人参多糖和当归多糖诱导人内皮细胞表达造血生长因子的实验研究

目的：研究和论证人参和当归促进血细胞生成及“补气生血”的现代生物学机理。方法：采用造血生长因子生物活性检测与免疫细胞化学等技术，研究经人参多糖（GPS）和当归多糖（APS）诱导的人脐静脉内皮细胞株（Ecv304)上清液（HEcCM)中造血生长因子的活性及粒单系集落刺激因子（GM－CSF）、IL－3和IL－6在内皮细胞的表达。结果：GPS和APS体外诱导制备的HFcCM能显著促进粒单系造血祖细胞（CFU－GM）和多向性造血祖细胞（CFU－Mix)的增殖；同时，GPS和APS能不同程度地促进内皮细胞GM－CSF、IL－3和IL－6蛋白表达。结论：GPS和APS能上调造血微环境中的内皮细胞分泌造血生长因子来调节血细胞的生成。     

当归多糖的免疫活性和对造血功能影响

目的 :研究当归多糖灌服对免疫和造血功能的影响。方法 :分别采用DTH、血清溶血素抗体生成实验及内源性脾结节法、3 H TdR掺入骨髓有核细胞法、测定外周血Hb进行研究。结果 :当归多糖灌服对体液免疫有较强促进作用 ,大剂量对细胞免疫有促进作用 ;对溶血性血虚模型小鼠 ,当归多糖能显著升高外周血红蛋白 ,并能促进60 Coγ射线照射后小鼠内源性脾结节生成及骨髓细胞DNA合成。结果 :当归多糖有免疫促进作用 ,并能促进脾脏和骨髓造血功能。     

黄芪和当归配伍对环磷酰胺所致骨髓造血功能抑制小鼠造血功能的影响

目的探讨黄芪和当归不同比例配伍对环磷酰胺(CTX)所致骨髓造血功能抑制小鼠造血功能的影响,分析二者配伍的相互作用。方法采用CTX ip复制小鼠骨髓造血功能抑制模型,以重组人粒细胞集落刺激因子(NG-CSF)作为阳性对照药物,药物组分别ig给予当归、黄芪、当归一黄芪不同比例(10:1、5:1、2.5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10)配伍的提取物。测定外周血象,血清造血生长因子粒单系集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)的量,计数骨髓有核细胞数(BMNC),测定骨髓造血组织面积及脾指数(SI)。以综合指数法整合所有检测指标,采用多重线性回归分析法分析黄芪、当归2种药物间的相互作用。结果在连续注射CTX后的5~7d,小鼠外周血象显著降低,同时伴有血清GM-CSF、TPO量降低,骨髓BMNC减少,SI升高,骨髓造血组织面积减少。单用黄芪对外周血象、血清造血生长因子(HGF)量、骨髓造血组织面积和BMNC均无显著影响。单用当归可升高外周血中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)数,增加骨髓造血组织面积,但能不增加血清HGF的量和BMNC。黄芪-当归(5:1、2.5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10)配伍可升高外周血WBC、RBC、PLT数量,增加HGF的量、BMNC数量和骨髓造血组织面积,降低SI。综合效应分析表明,黄芪-当归1:1、1:2.5、1:5比例配伍时发挥促造血的作用最强。相互作用分析表明,黄芪-当归配伍后,当归发挥促造血作用的重要性大于黄芪,黄芪和当归配伍时其交互作用对药物效应的发挥产生了不可忽视的正面影响,二者配伍对促进造血具有增效作用。结论黄芪-当归配伍具有促进造血的作用,当归的促造血作用大于黄芪,黄芪配伍当归后对促进造血具有协同增效作用,黄芪与当归以1:1、1:2.5、1:5比例配伍时的促造血作用为佳。     

