弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞持续性免疫应答

目的观察弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导的脾淋巴细胞的免疫应答及持续时间。方法96只BALB/c小鼠随机分为免疫组和对照组,免疫组以弓形虫复合黏膜疫苗20μl/只(20μg可溶性速殖子抗原 1μg霍乱毒素)滴鼻免疫2次(间隔2周),对照组以PBS滴鼻。分别于末次滴鼻后第1,2,3,4,6,8,10,12周处死小鼠,脾淋巴细胞计数,免疫细胞化学法检测CD4 、CD8 T细胞亚群水平。结果免疫组小鼠于第1,2周脾淋巴细胞明显高于对照组(P<0.01),其中以CD4 T细胞增生为主,第1,2,3,4,6周增生显著(P<0.01),CD8 T细胞水平在第2,3周也有增生(P<0.05),CD4 /CD8 比值第6周高于对照组(P<0.01)。结论弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导脾淋巴细胞增殖性免疫应答,且可持续较长时间。     

弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导NALT和GALT黏膜部位的免疫应答

目的观察弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织（NALT）和肠相关淋巴组第（GALT）黏膜部位的免疫应答。探讨弓形虫黏膜疫苗能否在感染起始阶段有效诱导免疫应答。方法将BALB／小鼠随机分为免疫和对照组,免疫组小鼠以弓形虫复合黏膜疫苗20μl／只（20μg STAg＋1μg CT）滴鼻免疫2移（间隔2周）,对照组PBS滴鼻。于末次滴鼻后14d颈椎脱臼处死小鼠,ELISA测定粪便和鼻咽冲洗液IgA抗型水平;计数NALT、NC及PP、IEL淋巴细胞数,免疫细胞化学法检测CD4^＋、CD8^＋T细胞亚群水平。结果免疫匀小鼠粪便IgA和鼻咽冲洗液IgA抗体显著高于对照组（P〈0．05）。NALT内淋巴细胞明显增生（P〈0．05）,其中CD4^＋、CD8^＋T细胞均有增生（P〈0．01）,CD4^＋／CD8^＋比值降低（P〈0．05）。NC中淋巴细胞数明显升高（P〈0．01）,以CD4^＋T细胞水平为主（P〈0．01）。GALT部位PP淋巴细胞增生显著（P〈0．01）,主要以CD4^＋T细胞为主;而IEL以CD8^＋T细胞增生为主（P〈0．01）,CD4^＋／CD8^＋比值降低（P〈0．05）。结论弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB／c小鼠可有效诱导NALT和GALT黏膜部位免疫应答。     

不同佐剂的弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答

目的比较IFN-γ、蜂胶佐剂以及两种佐剂混合鼻内免疫辅助可溶性速殖子抗原(STAg)增强机体黏膜免疫应答的水平,探讨两种佐剂联合应用的免疫效果。方法将5～6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4组(各15只):20μgSTAg,20μgSTAg 40μg蜂胶,20μgSTAg 1000UIFN-γ或20μgSTAg 40μg蜂胶 1000UIFN-,γ均溶于总体积为20lμ的PBS中,滴鼻免疫(10lμ/鼻孔),免疫2次,间隔14d。末次免疫后第10天用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击。攻击后第43天处死全部存活小鼠,比较各组小鼠肠黏膜小肠上皮内淋巴细胞(IEL)、PP结T淋巴细胞数;检测小鼠粪便、鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液中弓形虫特异性sIgA含量。结果各佐剂组小鼠IEL、PP结T淋巴细胞数显著高于STAg组,黏膜sIgA含量显著高于STAg组;蜂胶 IFN-γ联合组小鼠黏膜免疫应答水平高于单独佐剂组,其中显著高于蜂胶组(P<0.05)。结论IFN-γ作为弓形虫黏膜疫苗佐剂的效应优于蜂胶,IFN-γ 蜂胶作为复合黏膜佐剂鼻内免疫效果优于两者单独应用。     

