洛贝林逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药作用及其机制

目的：探讨哌啶生物碱洛贝林对人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADM耐药的逆转作用及其分子机制。方法：利用MTT比色法测定不同浓度洛贝林对人乳腺癌细胞株MCF-7/ADM的阿霉素（ADM）和氟尿嘧啶（Fu）的耐药逆转指数。多功能酶标仪测定洛贝林干预对细胞内罗丹明123荧光强度以反映其对细胞多药耐药蛋白P-gp活性的影响。同时用流式细胞术检测洛贝林对MCF-7/ADM细胞内罗丹明123积聚浓度的影响,从功能学的角度观察洛贝林的耐药逆转作用及其机制。结果：洛贝林(10 μmol/L)干预下,多药耐药细胞株MCF-7/ADM对化疗药的敏感性增加,ADM对耐药细胞株的IC50由（44.81±0.43)mg/L降至（16.72±0.75）mg/L,逆转指数为2.68;Fu对耐药细胞株的IC50由（53.12±1.60）mg/L降至（38.90±1.43）mg/L,逆转指数为1.37。洛贝林对细胞的罗丹明123外排有显著的浓度依赖性抑制作用。洛贝林（20 μmol/L）的多药耐药逆转有效率为经典耐药逆转剂维拉帕米（20 μmol/L）的71.6%,但毒副作用显著降低。结论：洛贝林对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADM的耐药性具有逆转作用,其机制主要为抑制细胞多药耐药蛋白P-gp的活性     

白藜芦醇对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性的逆转增效作用

目的研究白藜芦醇（Res）逆转人乳腺癌MCF-7/阿霉素（ADM）细胞多药耐药（MDR）的作用及初步机制。方法采用MTT法测定不同浓度Res对MCF-7/ADM细胞的抑制作用、应用金氏公式判断Res和ADM联合效应;同时采用荧光分光光度法对不同浓度Res作用下MCF-7/ADM细胞内的ADM积量进行测定。结果Res能提高MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性,ADM联合4μmol/L Res时逆转倍数为1.950,8μmol/L为2.178,12μmol/L为2.355;Res可提高ADM在MCF-7/ADM细胞内的蓄积,耐药细胞MCF-7/ADM内ADM的浓度明显升高（与对照组比较,P〈0.05）,且细胞内ADM浓度均随细胞外ADM浓度升高而升高。结论Res对ADM抗人乳腺癌MCF-7/ADM细胞具有增敏作用;Res能够部分逆转MDR,其逆转机制与增加ADM药物浓度有关。     

三羟异黄酮对人乳腺癌耐药细胞mdr-1、HER2/neu表达的影响

目的研究三羟异黄酮(Genistein,GEN)对体外培养人乳腺癌MCF-7/ADM耐药细胞中mdr-1、HER2/neu基因及蛋白表达的影响,探讨其逆转多药耐药机制。方法采用MTT法检测GEN作用MCF-7/ADM细胞后的细胞增殖抑制率(IR)和半数抑制浓度(IC50);RT-PCR法检测MCF-7/ADM细胞经不同浓度阿霉素(ADM)、GEN及GEN联合ADM处理后,其mdr-1、HER2/neu mRNA表达的变化;Western blot检测其对c-erbB2蛋白及P-糖蛋白(P-gp)的影响。结果 GEN对MCF-7/ADM细胞生长抑制作用明显,其抑制效应呈时间-剂量依赖性,特别是GEN浓度增加到60μg/mL时,对细胞抑制作用急剧升高(P<0.01)。MCF-7/ADM细胞中有mdr-1、HER2/neu过量表达,经GEN单独及联合ADM作用后,HER2/neu mRNA表达明显下调,c-erbB2蛋白出现一致性的表达下调,但对mdr-1mRNA及P-gp无影响。结论人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性与耐药基因及原癌基因的高表达相关,GEN能下调MCF-7/ADM细胞HER-2/neu基因及蛋白表达,可能是其逆转MCF-7/ADM细胞多药耐药性的机制之一,但对由P-gp介导的多药耐药无效。     

