蝎毒对人肝癌Bel-7404 细胞端粒酶活性的影响

目的：观察蝎毒(BMK)对人肝癌Bel-7404细胞端粒酶活性的影响。方法：不同浓度的BMK处理体外培养的人肝癌Bel-7404细胞72h，聚合酶链反应一端粒重复扩增(PCR-TRAP)法测定端粒酶活性，四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖抑制。结果：BMK可抑制Bel-7404细胞端粒酶活性，随BMK浓度增大，端粒酶活性抑制增强。MTT结果显示BMK抑制Bel-7404细胞增殖且抑制有浓度依赖性。结论：端粒酶活性的抑制可能是BMK发挥抗癌活性的作用机制之一，并可作为评价BMK抗肝癌冶疗效果的指标之一。     

转导人端粒酶逆转录酶基因致人成骨细胞永生化的研究

目的建立永生化的人成骨细胞系供骨科临床和基础研究使用。方法将人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,以逆转录病毒为载体,导入人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)全长cDNA,经筛选得到阳性克隆,体外连续传代,检测hTERT基因的整合情况及其表达,并对不同代次细胞的成骨特性进行了检测。结果成功地将hTERT基因转入人成骨细胞,得到的转化细胞端粒酶表达阳性,增殖旺盛,至今已传至62代,对第25、第55代转化细胞分别进行碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨桥素的检测,证明此永生化细胞保持了良好的成骨特性。结论转导外源性的hTERT基因可以导致人成骨细胞永生化且可保持其正常的成骨特性。     

人端粒酶逆转录酶核心启动子的克隆

目的克隆出人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因核心启动子,为构建hTERT核心启动子调控的重组腺病毒提供实验基础。方法提取肝癌细胞HepG2基因组DNA作为模板,进行PCR扩增,扩增产物酶切后亚克隆至pcDNA3.1（＋）质粒。对重组体进行酶切和测序鉴定。结果PCR扩增出约250 bp的目的片段,经酶切和测序鉴定表明质粒构建成功。结论hTERT核心启动子的成功克隆,为进一步实验提供了基础。     

端粒酶逆转录酶基因单核苷酸部分位点多态性可能增加罹患肝癌和肝癌转移的风险

目的本研究拟通过对原发性肝癌及肝癌转移患者hTERT单核苷酸多态性的分布进行调查,探索其在肝癌转移中的潜在作用。方法选取全血样本和血清样本,290例男性样本诊断明确,分组如下,原发性肝癌组162例,原发性肝癌合并转移组22例,对照组106例。采用美国Beckman公司的超高通量液相芯片SNP基因分型系统SNPStream进行测定对基因进行分型。结果 rs2853690和rs10069690两个位点具有统计学差异。等位基因频率分析中,rs10069690和rs6554743 C和T等位基因间存在统计学差异。rs10069690在等位基因频率和携带率分析中具有统计学差异,在肝癌和肝癌转移中比例较高。结论本研究发现hTERT部分位点多态性可能增加罹患肝癌和肝癌转移的风险,为肝癌发病和转移机制提供一定的理论依据。     

蝎毒对耐药肝癌细胞株Bel-7404/ADM逆转作用研究

目的:研究蝎毒(BMK)对耐药肝癌细胞株Bel-7404/ADM耐药逆转的的机理.方法:采用免疫组化检测细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达,荧光定量PCR法检测多药耐药基因MDR1 mRNA水平.结果:50 mg/L蝎毒处理Bel-7404和Bel-7404/ADM后,细胞表面P-gp表达分别由原来的4.20±0.05、68.49±3.07下降到4.05±0.07、37.15±2.03,差异均有统计学意义(u=3.025 3,P=0.002 5).多药耐药基因MDR1 mRNA表达分别由原来的1.73±0.35、9.51±1.82下降到2.35±0.18、4.58±0.22,差异无统计学意义(u=1.603 6,P=0.108 8).结论:BMK在非细胞毒剂量水平具有下调MDR1 mRNA、P-gp的表达的作用.     

