白膜法手工富集血小板与单供者机采血小板质量对比研究

本研究旨在对比白膜法手工富集血小板与单供者机采血小板的质量差异。将15袋（2单位/袋,400ml全血制备）白膜法手工富集血小板和15单位单供者机采血小板在（22±2）℃条件下振荡保存。在制备后1小时检测血小板浓度、体积、白细胞残留量、红细胞残留量;分别在血小板保存的0、1、2、3、4、5天检测平均血小板体积、pH值、乳酸浓度、血小板膜表面CD62p表达率、凝血酶激活后CD62p再表达率、血小板低渗休克反应。结果显示：二组的血小板得率、红细胞残留量、白细胞残留量都分别达到相应的国家质量标准,但在达到相同血小板计数的情况下,白膜法手工富集血小板组的红细胞残留量、白细胞残留量明显高于单供者机采血小板组（p〈0.01）;二组的乳酸、血小板膜表面CD62p表达率均随保存时间延长而升高;二组间比较,白膜法手工富集血小板组CD62p表达率在保存0-5天均高于单供者机采血小板组（p〈0.01）。二组的pH值、凝血酶激活后CD62p再表达率均随保存时间的延长而下降;二组间比较,2-5天白膜法组pH值明显低于单供者机采血小板组（p〈0.01）,0-5天白膜法组CD62p再表达率明显低于单供者机采血小板组（p〈0.01）。单供者机采血小板组血小板低渗休克反应水平在0-5天无明显变化,而白膜法手工富集血小板组血小板低渗休克反应水平随保存时间的延长而下降,保存1-5天时均明显低于单供者机采血小板组（p〈0.01）。结论：白膜法手工富集血小板质量低于单供者机采血小板质量,其制备工艺有待改进和优化,以降低红细胞、白细胞残留量和活化血小板水平,提高其血小板质量。     

深低温保存血小板匀速和非匀速降温模式比较研究

目的评估3种降温模式对冷冻保存血小板质量的影响,优化深低温保存血小板降温技术。方法随机选取8人份血小板,每人份等分3份并随机配对分为A、B、C组,分别采用传统匀速(-1℃/min)降温模式、-80℃低温冰箱降温模式和非匀速降温模式进行冷冻降温处理。各组降温至终点后取出,均采用37℃循环式水浴箱复温,然后检测血小板计数(Plt)、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血浆乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸(LA)、pH、CD62p阳性率、磷脂酰丝氨酸(PS)阳性率、CD62p再表达率、玻片法血小板聚集实验(SPAT)、激活血小板血浆凝固时间(APCT)。结果1)3组Plt、PDW、pH、LA、aPCT均差异无显著性统计学意义(P>0.05)。2)B组和C组各项指标差异无显著性统计学意义(P>0.05)。3)B组和C组MPV、CD62p再表达率、SPAT明显优于A组,差异有显著性统计学意义(P<0.01)。A组、B组和C组MPV分别为(5.81±0.90)fl,(5.61±0.91)fl,(5.68±0.81)fl;A组、B组和C组CD62p再表达率分别为(52.4±7.8)%,(55.0±8.6)%,(57.0±8.3)%;A组、B组和C组SPAT分别为(123±14)s,(111±13)s,(110±16)s。4)B、C组血浆LDH水平明显低于A组,差异有显著性统计学意义(P<0.05)。A组、B组和C组血浆LDH分别为(127±22)U/L,(120±20)U/L,(122±22)U/L。结论1)匀速降温不是血小板最理想的冷冻降温方式;2)能保证-10℃—-40℃温度段降温平均速率在(-1—-3)℃/min间的非匀速降温模式不仅具有可操作性强的明显优势,而且更加符合血小板低温生物学特性,有利于提高血小板保存质量。     