水飞蓟素逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM耐药性的实验研究

目的 明确水飞蓟素(Silymarin,Sily) 对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转耐药作用。方法 以CCK-8法测定阿霉素（Adriamycin,Adm）对人乳腺癌敏感细胞株MCF-7/S和耐药细胞株MCF-7/ADM的毒性作用,计算出耐药倍数。以无细胞毒性的Sily（10μg/ml）作为逆转耐药剂,联合Adm观察其对耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转耐药作用,计算得逆转倍数。结果 ①Adm对MCF-7/S和MCF-7/ADM的半数抑制浓度(IC50)分别为1.773 μg/ml和43.812 μg/ml,耐药倍数为24.7倍。②Sily能够增强ADM对MCF-7/ADM的细胞毒作用。以10μg/ml（抑制率为2.0%）的Sily联合Adm作用于MCF-7/ADM 48h后,耐药细胞株的IC50降至7.798 μg/ml,逆转倍数为5.6倍(P <0.01)。结论 Sily能够逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM的耐药性。     

水飞蓟素逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM耐药性实验研究

目的观察水飞蓟素(Silymarin,Sily)对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转耐药作用。方法以CCK-8法测定阿霉素(Adm)对人乳腺癌敏感细胞株MCF-7/S和耐药细胞株MCF-7/ADM的毒性作用,计算出耐药倍数。以无细胞毒性的Sily(10μg/m L)作为逆转耐药剂,联合Adm观察其对耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转耐药作用,计算得逆转倍数。结果 (1)Adm对MCF-7/S和MCF-7/ADM的半数抑制浓度(IC50)分别为1.773μg/m L和43.812μg/m L,耐药倍数为24.7倍。(2)Sily能够增强ADM对MCF-7/ADM的细胞毒作用。以10μg/m L(抑制率为2.0%)的Sily联合Adm作用于MCF-7/ADM 48h后,耐药细胞株的IC50降至7.798μg/m L,逆转倍数为5.6倍(P0.01)。结论Sily能够逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM的耐药性。     

蝎毒对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药的影响及机制研究

[目的]探讨蝎毒(BMK)对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药的逆转及谷胱甘肽S转移酶(GST)活性的影响。[方法]实验分两组:MCF-7/ADM耐药细胞组;MCF-7/ADM 蝎毒组。采用MTT法测定蝎毒的细胞毒性和抗药性逆转,流式细胞术测定蝎毒对耐药细胞凋亡百分率的影响,紫外分光光度术测定蝎毒对谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)活性的影响。[结果]与MCF-7/ADM耐药细胞组相比:①非细胞毒性剂量(3.0μg/mL)蝎毒能显著降低MCF-7/ADM的IC50(P<0.01),逆转倍数为1.52倍。②蝎毒(3.0μg/mL)显著增强对耐药细胞的凋亡诱导作用,凋亡率由(8.9±0.01)%上升为(12.6±0.21)%(P<0.01)。③蝎毒(3.0μg/mL)显著降低耐药细胞内谷胱甘肽S转移酶的活性(P<0.01)。[结论]蝎毒能够部分逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性,增加ADM对肿瘤细胞的凋亡诱导作用,其逆转机制与降低耐药细胞内GST酶活性有关。     

热化疗联合维拉帕米对人乳腺癌耐药细胞化疗敏感性的实验研究

目的观察用热化疗与维拉帕米合用是否能抑制人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM多药耐药蛋白P-gp的表达以逆转乳腺癌对化疗药的耐药性,提高化疗敏感性。方法高表达P-gp的MCF-7/ADM,在37~43℃热化疗条件下分别加入3μg/mL阿霉素(ADM)和不同浓度的逆转剂维拉帕米(VRP,0~5μmol/L),用共聚焦MRC-1024(60×物镜)观察扫描,Laserpix软件检测细胞内ADM的荧光强度,流式细胞仪检测凋亡。结果随着温度和VRP浓度的升高,MCF-7/ADM细胞内ADM荧光强度升高,凋亡率增加,且温度和浓度有协同作用。结论热化疗与维拉帕米联合可有效逆转P-gp所致耐药,提高化疗敏感性。     

咯萘啶逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性及机制探讨

目的 在明确咯萘啶(PND)逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药性的药效基础上,初步探索作用机制。方法采用MTT法检测单用阿霉素(ADM)和联用咯萘啶(PND)对人乳腺癌敏感细胞MCF-7和耐药细胞MCF-7/ADM的抑制作用,得出半数抑制浓度(IC₅₀),并计算耐药倍数和逆转倍数。Western blot检测细胞中Fas和Caspases-3蛋白表达。结果ADM对MCF-7和MCF-7/ADM的IC₅₀分别为1.399 μg/mL和43.885 μg/mL,耐药倍数为31.4倍。PND(0.5 μg/mL)联合ADM作用MCF-7/ADM的IC₅₀为3.246 μg/mL,逆转倍数为13.5倍,并能提高耐药MCF-7/ADM中Fas和Caspases-3蛋白表达。结论PND能够逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药性,通过上调膜蛋白Fas表达,增加MCF-7/ADM对ADM的敏感性,从而促进细胞凋亡。     

