遗传修饰小鼠模型在功能蛋白质组学研究中的应用

功能蛋白质组学是蛋白质组学研究的重要分支，其研究与发展对获得蛋白质的功能信息具有重要作用。各种遗传修饰小鼠模型是研究功能基因组学的有力工具，在功能蛋白质组学的研究中，这项技术的应用也日益广泛。本文综述了利用肝脏、神经系统、心脏疾病的小鼠模型进行蛋白质组学研究取得的有意义的结果。     

蛋白质芯片技术及其在肿瘤研究中的应用进展

蛋白质组学是现代科技前沿，蛋白质芯片是20世纪末出现的最新一代生物芯片，其高通量、高敏感、高效快捷等优点使其刚刚出现就广泛应用于生命科学的多个研究领域，并取得了一系列突破性进展。本文就蛋白质芯片的基本构成、技术原理、在肿瘤研究中的应用、存在的问题及其应用前景作一简要综述。     

放射敏感性不同鼻咽癌细胞株的蛋白质组学比较研究

鼻咽癌（NPC）是我国南方常见的恶性肿瘤，放射治疗是鼻咽癌治疗最有效的手段之一。预测肿瘤的放射敏感性将有助于制定合理的放疗方案。目前采用的常规放疗方案没有考虑到不同个体存在放射敏感性的差异，影响了肿瘤的放疗控制率。所以，寻找能准确地预测肿瘤细胞的放射敏感性的蛋白质，对不同患者采用更合理的个体化放疗方案极为重要。蛋白质组学方法使高通量地研究生物个体功能成为可能。在本研究中，将应用蛋白质组学技术初步研究放射敏感性不同鼻咽癌细胞株中差异表达蛋白。     

蛋白质组学技术在航空航天医学研究中的应用

目的 通过文献综合,分析蛋白质组学技术在航空航天医学研究中的应用现状和前景.资料来源与选择 国内外该领域及相关领域的研究论文和报告. 资料引用 国内外公开发表的文献34篇. 资料综合 蛋白质组学技术是一门从整体角度分析细胞内蛋白质组成、表达水平与修饰状态的新兴技术,是高通量研究生物体的一种方法.在航空医学研究中,蛋白质组学技术被尝试应用于筛选与心理应激相关的血清生物学指标,用以选拔具有良好飞行能力的飞行员,探讨航空性疾病的发病机制.蛋白质组学技术在航天医学中得到较广泛的应用,如火箭推进剂对睾丸蛋白质组的影响,微重力作用及离子辐射对组织细胞及环境微生物蛋白表达的影响等. 结论 由于蛋白质组学技术高通量、实时研究蛋白质动态表达等特点,使其已经广泛应用于疾病研究中.未来还将利用蛋白质组学技术阐明航空航天疾病的生理机制,建立诊断标准,探寻治疗靶点,为航空航天医学研究提供新的技术和思路.     

金标记银增强方法检测HIV抗体的蛋白质微阵列

目的：采用金标记银增强技术制备检测抗HIV病毒P24、gp41、sp36、gp120蛋白抗体的蛋白质微阵列。方法：将上述抗原片段固定在醛基化玻片上，制成了能够检测多种抗体的蛋白质微阵列，同时研究了金标记银增强技术用于蛋白质微阵列检测的方法学基础。结果：采用金银染色方法的蛋白质微阵列能够准确而灵敏地检测抗HIV不同抗原的抗体。该方法被引入应用到蛋白质微阵列检测中，可以通过光学显微镜或凭内眼观察定性结果，仅使用普通的CCD数字照像机或CCD扫描仪就可以对信号进行采集。结论：与传统的荧光标记方法相比，金标记银增强方法的灵敏度相当，而且成本低、信号稳定、操作简便，将是前者的一种通用替代方法。     

比较蛋白质组学在电离辐射中的应用及其研究进展

比较或差异蛋白质组学作为蛋白质组学研究的重要组成部分,以双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)和质谱(mass spectrometry,MS)技术为核心,着重探讨机体在不同病理生理条件下蛋白质时空表达的变化,目前已广泛应用于疾病早期诊断、疗效监测、发病机制探讨、肿瘤标志物及药物靶点筛选等诸多研究领域,筛选出许多重要功能的相关蛋白.     