血小板添加液保存单采血小板的研究

目的研发一种新型血小板添加液(H-sol),并评价其对血小板的保存效果。方法新型血小板添加液(H-sol)的组成成分:氯化钠80.0mmol/L、醋酸钠25.0mmol/L、氯化钾5.0mmol/L、氯化镁2.0mmol/L、枸橼酸钠15.0mmol/L、葡萄糖15.0mmol/L、碳酸氢钠13.0mmol/L、磷酸二氢钠4.0mmol/L、L-精氨酸180.0μmol/L。将超浓缩单采血小板(PLT≥10×109/ml)悬浮在H-sol和100%血浆(对照组)介质中,置22℃±2℃振荡条件下保存,分别于1、5、7d取样检测血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、pH、葡萄糖、乳酸、血小板低渗休克反应(HSR)、血小板形变能力(ESC)、CD62P表达率。结果血小板保存至7d时,H-sol组(含<10%的血浆)与对照组比较,PLT、MPV、PDW、CD62P表达率、HSR、ESC的差异无统计学意义(P>0.05),其pH高于对照组(P<0.01),1～7d葡萄糖平均消耗量和乳酸平均产生量明显低于对照组(P<0.01)。结论单采血小板在H-sol中的保存效果与100%血浆相同,血小板在H-sol中保存能更好地维持pH的稳定。     

不同比例血浆对GMA添加液4℃保存血小板体外质量的影响

目的分析低温液态条件下血浆对保存于葡萄糖甘露醇腺嘌呤（GMA）血细胞添加液中血小板体外质量的影响。方法取白膜法制备的浓缩血小板（PCs）7单位。每单位等分成3份，分离部分血浆后，按比例加入GMA血细胞添加液，制成10％血浆-PCs、35％血浆-PCs和100％血浆-PCs，置4℃冷藏5d。检测0d和5d的血小板计数、pH、平均血小板体积（MPV）、血小板低渗休克反应（HSR）、血小板形变能力（ESC）、P-选择素（P—selectin）、磷脂酰丝氨酸（PS）、血小板表面糖蛋白GPIbα以及乳酸和RANTES（Regulated On Activation，Normal，T—cell Expressed，and Secreted）的生成。结果4℃冷藏5d后，35％血浆-PCs与100％血浆-PCs比较，血小板计数、pH、MPV、HSR、P—selectin、GPIbα和PS以及乳酸和RANTES的差异无显著性（P〉0．05）；而10％血浆-PCs与35％血浆-PCs和100％血浆-PCs比较，P—selectin和PS表达的增加，差异有显著性（P〈0．05），而HSR下降，但差异无显著性（P=0．09）；10％血浆-PCs与100％血浆-PCs比较，血小板计数下降，乳酸的生成增加，差异有显著性（P〈0．05）。结论用GMA保存液4℃保存血小板时，35％ACD血浆可维持冷藏血小板的膜的完整性、正常代谢和功能。     

血小板保养液与血浆混合保存血小板的初步研究

目的探讨血小板保养液与不同比例血浆混合保存单采血小板的效果。方法选用枸橼酸钠、醋酸钠、磷酸钠和氯化钠等组成血小板保养液,(22±2)℃振荡条件下保存单采血小板7d;按保养液与血浆混合比例,实验组分为实验Ⅰ组(50%保养液+50%血浆)和实验Ⅱ组(80%保养液+20%血浆),分别于1、3、5、7d取样检测血小板数(Plt)、pH值、葡萄糖消耗量、乳酸产生量和血小板膜CD62p的表达情况,并与100%血浆保存的血小板(对照组)比较。结果血小板保存到5d时,实验组与对照组比较Plt差异无统计学意义(P>0.05),其pH值较对照组均有明显下降(P<0.05),但pH仍>6.0;实验组血小板膜CD62p阳性表达率分别为32%和36%,比对照组的28%略高(P<0.05)。血小板保存到第7天时,Plt、pH和血小板膜CD62p阳性表达率,实验各组较对照组为差(P<0.05);1—7d葡萄糖平均消耗量实验Ⅱ组比对照组和实验Ⅰ组为高(P<0.05),而乳酸平均产生量则实验各组较对照组明显为高(P<0.05)。结论采用血小板保养液与20%或50%比例的血浆混合,短期(5d)保存单采血小板的pH值和血小板数量与用100%血浆保存单采血小板的效果基本相同,但保存在保养液与血浆混合液中的血小板更易激活。     