逆转胶囊含药血清对MCF-7／ADR细胞bcl-2基因表达的影响

目的探讨中药逆转胶囊对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7／ADR细胞bcl-2基因表达的影响从而进一步了解其逆转耐药的作用机制。方法用逆转胶囊含药血清培养MCF3／ADR细胞,同时设计实验分组,以流式细胞仪计数方法检测各组MCF-7／ADR细胞的bct-2基因的表述情况。结果逆转胶囊含药血清能显著抑制MCF-7／ADR细胞bcl-2基因的表达;与阿霉素合用时亦可抑制MCF-7／ADR细胞bcl-2基因的表达,加强ADM诱导凋亡的作用。结论逆转胶囊具有逆转MCF-7／ADR多药耐药性的作用,其机制之一可能是通过下调bcl—2基因表达来实现的。     

三羟异黄酮联合阿霉素对人乳腺癌细胞HER-2/neu表达的影响

目的:探讨三羟异黄酮(GEN)联合阿霉素(ADM)对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中HER-2/neu mR-NA及蛋白表达的影响。方法:将不同浓度GEN和ADM单独或联合作用于体外培养的MCF-7/ADM细胞后,RT-PCR检测HER-2/neu mRNA表达情况,Western blot检测HER-2/neu蛋白表达情况。结果:体外培养的MCF-7/ADM细胞高表达HER-2/neu mRNA及蛋白,经GEN单独及联合ADM作用后,HER-2/neu mRNA和蛋白表达明显下调。联合用药比相同浓度GEN单用下调更明显。结论:人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性与HER-2/neu mRNA及蛋白高表达相关,GEN能部分逆转MCF-7/ADM细胞多药耐药性。     

三羟异黄酮对MCF-7/ADM细胞阿霉素耐药性的逆转作用

目的:探讨三羟异黄酮(GEN)单用及联合阿霉素(ADM)对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性的影响。方法:分别将不同浓度GEN(8、15、30、60μg/mL)和阿霉素单独及联合与人乳腺癌MCF-7/ADM细胞体外共培养48、72 h,MTT法检测细胞抑制率(IR),计算耐药倍数和逆转倍数。结果:MCF-7/ADM细胞相对敏感株MCF-7/S的耐药倍数48 h为117.15倍、72 h为54.42倍。当GEN单独作用后可抑制MCF-7/ADM细胞生长,抑制作用与时间、浓度呈正相关。25μg/mL GEN联合阿霉素对MCF-7/ADM细胞生长抑制率明显高于单用阿霉素(P<0.01),其逆转倍数为7.53倍。结论:GEN可抑制人乳腺癌MCF-7/ADM细胞生长,联合阿霉素对肿瘤细胞生长抑制具有协同作用,GEN能够逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。     

乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/A的建立

目的建立人乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/A,对其生物学特性进行初步分析评价,为后续乳腺癌多药耐药机制研究提供一株较理想的细胞模型.方法以阿霉素(ADM)为诱导药物,人乳腺癌细胞系MCF-7为诱导对象,采用ADM低浓度持续加量诱导方法,建立人乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/A,比较两组细胞形态变化和倍增时间,MTT法测定细胞耐药倍数及多药耐药指数,实时荧光定量PCR检测MDR1、MMP-2、CD44v6 mRNA表达水平.结果建成的MCF-7/A耐药细胞株,耐ADM指数为74,撤药培养60d后耐药指数仍维持在50以上,耐药性稳定,并与多种化疗药物有交叉耐药性,MCF-7/A耐药细胞株撤药培养倍增时间较亲本细胞明显缩短,MDR1、MMP-2、CD44v6 mRNA表达水平较亲本细胞均有明显增加(均P<0.01).结论建立的MCF-7/A模型具有多药耐药细胞的基本生物学特性,可用于乳腺癌多药耐药及侵袭转移机制的研究.     

