芦荟苦素对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究芦荟苦素诱导人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC) A549细胞发生凋亡,从而抑制其增殖的作用机制。方法:取对数生长期的A549细胞,用细胞计数试剂(cell counting kit,CCK-8)检测考察不同浓度的芦荟苦素(0,2,4,8,16,32,64,128μmol·L~(-1))对A549细胞增殖的影响,5μmol·L~(-1)的顺铂作为阳性对照。用结晶紫染色测定芦荟苦素(0,16μmol·L~(-1))对A549细胞克隆形成的数目以及克隆形成的大小的作用;磷脂酰丝氨酸结合蛋白V/碘化丙啶(annexin V/propidium iodide,PI)凋亡试剂盒染色检测芦荟苦素对A549细胞凋亡的影响;赫斯特(Hoechst)染色检测细胞凋亡核固缩现象;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测芦荟苦素对A549细胞中的B细胞淋巴瘤-特大型蛋白(B-cell lymphoma-extra large,Bclxl),B细胞淋巴瘤-特大型/B细胞淋巴瘤-2联合死亡促体(Bcl-xl/Bcl-2 associated death promoter,Bad),裂解半胱天冬酶-3[cleaved-Caspase3,cl-Caspase-3(Asp175)],半胱天冬酶-3(Caspase-3),裂解核糖聚合酶(cleaved-poly ADP-ribose polymerase,clPARP),核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)凋亡相关蛋白表达的影响。体内实验将5周龄裸鼠皮下接种2×106个A549细胞,并随机分为用药组和空白组,连续4周每天分别进行芦荟苦素或生理盐水腹腔注射,每周测量裸鼠肿瘤体积和小鼠体质量,并观察裸鼠的外观表现(精神、毛发、食欲、睡眠等)。结果:芦荟苦素呈浓度依赖性抑制A549细胞增殖及克隆形成的数量和大小(P 0. 05)。经芦荟苦素处理后,A549细胞凋亡的数量以及细胞发生核固缩的现象明显增加(P 0. 01),同时,芦荟苦素还明显下调了凋亡相关蛋白Bcl-xl的表达(P 0. 05),增加Bad蛋白表达(P 0. 01),同时还明显升高了cl-PARP(P 0. 01)和cl-Caspase-3(P 0. 05)表达水平。此外,在体内,芦荟苦素可明显缩小小鼠皮下肿瘤的体积,减轻肿瘤质量,并且小鼠外观表现优于空白组。结论:芦荟苦素可能通过诱导A549细胞凋亡从而达到抑制NSCLC的作用,并且用药安全。     

芒柄花素抗肿瘤作用机制的研究进展

芒柄花素(FN)是一种从红三叶草、黄芪和鸡血藤等药用草本植物中提取的植物异黄酮.研究表明,芒柄花素具有较强的抗肿瘤生物活性,可作为抗肿瘤药物治疗各种恶性肿瘤.迄今为止的研究表明,芒柄花素通过多种分子机制与途径对肿瘤产生抑制增殖、诱导凋亡、抑制迁移和侵袭、诱导细胞周期停滞等作用,可以在乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、膀胱癌和...     

