乳腺癌组织及血浆中RASSF1A,CDH1甲基化的检测及临床意义

目的 研究乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤组织及相应患者血浆中Ras相关区域家族1A(RASSF1A)、上皮型钙黏附素(CDH1)基因启动子区异常甲基化状态及其临床意义.方法 应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法对乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤组织及相应血浆中RASSF1A,CDH1基因甲基化状态进行检测.结果 34例乳腺癌组织RASSF1A基因启动子甲基化率为73.53%(25/34),CDH1基因启动子甲基化率为50.00%(17/34),相应血浆中RASSF1A的甲基化检出率为55.88%(19/34);CDH1的甲基化检出率为35.29%(12/34);联合检测血浆中RASSF1A和CDH1基因启动子区甲基化的敏感性为64.71%(22/34);而25例良性肿瘤组织RASSF1A基因启动子甲基化率为12.00%(3/25),CDH1基因启动子甲基化率为4.00%(1/25),相应血浆中未检测出甲基化的RASSF1A和CDH1基因.RASSF1A,CDH1甲基化率与肿瘤病理类型、患者年龄、有无淋巴结转移的差异无显著性(P>0.05).结论 联合检测血浆中RASSF1A和CDH1基因启动子区甲基化,可用于乳腺癌的辅助诊断.     

乳腺癌患者血浆RASSF1A基因启动子甲基化的意义

目的:探讨乳腺癌患者血浆、肿瘤组织中RASSF1A基因启动子甲基化与临床病理等因素的相关性.方法:采用甲基化特异性PCR方法,分别检测68例乳腺癌患者血浆、肿瘤组织及癌旁腺体组织,以及12例良性乳腺疾病患者的血浆和乳腺组织中RASSF1A基因启动子甲基化状况.结果:乳腺癌组织RASSF1A基因启动子甲基化频率47.1%(32/68),患者血浆中同样DNA变异检出率33.8%(23/68).血浆中DNA甲基化状况与乳腺癌组织的甲基化状况显著相关(r=0.906,P=0.001).检测血浆中RASSF1A基因启动子甲基化的敏感性71.8%,特异性97.2%,肿瘤组织及血浆中游离DNA甲基化异常与临床分期,病理类型,肿瘤大小,ER,PR和cerbB-2状况无相关性(P＞0.05).乳腺癌组织中未检测到RASSF1A基因启动子甲基化的血浆中、乳腺良性疾病患者血浆中均未检测到该基因甲基化变异.结论:乳腺癌患者血浆中RASSF1A基因启动子甲基化与肿瘤组织中的变异频率相关.     

RASSF 1A基因在卵巢癌组织及腹腔冲洗液中甲基化的研究

目的:探讨卵巢癌组织和腹腔冲洗液中Ras相关区域家族1A (Ras association domain family 1A,RASSF 1A)基因启动子异常甲基化状况及其在卵巢癌诊断中的价值。方法:采用甲基化特异性PCR方法检测42例卵巢癌组织、腹腔冲洗液或腹腔积液、11例正常卵巢组织和19例良性病变卵巢组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化状态。结果:42例卵巢癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为38.1%,11例正常卵巢组织和19例良性卵巢组织中RASSF 1A基因启动子区无甲基化,差异有统计学意义(P<0.01)。临床分期Ⅲ期和Ⅳ期的卵巢癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为54.2%,高于临床Ⅰ期和Ⅱ期者16.6%(P<0.05)。淋巴结阳性者癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率56.5%,高于淋巴结阴性者15.8%。腹腔冲洗液或腹腔积液细胞学阳性者癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为74.1%,高于腹腔冲洗液或腹腔积液细胞学阴性者33.3%(P<0.01)。结论:RASSF 1A基因甲基化在卵巢癌患者中具有较高的发生率,检测卵巢癌组织和腹腔冲洗液或腹腔积液中RASSF 1A基因的甲基化状态对卵巢癌的诊断和判断预后具有一定的价值。     

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的：探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法：运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Western blotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果：在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例（70.83%）、11例（22.92%）和6例（12.50%）发生了甲基化, 喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血（P<0.05）。在48例喉癌组织中27例（56.25%）不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例（16.67%）,喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例（73.53%）呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例（14.29%）,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。     

乳腺癌患者RASSF1A基因启动子区甲基化及临床意义

目的 探讨乳腺癌组织中RASSF1A（RAS association domain family 1A）基因启动子区CPG岛甲基化状态及临床意义。方法 用甲基化特异性PCR（MSP）检测40份乳腺癌组织和24份正常乳腺组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态。结果 乳腺癌组织中RASSF1A基因启动子区CPG岛甲基化率为45．0％（18／40），与正常乳腺组织比较差异有显著性（2／24）（P〈0.05），但与肿瘤病理类型、患者年龄、有无淋巴结转移的差异无显著性（P〉0．05）。结论 RASSF1A基因启动予区在乳腺癌中发生异常甲基化，为乳腺癌的候选基因。     

