MDR1基因转染的Swiss3T3细胞经秋水仙碱孵育后多药抗药性模式改变

为观察长期药物筛选对多药抗药性模式的影响，用ＭＤＲ１ｃＤＮＡ转染了Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞．秋水仙碱选择培养两个月前后，以ＭＴＴ方法测定各转化子对阿霉素，长春新碱，秋水仙碱的抗药性，以确定其多药抗药性模式．还测定了维拉帕米对各转化子的增敏效应．在非选择培养液中生长的转化子观察到基本一致的抗药性模式，即对长春新碱高度抗性，对秋水仙碱中度抗性，对阿霉素低度抗性．而在选择培养液中生长两个月后，各转化子的抗药性模式变得参差不齐．结果说明，ＭＤＲ１基因表达可造成一致的抗药性模式，长期秋水仙碱孵育可改变抗药性模式的均一性．     

维拉帕米对MDR1基因转染的Swiss－3T3细胞的化疗增敏作用

为进一步了解维拉帕米对抗药性逆转作用的待征，在人ＭＤＲ１基因转染的Ｓｗｉｓｓ－３Ｔ３多药抗药性细胞，观察了维拉帕米逆转幅度与阿霉素抗性水平的关系。各个转染细胞与母细胞相比，阿霉素毒性明显降低。非毒性浓度（３Ｕｍｏｌ·Ｌ－１）的维拉帕米对阿霉素毒性的增强作用，在转染细胞均高于母细胞，但逆转幅度与抗性水平成反比。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示，转染细胞基因组中有ＭＤＲ１ｃＤＮＡ整合。转染细胞的阿霉素蓄积障碍可被维拉帕米纠正。讨论了药物主动转运的饱和现象在维拉帕米增强效应中的作用，以及Ｐ－糖蛋白与药物相互作用的方式。     

维拉帕米对MDR1基因转染的Swiss-3T3细胞的化疗增敏作用

为进一步了解维拉帕米对抗药性逆转作用的特征,在人MDR1基因转染的Swiss-3T3多药抗药性细胞,观察了维拉帕米逆转幅度与阿霉素抗性水平的关系。各个转染细胞与母细胞相比,阿霉素毒性明显降低。非毒性浓度(3μmol·L^-1)的维拉帕米对阿霉素毒性的增强作用,在转染细胞均高于母细胞,但逆转幅度与抗性水平成反比。Southern杂交显示,转染细胞基因组中有MDR1 cDNA整合。转染细胞的阿霉素蓄积障碍可被维拉帕米纠正。讨论了药物主动转运的饱和现象在维拉帕米增强效应中的作用,以及P-糖蛋白与药物相互作用的方式。     

MTT方法测定培养细胞抗药水平的评价

用ＭＴＴ方法测定了多药抗药细胞ＭＣＦ－７Ａｄｒ及其敏感细胞ＭＣＦ－７ＷＴ对阿霉素、长春新碱、秋水仙碱的化学敏感性。ＭＣＦ－７Ａｄｒ与ＭＣＦ－７ＷＴ相比，对三种药物有明显的抗药性。维拉帕米可逆转ＭＣＦ－７Ａｄｒ对阿霉素的抗药性。随选择药物撤除时间的延长，ＭＣＦ－７Ａｄｒ的抗药水平逐渐下降。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示ＭＣＦ－７Ａｄｒ细胞有典型的ＭＤＲ１基因扩增现象。用ＭＴＴ方法测定Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞对阿霉素、长春新碱、秋水仙碱的化学敏感性，同时测定时各亚克隆株间差异较小，而分批测定时，不同批次相差很大。结果说明，ＭＴＴ方法能有效地检测出抗药细胞株的相对抗性；并提示，应在同时用完全相同的条件进行杀伤试验与ＭＴＴ测试，以避免批次间差异。     

维拉帕米对肿瘤细胞多药抗药性的逆转作用

维拉帕米对肿瘤细胞多药抗药性的逆转作用应明（南京八一医院骨科，２１０００２）中国图书分类号Ｒ９７９．１恶性肿瘤的抗药性是化疗无效的重要原因。肿瘤细胞的抗药性就其来源可分为内在性抗药性（ｉｎｔｒｉｎｉｃｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）和获得性抗药性（ａｃ...     

