视网膜母细胞瘤基因内VNTR的多态分析

VNTR区是连锁分析和个体鉴别的有效遗传标志。本文采用PCR方法扩增了人类RB1基因第20内含子的VNTR多态位点,扩增产物经6％聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染显示。结果表明该多态位点由多个等位片段构成,片段的大小在300－400bp之间。在108例无亲缘关系的个体中,我们检测到76例为杂合子,杂合子频率为70％。此外,我们还探讨了RB1．20VNTR在视网膜母细胞瘤产前诊断中应用的可能性。     

视网膜母细胞瘤基因对人骨肉瘤细胞株OS732的影响

目的 观察外源性N端截短的视网膜母细胞瘤（Rb)基因对骨肉瘤细胞株OS732的生长和细胞间缝隙连接信息通讯能力的影响。方法 构建N端截短的长度为1.65kb Rb基因的真核表达质粒,并用DOTAP将其导入骨肉瘤细胞株OS732。应用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）和Northern blot检测Rb基因的表达;用细胞计数,流式细胞仪分析和软琼脂克隆形成试验观察OS732细胞的生成状况;用半定量RT－PCR法和罗氏黄荧光传输法检测细胞间缝隙连接信息通讯的能力。结果 转染N端截短的Rb基因后,OS732细胞内可检测到内源性和外源性Rb基因的mRNA表达。OS732细胞的形态发生改变,其生长速度减慢,软琼脂形成集落能力降低,细胞周期阻滞于G0－G1期;缝隙连接蛋白基因Gonnexin43的表达和细胞信息通讯能力增强。结论 N端截短的Rb基因可抑制骨肉瘤细胞株OS732的恶性生长表型以及增强细胞间信息通讯能力。     

视网膜母细胞瘤基因治疗的实验研究

目的观察外源性Ｒｂ基因在视网膜母细胞瘤（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ,ＲＢ）移植瘤内的表达情况,及其对ＲＢ移植瘤生长的影响,为进行ＲＢ体内基因治疗提供实验依据。方法建立裸鼠眼玻璃体腔ＲＢ移植瘤模型,构建Ｒｂ基因的逆转录病毒表达载体,用脂质体将Ｒｂ基因导入裸鼠ＲＢ移植瘤,免疫组织化学染色及流式细胞仪间接免疫荧光法检测Ｒｂ基因表达,裸鼠ＲＢ移植瘤生长的活体观察、分级、组织病理形态观察。结果脂质体Ｄｏｓｐｅｒ介导的Ｒｂ基因转染可在ＲＢ移植瘤内表达至少７天,并部分抑制ＲＢ移植瘤的生长,抑制效果与Ｒｂ蛋白表达量、治疗时机有关。结论外源性Ｒｂ基因可在ＲＢ移植瘤内表达并部分抑制ＲＢ移植瘤的生长。     

视网膜母细胞瘤易感基因的研究与肿瘤遗传学研究新进展

近来对视网膜母细胞瘤易感基因(RB基因)的研究取得许多新的进展。在分子水平上充分证明了RB基因是隐性癌基因。它所编码的蛋白质(RB蛋白)是一种磷酸化蛋白,位于核内,可能具有调节基因活性的功能。在其它人类肿瘤中也发现了RB基因失活的证据,因此RB基因失活可能不只与视网膜母细胞瘤有关,在其它某些人类肿瘤形成中的作用也很重要。腺病毒癌基因EIA蛋白能与RB蛋白形成稳定的蛋白质复合物,而某些DNA致瘤病毒的癌基因产物均有类似EIA蛋白质这一功能区的氨基酸序列,且与EIA有类似的转化功能。这些不曾预料到的重要发现有可能为肿瘤发生的遗传机制提供一个统一的理论模型。     

视网膜母细胞瘤Rb基因表达

利用抗Ｒｂ基因蛋白产物的多克隆抗体对１５例视网膜母细胞瘤Ｒｂ基因表达水平进行Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析，并采用激光密度分析仪对结果进行进一步精确的定量分析，表明１５例视网膜母细胞瘤中仅有两例的Ｒｂ基因蛋白表达量与正常视网膜相似，其余１３例几乎没有Ｒｂ基因的表达产物。提示在大多数视网膜母细胞瘤中，Ｒｂ基因的蛋白质产物缺乏。     

视网膜母细胞瘤2例报告

视网膜母细胞瘤（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ，Ｒｂ）是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤，占儿童恶性肿瘤的３％，眼部肿瘤的３３％，眼内恶性肿瘤的９０％［１］，严重危害儿童的视力和生命，据统计因患Ｒｂ失明者占儿童总失明人数的５％，死亡数占儿童恶性肿瘤死亡总数的...     

