人膀胱癌耐药细胞系T24/ADM的建立及其耐药机制

目的建立人膀胱癌耐药细胞系,对其耐药机制进行初步探讨。方法采用阿霉素浓度梯度递增诱导法,建立多药耐药细胞系T24/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,应用RT-PCR和Western blot比较两种细胞P-GP、MRP和LRP的表达差异来探讨可能的耐药机制。结果建立了T24/ADM耐药细胞系,对ADM、VCR和VP16有交叉耐药,P-GP、MRP和LRP在耐药细胞系中表达升高。结论 T24/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因表达升高是T24/ADM获得耐药的主要机制之一。     

膀胱癌细胞凋亡与多药耐药的实验研究

目的 研究膀胱癌细胞凋亡与膀胱癌多药耐药的关系。方法 用电镜观察几种临床常用的化疗药物阿霉素、顺铂和丝裂霉素在体外诱导膀胱癌细胞的凋亡的形态学特征，免疫组化测定pgp糖蛋白的表达，应用MTT法检测阿霉素、顺铂和丝裂霉素的杀伤率。结果 16例患者中9例有效地诱导出细胞凋亡，7例未诱导出凋亡。电镜观察显示，患者的膀胱癌细胞对化疗药物阿霉素、顺铂和丝裂霉素敏感时，其细胞呈特异性的凋亡形态学特征改变：染色质聚集于核膜呈块状，扩张的线粒体，嵴移位膨胀，凋亡细胞被周围细胞吸收。体外检测显示耐药患者肿瘤细胞抑制率低于30％。结论 研究结果提示多药耐药的产生与膀胱癌细胞凋亡受到抑制有关。     

人结肠癌LS174T/5-Fu多药耐药细胞系的建立

目的建立人结肠癌多药耐药细胞系,并研究其生物学特性。方法以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为诱导药物,LS174T细胞株为研究对象,利用浓度递增诱导法,建立LS174T/5-Fu多药耐药细胞系。MTT法测定药物敏感性,光镜、细胞计数法、流式细胞仪及RT-PCR等方法观察其生物学特征及多药耐药相关基因(MRP)mRNA表达。结果历时6个月成功建立人结肠癌多药耐药细胞系LS174T/5-Fu,对5-Fu耐药指数为40.24,且与羟基喜树碱、顺铂、依托泊苷和脱氧氟尿苷等多种化疗药物有不同程度的交叉耐药性;细胞形态发生改变;倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期发现其G1和S期细胞增加,G2期细胞减少;MRP mRNA表达增高。结论LS174T/5-Fu细胞是一种可靠的人结肠癌多药耐药细胞系,该细胞系的建立为深入研究5-Fu诱导人结肠癌多药耐药的发生机制奠定了基础。     

人结肠癌LS174T/5-Fu多药耐药细胞系的建立

目的 建立人结肠癌多药耐药细胞系,并研究其生物学特性.方法 以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为诱导药物,LS174T细胞株为研究对象,利用浓度递增诱导法,建立LS174T/5-Fu多药耐药细胞系.MTT法测定药物敏感性,光镜、细胞计数法、流式细胞仪及RT-PCR等方法观察其生物学特征及多药耐药相关基因(MRP)mRNA表达.结果 历时6个月成功建立人结肠癌多药耐药细胞系LS174T/5-Fu,对5-Fu耐药指数为40.24,且与羟基喜树碱、顺铂、依托泊苷和脱氧氟尿苷等多种化疗药物有不同程度的交叉耐药性;细胞形态发生改变;倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期发现其G1和S期细胞增加,G2期细胞减少;MRP mRNA表达增高.结论 LS174T/5-Fu细胞是一种可靠的人结肠癌多药耐药细胞系,该细胞系的建立为深入研究5-Fu诱导人结肠癌多药耐药的发生机制奠定了基础.     