食管癌组织Ras相关区域家族1A基因启动子区甲基化检测

目的:检测食管癌和癌旁正常组织Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区甲基化变化.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测79例食管鳞癌患者癌组织及对应的20例癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区甲基化,并观察食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化与临床病理变化的关系.结果:79例食管鳞癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率(67%,53/79)明显高于癌旁正常组织(15%,3/20).食管癌组织中不同年龄、分化程度的RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),而淋巴结转移与否、肿瘤分期间甲基化阳性率差异无统计学意义.20例同一个体癌组织甲基化阳性率明显高于癌旁正常组织(50%(10/20)vs 15%(3/20))(P＜0.05),仅3例同时出现甲基化,一致率为15%.结论:RASSF1A基因启动子区甲基化是食管鳞癌频发的分子事件.食管鳞癌组织RASSF1A基因甲基化明显高于癌旁正常组织,并且和年龄、分化程度有关.     

肾癌组织中RASSF1A和BLU基因的异常甲基化

目的:观察肾癌组织中RASSF1A和BLU基因启动子甲基化状态,探讨二者在肾癌发生中的可能作用.方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测26例肾癌组织和相应癌旁组织中RASSF1A和BLU基因启动子甲基化状态,分析二者检测结果.结果:肾癌组织中17例(65.4%)RASSF1A基因异常甲基化表达,相应癌旁组织中无RASSF1A基因异常甲基化表达;11例(42.3%)肾癌组织中BLU基因高甲基化,相应癌周组织中未发现BLU基因高甲基化.结论:肾癌组织中RASSF1A和BLU基因启动子高度甲基化,表明RASSF1A和BLU基因甲基化可能与肾癌的发生相关.     

应用BSP联合TA克隆测序检测胰腺癌中RASSF1A基因启动子区异常甲基化

目的:检测Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)在胰腺癌细胞株中的甲基化和表达状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病过程中的作用?方法:采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)联合TA克隆测序检测胰腺癌细胞株PANC-1及胰腺癌组织?癌旁组织及正常胰腺组织中RASSF1A启动子区CpG岛的甲基化状态,以甲基化酶抑制剂5-aza-2-deoxycitydine(5-aza-dC)处理PANC-1,观察处理前后甲基化率变化情况,逆转录PCR观察RASSF1A 的mRNA表达情况?结果:在PANC-1细胞中RASSF1A启动子的甲基化率平均为100.00%,在正常胰腺?癌旁及癌组织中平均分别为1.79%?93.75%和100.00%,与正常胰腺组织相比,胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高(P < 0.01),而癌旁及癌组织之间无明显差异(P > 0.05)?在PANC-1细胞?胰腺癌组织及癌旁组织中RASSF1A基因无表达,在正常胰腺组织中RASSF1A基因呈阳性表达;PANC-1细胞经5-aza-dC处理后,RASSF1A的甲基化率下降(88.89%,P < 0.05),mRNA表达无变化?结论:胰腺癌细胞株PANC-1及癌组织?癌旁组织RASSF1A基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1中RASSF1A基因的表达沉默?该基因异常甲基化有望成为胰腺癌的早期诊断指标和治疗靶点?     

应用MSP检测子宫内膜异位症相关性卵巢癌中RASSF2A基因启动子甲基化状态

目的采用甲基化特异性PCR(MSP)检测子宫内膜异位症相关性卵巢癌(EAOC)中RASSF2A基因启动子甲基化的情况。方法收集30例正常子宫内膜组织,30例卵巢透明细胞癌(OCC)组织,30例卵巢子宫内膜样腺癌(OEA)组织,采用MSP法分析比较RASSF2A启动子甲基化在不同组织类型患者中的表达差异。结果 63.33%(19/30)的卵巢透明细胞癌组织中存在RASSF2A启动子甲基化,73.33%(22/30)的卵巢子宫内膜样腺癌组织中存在RASSF2A启动子甲基化,而在正常子宫内膜组织中没有检测到甲基化现象。卵巢透明细胞癌组织RASSF2A基因启动子甲基化阳性率明显高于正常子宫内膜组织(P<0.05),卵巢子宫内膜样腺癌组织RASSF2A基因启动子甲基化阳性率明显高于正常子宫内膜组织(P<0.01)。结论RASSF2A基因启动子甲基化与EAOC的发生、发展有关。     

