氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞产生转化生长因子β1的影响

目的 观察氧化苦参碱对传代大鼠肝星状细胞自分泌产生TGFβ1的影响。方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流消化正常大鼠肝脏，Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞并传一代，药物作用于传代HSC，以貂肺上皮细胞(My—l—Ln)生长抑制MTI’法检测培养上清中他隋活性及分泌总量，并抽取HSC的mRNA，RT—PCR半定量分析药物对HSC他F住mRNA的表达。结果氧化苦参碱可减少HSC’rG耶。的分泌总量，并抑制‘IGF任的活化及mRNA的表达。结论氧化苦参碱能抑制肝星状细胞‘rGFA产生并活化可能是与其具有抗肝纤维化的作用有关。     

羟尼酮可阻止大鼠肝星状细胞活化：基于抑制TGF-β1通路蛋白的磷酸化

目的 探讨羟尼酮对CCl₄诱导的大鼠肝纤维化的作用及相关机制。方法 66只雄性SD大鼠按随机数字法分为对照组10只、模型组20只、羟尼酮(100 mg/kg)组12只、羟尼酮(250 mg/kg)组12只、吡非尼酮(250 mg/kg)组12只,采用CCl₄皮下注射进行肝纤维化造模,羟尼酮、吡非尼酮予以灌胃给药,处死大鼠后,留取血清检测肝功能,利用肝脏组织检测羟脯氨酸的含量,肝组织进行HE染色和Sirius Red染色,对炎症和纤维化程度进行评分。将人肝星状细胞系LX-2分组：对照组、TGF-β1组、羟尼酮组、吡非尼酮组,经过TGF-β1刺激和羟尼酮、吡非尼酮处理后,Western blot分别检测α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和磷酸化Smad3、磷酸化p38、磷酸化Erk1/2、磷酸化Akt等磷酸化蛋白。结果 动物实验显示羟尼酮组大鼠肝功能值有改善,肝组织羟脯氨酸含量明显减少,肝组织纤维化程度显著降低,且均具有统计学意义(P<0.05)。细胞实验发现随羟尼酮浓度的增高,ɑ-SMA和Ⅰ型collagen蛋白表达水平降低;TGF-β1刺激细胞后...     

槲皮素对活化大鼠肝星状细胞TGF-1信号的影响

目的　了解槲皮素对肝脏星状细胞 (HSCs)通过转化生长因子 (TGF)β1诱导的结缔组织生长因子(CTGF)及纤维连接素 (FN)表达的影响。方法　通过胶原酶与链霉蛋白酶原位灌注、Nycondenz一步法梯度离心分离雄性 Wistar大鼠 HSCs。培养活化的 HSCs无血清饥饿后与 10 - 9～ 10 - 5m ol/ L浓度的槲皮素孵育 2 4 ,4 8或 72h。以流式细胞术测定 TGFβ1的表达与分泌。逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)检测 CTGF基因表达 ,免疫组化检测FN表达。结果　流式细胞术检测免疫荧光强度显示 10 - 8～ 10 - 5m ol/ L浓度槲皮素可抑制 HSCs TGFβ1表达 ;10 - 7mol/ L浓度槲皮素孵育 4 8h可显著抑制 HSCs TGFβ1表达 (特异性平均荧光强度分别为 13.33± 2 .4 4和 18.0 8±2 .5 4 ,t=16 .5 2 ,P<0 .0 1)。 TGFβ1可明显促进活化 HSCs CTGF m RNA表达 ,但 10 - 7mol/ L浓度槲皮素在 72 h内几乎可完全拮抗此效应。与对照相比 ,10 - 7mol/ L浓度槲皮素孵育 4 8h可显著抑制 HSCs FN表达。结论　槲皮素可抑制 TGFβ1信号通路 ,包括抑制 TGFβ1、FN表达及 CTGF的基因表达 ,具有潜在的抗肝纤维化治疗作用。     

TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞

目的：研究转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）激活小鼠肝星状细胞（mouse hepatic stellate cells,mHSC）的具体机制。方法：实验选用mHSC-T25细胞株为实验对象,随机分为激活组（mHSC-T25+10 ng/mL TGF-β1）、抑制组（mHSC-T25+1 μmol/L TGF-β-R1抑制剂）和对照组（mHSC-T25）。qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1、转化生长因子β受体1（transforming growth factorβreceptor1,TGF-β-R1）、Jagged1、血管内皮生长因子（vas－cular endothelial growth factor,VEGF）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）等的mRNA表达;细胞免疫荧光法检测α-SMA、Jagged1等蛋白的表达;Western blot检测TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3等蛋白的表达。结果：①TGF-β1刺激组中α-SMA、TGF-β1、TGF-β-R1、Jagged1、VEGF、HGF等mRNA表达量均较对照组明显增加而抑制组均明显下降。α-SMA：激活组（315.1±6.2）%,抑制组（34.3±4.5）% （F=3291.956,P=0.000）;TGF-β1：激活组（524.8±14.3）%,抑制组 （29.0±10.7）%（F=469.534,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组（235.5±15.2）%,抑制组（17.0±2.8）%（F=392.239,P=0.000）;Jagged1：激活组（548.7±16.6）%,抑制组（17.4±4.7）%（F=364.166,P=0.000）;VEGF：激活组（331.9±19.8）%,抑制组（19.5±3.7）%（F=278.407,P=0.000）;HGF：激活组（376.00±6.51）%,抑制组（16.2±2.7）%（F=640.340,P=0.000）。②激活组高表达α-SMA、Jagged1等蛋白,而对照组、抑制组表达明显较少。α-SMA：激活组0.880±0.016,对照组0.481±0.007,抑制组0.207±0.014 （F=2098.556,P=0.000）;Jagged1：激活组0.796±0.015,对照组0.474±0.021,抑制组0.167±0.005（F=1242.556,P=0.000）。③TGF-β1激活组中TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白表达量均较对照组明显上调而抑制组均明显下调。TGF-β1：激活组1.180±0.138,对照组0.654±0.061,抑制组0.359±0.012（F=67.706,P=0.000）;α-SMA：激活组1.076±0.063,对照组0.689±0.022,抑制组0.374±0.011（F=239.186,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组1.192±0.142,对照组0.710±0.380,抑制组0.378±0.069 （F=57.235,P=0.000）;Jagged1：激活组1.582±0.247,对照组0.817±0.116,抑制组0.364±0.059（F=43.649,P=0.000）;Smad2/3：激活组2.057±0.114,对照组1.203±0.105,抑制组0.664±0.063（F=158.856,P=0.000）;p-Smad2/3：激活组2.088±0.120,对照组1.168±0.107,抑制组0.573±0.120 （F=136.369,P=0.000）。上述实验结果提示,激活组、抑制组与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞并调控其相关生物学活性。     

粉防己碱抑制肝星状细胞活化与转化生长因子-β信号转导关系

目的观察不同剂量粉防己碱对静止期大鼠肝星状细胞（HSC）活化的影响,以及该作用与转化生长因子-β（TGF-β）信号转导的关系.方法采用胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离正常大鼠HSC,培养48h后并给予不同浓度粉防己碱（0.25、0.5、1.0、2.0 mg/L）处理.观察HSC形态学变化.采用免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达并进行图像分析;放射免疫法检测上清层粘连蛋白（LN）和Ⅲ型前胶原（PCⅢ）;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1、Smad 7 mRNA表达;Western blot法检测给予粉防己碱1.0mg/L处理的Smad 7表达.结果粉防己碱0.25～2.0 mg/L能抑制体外培养静止期HSC形态向成纤维细胞样转化;降低α-SMA、LN和PCⅢ表达;RT-PCR显示粉防己碱抑制HSC TGF-β1 mRNA表达,抑制率最高达87.85%（P＜0.01）,同时上调Smad 7 mRNA表达,达对照组的2.4～5.8倍（P＜0.01）,两者呈显著负相关（r=-0.755,P＜0.01）.Western blot也显示,与对照组相比,粉防己碱（1.0 mg/L）显著上调Smad 7蛋白表达.结论粉防己碱能直接抑制体外培养的静止期HSC活化,该作用可能是上调Smad 7、影响TGF-β1信号通路并抑制TGF-β1表达的结果.     

姜黄素对肝纤维化大鼠肝组织中α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1表达的影响

目的 观察姜黄素对肝纤维化大鼠肝组织中α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1表达的影响，探讨姜黄素抗大鼠肝纤维化的作用机制。方法 用四氯化碳制作大鼠肝纤维化模型，同时分别予低（100mg/kg）、中（200mg/kg）、高（300mg/kg）剂量姜黄素灌胃，设立溶质对照组；分别于实验第4、7、21、42天，各组随机处死5只大鼠，取同部位肝组织行HE, V-G染色，并用免疫组化方法检测各组α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1 的表达。结果 溶质对照组不表达或微量表达α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1；模型组α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1的表达随造模时间延长明显增强，姜黄素可显著减少α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1的表达，其作用强度与剂量和时间有关。结论 姜黄素可抑制大鼠肝纤维化模型中PDGF-BB和TGF-β1的表达，这可能是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