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及其生物学性状的测定

目的：体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系。方法：以阿霉素(adriamycin，ADM)为诱导药。人肺腺癌细胞系(SPC-A-1)为诱导对象。逐步增加ADM药物浓度进行诱导，以一定浓度ADM培养46周后．光镜观察细胞形态，采用MTT法检测细胞耐药指数(RF)，并同时对长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5-氟脲嘧啶、紫杉醇、ADM6种药物进行交叉耐药检测。结果：SPC-A-1／ADM形态不规则。SPC-A-1／ADM对ADM的RF为11．3．同时对长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5-氟脲嘧啶、紫杉醇5种抗癌药物有不同程度的耐药性。结论：建立了相对稳定多药耐药细胞系SPC-A-1／ADM，可用于多药耐药性机制及逆转的研究。     

胃癌细胞MTT法药敏试验的研究

目的：筛选对胃癌有效的药物,为临床合理用药提供依据。方法用四氮唑蓝快速比色法（MTT法）对人胃癌BGC-823细胞和胃癌实体瘤细胞进行7种化疗药物敏感性试验．结果7种化疗药物对BGC－823细胞和实体瘤细胞的生长均有一定的抑制作用．其敏感性顺序为DDP＞MMC＞ADM＞VP－16＞5－Fu＞Ara－C＞VCR,但不同个体的药物敏感性有所差异。结论在胃癌药敏试验中．MTT法能筛选有效的化疗药物,合理设计化疗方案,为临床化疗个体化用药提供客观依据。     

鼻咽癌顺铂耐药细胞系的建立及其耐药性变化

目的通过顺铂（cDDP）浓度递增法建立鼻咽癌耐药的细胞株CNE2／cDDP,并研究其耐药性变化。方法采用cDDP浓度递增法建立鼻咽癌顺铂耐药细胞系CNE2／cDDP,倒置显微镜进行形态学观察,MTT检测CNE2／cDDP细胞系对不同化疗药物的耐药性。结果MTT研究发现在不同药物（顺铂、长春新碱、卡铂、紫杉醇、5-FU）作用下,CNE2／cDDP较CNE2的IC50值及耐药指数均有明显的增加,CNE2／cDDP细胞对顺铂的耐药性最强,增加到200．6倍,对5-Fu的耐药性最差,增加到2．8倍;耐药细胞株CNE2／cDDP较非耐药细胞株CNE2生长速度减慢,其细胞倍增时间由18h增加到24h;CNE2／cDDP细胞体积较CNE2为小,常呈克隆聚集现象。结论CNE2／cDDP具有多药耐药性,是一个理想的用于鼻咽癌的多药耐药研究的细胞系。     

IL-33增强胃癌细胞顺铂抵抗的机制研究

目的研究IL-33对胃癌细胞自噬调节的作用,分析其对胃癌细胞的作用靶标,阐明胃癌细胞顺铂耐药的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同剂量IL-33处理下,胃癌细胞MKN45和正常胃上皮细胞GES-1的增殖率、胃癌细胞对4种化疗药物的敏感性及胃癌细胞对顺铂及其抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）的敏感性。Westernblot法检测IL-33作用下,胃癌细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3α/β（LC3A/B）、Beclin1和生长刺激表达基因2蛋白（ST2）相对表达量的变化。结果高剂量IL-33促进胃癌细胞增殖。≥128ng/LIL-33处理后,胃癌细胞对顺铂产生显著抵抗作用,顺铂共培养的胃癌细胞增殖率显著上升（P＜0.05）。IL-33作用下胃癌细胞自噬相关蛋白LC3A/B和Beclin1相对表达量提高（P＜0.05）,3-MA逆转了IL-33对胃癌细胞的顺铂耐药效应（P＜0.05）。添加iST2-1,IL-33处理下的胃癌细胞自噬相关蛋白相对表达量上调,顺铂共培养的胃癌细胞增殖率降低（P＜0.05）。结论IL-33能够通过与ST2结合介导胃癌细胞自噬水平增加,进而产生对顺铂的耐药性。     

