缺血90min再灌注24h大鼠额顶部皮质Bcl-2和caspase-3蛋白表达,并进行2,3,5-三苯皋氯化四氮唑染色和HE染色观察脑梗死体积及病理形态学变化.结果:脑缺血再灌注24h,缺血再灌注组Bcl-2和caspase-3表达增加,与假手术组比较,差异具有显著性意义(P＜0.05);与缺血再灌注组比较,Tan ⅡA高、低剂量治疗组均显著增加Bcl-2表达,减少caspase-3表达,高、低剂量组之间差异亦具有显著性意义(P＜0.05).TanⅡA高、低剂量治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异具有显著性意义(P＜0.05).Tan ⅡA高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组,TanⅡA高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组.结论:TanⅡA对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与增加Bcl-2蛋白表达同时降低caspase-3蛋白表达有关.