绞股蓝总皂苷对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的：观察绞股蓝总皂苷对大鼠肝纤维化转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：将Wistar雄性大鼠设为正常组、模型组、绞股蓝总皂苷组、秋水仙碱组,除正常组外采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型。造模第7周开始予相应的药物干预,每日给药剂量为股蓝总皂苷200 mg/kg、秋水仙碱0.1 mg/kg,共3周。观察大鼠一般情况变化,肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量,肝组织病理及胶原沉积;检测肝组织肝星状细胞（HSC）活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达,肝组织TGF-β1/Smad信号通路指标TGF-β1、TGF-β1受体1（TβR-Ⅰ）、TGF-β1受体2（TβR-Ⅱ）、Smad2/p-Smad2、Smad3/p-Smad3蛋白表达。结果：模型组大鼠一般状态较差,肝组织Hyp含量较正常组显著增高,肝小叶被破坏,肝细胞脂肪变性伴炎性细胞浸润,并有大量纤维结缔组织增生;大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均显著升高,而Smad3蛋白表达与正常组比较无差异。绞股蓝总皂苷组及秋水仙碱组大鼠肝组织Hyp含量显著降低,肝组织病理改善;绞股蓝总皂苷组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及Smad3蛋白表达无显著变化;秋水仙碱组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、p-Smad2及Smad3蛋白表达无显著变化。结论：绞股蓝总皂苷对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有显著的干预作用,其作用机制可能与抑制HSC活化、TGF-β1分泌及其信号通路中p-Smad2、p-Smad3表达有关。     

TGF-β1、bFGF与肝纤维化的关系

近年来研究发现,在肝纤维化的病理生理过程中,储脂细胞通过自分泌和旁分泌的方式分泌TGF-β1、和bFGF,从而调节自身的增生分化和细胞外基质(ECM)的产量,促进肝纤维化的发生和发展.     

TGF-β1与肝纤维化的关系再探讨

转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)是一簇具有多种功能的蛋白多肽,广泛存在于动物正常组织细胞以及转化细胞中,以骨组织和血小板中含量最为丰富.目前至少发现有5种异构体,分别命名为TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5[1](其中肝脏中含量最高并有牛物活性的是TGF-β1).正常情况下,TGF-β1的表达极少,而肝损伤时其表达明显增加,是肝纤维化形成的关键因子.     

蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的研究蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响。方法传代培养的HSC-T6与蕲艾提取液药物血清共同培养24h后,采用MTT法检测其对HSC增殖的影响,Elisa法检测TGFβ1蛋白表达情况。结果不同浓度蕲艾提取液药物血清(5%、10%、20%)与空白对照组及生理盐水血清组比较,能显著抑制HSC-T6增殖(P0.01)及TGFβ1蛋白的表达(P0.01)。结论蕲艾提取液药物血清可显著抑制HSC-T6增殖。     

姜黄素对大鼠肝星状细胞中TGF-β调节的NADPH氧化酶4的激活及Smad信号通路的影响

目的：研究姜黄素潜在的抗纤维化作用,以及转化生长因子β( TGF-β)诱导大鼠肝星状细胞( HSC-T6)激活的机制。方法不同浓度的姜黄素(0、5、10、20、40μmol/L)处理HSC-T6后,用MTT法测定其对HSC-T6增殖作用的影响;用RT-PCR法检测其mRNA水平的表达;用Westem blot法检测表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外基质主要成分α1I胶原(Col1α1)、NADPH氧化酶4(NOX 4)、 Smad 2、Smad 3及其磷酸化的水平。结果40μmol/L的姜黄素组刺激HSC-T648 h后,其抑制率达到最大,显著低于仅TGF-β1刺激组、5、10及20μmol/L姜黄素组( P<0．05)。姜黄素可显著降低激活型HSC-T6的α-SMA、α1I胶原mRNA与蛋白表达,从而可以降低细胞外基质的沉积;有效降低了NOX 4的蛋白水平,减少了活性氧的水平;还明显降低Smad 2、Smad 3的磷酸化程度,呈浓度依赖性。结论姜黄素在体外能够明显地抑制HSC-T6激活,对肝纤维化的发生发展具有一定抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β诱导的NOX4的激活及Smad信号通路有关。     

细胞因子对肝星状细胞活化与凋亡的影响

肝纤维化是指各种因素引起的肝脏损害和炎症,是各种慢性肝病向肝硬化发展的共有的病理特征,肝星状细胞的活化在肝纤维化的发生发展过程中的中心环节作用一直以来受到人们的关注,本文就针对肝星状细胞的各种细胞因子对肝纤维化发生发展的作用作一综述.     

