芦丁拮抗血小板活化因子与受体结合的作用

目的　观察芦丁对血小板活化因子(PAF)与受体结合的拮抗作用。方法　以放射配基结合试验观察[3H]PAF与家兔血小板受体特异性结合的作用;体外以分光光度法测定PAF介导血小板黏附的强度;以Fura- 2荧光分光光度法测定PAF介导的兔多形核白细胞(PMNs)内钙离子浓度的升高。结果　芦丁可浓度依赖地抑制1、2、4 nm ol/L [3H]PAF与血小板受体的特异性结合,其IC50 分别为7.3、8.7、17.2 mm ol/L ;芦丁可明显抑制PAF介导的血小板黏附,IC50 为1.5 1mm ol/L;芦丁浓度为6 8.2～5 4 6 μm ol/L 时可浓度依赖地抑制PAF介导的PMNs内游离钙浓度的升高。结论　芦丁具有抗PAF作用,为一种新的PAF受体拮抗剂。     

红花黄色素抑制血小板激活因子介导的血小板活化作用的研究

 目的 观察血小板激活因子(PAF)对血小板聚集性、5-HT释放、胞浆内游离钙离子浓度的影响及红花总黄色素的抑制作用。方法 红花水煎液经硅胶吸附法除杂质得到红花总黄色素,以比浊法及邻苯二甲醛(OPT)荧光分光光度法观察其对PAF诱导家兔洗涤血小板(WRP)聚集及5-HT释放的影响。以Fura-2荧光分光光度法测定血小板内游离钙离子浓度。结果 红花总黄色素抑制PAF诱发的WRP聚集、5-HT释放作用呈明显的量效关系。PAF 2.0×10^-9 mol·L^-1时,0.21,0.42,0.85,1.69 g·L^-1红花总黄色素血小板聚集抑制率依次为28.0%,32.9%,60.0%,79.4%;5-HT释放抑制率分别为4.70%,12.9%,32.9%,58.4%;同时4.1,6.5,10.3,16.7,26.7 mg·ml^-1红花总黄色素剂量依赖地抑制8×10^-10 mol·L^-1 PAF引起的血小板内游离钙增高。结论 红花总黄色素可抑制PAF诱导的血小板聚集、5-HT释放及血小板内游离钙增加。     

红花总黄色素体外抑制血小板激活因子受体结合作用的研究

 目的观察硅胶吸附法制得的红花总黄色素体外对氚标记血小板激活因子(³HPAF)血小板受体结合的影响,试图证明该药为一新型血小板激活因子(PAF)受体拮抗剂。方法以洗涤的家兔血小板(WRP),血小板膜(PM)及血小板膜蛋白(PMP)为受体制剂,配体为3HPAF进行受体结合实验,观察红花总黄色素对3HPAF受体结合的抑制作用。结果3种浓度3HPAF作为配体进行WRP受体结合实验,不同浓度的红花总黄色素抑制3HPAF与受体的特异性结合均可见明显的量效关系;3种浓 度3HPAF作为配体进行PM受体结合实验,不同浓度的红花总黄色素抑制³HPAF与受体的特异性结合均可见明显的量效关系;两种浓度3HPAF作为配体进行PMP受体结合实验,不同浓度的红花总黄色素抑制3HPAF与受体的特异性结合均可见明显的量效关系。结论红花总黄色素为一新型血小板激活因子受体拮抗剂。     