膀胱移行细胞癌中RASSF1A基因的表达及其临床意义

目的研究RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌(TCC)中的表达及其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应检测45例膀胱TCC及其相应癌周正常组织中RASSF1A基因mRNA表达情况,采用免疫组织化学方法检测38例膀胱TCC及18例癌周正常组织中RASSFIA蛋白表达情况。结果与癌周正常组织相比,60.0%(27/45例)的膀胱TCC组织中发现RASSF1A mRNA表达异常下调。RASSF1A蛋白在膀胱TCC组织中的阳性表达率为36.8%,明显低于癌周正常组织中的83.3%(P<0.05)。不同临床分期和病理分级间RASSF1A mRNA表达异常和RASSF1A蛋白阳性表达的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论RASSF1A的失表达可能参与膀胱TCC的发生。     

BRCA1基因在散发性乳腺癌中的表达及异常甲基化

目的：通过检测乳腺癌易感基因1（BRCA1）基因在散发性乳腺癌中的表达情况及其启动子甲基化状态,探讨BRCA1基因与散发性乳腺癌的关系。方法应用实时荧光定量PCR的方法和免疫组织化学方法分别检测BRCA1 mRNA和蛋白在60例散发性乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织及30例乳腺良性病变组织中的表达情况;应用重亚硫酸盐测序PCR（BPS）联合TA克隆测序方法检测上述组织中BRCA1启动子CpG岛的甲基化状态,分析BRCA1基因表达和启动子甲基化相关性。结果BRCA1 mRNA和蛋白在散发性乳腺癌组织中的相对表达水平分别低于癌旁正常组织及乳腺良性病变组织,差异有统计学意义（P＜0．001）。乳腺癌组织中BRCA1蛋白的表达率为51．7％（31／60）,明显低于癌旁正常乳腺组织的71．7％（43／60）及乳腺良性病变组织的66．7％（20／30）,差异有统计学意义（P＜0．001）;散发性乳腺癌组织中BRCA1启动子甲基化率为31．7％（19／60）,癌旁正常乳腺组织及乳腺良性病变组织均未检测出甲基化,差异有统计学意义（P＝0．000）;BRCA1蛋白表达与其启动子甲基化呈负相关（r＝－0．345,P＝0．007）。结论乳腺癌易感基因BRCA1启动子区CpG岛甲基化导致BRCA1基因表达显著下调,可能参与散发性乳腺癌的发生、发展。     

RASSFIA及CyclinD1在乳腺癌及癌前病变中的表达及意义

目的探讨RASSF1A与CyclinD1蛋白在乳腺癌发生发展中的作用及其在乳腺癌早期诊断中的意义。方法采用Western blot印迹法检测RASSF1A及Cyclin D1在20例乳腺纤维腺瘤组织，20例乳腺导管上皮不典型增生组织，20例乳腺导管内癌组织及50例原发性乳腺浸润性导管癌组织中的表达水平。结果导管内癌组RASSF1A的表达低于不典型增生组（P〈0．01），而cyclinD1的表达高于不典型增生组。乳腺癌组织中，RASSF1A的表达与病理分级及临床分期有关（P〈0．05）。随着病变程度加重，CyclinD1表达呈增高趋势（P〈0．01）。乳腺癌组织中，CyclinD1的表达仅与病理分级有关（P〈0．05）。乳腺癌中RASSF1A与CyclinD1两蛋白的表达呈负相关（P〈0．05）。结论RASSF1A与CyclinD1两种蛋白的异常表达在乳腺癌的发生发展中可能具有协同作用，二者联合检测能为乳腺癌的早期临床诊断和治疗提供有利的生物学信息。     

食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化检测及其临床意义

目的探讨Ras相关结构域家族基因1A（RASSF1A）启动子区异常甲基化与食管癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法,检测66例食管癌组织及相应的癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区异常甲基化。分析食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与临床病理特征的关系。结果在食管癌组织、癌旁正常组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率分别为48．5％（32／66）、6．1％（4／66）。淋巴结转移者食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（61．1％）明显高于无淋巴结转移者（33．3％）（χ^2=5．055,P=0．025）;晚期（Ⅲ～Ⅳ期）食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（69．2％）明显高于早期（Ⅰ～Ⅱ期）（35．0％）（χ^2=7．392,P=0．007）;食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与肿瘤分化程度无相关性（P〉0．05）。结论食管癌组织中存在RASSF1A基因启动子区的异常甲基化,甲基化与食管癌病理分期和淋巴结转移有关。     