富含血小板血浆制备过程中血小板CD62p表达

为了探讨大批量制备冰冻保存富含血小板血浆（Cryo-PRP)全过程中影响血小板质量变化的因素，以优化Cryo-PRP制作过程，提高Cryo-PRP质量，采用流式细胞术测定Cryo-PRP全过程中血小板膜表面CD62p表达。冰冻保存血小板全过程包括血液采集，离心制备，添加DMSO，－80℃冰箱保存和38℃水浴解冻，结果表明，在血液采集、离心制备，添加DMSO过程中血小板膜CD62p阳性率有一个突然的升高，其幅度约占整个过程的82％，对血小板的损害较大，结论：在Cryo-PRP的制备过程中，血小板的离心制备和DMSO的添加方式均可以得到良好的优化的优化，而对冰冻富含血小板血浆的质量影响也易于控制，但冰冻保存的损害较大，且不可避免，因此，迫切需要一种新型的血小板冰冻保护液和改进冰冻保存方法，以冰冻损害，进一步提高冰冻血小板质量。     

2种血小板保存袋保存效果的比较

目的比较国产和同类进口产品保存血小板保存袋对机采血小板的保存效果。方法机采血小板无菌加入到2种血小板保存袋于22℃保存,分别在0、3、5和7 d取样品测定血小板聚集功能、膜蛋白CD62p、血小板代谢功能、pH、浓度、MPV、PDW、血小板低渗休克反应(HSR)及细菌培养。结果 2种血小板保存袋常温条件下保存的血小板各项检测指标差异无统计学意义。结论产品保存血小板保存袋相比,各项检测指标差异无统计学意义,2种保存袋保存效果基本一致。     

PASⅢM血小板保存添加液对保存期血小板质量的影响

目的:探讨PASⅢM血小板保存添加液对保存期血小板质量的影响。方法:采集正常献血者标本15份,制备浓缩血小板。应用PASⅢM血小板保存添加液保存浓缩血小板(PASⅢM保存组),富含血小板的血浆作对照(血浆组)。分别在保存1、5、7、10d,检测血小板计数、平均血小板体积(MPV)、胶原诱导的聚集反应、血小板活化率及葡萄糖消耗和乳酸生成。结果:PASⅢM保存组血小板溶液的pH、pCO2和MPV比血浆组稳定。血小板活化率在血浆组随保存时间上升,在PASⅢM保存组比较稳定。血小板聚集率在PASⅢM保存组比血浆组下降幅度小。PASⅢM保存组葡萄糖消耗和乳酸生成幅度低于血浆组。结论:PASⅢM保存添加液在血小板的体外保存期维持血小板质量的作用上优于血浆。     

白细胞滤除对机采血小板质量的影响研究

本研究旨在评价白细胞滤除对机采血小板整体质量的影响。随机选取20单位单供者机采血小板在（22±2）℃条件下振荡保存24—96小时后使用血小板型白细胞过滤器进行过滤,分别检测机采血小板过滤前后的血小板浓度、平均血小板体积（MPV）、血小板单位容量、白细胞量、pH值、乳酸脱氢酶（LDH）浓度、K^＋浓度、血小板膜表面CD62p表达率、血小板凝血指数MA值,并计算白细胞去除率和血小板损失率。结果表明：机采血小板经白细胞过滤器过滤后,残留白细胞计数明显低于滤前白细胞计数（P〈0．001）,白细胞去除率达到了99．97％;血小板损失率为（8．1±4．2）％,明显低于20％的国家标准规定（P〈0．001）;与过滤前相比,过滤后MVP、机采血小板保存介质中的LDH浓度、K^＋浓度和pH值无明显变化（P〉0．05）,过滤后的血小板膜表面CD62p表达率出现轻度下降（P〉0．05）,但滤盘灌注液内血小板膜表面CD62p表达率却明显高于滤前（P〈0．05）;过滤后血小板MA值出现轻度下降,但无明显统计学差异（P〉0．05）。结论：使用白细胞过滤器可以有效去除机采血小板中混杂的白细胞及部分活化血小板,使血小板损失率控制在较低水平,且对于血小板凝血活性没有产生明显影响。过滤后的机采血小板达到预防巨细胞病毒感染及HLA同种免疫的质量要求。     