蛋白质芯片在肿瘤研究中的应用

蛋白质芯片是继基因芯片之后发展起来的一项快速、高效、灵敏的蛋白质分析技术,为蛋白质的功能研究提供了强有力的工具,在肿瘤研究方面的应用尤为突出。它可以同时检测样本中多个肿瘤标志物表达水平的变化,将这些与肿瘤相关的标志物综合分析,可以显著提高诊断的准确性。蛋白质芯片与质谱技术联合应用对未知蛋白的检测,在诊断学的应用中已显示出光明的前景。本文对蛋白质芯片概况及其在肿瘤研究方面的应用作一综述。     

小鼠不同发育阶段脑蛋白质组学初步研究

目的:本研究为国际脑蛋白质组计划(HUPO BPP)的预实验部分,旨在获得可靠的小鼠脑蛋白质组数据库,比较和评估小鼠不同发育阶段的脑蛋白质组,为下一步进行神经系统疾病的蛋白质组学研究奠定基础。方法:样品来源于国际脑蛋白质组委员会所提供的胚胎16 d、出生后7 d及生后60 d等3个发育时期的C57/B l6雌性小鼠脑组织。常规方法提取组织总蛋白,采用固相pH梯度的二维电泳分离和串联质谱分析等进行鉴定,使用M ascot软件搜索Un iProt数据库,鉴定蛋白种类。结果:获得3个不同发育时期小鼠脑组织蛋白质表达谱,完成国际脑蛋白质组计划的预实验所要求的质量控制,鉴定出各发育阶段均有稳定表达的4个蛋白点,包括α烯醇酶、磷蛋白质P19及2个肌动蛋白。经进一步评估后鉴定出随年龄增大而丰度减低的C14orf166同源蛋白、28×103热/酸稳定的磷蛋白、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、40S核糖体蛋白S3 a等4个蛋白。其中α烯醇酶及C14orf166同源蛋白曾有文献报道与神经发育及组织发生密切相关。结论:蛋白质组学的方法为脑发育研究提供了有参考价值的数据,其差异蛋白的发现可促进对神经发育机制的了解,并将为后续启动神经系统疾病蛋白质组学研究提供参考。     

胃癌血清蛋白质谱的差异性研究

目的对比胃癌患者手术前后与正常人血清蛋白质谱的差异,筛选出诊断胃癌的特异性蛋白标志物。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术和CM10蛋白质芯片,对22例胃癌患者和18名正常人的血清蛋白质谱进行检测。结果通过对胃癌术前血清与正常人血清蛋白质谱分析,发现由5个蛋白质峰组成的生物标记物可将胃癌术前患者与正常人准确分组。结论建立胃癌的血清蛋白质谱,为胃癌蛋白质组学研究奠定一定的基础．建立了以8961．2404M／Z、3947．264M／Z、5919．7541M／Z、4103．348M／Z、8711．0363M/Z5个蛋白质峰组成的生物标记物检测胃癌。     

2DE技术及其在辐射损伤研究中的应用

2DE（二维聚丙烯酰胺凝胶电泳）技术是蛋白质组学研究中的主要分离技术，其分别以蛋白质的等电点和分子质量这两个独立的参数为基础，实现蛋白质混合物的分离。2DE在探讨疾病发生机理，寻找肿瘤早期诊断指标，及药物开发研究等方面均有较好的应用，在辐射损伤研究中的应用也有广泛的前景。     

蛋白芯片筛选鼠疫耶尔森菌与巨噬细胞的蛋白相互作用

目的：利用蛋白芯片筛选鼠疫耶尔森菌的毒力因子，进一步揭示鼠疫菌与宿主之间相互作用的机制。方法：鼠疫菌毒力相关蛋白芯片筛选与小鼠巨噬细胞系774A．1可能有相互作用的蛋白质，免疫荧光试验验证筛选出的蛋白相互作用。结果：共筛选到17个可能与巨噬细胞有相互作用的鼠疫菌蛋白，并通过免疫荧光试验初步验证了其中8个蛋白芯片筛选试验中信号最强的蛋白与巨噬细胞的相互作用。结论：蛋白芯片技术可用于筛选病原菌与宿主之间的相互作用，有助于深入研究病原与宿主之间相互作用的机制。本研究筛选出的鼠疫菌蛋白与巨噬细胞的相互作用尚需深入研究和验证，以便最终确定这些蛋白在鼠疫菌致病机制中所发挥的作用。     