ZNF139通过抑制miR-181a-5p增加胃癌细胞耐药性的机制

目的:探讨ZNF139通过抑制miR-181a-5p表达增加胃癌细胞耐药性的机制.方法:检测ZNF139和miR-181a-5p在胃癌组织和细胞系中的表达情况,ZNF139-siRNA、miR-181a-5p模拟物或pcDNA-ZNF139转染MKN45、MKN45/ADR细胞系.MTT法测定细胞活性,Real-time PCR和Western blot分别检测ZNF139、miR-181a-5p和P-gp、GST-π、MRP-1、Bcl-2、TS和Bax等耐药相关基因mRNA和蛋白表达水平.ChIP和双荧光素酶活性试验验证ZNF139、miR-181a-5p之间的调控作用.结果:ZNF139 mRNA和蛋白相对表达量在胃癌组织和细胞系较癌旁组织升高(P<0.05),miR-181a-5p mRNA相对表达量降低(P<0.05).转染ZNF139-siRNA后,MKN45/ADR细胞中miR-181a-5p mRNA表达升高,化疗药物阿霉素(ADR)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、奥沙利铂(L-OHP)处理后,MKN45/ADR细胞存活率降低(P<0.05).MKN45细胞系转染pcDNA-ZNF139后,ZNF139 mRNA和蛋白表达水平升高,miR-181a-5p mRNA表达水平下降,同时细胞对ADR、5-FU、L-OHP的耐药性增强(P<0.05).双荧光素酶活性试验表明,ZNF139抑制了miR-181a-5p启动子的转录活性(P<0.05).抑制ZNF139可降低MKN45/ADR细胞中P-gp、MRP-1、Bcl-2的表达(P<0.05);miR-181a-5p模拟物转染MKN45/ADR细胞后,P-gp、LRP和Bcl-2的表达降低(P<0.05).结论:ZNF139通过抑制-miR-181a-5p诱导胃癌中P-gp、MRP-1和Bcl-2的表达来增加细胞的耐药特性,有望成为防治胃癌细胞耐药的新的策略.     

胃癌细胞株MKN45球体细胞中Sox2的表达研究

目的：检测干细胞相关因子Sox2在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达。方法：选择人胃癌细胞株MKN45,在含有表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）及基本的成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）无血清培养液中培养,观察球体形成情况,并检测球体细胞对化疗药物顺铂（cisplatin,DDP）的耐受性;采用RT-PCR与免疫印迹分析检测干细胞相关基因Sox2在球体细胞及原代贴壁细胞两组细胞中的表达差异。结果：胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下能形成悬浮球体,球体细胞中Sox2的相对表达量明显高于原代贴壁细胞（P=0.000）。结论：悬浮球培养法在胃癌细胞株MKN45中培养形成的球体细胞具有肿瘤干细胞特性。该方法是分离和鉴定肿瘤干细胞的实用而有效的方法。     

艾恒与传统化疗药物在不同分化程度胃癌细胞株中敏感性的研究

目的:探讨不同分化程度胃癌细胞对艾恒、5-FU、MMC和VP-16的敏感性。方法:将不同浓度的化疗药物与两株不同分化程度的胃癌细胞株共同温育,采用MTT方法检测化疗各药物对胃癌细胞增殖的影响。结果:四种化疗药物对两株胃癌细胞的增殖均具有显著的抑制作用,MKN45细胞株对各化疗药物敏感性顺序为:MMC>VP-16>艾恒>5-FU,而SGC7901细胞株对各化疗药物敏感性顺序为:MMC>艾恒>VP-16>5-FU。中分化的SGC7901对艾恒、MMC、VP-16的敏感性均显著高于低分化的MKN45,而MKN45对5-FU的敏感性高于SGC7901。结论:不同分化程度的胃癌细胞对药物的敏感性不同。     

胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响

目的 探讨胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响。方法 应用细胞培养、P1染色、流式细胞仪检测的方法，观察胃癌细胞SGC-7901、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞周期及细胞凋亡率，western blot方法分析4种胃癌细胞中bel-2和Caspase3的表达。结果 TRAIL300ng／ml作用于胃癌细胞24h后，胃癌细胞MKN28、MKN45、AGS和SGC-790I的凋亡率分别为36．05％、20．27％、16．50％和11．80％。Western blot结果显示MKN28细胞Caspase3的表达高于其它细胞，而bel-2的表达在各细胞间并无明显差别。结论 胃癌细胞对TRAIL的敏感性与Caspase3的高表达有关，而与bel-2的表达无关。     

