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1.
HFRS患者血清中HV-RNA的PCR检测及扩增产物的测序分析   总被引:7,自引:3,他引:4  
目的 探讨RT-PCR用于HFRS临床标本中病毒基因检测的若干影响因素及西安地区近年主要浒汉坦病毒(HV)毒株的分子流行病学特点。方法 设计合成了两套分别互补于HV M基因片段和S基因片段的引物,建立了检测HFRS患临床血清标本中HV基因的RT-nested PCR方法,并对扩增的部分HV靶基因进行了测序分析和比较,结果 119份HFRS患轿清(经临床和IFA确诊)经用S基因片段引物的RT-n  相似文献   

2.
直接分型检测单纯疱疹病毒PCR方法的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
喻启桂  秦克锋 《医学争鸣》1994,15(6):443-446
作依据单纯疱疹病毒(HSV)DNA聚合酶基因的核苷酸序列,设计三个引物,一个上游HSV-1/HSV-2型共同性引物,一个下游HSV-1型特异性引物和一个下游HSV-2型特异性引物,建立分型检测PCR的方法,HSV-1的扩增产物是477bpHSV-2扩增产物为399bp,扩增产物的克隆及序列分析表明,该方法特异,用此方法对BALB/c幼鼠中枢神经系统HSV感染的脑标本进行了检测,进一步证实直接分型  相似文献   

3.
应用引物设计原则,选择呼吸道合胞病毒(RSV)基因组中高度保守的F基因作为扩增靶序列,独立设计合成了两对引物,建立了一个逆转录套式聚合酶链反应(PCR)检测RSVRNA的方法。结果:对引物进行敏感度实验,其检测敏感度为每ml10TCID50s(50%tissuecultureinfectivedose)的病毒量;用副流感病毒1型、甲型流感病毒、乙型流感病毒、新城疫病毒、腮腺炎病毒和腺病毒2型作对照,均无预期扩增产物出现,证实了设计引物的特异性;用建立的逆转套式PCR方法对5例急性下呼吸道感染患儿的鼻咽部分泌物标本进行检测,发现3例阳性,2例阴性;同时用病毒培养法检测,结果完全相同。提示:该方法具有快速、敏感、特异和观察结果客观等优点。  相似文献   

4.
高雁  齐丽梅 《吉林医学》1998,19(4):202-203
为探讨婴儿肝炎综合征(NHS)与疱疹病毒(HSV)感染的关系。在疱疹病毒高度同源序列DNA聚合酶基因中设计一对引物,能对HSV-I、HSV-Ⅱ、EBV和CMV四种疱疹病毒DNA进行扩增,继而用凝胶电泳和限制性内切酶BamHⅠ或SmaⅠ酶切分析扩增产物进行鉴别,建立了能一次性分型检测上述四种病毒的PCR-酶谱法。灵敏度可测到1fgDNA,且该引物仅对四种疱疹病毒扩增。用建立的PCR-酶谱法检测30例  相似文献   

5.
123′HVR的结构多态性及其PCR指纹分析余裕炉,张思仲。华西医科大学医学遗传学研室中华医学遗传学杂志1995;12(2):72设计了一对与3′HVR(D16S85)中重复单位3以及旁侧单拷贝序列互补的寡核苷酸引物,建立了直接反映重复单位变异体排序...  相似文献   

6.
建立一种敏感,特异和精确的乙型肝炎病毒(HBV)基因PCR及其产物的酶联杂交定量分析技术。方法:(1)常规PCR法扩增HBV DNA质粒和血清HBV DNA,引物(SP1,SP2)为一对HBV DNA S区基因特异引物,扩增片段长319bp,SP2的5′端用生物素修饰。扩增条件经过严格优化组合,以最大限度减少非特异片段,包括引物二聚体产生。设定5个不同梯度的HBV DNA外参照管,制作标准曲线。(  相似文献   

7.
目的:探讨通用引物检测多种病毒的PCR方法。方法:应用聚合酶链反应-酶谱法(PCR-EC0和疱疹病毒通用引物,检测宫颈脱落细胞中单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)、爱泼期坦-巴尔病毒(EBV0和人巨细胞病毒(HCMV)。结果:健康人(20例)和宫颈糜烂患者(34例)。HCMV阳性检出率分别为10.0%和41.2%,两者差异显著;HSV-1分别为5.0%和14.7%;HS  相似文献   