电刺激诱发兔隐动脉双相血管收缩反应的药理学分析

 目的建立兔离体隐动脉环双相血管收缩反应模型,利用哌唑嗪和α,β-亚甲基ATP(α,β-meATP)对双相收缩成分的特性进行药理学分析。方法兔离体隐动脉血管环张力记录法及电场刺激诱发血管收缩法。结果本实验条件下的电场刺激(电压15V、波宽1 ms、刺激频率2～16 Hz、连续刺激时程32 s)可诱发兔离体隐动脉产生双相收缩反应,且具有频率(2～16 Hz)依赖性。电刺激隐动脉收缩反应的第1相不被α₁受体阻断剂哌唑嗪(0.1～10μmol·L^-1)所阻断,P2X₁受体激动剂α,β-meATP脱敏P2X₁受体后完全抑制该相反应。0.1～10μmol·L^-1哌唑嗪显著抑制8,16 Hz的第2相反应,P2X₁受体脱敏剂α,β-meATP不影响8,16 Hz的第2相反应。联合应用α,β-meATP(3μmol·L^-1)和哌唑嗪(1μmol·L^-1)则完全阻断电刺激诱发的血管收缩反应。哌唑嗪10μmol·L^-1显著抑制去甲肾上腺素(NA,0.01～30μmol·L^-1)诱发的血管收缩反应,而哌唑嗪1μmol·L^-1对α,β- meATP诱发的血管收缩反应无显著性作用。α,β-meATP3μmol·L^-1对NA(0.01～30μmol·L^-1)诱发的血管收缩反应无显著性影响。结论建立电场刺激诱发兔离体隐动脉环双相收缩反应模型,该双相反应的第一相仅与交感神经嘌呤能递质ATP的突触后效应有关,第2相反应由肾上腺素能成分和少量嘌呤能成分组成。     

橐吾中倍半萜对二氢吡啶类受体的作用研究

 目的：观察8个倍半萜类化合物对二氢吡啶类受体结合的作用和对离体血管张力的影响。方法：用［3H］尼群地平对猪心室肌微粒体膜受体结合方法和家兔离体血管条实验对化合物的体外作用进行研究。结果：化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对尼群地平与受体结合有明显抑制作用，其IC₅₀分别为2.0×10^-5mol·L^-1，2.7×10^-5mol·L^-1和3.9×10^-5mol·L^-1，其余化合物作用较弱。这些化合物抑制受体结合的作用强度与结构中母核与取代基的改变有关，而取代基的变化对活性的影响更重要。化合物Ⅱ、Ⅲ对高K+引起的兔胸主动脉收缩有剂量依赖性的抑制作用。结论：这类化合物有钙拮抗作用，作用机制可能与影响二氢吡啶类受体有关；它们作用有量效关系和构效关系，提示有以此为先导进行深入结构改造和构效关系研究的价值。     

穿心莲总内酯的NO抑制活性研究

目的：考察穿心莲总内酯对巨噬细胞释放一氧化氮的抑制作用。方法：以脂多糖（LPS）刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7 建立体外炎症模型,采用Griess Reagent法检测细胞培养上清一氧化氮（NO）含量并计算抑制率,通过MTT法评价细胞毒性。结果：穿心莲总内酯在 5-50 μmol·L^-1浓度范围内对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7释放的NO具有明显的抑制作用,并呈现良好的剂量依赖关系,IC50分别为8.58 μmol·L^-1,11.52 μmol·L^-1,8.94 μmol·L^-1;其主要活性成分穿心莲内酯（5-60 μmol·L^-1）、脱水穿心莲内酯（5-100 μmol·L^-1）、新穿心莲内酯（5-100 μmol·L^-1）对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7释放的NO亦表现出抑制作用,并呈现良好的剂量依赖关系,其IC50分别为17.54 μmol·L^-1,49.54 μmol·L^-1,41.80 μmol·L^-1。结论：穿心莲总内酯的NO抑制作用优于三个单体,以上结果可为穿心莲总内酯的制剂开发及临床应用提供一定的理论基础及科学依据。     