卵巢癌组织和血清中RASSF1A基因甲基化的检测及临床意义

目的：检测卵巢肿瘤组织和血清中Ras相关区域家族1A（Ras association domain family 1A,RASSF1A）基因启动子区异常甲基化,并探讨其与卵巢癌的关系。方法：收集新鲜的卵巢癌组织及其对应的血清标本67例,采用半巢式甲基化特异性PCR技术分别检测肿瘤组织DNA和血清游离DNA中RASSF1A基因启动子异常甲基化情况。结果：卵巢癌患者血清和癌组织中RASSF1A基因甲基化的检出率分别为28.4%和40.3%。卵巢良性肿瘤组织和血清以及健康志愿者血清中均未发生RASSF1A基因甲基化。癌组织中RASSF1A基因的甲基化状况与血清中出现RASSF1A基因甲基化关系密切（P＜0.01）;卵巢癌患者血清和癌组织中RASSF1A基因的甲基化改变与肿瘤的临床分期、细胞分化程度、组织学类型无明显相关性（P＞0.05）;与淋巴结转移密切相关（P＜0.01）。结论：检测血清DNA 的RASSF1A基因异常甲基化有可能成为辅助卵巢癌诊断的有效方法之一。     

血浆RASSF1A甲基化检测及其在非小细胞肺癌诊断中的意义

目的:分析非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血浆游离DNA和相应的肿瘤组织中RASSF1A启动子甲基化情况,探讨检测血浆中该基因异常甲基化在NSCLC诊断中的意义。方法:应用半巢式MSP法分析了96例NSCLC、12例肺良性病变患者及20例健康人血浆游离DNA,MSP法分析了96例NSCLC患者对应的肿瘤组织DNA,检测RASSF1A的异常甲基化改变。结果:①血浆及相应的肿瘤组织RASSF1A异常甲基化检出率分别为43.75%和48.96%,血浆中该基因甲基化仅发生在相应的肿瘤组织甲基化阳性的NSCLC患者。②血浆RASSF1A异常甲基化只与肿瘤的组织学类型有关,鳞癌组(57.14%)高于腺癌组(33.33%,P<0.05)。但与患者的年龄、性别、是否吸烟,肿瘤的TNM分期、分化程度和有无淋巴结转移无关(P>0.05)。③检测RASSF1A异常甲基化用于诊断NSCLC的敏感性43.75%,特异性100%,阴性预测值41.30%,阳性预测值100%。结论:RASSF1A异常甲基化很可能是NSCLC发生过程中的早期分子事件,检测血浆游离DNA中该基因异常甲基化可能成为NSCLC早期诊断的有效方法之一。     

MUC1与ER、PR在乳腺癌组织中的表达及意义

目的　检测MUC1、ER和PR在乳腺癌中的表达 ,探讨其在乳腺癌的诊断和预后评估中的意义。方法　采用免疫组化方法检测了 86例乳腺癌及 4 0例乳腺良性病变组织中MUC1、ER和PR的表达水平。结果　乳腺良性病变组织中可见MUC1阳性表达 ,而乳腺癌组织中MUC1高表达 ,MUC1在乳腺癌组织中的高表达与乳腺良性病变组织之间存在显著性差异 (P <0 .0 1)。ER、PR在乳腺癌与乳腺良性病变组织中的阳性表达之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。MUC1及PR在乳腺癌组织中的表达与预后无明显相关 (P >0 .0 5 ) ,ER在乳腺癌组织中阳性表达与乳腺癌的良好预后明显相关 (P <0 .0 1)。结论　MUC1在乳腺癌组织中的高表达是乳腺良恶性病变的鉴别诊断指标 ,与乳腺癌的预后无明显相关 ,ER阳性表达是乳腺癌预后良好的指标。     

卵巢上皮性癌组织中TGFBI基因启动子甲基化及VEGF检测

目的:检测卵巢上皮性癌组织中TGFBI基因启动子的甲基化状态及VEGF的表达,探讨二者的关系。方法:应用甲基化特异性PCR法(MSP)和免疫组化SP法分别检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织及30例卵巢上皮性癌组织中TGFBI基因启动子的甲基化状态及VEGF蛋白的表达。结果:3种组织中TGFBI基因启动子的甲基化率及VEGF蛋白的阳性表达率差异均有统计学意义(χ2=34.886和26.298,P<0.001),卵巢上皮性癌组织中TGFBI基因的甲基化率及VEGF蛋白的阳性表达率均高于正常卵巢组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织。卵巢上皮性癌组织中TGFBI基因启动子甲基化与VEGF的表达有关联(χ2=13.976,rP=0.516,P<0.001)。结论:TGFBI基因启动子在卵巢上皮性癌组织中发生超甲基化,可能诱导血管生成,促进卵巢上皮性癌的发生发展。