芒柄花素通过miR-1229/ZDHHC9分子轴对胶质瘤细胞增殖、活力及凋亡的影响

目的：探讨芒柄花素对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子作用机制。方法：构建皮下移植瘤小鼠模型,灌胃给予5.72、14.31、22.9、31.49 mg/kg剂量的芒柄花素,观察肿瘤重量、体积变化;免疫组织化学法检测肿瘤组织增殖细胞核抗原（PCNA）表达。用不同浓度（20、50、80、110 μmol/L）的芒柄花素处理TJ905细胞,并将TJ905细胞分为空白对照组、110 μmol/L芒柄花素组、110 μmol/L芒柄花素+miR-1229组、110 μmol/L芒柄花素+miR-1229+ZDHHC9组、miR-NC组、miR-1229 mimic组。用Edu实验、CCK-8实验检测细胞增殖能力,TUNEL实验检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验检测miR-1229、ZDHHC9 mRNA表达水平,在线网站及双荧光素酶报告基因法验证miR-1229与ZDHHC9靶向结合。结果：与空白对照组比较,不同剂量的芒柄花素处理组肿瘤体积、重量及PCNA蛋白表达均显著降低（均P<0.05）。与对照组比较,不同浓度（20、50、80、110 μmol/L）的芒柄花素处理后,细胞增殖率显著降低,凋亡率显著升高（均P<0.05）;与110 μmol/L芒柄花素组比较,110 μmol/L芒柄花素+miR-1229组细胞增殖率、细胞活力均显著降低,凋亡率显著增加（均P<0.05）;与110 μmol/L芒柄花素+miR-1229组比较,110 μmol/L芒柄花素+miR-1229+ZDHHC9组细胞增殖率、细胞活力均显著增加,凋亡率显著下降（均P<0.05）;双荧光素酶报告基因实验验证miR-1229与ZDHHC9靶向结合。结论：芒柄花素可能通过miR-1229/ZDHHC9分子轴抑制胶质瘤细胞增殖,并诱导其凋亡。     

灯盏花素对非小细胞肺癌A549细胞的作用及机制研究

目的:探讨灯盏花素(BVP)对非小细胞肺癌A549细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法:将非小细胞肺癌A549细胞分为对照组、BVP低剂量组(20 μmol/L)、BVP中剂量组(40 μmol/L)、BVP高剂量组(80 μmol/L),使用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞12、24、48 h细胞存活率,使用AnnexinV-FITC /PI双染法检测各组细胞24 h细胞凋亡情况,使用蛋白印记法检测各组细胞细胞周期、凋亡相关蛋白表达。结果:BVP低、中、高剂量组A549细胞12、24、48 h时的细胞存活率依次呈降低趋势(P<0.05),作用相同时间时,BVP低、中、高剂量组A549细胞存活率均明显低于对照组(P<0.05),存在剂量效应(P<0.05); BVP低、中、高剂量组24 h细胞凋亡率和Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达均明显低于对照组(P<0.05),而p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),存在剂量效应。结论:BVP可降低非小细胞肺癌A549细胞存活率和促进细胞凋亡,其机制可能与调节细胞增殖、凋亡相关蛋白表达有关。     

芒柄花黄素对人黑色素瘤细胞株A375凋亡的影响

目的研究芒柄花黄素对人黑色素瘤细胞A375凋亡的影响。方法以人黑色素瘤细胞A375为研究对象,MTT法检测不同浓度的芒柄花黄素对A375细胞活性的影响,并用流式细胞术检测芒柄花黄素导致的细胞凋亡率;用Western blot方法检测cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-XL的蛋白表达水平,从而初步探讨其凋亡的机制。结果芒柄花黄素可降低A375细胞的活力并增加其凋亡率,Western blot结果显示芒柄花素增加了A375中cleaved Caspase-3蛋白的表达,减少了抗凋亡蛋白Bcl-XL的表达,并增加促凋亡蛋白Bax表达。结论芒柄花黄素可抑制A375细胞的活力并诱导细胞凋亡,其机制与减小Bcl-XL/Bax蛋白表达比例,从而启动Caspase-3介导的凋亡途径有关。     

芒柄花素磺酸钠调控线粒体凋亡通路改善脑缺血再灌注损伤的研究

目的 研究芒柄花素磺酸钠（sodium formononetin-3ʹ-sulphonate,Sul-F）调控线粒体凋亡通路改善脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法 建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、模型组、依达拉奉（3 mg/kg）组和Sul-F高、低剂量（80、40 mg/kg）组,分别于再灌注0、12 h尾iv药物干预,假手术组和模型组给予等体积的生理盐水。再灌注24 h后,Zea Longa评分法评估神经功能;2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色测定脑梗死体积;苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察脑缺血半暗带病理变化;原位末端标记（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）染色检测脑缺血半暗带细胞凋亡情况;JC-1探针流式细胞术检测脑缺血半暗带线粒体膜电位水平;透射电镜观察脑组织超微结构;ELISA法检测脑缺血半暗带丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性;qRT-PCR和Western blotting分别检测脑缺血半暗带B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）mRNA和蛋白表达。结果 与模型组比较,Sul-F高剂量组大鼠神经功能评分显著降低（P＜0.01）,脑梗死体积显著减小（P＜0.05）,脑缺血半暗带病理损伤减轻,细胞凋亡显著减少（P＜0.01）,线粒体膜电位的去极化显著逆转（P＜0.05）,线粒体嵴更加清晰、自噬现象更少见,MDA含量显著降低（P＜0.01）,SOD和GSH-Px活力显著升高（P＜0.05、0.01）;Bcl-2表达显著增加（P＜0.01）,Bax和Caspase-3表达显著减低（P＜0.01）。结论 Sul-F通过调控线粒体凋亡相关基因Bcl-2/Bax平衡,改善线粒体氧化应激水平,减轻脑缺血再灌注损伤。     