改良血小板添加液低温(10℃)保存血小板的动物实验研究

目的对添加海藻糖的血小板添加液替代70%血浆冷藏的血小板进行动物体内输注效果评价。方法采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板,将浓缩血小板分3组保存。血浆常温组:添加100%血浆,22℃保存;添加液低温组:添加70%PAS-ⅢM/30%血浆,10℃保存;冰冻保存组:添加100%血浆,-85℃保存。以新鲜血小板为对照,常温血浆保存组在d 3,添加液低温保存组在d 3、7、9,冰冻保存组在d 20复苏后分别检测血小板缺乏兔模型的血小板24 h回收率和生存率。结果除保存9 d的添加液低温组血小板存活率明显低于新鲜血小板存活率(P<0.05)外,血浆常温组、添加液低温组以及新鲜血小板的24 h回收率和存活率相互比较差异均无显著统计学意义(P>0.05)。冰冻保存组血小板24 h回收率和存活率均低于其他各组(P<0.05)。结论改良的PAS-ⅢM能够替代血浆在低温条件下用于血小板的保存,能维持血小板的体内功能。     

二甲亚砜与海藻糖联用对冷冻保存血小板的保护作用

本研究观察二甲亚砜（DMSO）与海藻糖联用对冷冻保存血小板的保护效果。实验分设空白组、海藻糖组、DMSO组、5％DMs0加海藻糖联用组、2．5％DMSO加海藻糖联用组。各组血小板置-80℃冰箱保存,37℃水浴融化。采用血细胞计数仪测定血小板回收率和MPV值、电子显微镜观察血小板超微结构变化和流式细胞仪测定血小板的CD41、CD42b、CD61及CD62p的表达水平。结果表明：海藻糖单独应用对提高回收率的保护作用不强,但海藻糖处理后冷冻保存的血小板的形态接近正常。DMSO在保证冷冻保存血小板的回收率和血小板整体完好性方面作用较为突出,但其血小板形态偏向于肿胀,仍有部分血小板呈异形性改变。DMSO和海藻糖合用对维持血小扳外部形态和内部结构接近正常稳态方面具有保护作用,同时保证冷冻保存血小板具有理想的回收率和较高的CD41、CD42b、CD61、CD62p表达水平。结论：DMSO和海藻糖联合应用对冷冻保存血小板具有协同保护作用,但DMSO和海藻糖单用或合用都较难抑制冷冻保存血小板的活化,两者合用作为血小板冷冻保护剂有望促使冷冻保存血小板临床输注效果的进一步提高。     

L-精氨酸对液体保存血小板的保护作用研究

目的研究在血小板4℃液体低温保存体系中添加L-精氨酸对血小板保存效果的影响。方法制备新鲜富含血小板血浆(PRP)5份,每份PRP分为7份平行样品。一份为对照组22℃保存,另一份为4℃保存,其余5份加入不同浓度L-精氨酸溶液,保存第1天到第5天检测血小板膜CD62P表达率的变化,CD62P表达率最低的L-精氨酸浓度为最佳介入浓度。所有数据经配对资料采用t检验分析。结果血小板4℃保存并加入L-精氨酸4mmol/L时每天CD62P表达率与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论血小板4℃液体低温保存时L-精氨酸的最佳介入终浓度为4mmol/L,在这一浓度下L-精氨酸能有效抑制血小板膜CD62P表达,提高血小板的保存质量。     