多药抗药性的产生与谷胱甘肽的关系

用荧光法对EAC及EAC/ADR细胞内GSH含量进行测定,发现EAC/ADR细胞内GSH含量较EAC细胞明显增高,分别为1.25±0.35及0.31士0.12μg/10⁶细胞;但若对EAC/ADR细胞株停用ADR治疗36周后,则能使该细胞株部分恢复其敏感性,且GSH水平也随之下降。另外,长春新碱、丝裂霉素C、放线菌素D及VP-16对EAC/ADR细胞内GSH水平均无明显影响。提示:GSH水平增高,可能是多药抗药性产生的机理之一。     

阿霉素细胞水平药物动力学在维拉帕米对Swiss—3T3细胞的化学增…

确定维拉帕米对药物敏感细胞深化增敏效应中，阿霉素细胞药物动力学是否起作用。     

秋水仙碱和长春新碱诱导L5178Y小鼠淋巴瘤细胞tk基因杂合性缺失分析

目的探讨秋水仙碱(Col)和长春新碱(V in)诱导tk基因分子突变类型及机制。方法挑选经Col,V in诱导的tk基因突变子(tk-/-)和自发突变体,提取基因组DNA,经等位基因特异性PCR扩增,杂合性缺失(LOH)分析等技术,分析其tk基因杂合性缺失。结果Col和V in诱导突变体的tk基因LOH发生率分别为91.5%和92.1%。由LOH分析结果显示,诱导突变体的LOH发生率在自发突变与诱导突变之间,大集落与小集落之间差异均没有显著性。结论Col和V in诱导的tk基因是以功能性等位基因缺失为主的分子突变。     

脂质体阿霉素逆转肿瘤多药耐药的活性和机制研究

目的 探讨脂质体阿霉素( PLD)逆转肿瘤多药耐药(MDR)的活性及其逆转机制.方法 以噻唑蓝(MTT)方法检测PLD对多药耐药肿瘤细胞MCF-7/ADR及KBv200的耐药逆转活性.结果 PLD在体内具有较强的逆转活性,逆转活性大于公认的强逆转剂维拉帕米的活性;在5.0μmol/L浓度下使多药耐药细胞KBv200对长春新碱的敏感性增加了45倍.PLD浓度依赖性增加(0、2.5、5.0、10 μmol/L)KBv200细胞内的罗丹明蓄积.PLD的心脏毒性、骨髓抑制以及脱发等不良反应显著降低.结论 脂质体阿霉素具有较强的逆转MDR的活性,主要通过持续向肿瘤组织聚集,肿瘤局部药物浓度升高,抗肿瘤的活性增强.     

GCS基因与MDR1基因在肝癌细胞多药耐药中的相关性研究

目的观察葡萄糖神经酰胺合酶(GCS)基因高表达对肝癌细胞HepG2内多药耐药基因(MDR1)表达的影响,探讨GCS基因参与肝癌多药耐药的作用机制。方法脂质体法将GCS基因真核表达质粒pEGFP-GCS导入肝癌细胞株HepG2中,应用G418筛选培养,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞GCS mRNA和MDR1 mRNA的表达,蛋白印迹法检测细胞GCS蛋白和P-糖蛋白(P-gp)的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测基因转染前后阿霉素对HepG2细胞半数抑制浓度(IC50)的变化。结果转染后HepG2细胞内GCSmRNA和蛋白的表达水平显著提高(P<0.05),而MDR1mRNA及P-gp的表达水平亦显著提高(P<0.05);同时,MTT法检测结果显示GCS基因转染后HepG2细胞对阿霉素的耐药性显著提高(P<0.05),IC50从(6.2±0.4)μg/ml上升到(11.6±1.0)μg/ml。结论高表达GCS可以上调HepG2细胞中MDR1的表达,使HepG2细胞发生多药耐药。     