豚鼠肺膜LTD4受体结合特征及二苯乙烯低聚体(Gn-3)的LTD4受体拮抗作用

 目的 采用LTD₄放射受体结合实验方法,在分析LTD₄受体的有关特征的基础上,观察比较二苯乙烯低聚体(Gn-3)对LTD₄受体的拮抗作用。方法 以豚鼠肺膜为实验材料,采用³H-LTD₄为放射配体,以FPL₅₅₇₁₂作阳性对照药物,Gn-3为实验药物,进行药物竞争结合实验。采用离体器官生物检测法鉴定Gn-3对LTD₄受体的拮抗作用。结果³H-LTD₄与其相应受体呈现单一结合位点,其Kd和B_max值分别为19.9×10^-11mol·L^-1和232.9 fmol·mg^-1蛋白。Gn-3可明显取代³H-LTD₄与其受体结合,IC₅₀值为5.71×10^-7 mol·L^-1,Ki值为2.54×10^-7 mol·L^-1。生物学鉴定法证实Gn-3可抑制LTD-4引起的生物学效应。结论 豚鼠肺膜LTD₄受体为单一结合位点受体,Gn-3为高活性的LTD4受体拮抗剂。     

花椒毒酚对家兔离体回肠的作用

目的 :研究花椒毒酚对家兔离体回肠平滑肌的作用及其与Ca²⁺的关系。方法 :采用常规回肠离体标本运动的实验方法。结果 :花椒毒酚 (XT)、维拉帕米 (Ver)可剂量依赖性地抑制次大剂量ACh ,5-HT所致的家兔离体回肠平滑肌收缩 ,非竞争性拮抗CaCl₂ 累积量 效曲线 ,pD2 ′分别为 4.69±0.03 ,6.35±0.10。XT10 μmol·L^-1,Ver 0 .0 6 μmol·L^-1可抑制ACh诱导的依内钙性收缩。XT 100 μmol·L^-1尚可抑制ACh诱导的依外钙性收缩 ,但Ver 0.6μmol·L^-1对此相收缩没有影响。结论 :XT具有钙拮抗作用 ,其作用方式不完全相同于Ver。     

两种哒嗪酮衍生物对小鼠腹腔巨噬细胞体外释放肿瘤坏死因子的影响

 目的研究两种哒嗪酮衍生物即：6-(a,a-二苯基乙酰哌嗪基苯基)-4,5-二氢-5-甲基-3-(2H)-哒嗪酮(简称DMDP)和6-(a-苯基乙酰哌嗪基苯基)-4,5-二氢-5-甲基-3-(2H)-哒嗪酮(简称PMDP)及对照药物维拉帕米(verapamil,Ver)对小鼠腹腔巨噬细胞体外释放肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)的影响。方法体外诱生TNF,以L929细胞为靶细胞的细胞毒结晶紫染色法进行TNF的生物定量测定。结果在10^-6～10^-4mol·L^-1浓度范围内,DMDP的抑制作用呈剂量依赖性;浓度达10^-4mol·L^-1时,可完全抑制TNF的释放。IC50<10-6mol·L^-1。PMDP的抑制作用更强：10^{-8～10-6mol.L-1时,该抑制作用呈剂量依赖性;10-6mol·L-1时,即可完全抑制TNF的释放。IC50<1O-8mol·L-1。结论DMDP,PMDP及Ver对小鼠腹腔巨噬细胞体外释放TNF具有显著的抑制作用。}     

应用m2-Gi1α融合蛋白鉴别M2受体的特异性药物

 目的表达m2-Gilα融合蛋白,通过检测GDP与m2-Gilα融合蛋白的亲和力大小来鉴别m2受体的特异性激动剂、拮抗剂和反向激动剂。方法用两步PCR反应重组m2-Gilα融合蛋白cDNAs,并插入到pBacPAK9病毒载体中,利用Sf9细胞表达M2受体蛋白和m2-Gilα融合蛋白,通过[³H]QNB结合饱和实验及[³⁵S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测受体表达水平及GDP 与m2-Gilα融合蛋白的亲和力。结果m2-Gilα融合蛋白表达水平是(18.14±0.17)pmol·mg(膜蛋白)^-1。M2-Gilα融合蛋白与[³H]QNB的结合量随着[³H]QNB浓度的升高而增加,10μmol·L^-1GTDγS使m2-Gilα融合蛋白与[³H]QNB的饱和结合曲线明显下移。Ach使m2-Gilα融合蛋白与[³⁵S]GTPγS竞争性替代结合曲线明显右移,Pilo稍次之,alcuronium,AF—DX116,Iso及atropine 则使曲线左移,GDP的IC₅₀值分别是168.4,152.3,6.84,6.12,5.59,4.52μmol·L^-1,无配体存在时为14.7μmol·L^-1。结论表达的m2-Gilα融合蛋白具备M2配体结合的特性及G蛋白耦联受体的信号转导功能,对于有基础活性的m2-Gilα融合蛋白,Ach, Pilo是完全激动剂;atropine,alcuronium,Iso和AF-DX116为拮抗剂。     