端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子的克隆及在人肝癌细胞的肿瘤特异性分析

目的:克隆hTERT基因启动子并检测其在不同肝癌细胞系和正常组织细胞中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据.方法:采用PCR法扩增获得hTERT基因的启动子片段,将之克隆到表达虫荧光素酶基因的报告质粒上,通过测定荧光素酶报告基因的表达,检测hTERT基因启动子在肝癌细胞系和正常组织中的转录活性,并将之与甲胎蛋白(alpha-fetal-protein,AFP)基因启动子活性相比较,评价其作为肝癌基因治疗中应用的肿瘤特异性启动子的可行性.结果:成功克隆了hTERT启动子,证实hTERT启动子在肝癌细胞中具有相当强的转录活性,其活性水平为AFP启动子的14～30倍;在原代培养的成纤维细胞中其启动子未表现转录活性.结论:hTERT启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性和显著的肿瘤特异性,可望开发成为新型的肝癌靶向性基因治疗工具.     

端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨端粒酶逆转录酶(TERT)的反义寡核苷酸(ASODN)对甲状腺癌(TC)细胞凋亡的影响.方法:体外培养TC细胞,TERT ASODN和正义寡核苷酸(SODN)分别作用于体外培养的TC细胞,采用透射电镜,Hoechest荧光染色,流式细胞仪等方法分析ASODN TERT对TC细胞凋亡的影响.结果:透射电镜示ASODN可诱导TC出现典型的细胞凋亡形态,Hoechest荧光染色显示ASODN可使TC凋亡数目增多从52±16上升到178±32,流式细胞仪证实5 μmol/L ASODN处理组,SODN处理组及空白对照组的细胞凋亡率分别为10.4%,1.6%和无凋亡(P＜0.05).结论:TERT ASODN能增强TC细胞凋亡.     

人端粒酶逆转录酶与甲状腺癌组织的关系的研究进展

目的探讨甲状腺癌与人端粒酶逆转录酶的关系及其调节机制。方法参阅国内外相关文献就人端粒酶逆转录酶与甲状腺癌组织的关系及其调控机制作一综述。结果人端粒酶逆转录酶在甲状腺癌发生发展中起重要作用并受多种因素调节。结论人端粒酶逆转录酶对甲状腺癌的诊断、预后估计及针对端粒酶逆转录酶的抑制剂在甲状腺癌的基因治疗中具有重要的临床意义。     

蝎毒多肽提取物抑制胰腺癌肝转移作用的实验研究

目的探讨东亚钳蝎蝎毒多肽提取物（PESV）对胰腺癌肝转移的抑制作用。方法筛选出高肝转移的胰腺癌细胞亚型MIA PaCa2 3,用Transwell小室模型观察PESV对MIA PaCa2 3细胞体外侵袭能力的影响;尾静脉注射MIA PaCa2 3细胞建立高肝转移率的裸鼠胰腺癌模型,对比PESV和化疗药物吉西他滨（gemcitabine）以及抗血管生成剂TNP 470对裸鼠胰腺癌肝转移的抑制作用。 结果PESV可以抑制MIA PaCa2 3细胞穿过人工基底膜的能力;PESV处理组肝转移抑制率为70％（7/10）,与吉西他滨处理组相近（8/10）,明显高于TNP 470处理组（2/9）。结论PESV作为一种“抗血管-细胞毒”药物对胰腺癌肝转移具有明显的抑制作用。     

RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性抑制的研究

目的:探讨RNA干扰技术使人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因沉默,对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性的抑制作用。方法:针对hTERT基因设计构建多种siRNA表达载体,并转染至膀胱肿瘤BIU-87细胞,通过实时荧光定量、单四唑(MTT)检测端粒酶活性,观察siRNA表达载体对hTERT基因表达的影响。结果:实时荧光定量和MTT检测证明,所构建的载体能导致不同程度的hTERT基因沉默,并成功地抑制BIU-87细胞的生长。结论:RNA干扰膀胱尿路上皮癌细胞(BIU-87)端粒酶hTERT基因,能影响端粒酶基因的表达,为进一步研究端粒酶活性在膀胱尿路上皮癌中的作用奠定了基础。     