R-dl-型维拉帕米调低KBv200肿瘤细胞对长春新碱和多柔比星的多药抗药性

目的:研究R-型维拉帕米对多药耐药的降低作用及其急性动物毒性,并与消旋维拉帕米的相应结果作比较。方法:细胞毒性的测定用MTT法;细胞内多柔比星积累的测定用萤光分光光度计法。急性毒性试验用BALB/c小鼠腹腔注射法。结果:R-型维拉帕米部分调低KBv200细胞对长春新碱和多柔比星的耐药性,其调低效应与作用浓度和作用时间有关。1.25μmol·L~(-1)的R-型维拉帕米与长春新碱对细胞作用24h,能够显著增加KBv200细胞对长春新碱的敏感性。在增敏和增加细胞内多柔比星累积方面,R-型维拉帕米与消旋维拉帕米效果一样,但R-型维拉帕米的急性动物毒性明显低于消旋维拉帕米。结论:R-型维拉帕米1.25μmol·L~(-1)提高耐药肿瘤细胞对长春新碱和多柔比星的敏感性,增加对长春新碱敏感性所需的药物作用时间可缩短至24h。     

基因mdr1高表达多药耐药肿瘤细胞对力达霉素的药物敏感性

目的利用经药物诱导获得的mdr1基因高表达细胞株以及通过mdr1基因转染建立的稳定高表达细胞株，研究多药耐药肿瘤细胞对力达霉素(C-1027)的药物敏感性。方法构建mdr1重组真核表达质粒pcDNA3.1/mdr1，利用脂质体转染技术，获得mdr1高表达HepG2肝癌细胞。经RT-PCR、细胞荧光免疫化学及罗丹明外排实验，鉴定了细胞的mdr1表达水平和药物外排活性。MTT方法测定敏感细胞及相对应的多药耐药细胞对力达霉素等多种抗肿瘤药物的药物敏感性。结果mdr1稳定转染细胞株HepG2/mdr1、多药耐药KBv200细胞和MCF-7/ADR细胞对力达霉素的IC₅₀值分别为(0.020±0.011) nmol·L^-1，(0.24±0.20) nmol·L^-1和(0.028±0.011) nmol·L^-1。相对于各自的敏感细胞，多药耐药细胞HepG2/mdr1，KBv200和MCF-7/ADR对力达霉素的抗药倍数分别是1.3，6.8和1.6倍，对阿霉素的抗药倍数分别是8.8， 37.2和181.3倍，对紫杉醇的抗药倍数分别是40.3， 336.8和49.2倍。结论 mdr1高表达的多药耐药肿瘤细胞对力达霉素仍高度敏感，未表现出抗药性。     

Modulation of multidrug resistance by three bisbenzyl-isoquinolines in comparison with verapamil

比较轮环藤碱（Ｃｙｃ）、海岛轮环藤碱（Ｉｎｓｒ）和海岛轮环藤酚碱（Ｉｎｓｎ）与维拉帕米（Ｖｅｒ）体外调节多药耐药性（ＭＤＲ）的作用．方法：细胞毒试验采用ＭＴＴ法，细胞内阿霉素（Ｄｏｘ）积累采用荧光分光光度法测定．结果：Ｃｙｃ，Ｉｎｓｒ，Ｉｎｓｎ和Ｖｅｒ在ＭＤＲ细胞系ＭＣＦ７／Ａｄｒ和ＫＢｖ２００能显著调节Ｄｏｘ和长春新碱的耐药性，且其作用呈剂量依赖性．Ｃｙｃ，Ｉｎｓｒ，Ｉｎｓｎ和Ｖｅｒ均能增加ＭＣＦ７／Ａｄｒ细胞内Ｄｏｘ的积累．Ｃｙｃ和Ｉｎｓｒ调节ＭＤＲ作用明显优于Ｖｅｒ，而Ｉｎｓｎ的作用类似于Ｖｅｒ．结论：Ｃｙｃ，Ｉｎｓｒ和Ｉｎｓｎ能通过增加ＭＤＲ细胞内Ｄｏｘ的积累而调节ＭＤＲ．     