STAg和霍乱毒素不同程序滴鼻免疫小鼠诱导抗弓形虫作用

目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素(cholera toxin,CT)佐剂不同程序滴鼻免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染能力,确定STAg和CT滴鼻免疫的最佳程序。方法BALB/c小鼠随机分为3组:1次、2次和3次免疫组,用20 μg STAg 1 μg CT/只分别滴鼻免疫1次,2次或3次,前2次间隔2周,末次间隔1周。末次免疫后第14天,用4×104个速殖子/只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康及死亡情况,攻击后第30天处死,ELISA法检测血清IgG和粪便IgA,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子,分离并计数派伊尔结(Peyer′spatches,PP)和脾淋巴细胞数。结果2次和3次免疫组小鼠存活率明显高于1次免疫组(P<0.05),肝、脑组织内虫荷显著低于1次免疫组(P<0.001),血清IgG和粪便IgA高于1次免疫组,PP和脾淋巴细胞数无显著性变化。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫2次或3次能有效诱导小鼠抗弓形虫感染。     

STAg和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织细胞免疫应答

目的研究可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻相关淋巴组织(nasal-associatedlymphoidtissue,NALT)的免疫效应及持续时间。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以免疫原性好的STAg(20μg/只)为抗原,CT(1μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死6只小鼠。分离NALT的淋巴细胞,计数并涂片,用免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)检测其CD4 、CD8 T细胞亚群水平。结果小鼠免疫后,NALT淋巴细胞第1、2、6、8、12(P<0.05)周显著增生,可持续至免疫后第12周;CD4 T细胞第1周至第6周(P<0.05)持续显著增高,CD8 T细胞在第1周至第4周持续增高(P<0.01),CD4 /CD8 比值第2、3周显著降低(P<0.05)。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠能够有效诱导NALT的免疫效应,并可持续较长时间。     

弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答

目的 观察弓形虫排泄-分泌抗原(excreted-secreted antigen,ESA)鼻内免疫小鼠诱导黏膜和系统免疫应答的效果.方法 将64只BALB/c小鼠随机分为8个组,每组8只.实验组小鼠分别用腹腔感染弓形虫小鼠第0,6,12,24,36,48和60小时无菌收集的腹腔液中获取的ESA 20 μg/只滴鼻免疫小鼠2次,间隔14 d,以PBS20 μl/只滴鼻为对照.逐日观察小鼠状况,于末次免疫后第14天颈椎脱位处死小鼠,检测血清特异性IgG、小肠冲洗液sIgA水平,分离肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes,iIEL)及肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL)并计数.结果 60 h组小鼠初次免疫后第8-11天,有倦怠、饮水及采食量减少等表现,体重增长较其他组缓慢(P＜0.05),其他组小鼠健康状况良好.不同时相ESA鼻内免疫小鼠后特异性抗体水平升高,MLNL、iIEL发生增殖性应答.48 h组和60 h组各项指标均明显高于0 h组(P＜0.01)及PBS组(P＜0.05).结论 48 h和60 h弓形虫ESA均能诱导黏膜及系统免疫应答,但60h ESA可能对机体有毒副作用,不适宜直接滴鼻免疫,48 h ESA可作为弓形虫黏膜疫苗的候选抗原.     

大蒜素对弓形虫感染小鼠黏膜免疫应答的影响

目的通过对大蒜素治疗弓形虫感染小鼠黏膜部位SIgA、IgG含量测定，研究黏膜在弓形虫感染免疫中所起作用。方法将雌性小鼠分成治疗、感染和对照3组，用5×10^4个，只RH株弓形虫速殖子经口感染小鼠后大蒜素治疗，每天1次，于治疗后第0．2、4、6、8、10、12周断颈处死，冲洗上呼吸道、下呼吸道、肠道、阴道、子宫黏膜，夹心ELISA法测定SIgA、IgG抗体含量。结果在观察的时间段内SIgA治疗组高于对照和感染组，治疗后4、6、8周差异具有显著性（P〈0．05）。结论大蒜素治疗经口感染弓形虫速殖子小鼠，能提高黏膜、特别是消化道黏膜产生SIgA抗体，保护机体抵御病原体感染。     