当归补血汤含药血清对血虚小鼠骨髓造血功能的影响

目的:观察当归补血汤含药血清对血虚模型小鼠骨髓造血功能的影响,阐述当归补血汤补气生血作用机理。方法:连续4天腹腔注射环磷酰胺30mg/kg复制化学性血虚小鼠模型;灌胃给予15g/kg、7.5g/kg、3.75g/kg当归补血汤水煎液,一日两次,第4天腹主动脉取血,分离含药血清;将各剂量当归补血汤含药血清加入到血虚模型小鼠骨髓细胞的培养体系中,观察各组含药血清对骨髓造血祖细胞CFU-GM、CFU-E、CFU-B及骨髓有核细胞DNA合成的影响。结果:当归补血汤15g/kg含药血清5%组、10%组,当归补血汤7.5g/kg含药血清10%组、15%组,以及当归补血汤3.75g/kg含药血清15%组对血虚小鼠骨髓CFU-GM的集落生成均具有促进作用;当归补血汤15g/kg含药血清10%组、20%组,当归补血汤7.5g/kg含药血清20%组、30%组可明显升高骨髓CFUE和BFU-E集落个数;当归补血汤15g/kg含药血清0.5%组,7.5g/kg含药血清1%组、2%组及3.75g/kg含药血清1%组、2%组对血虚小鼠骨髓有核细胞DNA的合成具有促进作用。结论:当归补血汤含药血清能够促进骨髓粒系、红系造血祖细胞的增殖与分化,促进骨髓有核细胞DNA的增殖,达到其补气生血的功效。     

黄芪当归配伍对骨髓造血功能抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响

目的研究黄芪和当归不同剂量比例配伍对骨髓造血功能抑制模型小鼠造血祖细胞增殖能力和细胞衰老的影响,探讨黄芪和当归配伍促造血作用的机制。方法 ICR雄性小鼠,随机分为对照组、模型组、阳性药对照组、黄芪组、当归组、黄芪-当归不同剂量配伍组,分别ig给予不同配伍比例的黄芪-当归药液,每天1次,连续8 d。阳性对照组于给药的第6、7、8天sc重组人粒细胞集落刺激因子(rh G-CSF)。除对照组外,其余各组于给药的第4、5、6天ip环磷酰胺(CTX)造成骨髓造血功能抑制模型。于实验第9天处死动物取骨髓细胞进行红系、粒系、巨核系3系造血祖细胞培养,并以β-半乳糖苷酶染色法检测骨髓有核细胞衰老率。结果与模型组比较,单用当归组、黄芪-当归(5∶1)组、黄芪-当归(1∶1)组、黄芪-当归(1∶5)组均能显著升高粒细胞-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)、红细胞集落形成单位(CFU-E)、红系爆式集落形成单位(BFU-E)集落产率(P0.01);黄芪-当归(10∶1)组可升高CFU-E、BFU-E、CFU-MK的集落产率(P0.05、0.01),而对CFU-GM集落产率无显著影响。黄芪-当归(1∶1)组促进造血祖细胞集落形成的作用显著强于单用黄芪、单用当归和其他比例配伍组(P0.05)。与模型组比较,单用黄芪组、单用当归组、黄芪-当归(10∶1)组、黄芪-当归(5∶1)组、黄芪-当归(1∶1)组、黄芪-当归(1∶5)组骨髓有核细胞衰老阳性率显著降低(P0.01),黄芪-当归(1∶1)组骨髓有核细胞衰老阳性率显著低于单用黄芪、单用当归和其他比例配伍(P0.05、0.01)。结论黄芪、当归和黄芪-当归10∶1、5∶1、1∶1、1∶5配伍均可不同程度地促进骨髓造血功能抑制小鼠模型骨髓造血祖细胞增殖和分化,抑制骨髓造血细胞功能衰老,以黄芪-当归1∶1配伍作用为优。提示促进骨髓造血祖细胞增殖和分化是黄芪和当归配伍促造血作用机制之一。     

黄芪多糖对体外人骨髓造血祖细胞生成的影响

应用甲基纤维素半固体培养法观察了黄芪多糖（Astragalus Polysaccharides,APSs）在体外对人骨髓粒单集落（CFU-GM)、红细胞集落（CFU－E）和爆式红细胞集落（BFU－E）生成的影响。结果显示：APSs 5mg/L对人骨髓CFU－GM和CFU－E的生成具有促进作用（均为P＜0．05）,在APSs 125mg/L时,以促进BFU－E的生成（P＜0．05）;在CFU－GM的培养体系中,如果没有GM－CSF,APSs在5mg/L的终浓度时,仍能促进CFU－GM的生成（P＜0．05）,过高或过低的浓度无效。在培养CFU－E时,不含EPO,则APSs对CFU－E无刺激作用。骨髓细胞与APSs孵育2小时后,再进行造血祖细胞培养,则CFU－GM、CFU－E和BFU－E的生成均略有下降,但与孵育时APSs的浓度高低无关。提示浓度合适的APSs在体外能促进人骨髓细胞中红细胞系和粒细胞系祖细胞的生成,这种促进作用在造血因子存在时,才能发挥,或发挥的作用最大,并且这种促进作用的发挥需APSs的持续刺激,短时间的刺激无效。     

