恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的：在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶（GDH）与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白，测定重组蛋白的免疫活性。方法：采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫（海南株）GDH基因，双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达，重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清，并用琼脂双向扩散法检测效价，ELISA、Westernblotting检测重组抗原的免疫活性。结果：获到了重组表达的抗原蛋白，表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应，并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答，免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1：16。结论：恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。     

恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白,测定重组蛋白的免疫活性。方法采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫(海南株)GDH基因,双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清,并用琼脂双向扩散法检测效价,ELISA、Western blotting检测重组抗原的免疫活性。结果获到了重组表达的抗原蛋白,表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1∶16。结论恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。     

6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性与2型糖尿病患者血糖控制的相关性研究

目的:探究6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)活性与2型糖尿病(T_2DM)患者血糖控制之间的相关性。方法:选取确诊的135例T_2DM患者为研究对象,按照其是否出现G6PD缺乏将其分为单纯T_2DM组(123例)与合并G6PD缺乏组(12例),而后选取同期于我院进行体格检查的100例个体为健康对照组,经测定发现其中有9例存在单纯G6PD缺乏,而后分别对T_2DM组、合并G6PD缺乏组、对照组个体进行糖化血红蛋白(HBA1C)、果糖胺(DMF)及G6PD活性检测,而后进行对比。结果:①健康对照组中G6PD阳性率与T_2DM组相比,差异无统计学意义(P>0.05);②健康对照组中G6PD阴性患者其血浆HBA1C水平明显高于G6PD阳性患者,差异有统计学意义(P<0.05);③合并G6PD缺乏组患者其HBA1C水平明显低于单纯T_2DM组,差异有统计学意义(P<0.05);④设置DMF水平一致,对比发现合并G6PD缺乏组患者其HBA1C水平明显低于单纯T_2DM组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:G6PD活性的降低能够引起T_2DM患者机体HBA1C水平下降,对血糖监测造成影响,因而建议联合G6PD及HBA1C检测,提高对T_2DM患者血糖水平的诊疗准确性。     

2-型猪链球菌保护性抗原RfeA的B细胞表位预测

以2-型猪链球菌(SS2)保护性抗原RfeA推定的氨基酸序列为基础,采用Kyte-Doolittle法分析蛋白的亲水性,Emini法预测蛋白的表面可能性,以及Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原指数;辅以Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法对蛋白二级结构中柔性区域...     

谷氨酸受体-2在闭合性颅脑损伤中的表达

【目的】研究闭合性脑损伤后GluR2在脑组织中的表达部位、时序性特点【方法】采用清洁级SD大鼠随机分为对照组及损伤后1 h组、2 h组、4 h组、8 h组、12 h组、24 h组、2 d组、3 d组、5 d组、7 d组,复制marmarou＇s落体打击脑损伤模型。免疫组化SP法检测SD大鼠脑组织GluR2的表达情况。采用Mias 2000图像分析系统采集并计算阳性细胞数和阳性细胞面积。以P〈0.05为显著性差异的水准。【结果】对照组顶叶皮层、海马等部位均有免疫反应阳性细胞表达。损伤后阳性细胞表达减少,12~24 h达最低值,顶叶皮层、海马CA4、CA3、脑底皮层阳性细胞面积、阳性细胞计数与对照组比较差别有极显著意义（P〈0.01）【结论】脑损伤后,GluR2表达逐渐减少,提示其参与颅脑损伤病理生理过程。     

