醛固酮在乳鼠心肌细胞表达肿瘤坏死因子-α中的作用

目的:观察醛固酮对培养心肌细胞表达肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。方法:在原代培养的新生大鼠心肌细胞,采用免疫组化和RT-PCR,评价10-6M、10-5M醛固酮及10-5M醛固酮拮抗剂螺内酯对心肌细胞表达TNF-α的影响。用凝胶滞留实验(EMSA)验证NF-κB是否参与TNF-α的转录调控,筛选TNF-α可能启动子的位点。结果:TNF-α的免疫组化染色在对照组心肌细胞呈阴性,10-5和10-6M醛固酮作用心肌细胞48h,心肌细胞胞浆中出现棕色颗粒,10-5M醛固酮与螺内酯共同孵育的心肌细胞内TNF-α染色呈阴性。与单纯培养的对照组心肌细胞相比,10-5M,10-6醛固酮刺激心肌细胞24h致心肌细胞TNF-α表达的mRNA显著增高,与螺内酯共同培养的心肌细胞中TNF-αmRNA水平与对照组相比没有明显差异。醛固酮组心肌细胞的核蛋白与TNF-α上游含有潜在NF-κB结合位点的2段寡核苷酸(-619~-591 and-508~-481)的结合强于对照组,螺内酯能阻断这一效应。结论:正常情况下培养的新生鼠心肌细胞内无TNF-α合成,醛固酮通过醛固酮受体促使培养的心肌细胞表达TNF-α,NF-κB核转移是醛固酮激活心肌细胞表达TNF-α的一条通路。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨大蒜素对大鼠冠状动脉微栓塞的影响及作用机制

目的基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨大蒜素对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)的影响及作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、大蒜素低、中、高剂量组,每组10只,其中空白对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,阳性对照组给予瑞舒伐他汀[3.0 mg/(kg·d)]灌胃,大蒜素低、中、高剂量组分别给予大蒜素[10、20、40 mg/(kg·d)]灌胃,预处理14天后,模型组、阳性对照组及大蒜素低、中、高剂量组采用左心室注射42μm微栓塞球造模,空白对照组采用左心室注射等体积生理盐水。检测大鼠心功能变化; HBFP染色法检测心肌微梗死面积; TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况; ELISA法检测白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;电化学法检测肌钙蛋白I(c Tn I)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平; RT-PCR法检测大鼠心肌组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB p65(NF-κB p65) m RNA水平;Western blot法检测大鼠心肌组织中TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白表达。结果大蒜素可显著改善CME大鼠心功能,明显降低心肌微梗死面积和心肌细胞凋亡率,有效抑制炎症因子IL-1β、TNF-α和心肌损伤指标c Tn I、CK-MB表达,明显下调TLR4、MyD88和NF-κB p65 m RNA和蛋白相对表达量。结论大蒜素可抑制CME大鼠心脏功能障碍和心肌损伤,其作用机制可能与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路密切相关。     

不同剂量卡维地洛对大鼠冠状动脉微栓塞后心室重塑的影响

目的:比较不同剂量卡维地洛对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)后心室重塑的影响.方法:利用大鼠自体的血栓微粒造成心肌内小冠状动脉栓塞,建立CME模型.40只大鼠随机分成4组,即假手术组(SO组)、CME组、小剂量卡维地洛组(LCAR组,1.0 mg*kg-1*d-1)和大剂量卡维地洛组(HCAR组,10.0 mg*kg-1*d-1).灌胃4周后,行心功能检测、血流动力学测定及心肌病理学分析.结果:与SO组比较,CME组细胞间质胶原容积分数(CVF)与心肌细胞凋亡率(Rapo)明显增加,左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)明显增大,左心室短轴缩短率 (LVFS)、左心室射血分数 (LVEF)明显降低(均P<0.01);左心室舒张末期压(LVEDP)明显增加,左心室收缩压(LVSP)和左心室腔内压力最大上升速率(+LVdp/dtmax)显著下降(均P<0.01).与CME组比较,LCAR组和HCAR组心肌间质CVF和Rapo显著降低,LVEDD、LVESD明显减小,LVFS明显上升,LVEF明显改善(均P<0.01);LVEDP明显下降,+LVdp/dtmax显著上升,心率明显减慢(均P<0.01).除LVSP外,以上改变HCAR组均较LCAR组明显(P<0.05).结论:①大鼠CME后心脏发生慢性重塑;②卡维地洛剂量依赖性地改善CME后心室重塑.     