Modulation of MDR1 gene expression in multidrug resistant MCF7 cells by low concentrations of small interfering RNAs

MDR1 overexpression is one form of the multidrug resistance (MDR) phenotype, which can be acquired by patients initially responsive to chemotherapy. Because of the high toxicity of the inhibitors of P-glycoprotein (P-gp), the protein encoded by MDR1, attention has been focused on selective modulation of the MDR1 gene. Small interfering RNAs (siRNAs) were shown to be powerful tools for such a purpose, even when used at low concentrations (< or =20 nM) in order to avoid sequence nonspecific effects. Two siRNAs used at 20 nM were shown to lead to efficient down-regulation of MDR1 at the protein level (only ca. 20% total P-gp expression remaining) in the doxorubicin selected MCF7-R human cell line. Cell surface expression of P-gp was inhibited, leading to reversal of the drug efflux phenotype (about 40% reversal with the most efficient siRNA) and enhancement of chemosensitivity (about 35%). At the mRNA level, the down-regulation of MDR1 obtained with the most efficient siRNA increased from about 50% (5 nM siRNA) to 60% (10 or 20 nM). The advantage of using a combination of siRNAs instead of a single one has been suggested.     

蒽环类药物在多药抗药细胞株K562r细胞内的积聚、滞留与外排

我们建立的抗药细胞株K 562r表现为典型的MDR特性,K 562r细胞对阿霉素、表阿霉素、及柔红霉素的摄入量减少,外排量增加。维拉帕米对K 562r细胞的药物摄取无明显影响,但能抑制K 562r细胞内的药物外排,摄取药物60min时,1×10~6K 562r细胞核中阿霉素、表阿霉素和柔红霉素的含量分别为809±68,1238±81和1664±77 ng,显著低于K562r细胞核内的药物含量P<0.01。     

Horizontal gene transfer—emerging multidrug resistance in hospital bacteria

The frequency and spectrum of antibiotic resistant infections have increased worldwide during the past few decades. This increase has been attributed to a combination of microbial characteristics, the selective pressure of antimicrobial use, and social and technical changes that enhance the transmission of resistant organisms. The resistance is acquired by mutational change or by the acquisition of resistance-encoding genetic material which is transfered from another bacteria. The spread of antibiotic resistance genes may be causally related to the overuse of antibiotics in human health care and in animal feeds, increased use of invasive devices and procedures, a greater number of susceptible hosts, and lapses in infection control practices leading to increased transmission of resistant organisms. The resistance gene sequences are integrated by recombination into several classes of naturally occurring gene expression cassettes and disseminated within the microbial population by horizontal gene transfer     

一种新番荔枝内酯单体atemoyacin-B克服肿瘤多药抗药性(英文)

目的:探讨atemoyacin-B(Ate)克服肿瘤多药抗药性(MDR)作用及其机制,方法:Bullatacin(Bul)为阳性对照物,细胞毒测定以MTT法;P-gp功能测定以Fura 2-AM法;细胞内药物积累测定以荧光分光光度计法;细胞凋亡测定以流式细胞仪法,结果:Ate对MCF-7/Dox,MCF-7,KBvzoo和KB细胞的IC_(50)分别为122,120,1.34,1.27 nmol·L~(-1),Ate显著增加MDR细胞内Fura-2及多柔比星(Dox)的积累,但不增加相应敏感细胞的细胞内Fura-2及Dox的积累,Ate也能诱导MDR细胞凋亡.结论:MDR细胞对Ate同样敏感,不受抗药性影响,其机制与降低P-gp功能及增加细胞内药物积累有关。