Alopecurone B逆转人乳腺癌细胞MCF-7阿霉素耐药株活性研究

目的 研究黄酮化合物Alopecurone B（APB）对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株MCF-7/ADR多药耐药的逆转活性及逆转机制。方法 人乳腺癌细胞阿霉素耐药株MCF-7/ADR维持在含有250 ng/mL阿霉素的培养基中,使用MTT法、qPCR、Western blot和流式细胞术研究APB对耐药株P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响。结果 APB能逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药,抑制P-gp的功能,下调P-gp基因和蛋白的表达。结论 APB具有强效逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的效果,其机制涉及对P-gp的调控。      

氧化苦参碱逆转MCF-7/ADM耐药的研究

目的研究氧化苦参碱(Oxy)对耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转作用及逆转机制。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对细胞株的抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞内ADM的荧光强度以及胞膜P-糖蛋白(p-glycoprotein,P-gP)的表达。结果浓度小于0.82mg/mL的Oxy对MCF-7/ADM无明显细胞毒性。ADM对MCF-7/S和MCF-7/ADM的IC50分别为0.85μg/mL和38.6μg/mL,耐药倍数约45.4倍,Oxy作用后ADM对MCF-7/ADM的IC50降低为11.8μg/mL,逆转倍数约为3.27倍。加入0.8mg/mL的Oxy后MCF-7/ADM胞内ADM的蓄积浓度增加,胞膜P-gP泵的表达量下降(P0.05)。结论 Oxy具有直接的抗肿瘤作用,可以部分逆转MCF-7/ADM的多药耐药性,机制与Oxy下调MCF-7/ADM细胞膜P-gP的表达有关。     

人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的耐药谱及brca1基因表达的实验研究

[目的]研究人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的耐药谱并探讨brca1基因产物表达与该细胞耐药性的相关性。[方法]经MTT法检测MCF-7/ADM细胞的耐药谱;通过免疫荧光法检测brca1基因产物表达情况。[结果]测得MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药倍数为3.7倍;对长春新碱的耐药倍数为70.3倍;对氟尿嘧啶的耐药倍数为7.8倍。brca1基因产物在MCF-7/ADM细胞中的表达强度(98.23±7.63)高于MCF-7/S细胞(8.69±1.25),差异具有显著性意义(P<0.01)。[结论]MCF-7/ADM细胞是多药耐药细胞株,brca1与肿瘤多药耐药产生可能有一定的相关性。     

微波热疗对人乳腺癌阿霉素细胞MCF-7多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的探讨微波热疗对人乳腺癌阿霉素细胞MCF-7和阿霉素耐药细胞MCF-7/ADM的多药耐药蛋白表达和耐药性的影响。方法应用Real-TimePCR法检测微波热疗对P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响和高效液相色谱法(HPLC)检测微波热疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果MCF-7/ADM细胞在微波热疗后4h和24h,P-gp、MRP表达量明显下降(P<0.01)。微波热疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显上升(P<0.01)。结论微波热疗抑制了耐药蛋白的表达,增加了细胞内的药物浓度,热疗可能是逆转化疗耐药从而提高化疗效果的一种有效手段。     

SRC激酶在人乳腺癌细胞对阿霉素耐药及侵袭转移中的作用

目的 探讨SRC激酶抑制剂PP2在乳腺癌细胞对阿霉素（adriamycin, ADM）耐药及侵袭转移过程中的作用。 方法 采用MTT法检测不同浓度ADM对乳腺癌细胞敏感株（MCF-7）和耐药株(MCF-7/ADM)细胞的增殖抑制作用,计算半数抑制浓度（50% inhibitory concentration, IC₅₀）及耐药指数(resistance index, RI);Western blot检测MCF-7和MCF-7/ADM细胞内多药耐药蛋白MDR1、SRC及缝隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达;Transwell和细胞划痕实验检测MCF-7、MCF-7/ADM细胞、不同浓度PP2（1、2、4 μmol/L）预处理MCF-7/ADM 24 h细胞的侵袭和迁移能力;采用标准集落形成分析法观察4 μmol/L PP2预处理对ADM细胞毒性的影响。 结果 ADM对MCF-7的增殖抑制作用大于MCF-7/ADM细胞（P<0.01）;ADM对MCF-7细胞IC₅₀为24.55 μmol/L, 对MCF-7/ADM细胞IC₅₀为770.57 μmol/L,RI为31;与MCF-7细胞比较,MCF-7/ADM细胞MDR1、SRC蛋白表达增高（P<0.01）,且MCF-7/ADM细胞具有更强的侵袭迁移能力（P<0.01）,采用SRC抑制剂后,MCF-7/ADM细胞侵袭转移能力被抑制（P<0.01）,细胞集落形成率下降,即对ADM的敏感性提高（P<0.01）。 结论 人乳腺癌细胞MCF-7在对ADM耐药的过程中伴随着SRC蛋白表达增多, SRC抑制剂可以降低细胞耐药性以及侵袭转移能力。     