大蒜素对弓形虫感染小鼠黏膜免疫应答的影响

目的通过测定弓形虫感染小鼠大蒜素治疗后黏膜部位SIgA含量,研究大蒜素在弓形虫感染免疫中所起作用。方法将雌性小鼠分成治疗组、感染组和对照组,用5×10~4个/只RH株弓形虫速殖子经口感染小鼠后大蒜素治疗,每天1次,于治疗后第0、2、4、6、8、10、12周断颈处死,冲洗上呼吸道、下呼吸道、肠道、阴道、子宫黏膜,夹心ELISA法测定SIgA抗体含量。结果在观察的时间段内,治疗组SIgA含量高于对照组和感染组,治疗后4、6、8周差异具有显著性(P0.05)。结论大蒜素治疗经口感染弓形虫速殖子小鼠,能提高黏膜(特别是消化道黏膜)SIgA抗体含量,保护机体抵御病原体感染。     

STAg滴鼻免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用

目的 观察可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)于妊娠前不同时间滴鼻免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用.方法 BALB/c雌鼠130只随机分为STAg和PBS组,分别用sTAg(20 μg/只)和PBS滴鼻免疫2次(间隔2周).末次滴鼻后雌雄鼠以2:1分批交配,各组获得孕鼠30只,各组按末次免疫时间的不同(妊娠前3 d,9 d,15 d)分为3小组,分别为PBS3、PBS9、PBS15组和STAg3、STAg9、STAg15组.全部孕鼠于妊娠第8天用8 000个/只速殖子灌胃攻击.妊娠第18天颈椎脱臼处死,记录孕鼠感染率、活胎率,检测孕鼠小肠冲洗液sIgA水平,测定孕鼠肝、胎盘和胚胎脑组织弓形虫抗原.结果 随着免疫时间推迟,STAg组感染率降低,STAg15组感染率最低,但三组间比较无统计学差异(P＞0.05),STAg各组孕鼠感染率均低于相应PBS各组,但差异无统计学意义(P＞0.05).STAg组小肠冲洗液sIgA水平逐渐升高,STAg15组高于STAg3组(P＜0.05)和STAg9组(P＞0.05),STAg15组明显高于PBS各组(P＜0.05).随着免疫时间推迟STAg组活胎率增加,STAg15组活胎率高于STAg3组和STAg9组,但差异无统计学意义(P＞0.05),STAg15组活胎率显著高于PBS15组(P＜0.05).STAg组胎盘感染率和胚胎感染率均呈减少趋势(P＞0.05),STAg组胎盘和胚胎感染率均低于PBS各组,但差异无统计学意义(P＞0.05).各组胎盘感染率高于胚胎感染率,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 妊娠前15 d STAg末次滴鼻免疫小鼠,可有效诱导孕鼠黏膜及系统免疫应答,提高孕鼠抗弓形虫感染作用,降低胎盘、胚胎感染率,减少垂直传播的发生,部分阻断垂直传播.     

弓形虫P30-P22复合DNA疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫应答

目的通过肌内注射弓形虫DNA疫苗PCDNA3．1-P30-P22直接免疫小鼠，观察其诱导的体液免疫应答及保护性作用。方法大量制备重组真核表达质粒PCDNA3．1-P30-P22，肌内注射免疫小鼠，ELISA法测定其抗体滴度的变化，用弓形虫作致死性攻击感染。结果实验组抗体水平明显高于对照组，二者存在显著性差异(P＜0．05)；攻击感染后实验组小鼠存活时间明显延长(P＜0．05)。结论重组真核表达质粒PCDNA3．1-P30-P22肌注BALB/C系小鼠可诱导一定的体液免疫应答，对攻击感染具有一定的保护性。     

不同佐剂的复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用

目的比较IFN-γ和蜂胶作为佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫攻击的能力,探索两种佐剂联合应用的效果。方法将5～6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4个组,每组15只,分别用20μg可溶性速殖子抗原(STAg)、20μgSTAg+40μg蜂胶、20μgSTAg+1000UIFN-γ或20μgSTAg+40μg蜂胶+1000UIFN-γ鼻内免疫小鼠2次,间隔14d。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击,逐日观察小鼠存活情况。攻击后第43天处死全部存活小鼠,计算胸腺、脾指数,计数脑、肝组织速殖子。结果STAg+IFN-γ组、STAg+蜂胶+IFN-γ组胸腺、脾指数显著高于STAg组(P<0.05);组织内速殖子虫荷显著降低(P<0.01),STAg+IFN-γ组小鼠脑、肝组织减虫率分别为57.00%和79.06%;STAg+蜂胶+IFN-γ组小鼠脑、肝减虫率分别为68.30%和79.06%。STAg+蜂胶组小鼠胸腺、脾指数有升高趋势,组织内速殖子虫荷降低,但与STAg组比较差异无统计学意义。结论在抗弓形虫感染中,IFN-γ、蜂胶+IFN-γ的佐剂效果优于蜂胶,IFN-γ、蜂胶+IFN-γ辅助...     