激活素A对肝星状细胞胶原合成的影响

目的：探讨激活素A(ACTA)对肝星状细胞(HSC)细胞外基质(ECM)合成的影响。方法：采用原位酶灌注法和密度梯度离心法分离HSC。初次传代后，HSC随机分为八组，分别加入不同浓度的ACT A和TGF-β1。加药后24h，采用放射免疫法检测培养液Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原含量。结果：ACTA能刺激体外培养HSC分泌ECM，在一定浓度范围内(1～100μg/L)呈剂量依赖关系；100μg/L ACT A刺激HSC分泌ECM的能力与10μg/L TGF-β1。相当，而且ACTA能协同TGF-β1发挥该生物学效应。结论：ACTA参与肝纤维化形成。     

祛湿软肝方对肝纤维化大鼠TGF-β1蛋白表达的影响

目的探讨以清热祛湿为治法的祛湿软肝方防治肝纤维化的作用机制.方法采用四氯化炭法建立肝纤维化大鼠模型,通过免疫组化及图像分析等方法,观察祛湿软肝方对大鼠肝纤维化组织转化生长因子-β1蛋白表达的影响.结果祛湿软肝方能明显抑制大鼠肝纤维化组织转化生长因子-β1蛋白的表达(p＜0.05或p＜0.01).结论祛湿软肝方可有效的防治大鼠肝纤维化,其作用机制可能是通过抑制肝纤维化组织转化生长因子-β1蛋白的表达,进而抑制肝星状细胞的增值.     

黄芩素通过Smad信号通路抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞活化

探讨黄芩素是否通过Smad信号通路抑制TGF-β1诱导的肝星状细胞(HSC-T6)活化。用不同浓度黄芩素和/或5 μg/L的转化生长因子β1(TGF-β1)刺激细胞,用免疫细胞化学法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,用Western blot法检测p-Smad 2、p-Smad 3表达。结果显示,TGF-β1可使HSC-T6细胞α-SMA表达增加,黄芩素预处理后,可剂量依赖性地降低α-SMA表达;TGF-β1可使HSC-T6细胞p-Smad 2和p-Smad 3的蛋白水平增加,500 nmol/L黄芩素预处理并未显著降低p-Smad 2和p-Smad 3的蛋白水平。结果说明,黄芩素可抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞活化,其机制与TGF-β1/Smad信号通路无关。     

肝星状细胞的活化对肝纤维化形成的影响

肝纤维化(HF)是肝硬化及肝癌的前期病变,是危害人民生命健康的常见疾病.本文从诱发肝纤维化的主要因素肝星状细胞(HSC)的活化,阐述了HSC的一般性质与功能、HSC活化的机制、肝纤维化的发病原因、活化的HSC在HF中的作用、肝纤维化可逆转的分子生物学基础与临床证据,说明HF逆转的可能性,为预防肝硬化和肝癌的发生,寻找有效的预防与治疗方法.     

肝星状细胞的活化对肝纤维化形成的影响

肝纤维化(HF)是肝硬化及肝癌的前期病变,是危害人民生命健康的常见疾病.本文从诱发肝纤维化的主要因素肝星状细胞(HSC)的活化,阐述了HSC的一般性质与功能、HSC活化的机制、肝纤维化的发病原因、活化的HSC在HF中的作用、肝纤维化可逆转的分子生物学基础与临床证据,说明HF逆转的可能性,为预防肝硬化和肝癌的发生,寻找有效的预防与治疗方法.     

新城疫病毒抑制肝星状细胞活化的初步研究

目的：探讨新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）在活化肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）中的复制对HSC的活化增殖以及细胞生物学功能的影响。方法：用不同滴度的NDV溶瘤株Italien（NDV-Italien）感染经转化生长因子-β1（trans－formation growth factor-β1,TGF-β1）刺激活化的人HSC系LX-2。MTT法检测NDV 对细胞增殖率的影响。免疫荧光显微镜技术检测活化标志物α-SMA的表达变化。结果：NDV的感染抑制了LX-2细胞的增殖,细胞增殖率和病毒滴度呈负相关。与未刺激组相比,NDV在TGF-β1刺激的LX-2细胞中的增殖抑制率提高,LX-2细胞的活化标志物α-SMA的表达显著性下调。结论：NDV在活化LX-2细胞中的复制具有抑制细胞增殖和HSC活化的作用。