生长抑素与大肠癌细胞凋亡及调控基因bcl-2、bax及p53关系的研究

目的　探讨生长抑素 (SS)与大肠癌细胞凋亡指数 (AI)和凋亡调控基因p5 3、bcl 2、bax的关系。方法　采用免疫组织化学SABC法和分子生物学细胞原位凋亡检测技术中的TUNEL法 ,检测 6 2例大肠癌组织中SS、p5 3、bcl 2、bax及细胞凋亡的表达情况。结果　在大肠癌组织SS高表达组、中表达组的AI明显高于SS低表达组 (P <0 .0 1) ;p5 3、bcl 2、bax阳性表达率在SS低表达组、中表达组、高表达组三组间相比较存在着明显差别 (P <0 .0 5 ) ,其中bax在SS高表达组、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组 (P <0 .0 5 ) ;bcl 2与其相反。p5 3在SS高表达组的阳性表达率明显低于低表达组 (P <0 .0 5 ) ;而p5 3在SS中表达组表达的阳性表达率低于低表达组 ,但其统计无明显差别 (P >0 .0 5 )。结论　生长抑素对大肠癌细胞凋亡的调控可能与 p5 3、bcl 2、bax基因的异常表达有关     

胃癌与生长抑素关系的研究

采用放免分析法 (RIA)测定 2 0例胃癌患者血浆、胃液、癌组织及癌旁组织中生长抑素 (SS)含量 ,并与 1 8例健康人对照。结果发现胃癌组血浆SS含量明显高于对照组 (P <0 .0 0 1 ) ,胃癌组血浆SS含量又明显高于其本身胃液中SS含量 (P <0 .0 0 1 ) ;癌旁组织SS含量明显高于癌组织中SS含量 (P <0 .0 0 1 )。提示胃癌患者血浆SS增高有利于抑制肿瘤组织的生长 ;胃癌患者的SS仍以内分泌形式进入血循环为主 ;检测胃粘膜不同部位的SS有助于对胃癌的诊断及确定肿瘤的范围 ,给予外源性SS治疗可能抑制肿瘤细胞的生长。     

细菌Ⅵ型分泌系统的研究进展

细菌的分泌系统(secretion system)像注射器一样将细菌合成的毒性蛋白转运到外界环境或是宿主细胞内,与细菌的致病性密切相关.目前已经发现了6种细菌分泌系统,按其分泌是否利用Sec转位酶可分为两大类:一类是利用Sec转位酶(translocase)和N末端信号序列进行蛋白转运的,包括Ⅱ型(T2SS)和Ⅴ型分泌系统(T5 SS);另一类则不依赖Sec转位酶,如Ⅰ型(T1SS)、Ⅲ型(T3SS)、Ⅳ型(T4SS)和Ⅵ型分泌系统(T6SS)[1].     

滑膜肉瘤中P300与EMT相关蛋白的表达及临床意义

目的通过检测滑膜肉瘤(SS)组织中组蛋白乙酰转移酶P300及上皮间叶转化(EMT)相关分子的表达,探讨P300在SS双相分化及EMT中的作用及临床意义。方法收集40例SS石蜡包埋组织样本,运用RT-PCR方法检测SS的SYT-SSX融合基因亚型;免疫组化检测P300及EMT相关分子的表达。结果 (1) 40例SS中[双相型滑膜肉瘤(BSS)30例,单相型滑膜肉瘤(MFSS)10例],37例存在SYT-SSX融合基因(包括SYT-SSX1、SYT-SSX2),其中BSS为90%(27/30)(SYT-SSX1 66.7%, SYT-SSX2 33.3%); MFSS为100%(10/10)(SYT-SSX1 80%,SYT-SSX2 20%),SS组织学类型与融合基因类型的差异无统计学意义。(2) 95%(38/40)的SS病例表达P300,包括93.3%(28/30)的BSS以及100%(10/10)的MFSS,P300的表达与SS组织学类型的差异无统计学意义。(3) P300与SS患者临床病理参数间的差异无统计学意义;但COX回归分析显示肿瘤转移(P=0.019)和TNM分期(Ⅲ～Ⅳ...     