人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7／ADM细胞迁移能力的对比研究

目的探讨乳腺癌细胞化疗继发耐药后细胞迁移能力的变化,并筛选出相关基因。方法以MCF-7细胞株为亲本细胞,采用阿霉素（ADM）低浓度持续加量诱导法建立对ADM耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7／ADM。应用ATP-TCA药物敏感检测法和×CELLligence／RT-CES实时细胞电子分析系统检测人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7／ADM对多种化疗药物的耐药情况及细胞增殖能力。应用Transwell实验和xCELLligence／RT-CIM实时细胞电子分析系统检测人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7／ADM的细胞迁移能力。应用比较基因组芯片筛选出人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7／ADMDNA拷贝数4倍差异的基因。结果撤药培养150d后,MCF-7／ADM细胞较亲本细胞MCF-7的ADM耐药指数为72.9,对其他化疗药物无明显的交叉耐药性。MCF-7／ADM细胞迁移能力较MCF-7明显降低（P〈0．05）。MCF-7／ADM有12种基因DNA拷贝数是MCF-7的4倍,MCF-7有6种基因DNA拷贝数是MCF-7／ADM的4倍。结论乳腺癌细胞化疗继发耐药伴随细胞迁移能力明显降低,其相关基因的DNA拷贝数亦有明显差异。     

MIF对耐ADM人乳腺癌细胞MCF-7/ADM 体内外耐药逆转作用

目的：采用动物体内外结合方法探讨米非司酮（mifepristone, MIF）对耐阿霉素（adriamycin,ADM）人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药逆转作用。方法：四甲基偶氮唑蓝法检测5 μmol/L MIF对 MCF-7/ADM体外耐药逆转作用。MCF-7/ADM接种裸鼠皮下构建裸鼠移植瘤模型,空白对照组（NS组）为0.2 mL生理盐水腹腔注射+0.5 mL食用油灌胃;ADM组为5 mg/kg ADM腹腔注射+0.5 mL食用油灌胃;MIF组为30 mg/kg MIF灌胃+0.2 mL生理盐水腹腔注射;ADM+MIF组为5 mg/kg ADM腹腔注射+30 mg/kg MIF灌胃。观察各组裸鼠移植瘤情况。结果：（1）5 μmol/L MIF对MCF-7/ADM细胞的抑制率小于5%,与未用MIF组的抑制率比较差异无统计学意义（P>0.05）。（2）ADM对MCF-7/ADM细胞的半抑制率为17.21 mg/L,而对非耐药乳腺癌细胞MCF-7细胞的半抑制率为0.42 mg/L,ADM对MCF-7/ADM细胞的半抑制率明显高于MCF-7的半抑制率（P＜0.05）。（3）5 μmol/L MIF与ADM联合处理MCF-7/ADM细胞后,MCF-7/ADM半抑制率为1.96 mg/L,明显低于单用ADM组的半抑制率（P＜0.05）。逆转ADM耐药倍数为8.78。（4）ADM+MIF组瘤体积［（232.5149±309.2377）mm3］均低于NS组的瘤体积［（962.2309±261.1313 ）mm3］（均P＜0.05）,也低于MIF组的瘤体积［（778.2846±42.6919）mm3］,还低于ADM组的瘤体积［（508.9648±16.2609） mm3］（均P＜0.05）。MIF+ADM组的瘤质量抑制率为78.0%。结论：MIF对耐阿霉素的人乳腺癌细胞MCF-7/ADM体内外均有逆转耐药性的作用。     

逆转胶囊对人乳腺癌MCF-7/ADR细胞中P-gp和MRP表达的影响

目的:检测逆转胶囊对乳腺癌耐药相关蛋白表达的影响,探讨其逆转乳腺癌多药耐药的作用机制。方法:流式细胞术、免疫印迹技术(Western-blot)检测逆转胶囊作用前后MCF-7/ADR细胞表面P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)的表达。结果:逆转胶囊能显著抑制MCF-7/ADR细胞表面P-gp的表达,并可诱导MRP表达下降,其作用随血药浓度增加和作用时间的延长而增强。结论:逆转胶囊逆转乳腺癌多药耐药的机制与下调P-gp和MRP的表达有关。