加温结合化疗对人胃癌细胞株的影响

通过检测MKN28人胃癌细胞株~3H-胸腺嘧啶核苷掺人情况,在体外实验研究加温和抗癌药物顺氨氯铂、5-氟脲嘧啶之间的协同作用。结果表明(1)顺氨氯铂的细胞杀伤作用具有温度-药物浓度依赖性;(2)5-氟脲嘧啶合并加温未见有显著协同作用,反见削弱其抗肿瘤效应;(3)单纯加温与合并应用中等剂量的顺氨氯铂或5-氟脲嘧啶的比较中发现,效果最佳的为加温加顺氨氯铂,其次是单纯加温;(4)加温加顺氨氯铂、5-氟脲嘧啶组合治疗效果最佳。为临床应用治疗胃癌的腹腔广泛转移提供了理论依据。     

利多卡因对抗肿瘤药物的增敏作用研究

目的 :研究利多卡因对 3种化疗药物的增敏作用。方法 :微量细胞培养四氮唑 ( MTT)法检测肝癌细胞系 SSMC 772 1对 3种抗癌药物 5-氟脲嘧啶 ( 5- FU)、丝裂霉素 ( MMC)和顺铂 ( CDDP)的敏感性。结果 :SSMC 772 1对 3种化疗药物 ( 5- FU、MMC及 CDDP)均敏感。结论 :利多卡因对这 3种化疗药物均有明显增敏作用。     

穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖的影响

[目的]明确穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖的影响.[方法]以不同浓度的穿心莲内酯处理低分化(MKN45)、中分化(SGC7901)和高分化(MKN28)胃腺癌细胞株,分别温育24h、48h,72h;采用噻唑蓝比色法检测各和穿心莲内酯对癌细胞的药物半数抑制浓度(IC50),比较穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖抑制作用的异同.[结果]穿心莲内酯对胃癌细胞株MKN45、SGC7901、MKN28的体外增殖均具有显著的抑制作用,并且呈剂量效应和时间效应关系.低分化的MKN45细胞株对穿心莲内酯的敏感性明显高于高分化的MKN28细胞株和中分化的SGC7901细胞株.[结论]穿心莲内酯对不同分化程度的胃腺癌细胞株体外增殖抑制作用不同.     

miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌生物学行为的影响

目的:探讨miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达情况及对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:应用实时荧光定量PCR法分析31例胃癌组织和癌旁组织样本以及人胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miRNA-101的表达水平;建立miRNA-101重组腺病毒载体感染胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,对照组为感染阴性对照病毒的胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,MTT法检测miRNA-101对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力.结果:胃癌组织中miR-101表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);miR-101在细胞系SGC-7901和MKN45中的表达量明显低于人正常胃黏膜上皮细胞系GES1(P<0.01).孵育48 h后MKN45细胞miRNA-101组的细胞增殖能力低于其对照组(P<0.05);而孵育72 h后SGC-7901细胞和MKN45细胞的miRNA-101组细胞增殖能力均亦低于相应对照组(P<0.05).迁移试验结果显示,miRNA-101组迁移的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数明显低于相应对照组(P<0.01);侵袭实验结果显示,miRNA-101组侵袭的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数亦明显低于其对照组(P<0.01).结论:miRNA-101在胃癌组织和胃癌细胞系中表达下调,转染miRNA-101可明显降低SGC-7901和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭能力,miRNA-101可能参与了胃癌疾病的发生及发展.     

肺癌细胞株对6种抗癌药物敏感性测定

目的　探讨肺癌细胞株抗癌药物的敏感性。方法　采用体外MTT比色分析法对 10株肺癌细胞进行NVB、GEM、TAX、SN - 38、CDDP、5 -Fu 6种抗癌药物的体外敏感试验。结果　 ( 1) 6种抗癌药物对SCLC的显效顺序依次为GEM、NVB、CDDP、TAX、5 -Fu、SN - 38,4株SCLC的敏感性顺序依次为Lu135、N2 31、H6 9、SBC - 3;( 2 ) 6种抗癌药物对NSCLC的显效顺序依次为 5 -Fu、NVB、GEM、CDDP、TAX ,对SN - 38均为耐药 ,3种 6株NSCLC的敏感性顺序依次为Lu 6 5、PC 7、LK - 2、PC 9、PC 14、A 5 49;( 3)SCLC株对 6种抗癌药物敏感性优于NSCLC ,6种抗癌药物对 4株SCLC的总有效率为 87 5 % ,敏感为 6 2 5 % ,较敏感为 2 5 % ,耐药为12 5 % ;对 6株NSCLC的总有效率为 5 2 78% ,敏感为 16 6 7% ,较敏感为 36 11% ,耐药为 4 4 4 4%。结论　 10株肺癌细胞株对 5 -Fu最敏感 ,GEM、NVB、CDDP、TAX次之 ,SN - 38效果最差。 6种药物中对 5 -Fu、CDDP未表现出明显耐药性 ,其余 4种均存在不同程度的耐药性 ,表明肺癌细胞株存在自然耐药性。     