S.suis 2溶血素SLY的分子克隆及溶血活性和免疫学特性研究

目的克隆并表达猪链球菌2型(S.suis 2)溶血素重组蛋白SLY,对其溶血活性及免疫学特性进行研究,为探讨SLY在S.suis 2感染中的致病机理及筛选有效的疫苗预防和控制猪链球菌病奠定基础。方法对S.suis2 05ZYH33全基因序列进行生物信息学分析,构建pET32a-sly原核表达质粒并诱导表达出S.suis 2重组溶血素SLY蛋白;采用高浓度尿素裂解包涵体和His-Tag亲和层析对重组SLY蛋白进行纯化并复性;免疫保护实验检验SLY的免疫保护作用。结果 SDS-PAGE显示70kD的SLY蛋白条带;重组SLY蛋白具有溶血活性并受多种因素的影响;SLY对感染S.suis 2的Balb/c小鼠有一定的免疫保护作用。结论优化原核表达体系可以有效提高SLY蛋白的表达量,经提纯并复性的重组SLY具有较高的溶血价,为进一步纯化及分析SLY蛋白的特性提供了必要的前提。     

血清谷氨酸脱氢酶检测的临床应用

目的 :观察血清谷氨酸脱氢酶在肝损害或导致肝损害相关疾病时的变化情况。方法 :以岛津CL 72 0 0全自动生化分析仪 ,采用双试剂双波长法 ,分别对 2 0 9例健康者和 187例肝、胃、胰、脑等疾病患者血清中谷氨酸脱氢酶活性进行了检测 ,作相关性检验 ,并统计有关指标。结果 :显示健康人血清中谷氨酸脱氢酶含量低 ,其参考范围为 0～ 11U/L ;肝脏疾病患者血清中谷氨酸脱氢酶的活性明显高于健康组。结论 :检测血清中谷氨酸脱氢酶的活性对肝病早期诊断、掌握病情、判断预后有着独特的临床意义 ,是诊断肝细胞病变 ,特别是坏死性肝病的重要指征。     

间日疟原虫乳酸脱氢酶的表达、纯化及免疫活性的鉴定

目的 在大肠杆菌中表达间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,对重组蛋白进行纯化并测定其免疫活性.方法 将构建的LDH/pGEX-4T-1重组菌BL21接种于LB培养基中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白的表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清,ELISA检测血清效价,Western-blotting鉴定其免疫活性.结果 重组质粒在大肠杆菌中表达PvLDH与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,表达产物主要以包涵体形式存在,经复性、纯化后免疫小鼠,能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,ELISA法测效价为1:51200,Western-blotting结果显示该血清能特异性与间日疟和恶性疟患者全血发生反应,而不能与正常人起交叉反应.结论 PvLDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性和免疫原性.     

猪链球菌2型脑膜炎抗菌药物临床应用探讨

目的探讨治疗猪链球菌脑膜炎有效抗菌药物及合理治疗方法的选择。方法收集21例患者流行病学、临床表现、细菌培养、毒力基因鉴定结果及药敏试验,抗菌药物疗效观察等资料进行分析。结果①从5例患者的脑脊液中培养出细菌经鉴定均含猪链球菌2型的毒力基因:猪链球菌2型溶菌酶释放相关蛋白基因,溶血素基因、荚膜多糖基因;②培养阳性的标本均来自于未接受抗菌药物治疗的患者;③药敏结果显示猪链球菌2型对大多数抗菌药物敏感,但对四环素,链霉素耐药;④21例患者均接受头孢曲松、青霉素联合治疗,全部治愈出院,平均治疗时间为17d。结论①此次脑膜炎疫情的病原体是猪链球菌2型;②病原体对大多数抗菌药物敏感,但已有耐药现象;③青霉素和头孢菌素可作为首选抗菌药物;④采用头孢菌素和青霉素联合方案疗效显著,无复发患者;⑤抗菌药物早期应用可以控制疫情的蔓延。     

ALS患者T细胞中代谢型谷氨酸受体2mRNA的表达减少

代谢型谷氨酸受体可改变A LS患者神经元兴奋毒性损伤的易感性,并有报道称该受体在患者中枢神经系统中的表达异常。采用逆转录聚合酶链反应,探讨20例散发ALS患者T淋巴细胞中特异代谢型谷氨酸受体亚型的m RN A表达,并将之与年龄相匹配的健康对照者和其他神经系统疾病患者相比较。     