急性血小板分离制备心脏手术患者富血小板血浆的质量分析

为评价心脏直视手术患者急性血小板分离制备的富血小板血浆（platelet—richplasma,PRP）的效率和效果,对PRP质量进行了分析。20例ASAⅡ—Ⅲ级择期心脏手术患者在麻醉诱导后进行全血采集和血小板分离。分别测定分离前（T1）的全血,分离后（T2）的PRP和回输前（T3）的PRP中的血小板数（Plt）、血小板平均体积（MPV）、血小板分布宽度（PDW）、血浆内pH、血浆乳酸（IA）浓度和乳酸脱氢酶（LDH）浓度、细菌培养结果、血小板CD62p和PAC-1阳性率以及ADP激活后的CD62p和PAC-1阳性率。结果表明：与全血相比,分离后的PRP中的血小板计数为（783±184）×10^9／L,MPV、PDW和pH值显著降低（P〈0．01）,LA、LDH浓度及CD62p和PAc-1阳性率无明显变化;回输前PRP血小板计数为（765±167）×10^9／L,MPV、PDw和pH值与T1相比显著降低（P〈0．01）,而LDH浓度、CD62p和PAC-1阳性率与T1和T2比较显著增高（P〈0．05或P〈0．01）;ADP激活后的CD62p和PAC-1阳性率各阶段无明显差异。结论：本研究所采取的方法可在术前高效分离心脏手术患者的血小板,而且不引起血小板活化;PRP在术中振荡保存后有部分血小板出现活化,但血小板整体活化功能无明显改变。     

脉血康对不稳定型心绞痛患者血小板活化因子的影响及临床疗效的观察

目的探讨脉血康对不稳定型心绞痛(UAP)患者血小板活化状态因子的影响及临床疗效的观察。方法 80例UAP患者随即分为脉血康治疗组(简称脉血康组40例)和常规治疗组(简称常规组40例),2组病例在入院后次日凌晨分别空腹抽肘静脉血用流式细胞仪检测血清CD62p和GPⅡb/Ⅲa的水平;用散射比浊法测定血浆FIB-C的水平。选择健康体检者(对照组)和稳定型心绞痛(SAP组)患者各40例作对照,脉血康治疗8周后复查上述指标及评定临床疗效,并与对照组进行比较。结果 UAP组患者血清CD62p、GPⅡb/Ⅲa和血浆FIB-C较健康对照组明显增高(均P<0.01),较SAP组也明显增高(分别为P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05);脉血康治疗8周后CD62p、GPⅡb/Ⅲa和FIB-C均有显著降低(均P<0.01),较常规组对以上指标降低更明显(均P<0.05)。常规组治疗8周后总有效率达62.5%,而脉血康组总有效率达92.5%,2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论脉血康可以抑制UAP患者血小板活化,有效控制心绞痛发作次数,有明显的抗凝血和抗血栓作用。     

TEG技术在血小板保存过程中功能评价的应用研究

本研究旨在通过血栓弹力图（thmmbelastography，TEG）技术探讨血小板保存过程中功能的变化。随机选择各项指标均符合国家标准的单供者机采血小板12个单位并在（22±2）℃条件下振荡保存。分别在保存1、2、3、4、5天检测血栓弹力图参数，包括反应时间（R）、凝血时间（K）、α角（ANG）和最大振幅（MA），同时检测血小板计数、平均血小板体积、低渗休克反应（HSR）水平、CD62p阳性率及凝血酶激活CD62p再表达率的变化，综合评价血小板保存过程中体外功能的变化情况。结果显示：平均血小板体积随保存时间延长而轻度增大，但无统计学差异（p〉0．05）；血小板膜表面CD62p表达率随保存时间延长而显著升高（P〈0．01）；凝血酶激活后CD62p再表达率随保存时间的延长而显著下降（p〈0．01）；血小板低渗休克反应水平在1-5天无明显变化（P〉0.05）；R值随保存时间延长而明显延长（P〈0．01），K值无明显变化（P〉0.05），α角虽呈轻度下降趋势，但无显著差异（P〉0．05）；MA值在保存1-4天无显著变化，保存5天时仅有轻度下降（P〈0．05）。结论：虽然血小板随保存时间延长激活率明显升高，但反映血小板综合凝血功能的最大振幅（MA值）和HSR水平在整个保存期内并无显著变化，说明保存期末的血小板仍然具有良好的止血功能；血栓弹力图参数MA值可以作为一项重要指标用于血小板保存过程中的功能评价。     