芒柄花苷的体外抗乳腺癌作用及机制研究

目的研究芒柄花苷对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法采用不同浓度芒柄花苷处理乳腺癌细胞MCF-7,噻唑盐(MTS)染色检测细胞活力,Ed U检测细胞增殖能力,Hoechst染色法检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western-blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)和基质蛋白酶(MMP)-9的表达。结果芒柄花苷剂量和时间依赖性的抑制MCF-7细胞的生长。MCF-7细胞经芒柄花苷干预后,Ed U阳性细胞数减少、侵袭及迁移细胞数减少和Hoechst阳性细胞数增加。芒柄花苷作用MCF-7细胞,可上调Bax的表达和下调Bcl-2、PCNA和MMP-9的表达。结论芒柄花苷可抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、诱导凋亡和减少侵袭,其机制可能分别涉及调节PCNA、Bcl-2/Bax和MMP-9的表达。     

HPLC测定玉郎伞中芒柄花素的含量

目的：建立玉郎伞药材中芒柄花素的含量测定方法。方法：乙腈-0．5％磷酸（35：65）为流动相,ZorbaxXDB—C18色谱柱,流速1ml／min,在250nm处进行芒柄花素的HPLC测定。结果：芒柄花素在HPLC进样0．0204～0．255μg线性关系良好（R：0．9999）,平均加样回收率为98．27％,RSD为0．8％（n=5）。结论：本法准确,简便,重复性好,可作为玉郎伞药材的质量控制方法。     

芒柄花素的植物雌激素作用研究

目的:探讨芒柄花素的雌激素样作用及其可能机制。方法:选取当归、黄芪、红三叶草中含有的黄酮类物质之一——芒柄花素,利用ER阳性T47D细胞,检测其对细胞增殖速率、分裂增殖指数以及ER亚型表达的影响,评价芒柄花素的植物雌激素活性。结果:MTT增殖试验结果显示,1×10-7~1×10-6mol.L-1芒柄花素不能促进人乳腺癌细胞T47D的体外增殖;在ICI182,780抑制试验中,芒柄花素可能能够与ICI182,780协同作用抑制T47D细胞体外增殖;流式细胞术测定细胞周期结果显示,1×10-7~1×10-6mol.L-1芒柄花素对T47D细胞的分裂增殖指数没有影响;芒柄花素有增强T47D细胞ERα表达的作用(P0.05)。结论:芒柄花素能够在体外条件下增强T47D细胞ERα表达,具有植物雌激素样作用,但该物质不能促进T47D细胞的体外增殖。     

地参多糖对非小细胞肺癌A549细胞抗肿瘤作用及机制

目的:观察地参多糖(LLP)的体外抗肿瘤活性及机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测LLP(0,5,10,15,20 g·L-1)对A549细胞不同作用时间(24,48,72 h)的增殖抑制作用;采用细胞划痕,transwell实验检测LLP(10,20 g·L-1)作用24,48 h后A549细胞的迁移侵袭能力;碘化丙啶(PI)单染法检测LLP(10,20 g·L-1)对A549细胞周期的影响;异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/PI凋亡试剂盒检测LLP(10,20 g·L-1)诱导A549细胞的凋亡作用;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测LLP(10,20 g·L-1)对A549细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9),细胞周期依赖性激酶-1(CDK-1),细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LLP对A549细胞中Caspase-3,Caspase...     