基于细胞表面特异识别的荧光标记小分子抗体的鉴定及其应用

 目的 建立基于细胞表面特异性识别的荧光标记小分子抗体的鉴定方法并应用于食管癌外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)检测。方法 本研究前期利用噬菌体技术高通量筛选富集到单链噬菌体抗体NFC 20b和NFC 70a,标记荧光后,观察在斑马鱼体内与食管癌细胞的聚集示踪,并用于检测食管癌患者的外周血CTCs;同时通过高通量蛋白组芯片对抗原蛋白表达谱进行分析。结果 荧光小分子抗体NFC 20b和NFC 70a于不同时间点,在斑马鱼的背主动脉、尾动脉和尾静脉中均能观察到抗体分布,与空白组和阴性抗体组相比,两抗体与移植瘤结合荧光更强;用蛋白芯片筛选抗原蛋白表达谱,初步确定NFC 20b结合的抗原蛋白为细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)。结论 荧光标记的小分子抗体可以通过血液循环分布到斑马鱼的卵黄囊,并能与移植瘤有明显的聚集结合效应,可以用于检测食管癌患者外周血CTCs;利用蛋白芯片技术可以辅助鉴定抗体所结合的抗原种类。     

利用INTERNET进行蛋白质结构的检索,图像显示和模型构建

越来越多的蛋白质结构数据库和软件资源可以通过ＩＮＴＥＲＮＥＴ的ＷＷＷ Ｍｏｓａｉｃ和Ｎｅｔｓｃａｐｅ程序存取。     

酵母表面展示技术及应用

酵母表面展示是近年发展的一种新的蛋白表面展示技术,能够展示需糖基化作用,二硫键异构化等翻译后修饰才具功能活性的复杂真核蛋白,本文介绍了该技术的基本原理,研究进程,筛选方法,应用及其发展前景。     

Body fluid identification by mass spectrometry

Standard methods for body fluid identification typically rely on detection of the functional proteins specific to or enriched in them, such as hemoglobin in blood, alkaline phosphatase and PSA in semen, or α-amylase in saliva. While these markers can be relatively specific, the multiple methods used to identify them frequently rely on nonspecific chemical, enzymatic, or antibody reactions that usually require the structural integrity of the markers and are not confirmatory because other proteins or substances can also give positive test results. Recent advances in proteomics and mass spectrometry offer the ability to simultaneously detect multiple body fluid protein markers in a single, confirmatory test. Here, multiple markers for blood, saliva, and semen are identified by matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) mass spectrometry (MS). Data demonstrate the ability to detect these body fluids at nanoliter to subnanoliter levels and to distinguish mixtures. Protein stability of mock samples assayed after 16 months showed no diminution of signal. Because multiple peptides from multiple protein markers are detected and effectively sequenced by MALDI MS/MS, the assay is confirmatory. As mass spectrometry detects whatever peptides are present in a sample, no a priori knowledge of an unknown stain is necessary to perform the test.     

Muscle protein turnover in endurance training: a review

There has been much debate about skeletal muscle capacity to adapt to long-lasting endurance exercise. Exercise in the aerobic zone of metabolism does not result in hypertrophy of skeletal muscle fibres but increases their oxidative capacity. The duration and intensity of an exercise session determines the time period of depressed muscle protein synthesis and increased degradation rate during the recovery period after exercise. Protein turnover characterizes the renewal processes of muscle proteins and the functional capacity of muscle. The turnover rate of myofibrillar proteins is slow in comparison with mitochondrial proteins and depends on the oxidative capacity of muscle fibres. The turnover rate of myofibrillar proteins in the same muscle is different and is also different within the myosin molecule between myosin heavy and light chain isoforms. The turnover rate of muscle proteins in endurance training shows the adaptation of skeletal muscle to long-lasting exercise via remodelling of muscle structures. Adaptational coordination between myofibrillar and mitochondrial compartments shows the physiological role and adaptational capacity of skeletal muscle to endurance training. It is challenging to use muscle protein turnover for the purposes of monitoring the training process of endurance athletes, optimizing training programs and preventing overtraining.     