视网膜母细胞瘤的临床与遗传学研究

视网膜母细胞瘤 (ＲＢ)是婴幼儿常见的眼内恶性肿瘤 ,常危及生命 ,具有先天性和遗传倾向 ,能否早期诊断、及时治疗 ,直接关系到患儿的预后。现代遗传学、影像检查提高了ＲＢ的正确诊断率。现将本文 47例确诊的ＲＢ的临床资料分析报道如下。临床资料1 性别 :47例ＲＢ中 ,随访二年健在者 2 6例 ,存活率为5 5 .32 % (2 6 /4 7) ,死亡 1例 ,死亡率 44 .6 8% (2 1/4 7)。其中男 2 5例 ,健在 14例 ,存活率为 5 6 .0 0 % (14/2 5 ) ,女 ,2 2例 ,健在 12例 ,存活率 5 4.5 % (12 /2 2 ) ,二者无显著差异。2 年龄 :<3岁者 35例 ,健在 34例 ,存活率 85…     

p53基因在视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb44中的表达及意义

野生型ｐ５３基因是一个重要的抑癌基因，５０％以上的人体肿瘤可检测到ｐ５３基因突变。但ｐ５３基因在视网膜母细胞瘤（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ，ＲＢ）发生中的作用如何，目前的研究结果仍有争议。ＨＸＯ－Ｒｂ４４是我国建立的一株来源于实体ＲＢ的恶性ＲＢ细胞系［１］，该细胞系中ｐ５３基因表达状况还未进行鉴定。我们利用免疫组织化学（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＩＨＣ）及流式细胞术（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）间接免疫荧光法，对ＨＸＯ－Ｒｂ４４中ｐ５３基因表达进行形态学定性、定位观察及…     

视网膜母细胞瘤免疫细胞特征及关键基因的识别

目的 使用生物信息学手段探究视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)潜在肿瘤标志物和免疫细胞特征.方法 对GEO数据库的3个基因表达数据集(GSE24673,GSE97508和GSE1108113)进行差异分析,Gene Ontology (GO)功能注释和Kyoto Encyclopedia of Gen...     

视网膜母细胞瘤的遗传学研究

本文对７３个家系，８２例患者作了家系分析和细胞遗传学研究。７３个家系系中，有家族史者６个，患者１３例，占１５．８５％，ＲＢ的发病年龄主要在０－６岁，高发年龄０－３岁，占８４．１５％，双眼患者在０－３岁发病，高发年龄为１岁以前，占５６．２５％；单眼患者高发年龄０－４岁占９５．４５％。本文３２例患者中２例有１３ｑ１４－、占６．２５％。在高分辨染色体分析时，家族及双眼散发性ＲＢ畸变率为１２．６７％，单眼散发的为５．３１％，正常对照为２．７８％，经统计学处理，差异显著，表明家族及双眼散发性ＲＢ的染色体不稳定性增高。可作为检测肿瘤易感人群的指标之一。     

乳腺癌中p16INK4a和视网膜母细胞瘤基因甲基化状况及其表达

目的 研究乳腺癌及癌旁增生组织中p16INK4a和视网膜母细胞瘤(RB)基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR方法 对46例乳腺癌、22例癌旁增生组织及7例正常乳腺组织中p16INK4a和RB基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学SP法对p16INK4a蛋白表达情况进行相应检测.结果 乳腺癌、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因的甲基化率分别为23.9%(11/46)、18.2%(4/22)、1/7;RB基因的甲基化率分别为10.8%(5/46)、9.1%(2/22)、0(0/7);肿瘤组织、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因、RB基因甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05).正常乳腺组织、癌旁增生组织、乳腺癌中p16INK4a蛋白表达阳性率分别为7/7、60.8%(28/46)和81.8%(18/22),三者之间差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组织中p16INK4a蛋白表达与肿瘤分级相关(P<0.05);肿瘤组织中p16INK4a甲基化状况与其蛋白表达、肿瘤分级、ER表达阴性具有相关性(P<0.05),与肿瘤大小、淋巴结转移、年龄均不相关;RB基因甲基化状态与肿瘤分级、肿瘤大小、ER表达及年龄均无相关性,但与淋巴结转移相关(P<0.05).结论 p16INK4a基因异常甲基化可能在乳腺癌发生过程中作用有限,但在肿瘤的演进中发挥作用;RB基因甲基化检测对于分析乳腺癌进展及预后情况可能有一定参考价值;p16INK4a基因甲基化是p16INK4a蛋白失表达的机制之一.     

乳腺癌中p16INK4a和视网膜母细胞瘤基因甲基化状况及其表达

目的 研究乳腺癌及癌旁增生组织中p16INK4a和视网膜母细胞瘤(RB)基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR方法 对46例乳腺癌、22例癌旁增生组织及7例正常乳腺组织中p16INK4a和RB基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学SP法对p16INK4a蛋白表达情况进行相应检测.结果 乳腺癌、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因的甲基化率分别为23.9%(11/46)、18.2%(4/22)、1/7;RB基因的甲基化率分别为10.8%(5/46)、9.1%(2/22)、0(0/7);肿瘤组织、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因、RB基因甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05).正常乳腺组织、癌旁增生组织、乳腺癌中p16INK4a蛋白表达阳性率分别为7/7、60.8%(28/46)和81.8%(18/22),三者之间差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组织中p16INK4a蛋白表达与肿瘤分级相关(P<0.05);肿瘤组织中p16INK4a甲基化状况与其蛋白表达、肿瘤分级、ER表达阴性具有相关性(P<0.05),与肿瘤大小、淋巴结转移、年龄均不相关;RB基因甲基化状态与肿瘤分级、肿瘤大小、ER表达及年龄均无相关性,但与淋巴结转移相关(P<0.05).结论 p16INK4a基因异常甲基化可能在乳腺癌发生过程中作用有限,但在肿瘤的演进中发挥作用;RB基因甲基化检测对于分析乳腺癌进展及预后情况可能有一定参考价值;p16INK4a基因甲基化是p16INK4a蛋白失表达的机制之一.     