志苓胶囊对人小细胞肺癌细胞系NCI-H446增殖抑制和诱导凋亡的影响

目的研究志苓胶囊（ZLJN）对人小细胞肺癌细胞系NCI-H446增殖影响及诱导凋亡作用。方法将志苓胶囊按其不同的中西药成分配制成不同浓度的中药组、西药组和复方组,与NCI-H446共培养后,采用MTT比色法、集落形成试验,分别检测细胞存活率和集落形成率。通过流式细胞仪进行DNA倍体分析、Bcl-2蛋白表达、线粒体跨膜电位及Caspase-3活性检测;DNA片段化分析法、Annexin V-FITC标记法、TdT酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞。结果不同浓度的药物组与NCI-H446共培养后,细胞生长明显受抑制,细胞集落形成率明显降低,呈浓度依赖性;各药物组处理后的细胞线粒体跨膜电位和Bcl-2蛋白表达水平下降,Caspase-3活性增强;琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA梯形带;各药物组均检测到明显的亚二倍体G1峰（凋亡峰）;Annexin V-FITC法检测到早期凋亡细胞;TUNEL法检测到晚期凋亡细胞。复方组诱导细胞凋亡作用强于中药组和西药组。结论志苓胶囊可以有效抑制NCI-H446细胞增殖,诱导其凋亡,细胞线粒体跨膜电位水平降低,Caspase-3活性增强和Bcl-2表达下调可能参与了该过程。     

荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及其机制初探

 目的 探讨荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用并对其作用机制进行研究。方法 MTT比色法检测荷包牡丹碱在不同浓度及不同时间对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用。利用TUNEL法探讨荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡效果;流式细胞术（FMC）测定荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞周期的分布;比色法测定荷包牡丹碱对半胱天冬酶（caspase）-3蛋白活性的影响。结果 荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549增殖抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强;荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞具有明显的凋亡效应;荷包牡丹碱与A549肿瘤细胞作用后,发生S期阻滞（P<0.05);荷包牡丹碱促使caspase-3蛋白活化(P<0.05)。结论 荷包牡丹碱能有效抑制人肺腺癌细胞A549的生长,使细胞周期阻滞在S期,进一步诱导其凋亡,并使caspase-3蛋白活化。caspase-3蛋白的激活可能在荷包牡丹碱诱导A549细胞凋亡过程中起重要作用。     

苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的干预作用

目的：观察苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法：选择苦参碱为干预药物,以不同浓度梯度作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,采用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果：MTT结果显示,各干预组对HFL-1细胞生长均有显著抑制增殖作用,其强度呈时间-剂量依赖性。苦参碱作用于HFL-1细胞48 h后,各干预组细胞总凋亡率均明显高于对照组（P〈0.05）;与对照组比较,苦参碱各浓度组HFL-1细胞G0/G1期百分率显著上升（P〈0.05）。结论：苦参碱可在一定程度上抑制人胚肺成纤维细胞增殖,并诱导其凋亡。     

雷公藤甲素对人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究雷公藤甲素影响人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的作用及机制。方法:采用细胞药理学实验方法,人肝癌细胞株Bel-7402与雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL及0.25μg/mL)共培养,MTT法检测其对Bel-7402细胞增殖的影响,TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响,免疫组织化学(SABC)染色法检测Bax及Bcl-2蛋白表达。结果:作用48h后雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)3个剂量对Bel-7402细胞增殖均有显著抑制作用,P<0.01,抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,最高抑制率可达38.67%,且呈量效关系,3个剂量组间有显著性差异,P<0.01。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)能有效诱导Bel-7402细胞凋亡,作用显著,P<0.01,且呈显著的量效关系。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)用药组Bax、Bcl-2表达与对照组比较,无显著性差异,P>0.05。结论:雷公藤甲素能抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡,其诱导Bel-7402细胞凋亡的作用机制可能不是通过Bax、Bcl-2途径。     