浓缩血小板滤除白细胞对血小板功能的影响简

目的 分析手工法制备的浓缩血小板滤除白细胞后血小板功能的变化.方法 采用富血小板血浆法（PRP法）,以400ml新鲜全血制备浓缩血小板,将7袋ABO同型的浓缩血小板汇集,国产血小板型去白细胞滤器过滤,测定过滤前后的血小板计数、白细胞计数、pH值、血小板CD62p阳性表达率、血小板聚集和血小板的抗低渗休克反应（hypotonicshock response,HSR）等指标.结果 血小板去白过滤后,血小板回收率为（87.46士3.56）％,白细胞去除率（98.61±1.03）％.CD62p＋过滤前后分别为（9.63±3.86）％和（9.72士3.91）％（P＞0.05）,最大聚集过滤前后分别为（57.44±12.58）％和（59.28±15.23）％ （P＞0.05）,HSR过滤前后分别为（75.83±8.67）％和（73.42±7.24）％（P＞0.05）.结论 去白细胞滤器过滤浓缩血小板未增加血小板的活化,对血小板聚集功能及抗低渗休克能力无明显影响,血小板回收率及剩余白细胞数符合国家相关标准.     

Platelet storage in PAS-2 or autologous plasma: impact on functional parameters

Currently, several platelet additive solutions for long-term platelet storage have been introduced. The aim of this study was to compare the deterioration of functional status of platelets stored for up to 5 days in autologous plasma (AP) only, with platelet stored in PAS-2, a salt solution containing acetate, citrate and sodium chloride. Change in platelet adhesion, aggregation and activation was measured by flow cytometric technique. In addition, beta-Thromboglobulin (beta-TG), lactate and glucose were determined. After 5 days of storage, the expression of P-Selectin was significantly higher, the production of lactate and the consumption of glucose were significantly lower, in platelets stored in PAS-2 than in autologous plasma. No significant differences were detected on day 5 between the two groups with regard to fibrinogen, von Willebrand factor binding capacity, or to beta-TG release. It can be concluded that neither storage medium was consistently better for the parameters tested. However, it must be emphasized that platelets stored in autologous plasma exhibited less lesion, in terms of P-Selectin expression compared with platelets stored in PAS-2.     

熟蒜黄汁抗血小板聚集功能机制研究

本研究探讨熟蒜黄汁抗血小板聚集功能的机制。将熟蒜黄汁与正常人富血小板血浆（PRP）进行孵育,加入二磷酸腺苷（ADP）和胶原,观察熟蒜黄汁对人血小板聚集功能的影响。ADP和胶原激活血小板后用流式细胞仪分析熟蒜黄汁对活化血小板纤维蛋白原受体（Fib—R）和P-选择素（CD62P）表达水平及血小板纤维蛋白原结合量的影响。10只普通白兔随机分为2组,除正常饮食外,分别定量饲以生理盐水、熟蒜黄汁,观察饲养1、3、5以及8周后血小板聚集功能情况。结果表明,与对照组相比,熟蒜黄汁能显著抑制ADP和胶原诱导的人血小板聚集（P〈0．05）,它们的聚集抑制率分别为87．37％（ADP诱导下）和86．24％（胶原诱导下）;熟蒜黄汁不能抑制ADP和胶原诱导的活化血小板Fib—R和cD62P表达水平（P〉0．05）,但能够明显抑制血小板纤维蛋白原结合量（P〈0．05）。体内试验发现,熟蒜黄汁能够明显抑制ADP和胶原诱导下兔血小板聚集。结论：熟蒜黄汁能够在体内、外明显抑制血小板聚集,其机制主要是抑制了聚集通路的最后环节,即血小板与纤维蛋白原的结合,因此经常食用熟蒜黄汁能够有效预防心脑血管血栓性疾病的发生。