猪链球菌2型感染的临床特征和治疗效果分析

目的 分析猪链球菌2型感染部分病例的临床特征及治疗效果.方法 回顾分析68例2005年夏季四川省猪链球菌2型感染的临床及病原学确诊的患者资料,从流行病学、临床特征及治疗效果等方面进行总结和分析.结果 猪链球菌2型感染流行于6～8月,传染源主要为猪,易感人群主要为农民,常见的暴露方式为宰杀、洗切病/死猪肉.临床表现为急起畏寒、发热、头昏、头痛、全身不适及疼痛,重者出现休克及昏迷.临床类型主要有单纯败血症型、休克型、脑膜炎型及混合型4型.所分离的猪链球菌2型均对四环素耐药,对其它多种抗菌药物均敏感.本组68例患者治疗后总有效率为76.5%(52/68),病死率为23.5%(16/68).有休克的患者治疗后有效率为42.3%(11/26),病死率为57.7%(15/26).化脓性脑膜炎患者治疗的有效率为97.5%(39/40).结论 猪链球菌2型感染的主要临床表现为化脓性脑膜炎和休克.治疗效果以脑膜炎型为好,休克型及混合型差,病死率高.     

猪链球菌2型溶血素介导细菌致病机制研究进展

猪链球菌（Streptococcus suis）是一种重要的人畜共患病原菌,其中猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2, SS2）致病性最强、发病率最高,SS2患病猪只传染给人,可导致败血症、心内膜炎、关节炎及脑膜炎等症状。关于其毒力因子的挖掘与功能探索一直是猪链球菌致病机理研究的重要方向。溶血素（Sly）作为猪链球菌2型分泌性毒力因子,一直被视为是SS2的毒力标志因子之一,在细菌感染与致病过程中扮演重要作用。本文阐述了猪链球菌2型溶血素因子的溶血特性与分子结构,并重点论述 Sly因子在介导 SS2 的黏附与侵袭、细菌繁殖与免疫逃避、突破血脑屏障与诱导脑膜炎等感染生物学过程中的作用。以期为推进猪链球菌基础研究及其他链球菌溶血素因子的机制探索提供参考。     

嗜麦芽寡养单胞菌蛋白酶纤溶活性及其机制的研究

目的自双齿围沙蚕消化道内分离得到1株嗜麦芽寡养单胞菌,前期研究发现该菌株可大量胞外分泌一种具有纤溶活性的蛋白酶。文中旨在观察嗜麦芽寡养单胞菌蛋白酶(S.maltophiliaprotease,SMP)在体内外的纤维蛋白溶解活性,并探讨其纤溶机制。方法试管凝块法和纤维蛋白平板法体外观察SMP对纤维蛋白和纤维蛋白原的溶解作用,计算其比活性;建立SD大鼠动-静脉旁路血栓模型,分别给予不同剂量的SMP、等渗盐水和蚓激酶,观察各组血栓重量及表面情况,检测血浆优球蛋白溶解时间(euglobulin lysis time,ELT)、纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)、纤维蛋白降解产物(fibrin degradation prod-uct,FDP)和D-二聚体等指标,并比较血浆中组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,t-PA)和血浆纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor type-1,PAI-1)的变化。结果 SMP同时具有溶解纤维蛋白原和纤维蛋白的活性,且活性呈一定的量效关系;SMP不依赖纤溶酶原的激活而直接溶解纤维蛋白,并...     