东亚钳蝎蝎毒蛋白的分离纯化

本文用离子交换层析、凝胶过滤等分离纯化技术从东亚钳蝎蝎毒中首次得到１个分子量为２６６２５的蝎毒蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示为一条带，激光扫描纯度为９４％。结果说明，蝎毒成分非常复杂，其广泛的药理学性质可能与此有关。     

蝎毒多肽促进创伤皮肤溃疡愈合的实验研究

目的研究蝎毒多肽促进皮肤溃疡愈合的作用及其机制。方法 NIH小鼠60只,采用创伤溃疡模型,分成五组,分别为外用无菌生理盐水组（空白组）、外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子（bFGF,贝复济）组（150 AU/cm^2）、蝎毒多肽高、中、低浓度治疗组（4×10^-3、4×10^-4、4×10^-5mg/mL）,给药的3、5、7、9 d测量创面面积,计算溃疡愈合率;采用液体试管法和琼脂稀释法观察体外抑菌作用。结果随给药时间延长,蝎毒多肽治疗组溃疡愈合率逐渐升高,与空白组比较,差异有统计学意义;蝎毒多肽对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度（MIC）为0.125 0 mg/mL。结论蝎毒多肽具有促进皮肤溃疡愈合及体外抑菌的作用。     

人端粒酶逆转录酶在喉鳞状细胞癌中表达与c-myc的相关性

目的研究人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA在喉鳞状细胞癌中和病理分级、临床参数的关系以及和c-myc的相关性。方法用原位杂交法检测40例喉鳞状细胞癌中hTERT mRNA的表达,用免疫组织化学法检测c—myc蛋白。结果喉正常组织、不典型增生、鳞癌组织中hTERT mRNA的阳性率分别为0％（0／10）、10％（1／10）、80％（32／40）,喉鳞癌中hTERT mRNA的阳性率明显高于正常组织（P〈0．05）和不典型增生（P〈0．05）,hTERT mRNA水平与c—myc的表达呈显著相关（r=0．5422,P〈0．01）。喉鳞癌中hTERT mRNA表达水平与病理分级不相关（P〉0．05）,与年龄、性别、TNM分期和淋巴结转移情况不相关（P〉0．05）。结论喉鳞癌中hTERT mRNA的阳性率明显高于正常组织和不典型增生,有助于喉部良恶性病变的鉴别,c-myc的过度表达可能是喉鳞癌端粒酶活性升高的一个重要机制。     

端粒酶催化亚单位在细胞学诊断肺癌中的表达

目的:检测支气管镜涂片中端粒酶催化亚单位(hTERT)的表达,探讨其与肺癌发生的关系,探索细胞学诊断肺癌的新途径。方法:应用免疫组化和原位杂交的方法检测137例支气管镜涂片中hTERT和hTERTmRNA的表达,并与临床病理资料及细胞学诊断进行相关性分析研究。结果:137例病例中,hTERT和hTERTmRNA表达阳性率在细胞学诊断为癌细胞组分别为67.86%(57/84)和79.76%(67/84);疑癌或异型细胞组分别为46.67%(7/15)和60.00%(9/15);未见癌细胞组分别为5.26%(2/38)和39.47%(15/38)。二者的表达在癌细胞组明显高于其他2组(P<0.05)。其中有组织学对照的105例,hTERT和hTERTmRNA阳性表达率与细胞学诊断阳性率相一致。hTERT和hTERTmRNA的阳性表达率呈正相关性(r=0.994,P<0.05),但这二者的表达率与组织病理类型及其他临床特征差异均无显著性(P>0.05)。结论:端粒酶在支气管涂片中的阳性表达与肺癌的发生密切相关。hTERT和hTERTmRNA在癌组织中均存在高表达,且比传统形态学诊断更敏感。而hTERT蛋白的表达在细胞学涂片中更可靠(假阳性率低)。因此检测这二者的表达有助于提高肺癌的细胞学检出率,对早期发现、诊断肺癌有重要意义。     