黄连解毒汤对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察黄连解毒汤对在体大鼠急性心肌缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用,并探讨其作用机制.方法 采用SD大鼠心肌缺血再灌注模型(I/R),将56只SD大鼠随机等分为7组:假手术组、心肌缺血再灌注组、溶剂(%CMC-Na)对照组、黄连解毒汤(HLJDT)低剂量组、HLJDT中剂量组、HLJDT高剂量组,复方丹参组.连续给药7 d,末次给药24 h后,复制大鼠心肌I/R损伤模型.测定血清肌酸激酶(CK)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-1β水平,测量心肌梗死范围,取心肌组织检测 NF-κB.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组血清TNF-α、IL-1β、CK水平明显增高(P<0.05),梗死范围明显增加(P<0.05),且NF-κB表达明显增高(P<0.05);实验组较缺血再灌注对照组的TNF-α、IL-1β、CK、NF-κB水平明显降低,梗死范围明显降低(P<0.05).结论 黄连解毒汤显著缩小心肌梗死面积,降低心肌酶,减少心肌细胞内TNF-α、IL-1β、CK、NF-κB蛋白的表达,发挥对缺血再灌注心肌的保护作用.     

积雪草酸通过SIRT3/β-catenin/PPARγ信号通路影响急性心肌梗死模型大鼠血管新生及心室重构

目的基于急性心肌梗死(AMI)发生发展过程中沉默信息调节因子3(SIRT3)/β-连环蛋白(β-catenin)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路的变化,探讨积雪草酸(AA)对AMI模型大鼠血管新生及心室重构的影响及作用机制。方法将72只SD大鼠按照体重均衡的原则随机分组,其中12只为空白对照组,剩余的大鼠制备AMI模型。造模成功后将大鼠采用随机数字表法分为5组:模型组、阳性对照组、AA高剂量组、AA中剂量组和AA低剂量组,每组12只。空白对照组和模型组给予生理盐水,阳性对照组给予阿司匹林肠溶片,药物干预组给予不同剂量的AA。28天后采用多普勒超声仪检测各组大鼠的血管新生和心室重构情况。采用逆转录-聚合酶链反应检测大鼠心肌SIRT3、β-catenin和PPARγmRNA表达。采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)等炎症因子水平。结果与空白对照组相比,模型组大鼠的心脏功能变差,微血管密度(MVD)增加,心肌SIRT3、β-catenin、PPARγmRNA表达和血清IL-6、TNF-α、NF-κB水平均升高(P0.05);与模型组相比,各给药组大鼠的心脏功能明显改善,MVD增加,心肌SIRT3、β-catenin、PPARγmRNA表达均增加,血清IL-6、TNF-α、NF-κB水平降低(P0.05);与阳性对照组相比,AA高、中、低剂量组大鼠的心脏功能改善,MVD增加,心肌SIRT3、β-catenin、PPARγmRNA表达均升高,血清IL-6、TNF-α、NF-κB水平降低(P0.05)。结论积雪草酸抑制大鼠梗死心肌SIRT3/β-catenin/PPARγ信号通路,对AMI大鼠心肌组织具有一定的保护作用。     

阿托伐他汀对冠状动脉微栓塞后非梗死区心肌炎症的影响

目的:探讨阿托伐他汀干预治疗对冠状动脉微栓塞（CME）后非梗死区心肌炎症的影响。方法: 给清洁级雄性新西兰兔选择性经左前降支(LAD)注入微栓子颗粒悬液建立CME模型，将36只新西兰兔随机分为CME组（模型组）、阿托伐他汀（atrovastatin）干预组及对照组，每组12只(n=12)。于术后7 d处死，取左心室乳头段心肌经HE染色后，观察梗死心肌并检测梗死面积。用ELISA法及RT-PCR检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）及其基因在非梗死区（右室）心肌中的表达。结果: 前降支动脉微栓塞后，非梗死区右室心肌中白细胞浸润明显增多，TNF-α、IL-6蛋白及其基因的表达显著增强。与未处理组相比，阿托伐他汀可显著抑制CME后右室心肌中白细胞浸润及TNF-α、IL-6蛋白及其基因的表达(均P<0.01)。结论: 冠脉微栓塞后，炎症反应的激活不仅局限于梗死灶，且累及非梗死区心肌。阿托伐他汀可显著抑制CME后非梗死区心肌炎症反应。     