芦丁抑制家兔血小板激活因子诱导血小板活化作用的实验研究

目的：观察芦丁对家兔血小板激活因子（PAF）诱导血小板聚集、5－羟色胺（5－HT）释放、血小板内游离钙离子浓度的影响及其机理。方法：以比浊法测定家兔洗涤血小板（WRR）聚集率，邻苯二甲醛（OPT）荧光分光光度法测定5－HT含量，以Fura-2荧光分光光度法测定血小板游离钙离子浓度的变化。结果：芦丁体外呈浓度依赖性抑制PAF（9．55×10^-9mol/L)诱发的WRP聚集、5－HT释放作用，IC50分别为0．73、1．13mmol/L；同时68．3、274、545μmol/L芦丁剂量依赖地抑制PAF（4．78×10^-9mol/L)引起的血小板内游离钙浓度增高。结论：芦丁可抑制PAF诱导的血小板聚集、5－HT释放及血小板内游离钙浓度增加。     

钩吻素子对兔血小板聚集的影响

钩吻素子在体外实验中，对由花生四烯酸（ＡＡ）、凝血酶（Ｔｈｒ）、Ｃａ２＋诱导的兔血小板聚集抑制作用的ＩＣ５０分别为０．４５ｇ／Ｌ、０．２２ｇ／Ｌ、０．００１５ｇ／Ｌ，并在一定浓度范围内呈剂量依赖关系。钩吻素子在静注后不同时间内，其抑制血小板聚集作用呈现良好曲线变化，以ＡＡ、Ｔｈｒ为诱导剂，其最大抑制作用的时间分别为静注后５６ｍｉｎ、７８ｍｉｎ处     

Effects of flavonoids isolated from licorice roots (Glycyrrhiza inflata Bat.) On degranulation in human polymorphonuclear neutrophils

The effects of chalcones and flavanone isolated from licorice roots (Glycyrrhiza inflata Bat.) on human polymorphonuclear neutrophil (PMN) degranulation were investigated. Licochalcone A (2-methoxy-4,4′-dihydroxy-5-α,α-dimethylallylchalcone) and licochalcone B (2-methoxy 3,4,4′-trihydroxychalcone), at concentrations of 10^?6M to 10^?3M, inhibited calcium ionophore A 23187 (A 23187)-, leukotriene B₄ (LTB₄) plus cytochalasin B (cyto B)-, platelet activating factor (PAF) plus cyto B- and N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine (fMLP) plus cyto B-induced lysosomal enzyme release from human PMNs. Isoliquiritigenin, isoliquiritin, liquiritigenin and liquiritin had no effects on PMN degranulation induced by various stimuli. In addition, licochalcones A and B, at high concentrations (10^?4M–10^?3M), increased cyclic AMP in human PMNs. Furthermore, licochalcones A and B, at concentrations of 10^?6M to 10^?3M, reduced the elevation of cytosolic free calcium concentration induced by calcium ionophore ionomycine (ionomycine), fMLP, PAF and LTB₄.     