8.
作者根据乙型肝炎病毒(HBV)adr型PreS2基因序列设计合成一对聚合酶链反应(PCR)引物,经特异性试验后,用于扩增正常人肝细胞中多聚人白蛋白受体(PHSAr)基因转录产物。结果:RT-PCR及RNA-PCR扩增结果均为阳性,而相应骨骼肌总RNA扩增结果呈阴性,提示乙型肝炎病毒PreS2区与PHSAr基因外显子序列具有一定程度的同源性;同时表明PHSAr基因在肝组织中处于表达状态,而对HBV不敏感的组织如骨骼肌则不表达。该研究结果与其它HBV-PHSAr研究相比,进一步证实了PHSAr在HBV感染肝细胞的作用。  相似文献   

9.
正常人肝细胞中HBV—PHSA受体基因表达的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
作者根据乙型肝炎病毒(HBV)adr型PrdS2基因序列设计合成一对聚合酶链反应(PCR)引物,经特异性试验后,用于扩增正常人肝细胞中多聚人白蛋白受体(PHSAr)基因转录产物。结果:RT-PCR及RNA-PCR扩增结果均为阳性,而相应骨骼肌总RNA扩增结果呈阴性,提示乙型肝炎病毒PreS2区与PHSAr基因外显子序列具有一定程度的同源性;同时表明PHSAr基因在肝组织中处于表达状态,而对HBV不  相似文献   

10.
目的:建立幽门螺杆菌(HP)细胞空泡毒素(VC)的聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法:根据HPVC基因图谱,设计了两对顺序特异性引物,分别扩增包括信号肽顺序(406-1516)和不含此顺序(811-1516)的基因片段。对14株经形态学和生化鉴定证实为HP的菌株提取其基因组DNA,以上述引物进行PCR。结果:已知VC阳性的HP标准株(NCTC11638)、临床分离株NZ7、NZ8、HP23、HP35、HP57、HP65、HP66、HP67和HP70共10株为VC阳性。扩增产物中均检出VC特异的1100bp、705bp、543bp片段,敏感性约为0.6ng基因组DNA。结论:所设计的引物和PCR检测方法正确,可应用于临床检测。  相似文献   

11.
探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用EB病毒(EBV),肠道病毒(EVs)、单纯疱疹病毒-1型(HSV-1),丙型肝炎病毒(HCV)特异性引的,以6份健康成人外周血DNA为模板,分别进行酶链式反应(PCR)。初步结果表明,有5份DNA样品可通过EBV、HCV特异性引物扩增,EBV引物扩增后的片段大小在154-234bp之间;HCV引物扩增的片段大小约200bp和120bp。提示病毒某些基因可能存在  相似文献   

12.
用与Moloney小鼠白血病病毒(Mo-MuLV)5'端引物序列、env-LTR间序列及pol基因互补的三种反义脱氧寡核苷酸(14mer,18mer,35mer)进行抗小鼠白血病病毒(SRSV)作用研究。发现它们在兔网织红细胞体外翻译系统中能抑制SRSVmRNA的转译,其中,35mer作用最强,浓度为8μmol/L时抑制率约40%14mer作用较弱,抑制率仅23%;RNaseH能有效降解不对称PCR反应合成的单链反义DNA(119mer)与SRSVRNA杂交体中的RNA,加入RNaseH后,35mer和18mer对SRSVmRNA转译的抑制率分别由42%提高到59%和27%提高到33%,但14mer抑制率无改变。提示反义寡核苷酸能有效地抑制SRSVmRNA的表达,这种作用呈序列特异性和剂量依赖性。它们可能是通过RNaseH对反义DNA·SRSVmRNA杂交体中的RNA降解所致。  相似文献   

13.
探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用EB病毒(EBV),肠道病毒(EVs)、单纯疱疹病毒-1型(HSV-1),丙型肝炎病毒(HCV)特异性引物,以6份健康成人外周血DNA为模板,分别进行聚合酶链式反应(PCR)。初步结果表明:有5份DNA样品可通过EBV、HCV特异性引物扩增。EBV引物扩增后的片段大小在154~234bp之间;HCV引物扩增后的片段大小约200bp和120bp。提示病毒某些基因可能存在人类基因组中或两者具有很高的同源性。  相似文献   

14.
套式聚合酶链反应检测丙肝病毒核酸   总被引:3,自引:0,他引:3  
对70例血清谷丙转氨酶(ALT)异常、疑是丙型肝炎(HCV)患者血清标本,用HCV基因5'非编码区引物作套式聚合酶链反应(套式PCR),扩增产物为260bp,结果显示52例丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)阳性,18例阴性,阳性率为74.2%。10例助血员血样HCV-RNA均为阴性。经Southernblot分析,阳性PCR产物为HCV-RNA所特异。作者认为,采用高保守区核苷酸序列引物作套式PCR检测HCV-RNA,可提高实验的敏感性和特异性。  相似文献   