当归补血汤不同剂型及配伍对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究

 目的本实验通过比较当归补血汤煎剂及颗粒剂对骨髓抑制小鼠造血机能调控的影响来比较它们之间的疗效差异。旨在为中药颗粒剂的疗效提供实验室依据。方法本实验用高效液相色谱仪检测了当归补血汤不同制剂中阿魏酸、黄芪甲苷的含量差异;采用造血祖细胞培养术、外周血像计数法、ELISA等方法对造血祖细胞集落数、外周血像的变化及造血微环境中EPO,TPO,G-CSF的变化进行检测。结果当归补血汤煎剂、颗粒剂能通过平衡骨髓微环境中EPO,TPO,GM-CSF的表达;促进骨髓造血细胞从G_{0/G1期进入G2/M期和S期;促进造血祖细胞增殖,从而提高骨髓抑制小鼠外周血像和骨髓像。结论当归补血汤煎剂、颗粒剂均能改善骨髓抑制小鼠的造血机能,其中配方颗粒剂疗效较为突出。}     

当归多糖对移植肌卫星细胞的受体鼠造血功能恢复的影响

目的:探讨当归多糖对移植肌卫星细胞的照射小鼠造血功能恢复的影响。方法:将昆明小鼠随机分为4组:照射组、移植骨髓组、移植肌卫星组、移植肌卫星且注射当归多糖组。小鼠经8Gy的137Cs-γ照射后按组别给予不同方式治疗,观察其生存状态、体重、外周血常规变化,PCR法检测Y染色体性别决定基因(sex determining region on Y chro-mosome,Sry)的表达。结果:照射组小鼠在照射后17天内全部死亡,移植骨髓组、移植肌卫星且注射当归多糖组、移植肌卫星组小鼠在照射后1周内体重和血象值均明显下降,各组体重分别于11天、12天、20天左右开始恢复,28天基本恢复到正常水平;各组血象值于第2周开始恢复,第4周时基本恢复,移植肌卫星且注射当归多糖组常规指标均优于移植肌卫星组,第3周时各存活小鼠体内均可检测到供体小鼠Sry基因。结论:当归多糖可促进移植肌卫星细胞的照射小鼠造血功能的恢复,并加速其造血重建。     

当归多糖对小鼠外周血造血干细胞动员作用的研究

目的探讨当归多糖(APS)对小鼠外周血造血干细胞的动员作用。方法采用外周血白细胞(WBC)计数、淋巴细胞(LC)计数、免疫细胞化学、流式细胞术、造血祖细胞体外培养等实验技术观察APS的动员作用。结果APS动员后小鼠外周血的WBC、LC数明显高于生理盐水(NS)组(P<0.05);APS动员后外周血中CD34 细胞百分率明显高于NS组(P<0.05);APS组CFU-Mix产率显著高于NS组(P<0.01);并且APS和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)联合动员后的各项指标均高于单用APS或单用rhG-CSF组。结论APS对小鼠外周血造血干细胞有一定的动员作用,并且APS和rhG-CSF联合动员的效果好于单用APS或单用rhG-CSF的动员效果。     

当归多糖抑制氧化损伤延缓造血干细胞衰老

目的:观察当归多糖(ASP)对小鼠造血干细胞(HSCs)活性氧(ROS)、总抗氧化能力(T-AOC)及p16 mRNA表达的影响,探讨ASP延缓HSCs衰老的可能机制.方法:C57BL/6J小鼠随机分为正常组、衰老组,并分别予ASP干预;衰老组采用X线3.0 Gy/8 F全身均匀照射,建立小鼠HSCs衰老模型;正常、衰老ASP干预组在建模期间均予ASP灌胃;而正常组、衰老组予等体积NS灌胃.免疫磁珠分离HSCs.通过β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期分析和混合集落培养观察HSCs生物学特性变化;流式细胞术与免疫荧光检测ROS产量;比色法检测T-AOC;荧光定量PCR检测p16 mRNA表达.结果:与正常组比较,3.0 Gy/8 F的X线能显著增加衰老组HSCs SA-β-Gal染色阳性率和G1期比例;增加ROS产量,上调p16 mRNA表达;混合集落形成能力和T-AOC下降.与衰老组比较,ASP能显著降低衰老组HSCs的SA-β-Gal染色阳性率和G1期比例,减少ROS产量,下调p16 mRNA;增加混合集落形成能力和T-AOC.结论:3.0 Cy/8 F的X线能诱导小鼠HSCs衰老;ASP则能通过抑制氧化损伤及下调p16 mRNA表达延缓小鼠HSCs衰老.     