中药养胃散对大鼠胃肠粘膜中前列腺素生长抑素胃动素 …

目的 :从生物分子学方面探讨养胃散的治疗机理 ,观察用药后胃肠粘膜中前列腺素 (PG)、生长抑素 (SS)、胃动素 (MTL)的变化规律。方法 :SD大白鼠为实验动物 ,消炎痛损伤胃粘膜后 ,再给予中药养胃散 10d ,用放射免疫法测定胃、肠粘膜中的PG、SS、MTL的变化规律。结果 :养胃散能明显增加消炎痛损伤后的胃肠粘膜中的PG( 2 4 9.4 2± 89.35ng·L- 1)、SS( 2 .0 2± 0 .83ng·L- 1)、MTL( 98.82± 2 9.31ng·L- 1)的含量 ,与消炎痛组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :中药养胃散能增加胃肠粘膜内PG、SS、MTL的分泌 ,是其增强胃粘膜屏障功能的机理之一     

生长抑素与儿童功能性消化不良疗效的关系(附66例分析)

目的探讨血浆中高生长抑素(SS)水平与儿童功能性消化不良(FD)疗效的关系,以期预测FD儿童药物治疗的效果。方法6~14岁的FD患者中,检测出血浆SS升高FD儿童33例为观察组,随机对应配对血浆SS正常FD的儿童33例作对照组,分析两组儿童治疗前、后血浆SS水平、症状评分及相互关系。结果(1)两组儿童血浆中SS水平治疗前后比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)治疗前症状评分比较,观察组稍高于对照组,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后症状评分比较,观察组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)促胃动力药及根除幽门螺杆菌(Hp)治疗,不能改变FD儿童血浆SS水平。(2)使用促胃动力药及根除Hp治疗FD儿童,血浆SS升高的FD儿童效果较血浆SS正常的FD儿童差。     

白藜芦醇通过保护线粒体和减少氧化应激改善失血性休克大鼠肠损伤

目的：探讨白藜芦醇是否能够减轻失血性休克大鼠肠损伤及其作用机制。方法：24只无特定病原体级 Sprague-Dawley 大鼠随机分为正常对照组(n=8)、白藜芦醇治疗组(SR组,n=8)和溶剂组(SS组,n=8),记录平均动脉 压。失血性休克2 h后分别给予15 mg/kg的白藜芦醇或0.3 mL等体积的溶剂(70%乙醇)并回输自体血。治疗2 h后采集小 肠标本行HE染色后,再行肠黏膜的病理学观察和评分,免疫组织化学法检测超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2,SOD2)表达,Western印迹测定SOD2和细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白含量。取部分肠组织匀浆检查ATP、 谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GXH-px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、总SOD活性。结果：自体血回输 2 h后,SR组平均动脉血压高于SS组,两组间差异有统计学意义(P<0.01);SR组较SS组病理损伤减轻,且病理学评分 明显下降(P<0.05);SR组小肠组织匀浆GXH-px,CAT和SOD活性以及ATP水平均高于SS组(均P<0.01);SR组SOD2蛋白 水平高于SS组,胞质Cyt C水平明显低于SS组,组间比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论：白藜芦醇减轻了失血性 休克大鼠的肠损伤,其机制可能与减少氧化应激和保护线粒体有关。     

Toll样受体4在干燥综合征患者外周血表达的研究

目的探讨干燥综合征(SS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体4(TRL4)的表达及其与病情活动的关系。方法治疗组选取25例SS患者,正常对照组10例健康志愿者,用流式细胞仪检测2组外周血单个核细胞中TRL4的表达。根据血沉、C反应蛋白将SS分为病情活动组和病情稳定组,对TRL4水平和免疫球蛋白、补体等免疫指标及血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)病情活动指标进行相关性分析。结果 TRL4在SS疾病组PBMC上的表达明显高于正常对照组;TRL4在SS病情活动组与稳定组外PBMC上的表达差异无统计学意义;SS疾病组PBMC上TRL4水平与免疫球蛋白IgG、IgA、补体C3、C4免疫指标和ESR、CRP病情活动指标无相关性。结论 SS患者PBMC上TRL4的高表达提示其参与了干燥综合征的发病机制,但与SS疾病活动度无相关性。     

2型糖尿病分型与胰岛素抵抗以及生长抑素的关系

目的:探讨2型糖尿病中医辨证分型与胰岛素抵抗(IR)及生长抑制(SS)水平的关系。方法:选取来我院就诊的2型糖尿病患者120例,同时选择同期的正常人26例作为正常对照组,测定所有研究对象的空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、生长抑素(SS)水平。结果:与对照组相比,2型糖尿病患者均存在IR且机体内SS水平较低;IR与SS呈负相关关系(r=-0.2034,P<0.05)。结论:2型糖尿病各证型均存在胰岛素抵抗和生长抑素水平降低,维持生长抑素较高水平有助于改善机体的胰岛素抵抗。     