猪链球菌2型等细菌不同感染途径研究

目的用猪链球菌2型、肠出血性大肠埃希菌O26（Entemhemorrhagic Escherchia coil，EHEC O26）经不同途径感染小鼠，研究其感染传播途径，并作细菌毒力监测。方法6周龄小鼠分别经腹腔注射丝裂霉素0．2mg／只。降低其免疫力，然后分别经皮肤创面，灌胃和腹腔注射猪链球菌2型和EHEC O26，另外用粪肠球菌ATCC29212。大肠埃希菌ATCC25922作阴性对照，进行临床观察和微生物学检查。结果猪链球菌2型经皮肤创面感染的小鼠病死率60％，病死日2—5d；经口灌胃感染的小鼠病死率60％，病死日7—10d。从病死鼠的心脏穿刺液中重新分离到猪链球菌2型。经腹腔注射猪链球菌2型及粪肠球菌ATCC29212的小鼠未见死亡，而腹腔注射EHEC026和大肠埃希菌ATCC25922后，小鼠在10h内死亡。结论本实验采用人工划破小鼠尾巴并在创面接种猪链球菌2型．证实该菌经皮肤创面感染这一重要途径，同时发现腹腔注射大肠埃希菌等革兰阴性杆菌会引起小鼠非特异性死亡。这对研究猪链球菌2型的致病机制，疫苗的研制评价和抗菌药物的效果观察有重要意义。     

广东省人感染猪链球菌2型10株病原学特征

目的分析广东省2005-2006年分离的10株2型猪链球菌菌株的病原学特征，为诊断、治疗和制定今后防控措施提供科学依据。方法对10株菌进行常规方法鉴定及PCR技术检测。结果经血清学分型和生化鉴定，10菌株均为猪链球菌2型，其中9株菌三种基因（菌种基因（16SrRNA）、荚膜多糖编码基因（CPS2J）和溶菌酶释放相关蛋白基因（mrp））均阳性，1株菌mrp基因检测阴性。结论广东省人感染猪链球菌病由2型猪链球菌引起。     

布鲁菌S2感染后死亡的巨噬细胞启动T细胞应答的作用

目的研究布鲁菌S2感染死亡的巨噬细胞在启动细胞免疫应答中的作用。方法以布鲁菌S2株体外感染小鼠腹腔巨噬细胞,并以未感染的正常细胞作为对照,感染后1h用不含血清的RPMI1540培养基饥饿培养5d,待细胞完全死亡后与骨髓源性树突状细胞共培养24h后,ELISA法检测细胞上清中IL-12、TNF—α水平;同时将树突状细胞与淋巴结T细胞共培养,在共培养的不同时间点ELISA法检测培养上清中IFN-γ含量。结果正常死亡的巨噬细胞和S2株感染死亡的巨噬细胞与树突状细胞共培养后均可刺激树突状细胞分泌TNF—α,但S2株感染死亡组的TNF—α分泌水平明显高于正常死亡组（P〈0．05）,但不刺激IL-12分泌,且与T细胞共培养各时间点IFN-γ的分泌水平均高于对照组（P〈0．05）。结论感染布鲁菌S2株死亡的巨噬细胞可激活树突状细胞,并可使其提呈抗原、诱导T细胞产生IFN-γ。     

海宁市人群猪链球菌感染状况监测分析

目的了解海宁市不同人群中猪链球菌的感染状况，为采取干预措施提供依据。方法抽查了288名普通人群和51名生猪屠宰工人采血进行猪链球菌抗体（SS2IgG）检测。结果普通人群SS2IgG阳性率为6、94％，以40～49岁组最高（14．58％），〈20岁组最低（0％）。阳性率与性别无关。屠宰工的SS2IgG阳性率为21．57％，显著高于普通人群（P〈0．05）。结论海宁市人群的猪链球菌感染以亚临床或隐性感染为主，须做好屠宰工的职业防护．加强生猪疫情的控制、集中屠宰和上市检疫。     

白细胞介素－2的基因克隆及其在啤酒酵母细胞中的表达

用ＰＣＲ方法从白细胞介素素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ全序列中扩增成熟肽基因片段，与酵母中间载体ｐＳＫ４３ＳＢ融合后，重组于酵母游离型表达载体ＹＥｐＨｃ８，获得了高效表达，并对其糖基化进行了研究。