The use of proteomics to study wound healing: a preliminary study for forensic estimation of wound age

Proteomics is the analysis of the protein complement of the genome. The technique involves extracting proteins from the tissue being examined; separating the proteins using methods such as two-dimensional gel electrophoresis and then identifying the proteins by mass spectrometry. This paper describes the application of proteomics to incised wounds of the rat to determine if this technology could be applied to the important forensic issue of determining the age of wounds. Experimental incised skin wounds were inflicted on rats 5, 15, 30 and 60 minutes, 3, 6, 12 and 24 hours and 2, 5, 7 and 12 days before euthanasia. Each wound was excised and frozen at 80 degrees C; protein extracts were prepared and subjected to two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis over the range pH 3 to pH 10. Protein spots were identified using Matrix-assisted Laser Desorption/Ionisation Time-of-Flight (MALDI-TOF) mass spectrometry. A number of proteins were identified in skin wounds. After wounding the most prominent change was in the level of haemoglobin, which was elevated in wounds five minutes old and remained elevated for three hours, falling to near control levels after 12 hours. This pilot study has illustrated the feasibility for proteomics to be applied to determining wound age.     

大鼠快肌与慢肌水溶性蛋白组的比较

目的 :对快肌和慢肌水溶性蛋白组进行比较 ,找出分别特异于快肌和慢肌的蛋白。方法 :应用蛋白组研究的核心技术———高分辨率二维电泳建立成年 (8月龄 )大鼠趾长伸肌 (代表快收缩纤维 )和比目鱼肌 (代表慢收缩纤维 )细胞内水溶性蛋白组表达的二维图谱。应用蛋白质氨基测序法和已知蛋白共电泳方法分别对经分离的蛋白进行鉴定。应用二维图谱差减法对快肌和慢肌的蛋白组进行比较。结果 :应用蛋白质氨基测序法和已知蛋白共电泳方法分别对 7个经分离的蛋白进行了鉴定。应用二维图谱差减法 ,发现了 3个分别特异于快肌和慢肌的蛋白。St1和St3仅在趾长伸肌被检测到 ,经蛋白质氨基测序法鉴定 ,St3为小钙白蛋白 ,而St2仅在比目鱼肌被检测到。结论 :快肌和慢肌细胞内水溶性蛋白组表达模式较为相似 ,但也分别存在其特异性蛋白 ,这些分别特异于快肌和慢肌的蛋白可能与其维持各自独特功能有关。小钙白蛋白和St1可作为鉴别快肌的标记物 ,而St2可作为鉴别慢肌的标记物。     

鼻咽癌放疗前后血清蛋白质谱的变异性研究

目的 通过对鼻咽癌患者放疗前后及健康对照组血清蛋白质谱的测定,观察放疗前后血清蛋白质图谱变化。方法 应用CM-10弱阳离子交换芯片和表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS),分析50例鼻咽癌放疗前组、40例健康对照组和25例经放疗后完全缓解组(鼻咽癌患者自身配对)3组的血清标本。结果 对鼻咽癌放疗前组与正常对照组蛋白质谱分析发现共有20个蛋白质表达量有差异。获得相对分子质量为2931、4098、5343和13766的4个蛋白质峰组合建立的分类树模型,判别鼻咽癌的敏感性为90.0%,特异性为90.0%。观察20个差异蛋白质的表达量在放疗后的变化,显示均发生了不同程度的变化。放疗前组高表达的相对分子质量为2931、4182、4688、13766的4个蛋白质表达量在完全缓解组降低,接近正常水平;相对分子质量为4098和5343的蛋白质表达量在CR组升高,接近正常水平。结论 应用SELDI-TOF-MS分析,可在放疗前后筛选出鼻咽癌患者血清蛋白质标志物,有可能对微小病灶的监测及疗效的判定等提供有用的信息。