迁延性及慢性腹泻患儿血中胃泌素、胃动素和生长抑素水平

应用放免法测定 2 8例迁延性及慢性腹泻患儿治疗前、恢复期和 2 2例正常儿童的晨空腹及餐后 1h血中的胃泌素 (GAS)、胃动素 (MOT)和生长抑素 (SS)的水平 ,并进行相关分析。结果显示 :患儿治疗前、恢复期及对照组餐后血中的 GAS、MOT和 SS水平明显高于空腹时 (P<0 .0 1) ;治疗前空腹和餐后的血清 GAS、血浆 MOT水平及空腹的血浆 SS水平高于恢复期和对照组 (P<0 .0 5 ,0 .0 1) ,但餐后 SS水平无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;患儿治疗前 GAS/SS和 MOT/ SS的比值增大 ,与恢复期和正常儿童比较差异极显著 (P<0 .0 5 ,0 .0 1)。恢复期和对照组血中 GAS与 SS和 MOT与 SS呈正相关 ,但治疗前则无相关。结果提示 ,腹泻迁延不愈可能与 GAS、 MOT和 SS分泌异常相关联     

融合蛋白ScFv（3G11）-mms13在大肠杆菌中的表达及鉴定

目的：构建抗Ⅳ型胶原酶单链抗体基因ScFv与磁小体膜蛋白基因mms13融合基因的原核表达载体pET30a（＋）-ScFv-mms13,在大肠杆菌中诱导表达并对融合蛋白进行初步鉴定。方法 PCR扩增融合基因ScFv-mms13,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后克隆入原核表达载pET30a（＋）质粒,构建重组表达质粒。将重组质粒导入大肠杆菌DH5ɑ中,利用PCR、酶切筛选鉴定重组菌株。用异丙基疏代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达融合蛋白,通过改变IPTG浓度、诱导时间优化表达条件。表达产物经SDS-PAGE电泳和Western blot法进行鉴定。结果重组质粒经PCR、酶切、测序证实重组质粒pET30a（＋）-ScFv-mms13构建成功。 SDS-PAGE电泳结果分析表明诱导菌株在43kDa左右处有明显异源蛋白表达,且确定了在IPTG终浓度为0．2mmol/L、诱导时间为6h时为表达稳定。对表达蛋白进行定位分析确定表达蛋白主要以包涵体形式存在,部分存在于可溶细胞质中。 Western blot结果实证该表达产物可与His-tag抗体发生特异性结合,提示为目的融合蛋白。结论成功构建pET30a（＋）-ScFv-mms13表达载体并表达获得目的融合蛋白。     

梅毒螺旋体重复蛋白K的克隆表达

目的体外克隆并表达梅毒螺旋体重复蛋白K，为制备预防性疫苗奠定基础。方法利用PCR反应及基因重组技术，扩增重复蛋白K编码基因，构建重组质粒pET28b（＋）／TprK，IPTG诱导表达。结果PCR法扩增出了1350bp的目的片段，原核表达质粒pET28b（＋）／TprK酶切鉴定正确，测序结果与Gengbank上公布的该基因序列完全一致，并可在大肠杆菌中高效表达。结论成功构建人pET28b（＋）／TprK原核表达载体，并能高效表达TprK蛋白，为梅毒的预防性疫苗的制备以及进一步研究其血清学诊断试剂奠定了基础。     

TAT-SOD融合蛋白表达载体的构建

目的:构建pET28a-TAT-SOD原核表达载体,纯化并测定其活性。方法:PCR法扩增TAT-SOD片段,插入载体pET28a后得到pET28a-TAT-SOD重组表达子,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导TAT-SOD融合蛋白表达。表达产物用SDS-PAGE电泳鉴定,组氨酸亲和层析柱纯化融合蛋白,利用SOD活性测定试剂盒测定其活性。结果:构建了高表达重组子pET28a-TAT-SOD,获得了相对分子质量约为25000的具有活性的融合蛋白TAT-SOD,纯度达90%。纯化的蛋白浓度为700mg/L,活性为197.54U/L。结论:成功构建了具有活性TAT-SOD融合蛋白的表达载体。     

TAT-EGFP融合蛋白表达载体的构建及表达

目的:构建TAT-EGFP原核表达载体,在E.coli BL21中高效表达并纯化.方法:人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET28a后得到pET28a-TAT重组质粒,再连接绿色荧光蛋白(EGFP)基因,组成pET28a-TAT-EGFP重组表达子.转化大肠杆菌,IPTG诱导TAT-EGFP融合蛋白表达.表达产物用十二烷基硫钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,组氨酸亲和层析柱纯化融合蛋白.结果及结论:成功地构建了TAT-EGFP融合蛋白的原核表达载体,在诱导后获得了高效表达并纯化,为进一步研究TAT的蛋白转导作用奠定了基础.     