人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞的分离培养

目的：体外分离培养人视网膜母细胞 瘤肿瘤干细胞（RTSC），建立RTSC的鉴定方法。方法：新鲜Rb组织经酶消化法获取单个瘤细胞，接种于无血清化学限定培 养基培养。对培养7-15 d的神经样球体，分别进行克隆形成、增殖能力、分化能力等干细 胞特性鉴定；采用RT-PCR及免疫荧光等方法对RTSC及其分化细胞的特性进行鉴定。结果:Rb肿瘤在无血清培养基中可以形成神经球体样肿瘤球体，后者可以多次传代，具有自我再续 能力。RTSC来源的神经球体表达神经干细胞或视网膜早期发育的相关基因Nestin、CD133、B mi-1、Pax6、RX及Chx10。在分化培养基上，肿瘤球体内细胞可以向神经元和胶质细胞分化 ，形成神经网络样结构，该分化细胞部分表达GFAP、MAP2、GAP43、PKC-a、Syntaxin及Reco verin等。RTSC分化后的神经样细胞为谷氨酸能神经元细胞。 结论：本结果揭示Rb中存在具有自我增殖及分化能力的视网膜前体细胞样 的肿瘤干细胞。此类细胞可能是Rb恶性增殖的根源，也将成为Rb治疗的新靶点。     

视网膜母细胞瘤眼球的病理取材方法

目的：探讨视网膜母细胞瘤病理标本的不同取材方法对脉络膜浸润检出率的影响，寻求理想的常规取材方法。方法：复查297只原发摘除的视网膜母细胞瘤眼球的病理切片，比较五平面取材法（151只眼）和单平面取材法（146只眼）对脉络膜浸润的检出率。结果：五平面取材法对脉络膜浸润的检出率（31％）明显高于单平面取材法（17％），且主要是对玻璃膜在肿瘤细胞影响下发生变化的检出率高。脉络浸润的各期都主要分布在五平面取材法的各平面上。结论：五平面取材法能提供判断视网膜母细胞瘤患者预后的较大量病理信息，在日常医疗工作中从人力、物力、财力上能够承受，可作为常规取材方法应用于临床。连续切片取材只作为在特殊情况下对五平面取材法的补充。单平面取材法有可能丢失一些重要的病理信息而应由五平面取材法代替。     

乳腺癌中p16INK4a和视网膜母细胞瘤基因甲基化状况及其表达

目的 研究乳腺癌及癌旁增生组织中p16INK4a和视网膜母细胞瘤(RB)基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR方法 对46例乳腺癌、22例癌旁增生组织及7例正常乳腺组织中p16INK4a和RB基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学SP法对p16INK4a蛋白表达情况进行相应检测.结果 乳腺癌、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因的甲基化率分别为23.9%(11/46)、18.2%(4/22)、1/7;RB基因的甲基化率分别为10.8%(5/46)、9.1%(2/22)、0(0/7);肿瘤组织、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因、RB基因甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05).正常乳腺组织、癌旁增生组织、乳腺癌中p16INK4a蛋白表达阳性率分别为7/7、60.8%(28/46)和81.8%(18/22),三者之间差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组织中p16INK4a蛋白表达与肿瘤分级相关(P<0.05);肿瘤组织中p16INK4a甲基化状况与其蛋白表达、肿瘤分级、ER表达阴性具有相关性(P<0.05),与肿瘤大小、淋巴结转移、年龄均不相关;RB基因甲基化状态与肿瘤分级、肿瘤大小、ER表达及年龄均无相关性,但与淋巴结转移相关(P<0.05).结论 p16INK4a基因异常甲基化可能在乳腺癌发生过程中作用有限,但在肿瘤的演进中发挥作用;RB基因甲基化检测对于分析乳腺癌进展及预后情况可能有一定参考价值;p16INK4a基因甲基化是p16INK4a蛋白失表达的机制之一.     

视网膜母细胞瘤发病机制的研究进展

视网膜母细胞瘤(RB)是婴幼儿常见的眼内恶性肿瘤,严重影响患儿的视力,甚至可危及生命。随着生物医学技术的发展,关于RB的研究已涉及病因学、分子生物学、表观遗传学、肿瘤干细胞及新药应用等各个方面。本文主要就国内外RB发病机制的研究进展进行系统综述,希望为RB的预防、诊断和治疗提供指导和参考意义。