15.
为探讨婴儿肝炎综合征(NHS)与疱疹病毒(HSV)感染的关系。在疱疹病毒高度同源序列DNA聚合酶基因中设计一对引物,能对HSV—Ⅰ、HSV—Ⅱ、EBV和CMV四种疱疹病毒DNA进行扩增,继而用凝胶电泳和限制性内切酶BamHⅠ或SmaⅠ酶切分析扩增产物进行鉴别,建立了能一次性分型检测上述四种病毒的PCR—酶谱法。灵敏度可测到1fgDNA,且该引物仅对四种疱疹病毒扩增。用建立的PCR—酶谱法检测30例NHS的患儿尿中CMV、HSV—Ⅰ、HSV—Ⅱ、EBV阳性率分别为66.67%、30%、3.33%、6.67%。12例同日龄肺炎治愈新生儿CMV阳性检出率为16.7%,与NHS的CMV感染率差异显著,P<0.05。而HSV—Ⅰ、HSV—Ⅱ、EBV的感染率在NHS与正常儿无明显差异。提示:NHS与CMV感染有关,与HSV—Ⅰ、HSV—Ⅱ、EBV感染关系不大  相似文献   

16.
徐江祥  李起栋 《九江医学》2000,15(3):132-134
目的:观察射频消融术(RFCA)治疗上性心动过速(SVT)效果。方法:采用RFCA对7例SVT患者进行治疗。结果:7例SVT患者均成功消融,其中5例为房室折返型心动过速(AVRT),2例为房室结折返型心动过速(AVNRT)。结论:RFCA治疗SVT安全有效,值得临床推广应用。  相似文献   

17.
目的:观察哌仑西平对兔心肌梗死(I)后心率变异性(HRV)、压力反射敏感性(BRS)和心肌电生理特性的影响。方法:36只兔随机分为对照组、心肌梗死组和哌仑西平组,2周后测量HRV、BRS、心室有效不应期离散性(VERP-D)和室颤阈值(VFT)。各指标间进行相关性分析。结果:心肌梗死后HRV各指标和BRS明显降低,VERP-D明显增加,VFT降低。哌仑西平明显增加心肌梗死后HRV各 BRS,减小V  相似文献   

18.
目的:探讨呼吸道合胞病毒cDNA(RSV cDNA)序列分析的方法。方法:将PCR扩增与核酸序列分析技术相结合,以γ^32P-ATP标记T7Promoter为测序引物,Taq DNA聚合酶直接测序。结果:测序梯清晰,可读性好。.RSV NS和N基因区虽较稳定,但仍有颠换突变。结论:RSV的变异性决定了它对人类的反复感染,PCR测序方法较简便,在临床标本的检测和变异的观察中有重要意义。  相似文献   

19.
本文选用人乳头瘤病毒(HPV)晚期基因区通用引物对,以dUTP代替dTTP,HPV16重组质粒DNA为模板,就PCR反应缓冲体系中pH值Mg^++浓度,引物,TapDNA聚合酶,BSA及引物复性温度和时间对扩增效率的影响进行了研究,结果说明,诸因素对PCR效率均有不同程度的影响,PCR条件优化对于保证其灵敏度和特异性是非常重要的。  相似文献   

20.
选择疱疹病毒科病毒DNA多聚酶基因高保守区中的一对引物,一次PCR可同时扩增疱疹病毒科的4种病毒[单纯疱疹病毒I型(HSV1)、单纯疱疹病毒I型(HSV2)、EB病毒(EBV)、及巨细胞病毒(CMV)]相应的DNA片段。根据扩增产物分子的大小及对扩增产物酶切分析,可将标本中的4种病毒准确分型。用该法检测临床疑为病毒脑炎患者和其他中枢神经系统疾病患者(对照组)的脑脊液(CSF),脑炎组CSF阳性率30%(9/30),对照组CSF阳性率6.7%(2/30);其中8例为HSV1阳性,2例为CMV阳性,1例为HSV2阳性。2例病毒脑炎患者经用无环鸟苷抗病毒治疗7~10d后其CSF中的HSV1DNA由阳转阴。由此说明PCR法不仅可早期诊断疱疹病毒性脑炎,还可显示抗病毒药物的疗效。  相似文献   

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