Expression of telomerase activity， telomerase RNA component and telomerase catalytic subunit gene in lung cancer

目的：探讨hTR、hTERT与端粒酶活性的表达是否与肺癌的发生发展有关,深入了解端粒酶基因对端粒酶活性的调控是在基因水平还是在转录水平。方法：采用TRAP-PCR和RT-PCR方法分别检测68例肺癌组织、68例癌旁组织端粒酶活性、端粒酶基因hTR和hTERT的表达。结果：68例肺癌组织中端粒酶阳性率79%,HTR阳性率为98.5％,HTERT阳性率为91.2%。68例癌旁组织中,无一例表达端粒酶阳性,且大多数癌旁组织均表达HTR(91.2%),而HTERT在68例癌旁组织中仅7例为阳性。结论：肺癌组织中表达高频率的端粒酶活性而癌旁组织无一例表达端粒酶阳性说明了端粒酶的活性是肺癌发生发展所必须的。与HTR相比,HTERT同端粒酶具有更市制一致性,其一致率为88.9％。HTR与HTERT可能是在转录后或翻译水平对端粒酶进行调控的。     

蝎毒镇痛酊抑制大鼠躯体痛实验研究

Ｗｉｓｔａｒ大鼠１００只，随机分为１０组，每组１０只。５组动物用于注射Ｆｏｒｍａｌｉｎ致痛模型镇痛实验：动物注射Ｆｏｒｍａｌｉｎ液后１ｍｉｎ开始涂蝎毒镇痛酊或生理盐水（其中１组于注射前３０ｍｉｎ口服阿斯匹林，观察早反应及迟反应。另５组动物用于神经干结扎慢性痛镇痛模型：戊巴比妥钠腹腔麻醉，在镜下于腓总神经与胫神经分支处结扎神经干，４８ｈ后分别涂蝎毒镇痛酊、生理盐水或口服阿斯匹林，第２０ｄ记录肌电变化。结果：蝎毒镇痛酊外用，对大鼠注射Ｆｏｒｍａｌｉｎ引起阵发性肌电发放、神经干结扎慢性痛及结扎后自残率均有显著的抑制作用，并具有一定的剂量效应关系。提示蝎毒镇痛酊对急、慢性躯体痛具有抑制作用。     

不同肿瘤细胞株人端粒酶逆转录酶及端粒酶活性的检测及其意义

目的：检测5种肿瘤细胞株人端粒酶逆转录酶（hTERT）表达及端粒酶活性状态，为端粒酶抑制剂在肿瘤治疗学方面的应用研究提供理论基础。方法：分别用免疫细胞化学S-P法和TRAP-ELISA方法检测人宫颈癌细胞株HeLa、人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株SMMC7721、人前列腺癌细胞株PC-3m和人骨肉瘤细胞株U2OS hTERT表达及端粒酶活性状态。 结果：HeLa细胞hTERT表达阳性率最高，为 (93.75±3.10) %；而U2OS阳性表达率最低,仅为(2.75±0.96) %，近于不表达；其他3种细胞MCF-7、SMMC7721和PC-3m的hTERT表达阳性率分别为(92.50±2.65)%、(53.75%±2.22)%和(23.50±2.89)%。与hTERT表达阳性率相似，HeLa细胞端粒酶活性最强，为(94.58±3.49)%；而U2OS 端粒酶活性近于阴性，为(3.02±0.43)%；其他3种细胞MCF-7、SMMC7721和PC-3m的端粒酶活性分别为 (73.90±4.50) %、(66.67±3.35) %和(50.62±1.96) %。结论：5种细胞系中hTERT表达及端粒酶活性状态差别很大，提示端粒酶抑制剂可适用于多数但并非所有恶性肿瘤的治疗学研究。