紫龙金对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖及凋亡的影响

目的观察复方中药紫龙金对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖的抑制作用及对其凋亡的诱导作用,探讨紫龙金治疗乳腺癌的作用机制。方法依据培养液紫龙金浓度的差异,实验共设4组:(1)对照组:不加紫龙金干预的1640培养液;(2)紫龙金低浓度组:1.5 mg生药/mL紫龙金培养液;(3)紫龙金中浓度组:3 mg生药/mL紫龙金培养液;(4)紫龙金高浓度组:6 mg生药/mL紫龙金培养液。采用细胞计数法绘制生长曲线及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度紫龙金对MCF-7细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞术、Hoechst 33342核染色法及DNA梯度形成法测定紫龙金诱导凋亡的作用。结果(1)与对照组比较,紫龙金各剂量组的细胞计数在各时间点(24、48、72、96、120、144 h)明显减少,其差异均有统计学意义(P0.05);紫龙金各剂量组间的生长抑制率差异除低、中浓度组间在24、72 h无统计学意义外(P0.05),各剂量组间两两比较在不同时间点(24、48、72、96、120、144 h),其差异均有统计学意义(P0.05)。紫龙金对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)紫龙金使细胞阻滞在G_0/G_1期;(3)中、高浓度紫龙金诱导MCF-7细胞凋亡,并形成DNA ladder。结论紫龙金能抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖,并诱导细胞凋亡,从而起到抗肿瘤的作用。     

三叶青提取物对人肺癌H1299细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨三叶青提取物对人肺癌H1299细胞增殖抑制、凋亡作用及其机制。方法采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测三叶青提取物对H1299细胞增殖的抑制作用;采用倒置显微镜观察三叶青提取物对H1299细胞形态的影响;荧光显微镜观察三叶青提取物作用细胞后经Hoechst 33258染色的凋亡形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白印迹法（Western blot）检测pro-caspase-3、9,cle-caspase-3、9,poly-ADP-ribose polymerase（PARP）蛋白表达变化。结果与对照组比较,浓度为0.5、1、5、10 mg/m L三叶青提取物作用H1299细胞后抑制率升高（P〈0.05,P〈0.01）;同时作用时间越长,抑制率越高（P〈0.01）。倒置显微镜下观察给药后细胞形态明显改变,细胞减少;荧光显微镜下观察荧光染色后细胞核浓染和凋亡小体形成。流式细胞仪检测结果显示细胞凋亡率呈明显的量-效关系。Western blot结果表明：与对照组比较,浓度为5、10 mg/m L三叶青提取物明显抑制H1299细胞中pro-caspase-3、9和PARP蛋白表达,增加cle-caspase-3、9,cle-PARP蛋白的表达,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论三叶青提取物对人肺癌H1299细胞具有明显抑制其增殖,促进细胞凋亡作用,且其机制可能与激活caspase蛋白表达有关。     

人参多糖体外诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的研究人参多糖体外对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的作用。方法应用MTT法、流式细胞仪、Annexin V-PI双标、Hoechest荧光染色、TUNEL法等多种方法,体外研究人参多糖对A549细胞的凋亡作用；采用免疫组化的方法,观察药物作用后bcl-2表达的变化。结果人参多糖对A549细胞生长具有抑制作用,并有促凋亡效应；对细胞周期的影响表现为G_0/G_1期的阻滞,未见bcl-2表达的下调。电镜和Hoechst、TUNEL法都可观察到凋亡形态学的改变。结论人参多糖可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡,这有可能是人参多糖抗肿瘤作用机制之一,其凋亡的发生与bcl-2的表达无明显关系。     

厚朴酚调控人小细胞肺癌H446细胞凋亡的机制研究

目的:探讨厚朴酚对人小细胞肺癌H446细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养人小细胞肺癌H446细胞,经不同浓度和不同时间的厚朴酚作用后,应用MTT法检测厚朴酚对H446细胞增殖的影响;采用流式细胞仪罗丹明123染色法检测线粒体膜电位的改变;蛋白印迹方法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:厚朴酚可呈时间剂量依赖性抑制H446细胞增殖,诱导线粒体膜电位的下降,免疫印迹结果显示Bcl-2的表达降低,Bax、Cyto.c和活化pro-caspase 9的表达增加。结论:厚朴酚可显著抑制H446细胞增殖,介导线粒体途径的细胞凋亡。