Inhibitory effects of xanthones on platelet activating factor receptor binding in vitro

Nine naturally occurring xanthones were investigated for their platelet activating factor (PAF) receptor binding inhibitory effects using rabbit platelets. 2-(3-methylbut-2-enyl)-1,3,5-trihydoxyxanthone, macluraxanthone, 1,3,5-trihydroxy-6,6'-dimethylpyrano(2',3':6,7)-4-(1,1-dimethylprop-2-enyl)xanthone, 6-deoxyjacareubin and 2-(3-methylbut-2-enyl)-1,3,5,6-terahydroxyxanthone showed strong inhibition with IC50 values of 4.8, 11.0, 21.0, 29.0 and 44.0 microM, respectively. The prenyl group at C-2, the dimethylprop-2-enyl group at C-4 and the hydroxyl group at C-5 are all beneficial to the binding of xanthones to the PAF receptor. The results revealed that xanthones can represent a new class of natural PAF receptor antagonists.     

香丹注射液对家兔血小板聚集功能的影响

目的研究香丹注射液对血小板聚集功能的影响。方法进行体内、体外试验,观察香丹注射液对不同诱导剂诱导的家兔血小板聚集率的影响。结果香丹注射液体内能抑制二磷酸腺苷(ADP)、血小板活化因子(PAF)诱导的血小板聚集;体外试验对ADP、PAF诱导的血小板聚集亦有抑制作用,半数抑制浓度(IC50)分别为76.73 mg mL-1、89.21 mg mL-1。结论香丹注射液具有抑制血小板聚集的作用。     

Inhibitory effects of compounds from Zingiberaceae species on platelet activating factor receptor binding

Ten compounds isolated from Alpinia mutica Roxb., Curcuma xanthorrhiza Roxb. and Kaempferia rotunda Linn. (Family: Zingiberaceae) were investigated for their platelet-activating factor (PAF) antagonistic activities on rabbit platelets using 3H-PAF as a ligand. Among them, four compounds showed significant inhibitory effects. Alpinetin and 5,6-dehydrokawain isolated from A. mutica exhibited IC50 values of 41.6 and 59.3 microM, respectively. The IC50 values of 3-deacetylcrotepoxide and 2-hydroxy-4,4',6'-trimethoxychalcone from K. rotunda were 45.6 and 57.4 microM, respectively. 1-Methoxy-2-methyl-5-(1',5'-dimethylhex-4'-enyl)-benzene, synthesized by methylation of xanthorrhizol which was obtained from C. xanthorrhiza, showed an IC50 value of 40.9 microM. The results indicated that these compounds were relatively strong PAF receptor binding inhibitors.     

Antiplatelet activities of newly synthesized derivatives of piperlongumine

Piperlongumine, a pyridone alkaloid isolated from Piper longum L., exhibited a potential inhibitory effect on washed rabbit platelet aggregation induced by collagen, arachidonic acid (AA) and platelet activating factor (PAF), without any inhibitory effect on that induced by thrombin. Piperlongumine was used as a lead compound for the synthesis of new antiplatelet agents. Seven synthetic compounds were newly synthesized from 3,4,5-trimethoxycinnamic acid (TMCA). They were 1-piperidin-1-yl-3-(3,4,5-trimethoxy-phenyl)prop-2-en-1-one (1'), 1-morpholin-4-yl-3-(3,4,5-trimethoxyphenyl)prop-2-en-1-one (2'), 1-(3,5-dimethylpiperidin-1-yl)-3-(3,4,5-trimethoxyphenyl)prop-2-en-1-one (3'), 1-(2-methylpiperidin-1-yl)-3-(3,4,5-tri-methoxyphenyl)prop-2-en-1-one (4'), 1-(3-hydroxypiperidin-1-yl)-3-(3,4,5-trimethoxyphenyl)- prop-2-en-1-one (5'), 1-[3-(3,4,5-tri-methoxyphenyl) acryloyl]-piperidin-2-one (6') and ethyl 1-[3-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-acryloyl]piperidine-4-carboxylate (7'). Among those seven synthetic derivatives, 1-(3,5-dimethylpiperidin-1-yl)-3-(3,4,5-trimethoxyphenyl)prop-2-en-1-one (3') had the most inhibitory effect on platelet aggregation induced by collagen, AA and PAF.