弓形虫可溶性速殖子抗原和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的鼻通道细胞免疫应答

目的研究弓形虫可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻通道(nasalcavity,NC)的免疫效应及持续时间。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20!g/只)为抗原,CT(1!g/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死6只小鼠。分离NC的淋巴细胞,计数并涂片,用免疫细胞化学法检测其CD4 T、CD8 T细胞亚群水平。结果小鼠免疫后,NC淋巴细胞第1周至第10周持续显著增生(P<0.05);NC中CD4 T细胞水平第1周至第8周持续显著增高(P<0.05),CD8 T细胞在第1、2、3周(P<0.05)显著增高,持续至免疫后第3周,CD4 /CD8 比值无明显变化。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导NC的免疫应答,并可持续较长时间。     

TSo联合IFN-γ鼻内免疫小鼠诱导的弓形虫IgA抗体特异性免疫应答

目的研究速殖子超声裂解物(TSo)和IFN-γ鼻内免疫小鼠经口感染弓形虫速殖子后,血清、小肠液和粪便IgA抗体分泌的动态变化。方法将6～7周龄BALB/c小鼠100只随机分为4组,每组25只,分别用10μl缓冲液PBS、20μgTSo、500UIFN-γ和20μgTSo 500UIFN-γ鼻内免疫小鼠。用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击,分别于攻击后第7、10、13、16、19天处死小鼠,收集血清、小肠液及粪便,ELISA法测定IgA含量。结果各组血清IgA抗体水平在攻击后第10天达到峰值,TSo IFN-γ组血清IgA抗体含量高于其他各组。小肠液和粪便IgA抗体含量在攻击后第13天达到峰值,在实验期各时点TSo IFN-γ组小肠液和粪便IgA抗体含量高于其他组。小肠液与粪便IgA抗体水平呈正相关。结论TSo或IFN-γ或TSo联合IFN-γ鼻内免疫小鼠可诱导黏膜免疫,产生高水平的弓形虫特异性IgA抗体。TSo联合IFN-γ鼻内免疫优于单独免疫,免疫小鼠肠道产生大量SIgA,发挥抗虫作用。鼻黏膜免疫是一种安全有效的免疫接种途径。     

小鼠过继转移致敏小肠IEL抗弓形虫感染

目的研究分离自弓形虫RH株速殖子经口感染小鼠后不同时间点的小肠上皮内淋巴细胞(intraepitheliallymphocyte,IEL)过继转移抗弓形虫感染作用,探讨其作用机制。方法BALB/c鼠经口感染弓形虫速殖子5×104个/只或未感染,作为供体提供IEL。同品系受体鼠分为实验组(IEL7组、IEL9组、IEL11组、IEL13组和IEL15组)和对照组(IEL0组),每组6只小鼠。受体鼠经尾静脉分别接受分离自供体鼠经速殖子感染后第7、9、11、13、15天的致敏IEL或未致敏的IEL3×105/0.2ml只。各组小鼠过继转移后第4天,用弓形虫速殖子灌胃攻击,攻击后第13天分离纯化脑、肺、脾组织弓形虫速殖子并计数,测定肠液IgA含量。结果致敏IEL过继免疫可使受体鼠脑、肺、脾组织内弓形虫速殖子数显著减少,接受感染后第13天IEL的小鼠组织内速殖子数减少最为显著(P<0.01)脑、肺和脾组织内速殖子数比对照组分别减少81.13%,58.43%和70.97%。致敏IEL过继转移使肠道IgA水平升高,IEL11组和IEL13组显著高于IEL0组(P<0.01)。结论致敏IEL过继转移能上调肠道黏膜的免疫应答,导致黏膜特异性IgA分泌增加,诱导黏膜抗体的保护性免疫应答。IEL的这种保护作用具有致敏的时间依赖性,感染后第13天分离的致敏IEL对弓形虫感染具有最大的保护作用。