大鼠锌指蛋白ZFP580的原核表达与分离纯化

【目的】构建ZFP580基因的原核表达质粒,转化大肠杆菌,诱导表达并分离纯化大鼠锌指蛋白ZFP580。【方法】根据ZFP580 cDNA序列的开放阅读框设计引物,利用PCR技术扩增ZFP580的开放阅读框cDNA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别双酶切、回收纯化后做定向连接,Nco I、Xho I双酶切电泳筛选、鉴定并测序。将构建的重组质粒pET30a-ZFP580转化大肠杆菌BL21(DE3),由异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化目的蛋白。【结果】成功扩增ZFP580基因并构建了表达质粒pET30a-ZFP580,测序结果表明与GeneBank公布的序列一致。含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19 kDa。【结论】成功表达并纯化了大鼠ZFP580蛋白,为进一步研究锌指蛋白ZFP580的功能奠定了基础。     

人FcγRIIb胞外区原核表达载体的构建及表达

目的构建人FcγRIIb胞外区蛋白原核表达载体pET-sFcγRIIb,诱导表达并纯化。方法 PCR扩增获得人sFcγRIIb基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a（＋）,构建原核表达重组质粒pET-sFcγRIIb,经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析后,转化大肠杆菌BL21,采用不同温度和时间的IPTG诱导蛋白表达,确定最佳诱导条件,SDS—PAGE分析正确后,用镍琼脂糖磁珠纯化。结果扩增出了人sFcγRIIb基因,成功构建原核表达重组质粒pET-sFcγRIIb,30℃10h IPTG诱导表达并纯化出41.5kDa的融合蛋白。结论获得重组人FcγRIIb胞外区蛋白,为以后人FcγRIIb胞外区蛋白功能的深入研究奠定基础。     

EGFL7原核表达载体的构建及鉴定

【目的】构建类表皮生长因子域7（EGFL7）原核表达载体,并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。【方法】以人肝癌细胞系 HepG2总RNA为模板,PCR扩增 EGFL7基因,克隆至原核表达载体pET‐21a（＋）中,转化大肠杆菌 BL21（DE3）,IPTG 诱导表达。 His‐tag 磁珠纯化重组蛋白 EGFL7,SDS‐PAGE 鉴定。【结果】克隆目的基因序列正确,未发生碱基突变;重组表达质粒pET21a（＋）‐TRX‐EGFL7经双酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子量为80kD ,与预期相符。【结论】成功在大肠杆菌BL21（DE3）中表达并纯化了EGFL7重组蛋白,为后续研究奠定了基础。     

GCF2基因片段原核表达载体的构建与鉴定

目的 构建肝癌相关抗原GCF2基因片断(323～1 234 bp)原核表达重组质粒.方法 提取人肝癌组织总RNA,通过反转录酶合成cDNA;根据GenBank公布的GCF2基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出人GCF2基因片断(编号2-5a),将此片段连接在克隆载体pGEM-T上进行测序,通过酶切、连接将...     

淋球菌外膜蛋白PI基因重组子的构建和表达

目的 扩增四株淋球菌外膜蛋白PI基因，构建pET30b-PI-NG重组子，在大肠杆菌中诱导表达外膜蛋白PI．方法 采集临床淋球菌四株，提取细菌基因组DNA，PCR扩增外膜蛋白PI基因，与克隆载体pBS-T连接，构建pBS-T-PI-NG重组子，测序，目的基因插入表达质粒载体pET30h中，构建pET30h-PING重组子，转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导蛋白质表达，SDS-PAGE初步分析．结果 成功构建了四株淋球菌的pET30b-PI大肠杆菌表达重组子，经IPTG诱导表达后，其中三株获得表达的目的蛋白PI。结论 本研究为PI蛋白免疫学特性的研究、抗体制备、以及预防淋病疫苗的研制莫定了基础。     

颗粒溶素的表达纯化及生物学活性分析

目的:采用原核表达系统对颗粒溶素(granulysin,GNLY)进行体外表达,纯化及活性鉴定.方法:以体外培养的人外周血单个核细胞(PBMC)为模板,RT-PCR扩增编码GNLY的cDNA片段,插入pMD-18-T 载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET28a( ) 中,构建重组表达质粒pET28a( )-GNLY,转化大肠杆菌BL21(DE3) plysS,IPTG诱导表达融合蛋白,包涵体经变复性后用Ni亲和层析纯化,CFU法测定蛋白活性.结果:成功地将GNLY cDNA片段插入载体pET28a( )中,构建了表达质粒pET28a( )-GNLY.经诱导在原核表达系统中以包涵体形式高效表达了相对分子质量为9 000的融合蛋白,变复性纯化后的GNLY蛋白经CFU法检测,发现其具有细胞毒活性且细胞毒作用具有剂量依赖性.结论:本实验利用原核表达系统成功地表达了具有生物学活性的GNLY,为研究其功能、作用机制及临床应用奠定了基础.