nm23H1和S100A4mRNA表达与胃癌细胞体外侵袭力的关系

目的探讨S100A4、nm23H1基因mRNA表达与胃癌细胞体外侵袭力的关系.方法采用Boyden小室法测定4种胃癌细胞系MKN1、MKN45、GT3TKB、BGC823的体外侵袭力,RT-PCR检测4种细胞系的S100A4和nm23H1mRNA表达水平.结果胃癌细胞体外侵袭力高低的顺序依次为MKN45最高,BGC823、MKN1次之(二者无显著差异),GT3TKB最低(P<0.001).nm23H1、S100A4基因mRNA各自表达与胃癌细胞体外侵袭力无明显关系.nm23H1/S100A4mRNA相关表达水平的顺序依次为GT3TKB最高,BGC823和MKN1次之(二者无显著差异,P>0.05)、MKN45最低(P<0.001),其相关表达与胃癌细胞体外侵袭力呈反比关系.结论nm23H1/S100A4mRNA的相关表达在评价胃癌细胞体外侵袭力方面具有重要价值.     

Stat3在人胃癌细胞株和组织中的组成性激活及其临床意义

目的探讨信号传导及转录活化因子Stat3在不同类型的人胃癌细胞株和组织中的激活情况及其与胃癌临床病理因素的关系。方法分别采用Western印迹法和凝胶阻滞电泳(EMSA)法检测人正常胃黏膜上皮细胞3T3和5种不同分化类型的人胃癌细胞株(MKN28、SGC7901、MKN45、AGS和NCI-SNU-1)中Stat3蛋白的表达和Stat3 DNA的结合活性;免疫细胞化学染色确定磷酸化Stat3(P-Stat3)蛋白在胃癌细胞内的定位;免疫组织化学法检测50例胃癌组织及正常胃黏膜中P-Stat3蛋白的表达。结果与正常胃黏膜上皮细胞3T3相比,Stat3在5种不同分化类型的人胃癌细胞株中有较高的活性。中分化和低分化胃腺癌细胞株(SGC7901、MKN45和AGS)中Stat3的激活水平高于其他类型的细胞株(MKN28和NCI-SNU-1)。P-Stat3的染色定位于AGS细胞的细胞核。胃癌组织中P-Stat3蛋白的表达水平较正常胃黏膜高,特别是中分化和低分化胃癌组织尤为显著(P＜0．05)。Ⅱ、Ⅲ期胃癌组织中P—Stat3蛋白表达水平显著高于Ⅰ期胃癌(P＜0．05),Ⅳ期胃癌组织中P-Stat3的蛋白表达水平与Ⅰ期胃癌之间差异无显著意义(P＞0．05)。P—Stat3蛋白的表达水平与胃癌的分化程度相关。结论Stat3在各种类型的人胃癌细胞和胃癌组织中都有较高的活性;JAK／STAT信号传导途径可能在胃癌的发生、发展中起重要的作用。     

野生型p53对胃癌细胞系的生长抑制作用

目的：观察野生型p53对胃癌细胞系的生长抑制作用。方法：以逆转录病毒为载体将野生型p53基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823，检测p53对肿瘤细胞的影响。结果：p53在转染细胞中表达水平提高。外源性p53的导入使肿瘤细胞增殖细胞核抗原（PCNA）水平明显降低；G0／G1期细胞数增加，S期降低。转染p53基因的MKN28细胞探鼠体内成瘤能力明显下降。结论：野生型p53基因参与调节DNA复制及细胞周期，抑制癌细胞过度增殖。