丁苯酞和TLR4抑制剂预处理对冠状动脉微栓塞大鼠心肌损伤的改善作用及其机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)联合Toll样受体4(TLR4)抑制剂预处理对冠状动脉微栓塞大鼠心肌损伤的改善作用及机制.方法 将32只SD大鼠按随机数字表法分为NBP+TAK-242组、NBP组、CME组、Sham组,每组8只.NBP+TAK-242组CME术前予NBP 80 mg/kg连续灌胃7 d,CME术前30 min按2 mg/kg尾静脉注射0.5 mg/mL的TLR4抑制剂TAK-242;NBP组CME术前予NBP 80 mg/kg连续灌胃7 d;其余各组同法注射4 mL/kg的生理盐水.然后,NBP+TAK-242组、NBP组、CME组左心室注入直径42μm微栓塞球混悬液0.1 mL,Sham组注射0.1 mL生理盐水.CME术后6 h,检测各组大鼠心功能指标,苏木精—伊红染色(HE)及苏木精—碱性品红苦味酸染色(HBFP)观察心肌组织病理改变;RT-PCR检测心肌组织TLR4 mRNA,Western blotting法检测心肌组织TLR4通路相关蛋白(TLR4、myD88、NF-κB)及炎性因子(IL-1β、TNF-α蛋白).结果 与Sham组相比,CME组大鼠心功能射血分数(LVEF)和短轴缩短率(FS)降低(P均<0.01),左心室收缩末期内径(LVEDs)增加(P<0.01);HE染色可见明显白细胞浸润,心肌微梗死面积增加(P<0.01);心肌TLR4 mRNA相对表达量升高(P<0.01);心肌TLR4通路相关蛋白及炎性因子相对表达量升高(P均<0.05).与CME组相比,NBP组及NBP+TAK-242组LVEF、FS升高(P均<0.01),左心室舒张末期内径(LVEDd)、LVEDs降低(P均<0.01);心肌炎性细胞浸润减少,心肌微梗死面积减少(P均<0.01);TLR4 mRNA相对表达量降低(P<0.01);心肌TLR4通路相关蛋白及炎性因子相对表达量均降低(P均<0.05).与NBP组相比,NBP+TAK-242组LVEF、FS升高(P<0.05);心肌炎性细胞浸润较少,心肌微梗死面积减少(P<0.01);心肌TLR4、MyD88、IL-1β、TNF-α蛋白相对表达量进一步降低(P均<0.05).结论 NBP和TLR4抑制剂预处理可改善冠状动脉微栓塞大鼠的心肌损伤,预处理效果优于单用NBP,其作用机制可能与抑制LR4/myD88/NF-κB信号通路及炎性因子有关.     

雷米普利对心肌梗死后心衰大鼠非梗死区胶原的抑制作用

目的 研究心肌梗死后心衰大鼠非梗死区心肌血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)及其Ⅰ型受体(AT1-R)表达对心室重构的影响及雷米普利的干预作用.方法 结扎大鼠左冠状动脉前降支并饲养6 w的16只存活大鼠,随机分为模型组及雷米普利组,每组8只,另取8只大鼠为假手术组,连续灌胃给药4 w后测定大鼠血流动力学参数,ELISA方法检测血清及左心室非梗死区AngⅡ的含量,RT-PCR 法测定左心室非梗死区心肌组织AT1-R mRNA表达水平,Masson染色观察非梗死区心肌胶原的沉积.结果 雷米普利能明显升高左心室内压最大上升和最大下降速率(±dp/dt_(max)),降低左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)(P<0.05或P<0.01),但对心率(HR)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)无明显影响(P>0.05),同时明显降低血清及左心室非梗死区AngⅡ的含量及下调AT1-R mRNA 表达水平(P<0.01或P<0.001),Masson染色可见非梗死区心肌胶原沉积明显减轻.结论 雷米普利对梗死后心衰大鼠非梗死区心肌间质胶原重构有显著的抑制作用,其作用机制与下调AT1-R表达水平及减轻胶原沉积有关.     

核因子MF-KB活化和肿瘤坏死因子-α表达在大鼠心肌梗死后心力衰竭中的作用

目的探讨心肌梗死(MI)后大鼠心肌核因子-kB(NF-κB)活化、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达在心室重塑和心力衰竭进展中的作用. 方法结扎大鼠冠状动脉前降支复制MI模型,同时设假手术组(SH)组,4、8、12周后检测血流动力学指标,称取心脏组织湿重.对左室非梗死区心肌组织采用Western-blot法检测TNF-α蛋白表达,电泳动度迁徙率法(EMSA)检测NF-κB活性.     

奈西立肽对老年慢性心力衰竭患者心室重构和相关神经激素的影响

目的探讨奈西立肽对老年慢性心力衰竭患者心室重构和血浆相关神经激素的影响。方法将96例慢性心力衰竭患者随机分为常规组32例、联合治疗组32例和奈西立肽组32例。分别在入院时和治疗后6个月进行心脏超声并检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素1及NO水平变化。结果与治疗前比较,常规组各项指标均有改善的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),联合治疗组和奈西立肽组LVEF和NO明显升高,左心室舒张末内径(LVEDD)明显缩小、AngⅡ和内皮素1明显降低(P<0.05,P<0.01);与常规组比较,联合治疗组和奈西立肽组LVEF和NO明显升高,LVEDD明显缩小、AngⅡ和内皮素1明显降低(P<0.05,P<0.01);与联合治疗组比较,奈西立肽组LVEF和NO明显升高,LVEDD、AngⅡ和内皮素1明显降低(P<0.05)。结论奈西立肽能改善老年慢性心力衰竭患者心脏功能,逆转心室重构,降低血浆AngⅡ及内皮素1,增加NO水平。