当归多糖干预调节再生障碍性贫血小鼠骨髓单个核细胞线粒体自噬稳态的实验研究

目的探讨当归多糖对再生障碍性贫血(AA)小鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs)线粒体自噬造成的影响。方法选取50只小鼠,按照体质量利用均衡随机法将小鼠随机分为正常组、模型组、当归多糖低剂量组、当归多糖中剂量组、当归多糖高剂量组,每组10只。除正常组外,其余组均采用化学方法制备AA小鼠模型。证实成模后,正常组、模型组小鼠每天给予0.2mL生理盐水灌胃1次;当归多糖低、中、高剂量组分别每天给予当归多糖40mg/kg、200mg/kg、400mg/kg灌胃1次。各组均连续灌胃14d,观察各组小鼠外周血白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(Plt)、BMMNCs计数和BMMNCs线粒体膜电位及骨髓细胞线粒体自噬情况。结果模型组小鼠外周血WBC、Hb、Plt、BMMNCs计数和BMMNCs线粒体膜电位均明显低于正常组(P均<0.05);当归多糖各剂量组各指标均明显高于模型组(P均<0.05),且高剂量组明显高于中、低剂量组(P均<0.05),中剂量组明显高于低剂量组(P均<0.05)。电镜下观察,模型组小鼠骨髓细胞内线粒体损伤,存在过度自噬现象;而当归多糖各剂量组小鼠骨髓细胞内线粒体损伤明显较模型组减轻,自噬泡数量较模型组明显减少。结论当归多糖能够促使AA小鼠骨髓造血功能的恢复,线粒体自噬的改变可能是其机制之一。     

中医药对骨髓造血生态位调控与构建的研究进展

骨髓造血生态位是造血干、祖细胞赖以生存的场所,不仅关系到机体造血机能的正常运转,而且其稳态失调及异常可诱发多种血液疾病,甚至可被诸如白血病干细胞等恶性细胞病态适配,以致预后严重不良,因此对骨髓生态位的调控与构建具有重要意义。概述了骨髓造血生态位的构成与生理病理基础,从中药活性组分与中药复方的调控展开,对复方药物组成和药效靶点进行图形分析,结合血液病临床,将分散研究加以整合与总结,以期为中医药对血液病的研究和治疗提供新的方向与视角。     

中药复方糖障明对糖尿病大鼠骨髓造血细胞的影响

目的:探讨中药复方糖障明对糖尿病大鼠骨髓造血细胞的影响。方法:将链脲佐菌素造成糖尿病模型的大鼠随机分为糖障明治疗组(即中药高、中、低3个剂量)、阴性对照组、降糖灵对照组,以同龄正常大鼠为正常对照组。各实验组在给药2个月后进行骨髓有核细胞的检查。结果:中药低剂量组的原始+早幼粒细胞明显低于正常对照组(P<0.05),阴性对照组的晚幼粒细胞较正常对照组及降糖灵对照组明显降低(P<0.01);各实验组嗜碱性粒细胞均较正常对照组明显降低(P<0.05);中药低剂量组的单核细胞明显低于降糖灵对照组及正常对照组(P<0.05)。结论:中药复方糖障明不仅对骨髓造血系统无抑制作用,而且低剂量的中药复方糖障明可能还有激活可溶性生长因子,增强抑制程序性细胞死亡(PCD)活性的作用。     

补虚化瘀方对化疗荷瘤小鼠骨髓造血微环境的影响

目的观察补虚化瘀方对联合荷瘤小鼠骨髓造血微环境的影响。方法采用P388瘤株制作荷瘤小鼠模型后,再以环磷酰胺、阿糖胞苷腹腔注射获得联合化疗荷瘤小鼠骨髓抑制模型,实验分为正常组、模型组及补虚化瘀方组,进行小鼠骨髓成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)、骨髓VCAM-1及NF-κB、骨髓微血管测定。结果联合化疗可致荷瘤小鼠CFU-F计数、骨髓VCAM-1及NF-κB表达、骨髓微血管损伤明显低于正常组(P均<0.01);补虚化瘀方可提高联合化疗荷瘤小鼠CFU-F计数、骨髓VCAM-1及NF-κB表达,改善模型小鼠骨髓微血管损伤。结论补虚化瘀方具有保护联合化疗荷瘤小鼠骨髓抑制模型骨髓造血微环境和促进其化疗损害修复作用。     

当归多糖对血瘀证动物免疫功能和抗氧化功能的影响

 目的：研究当归多糖(angelica polysaccharide,ASP)对血瘀证大鼠的影响。方法：采用阿霉素造大鼠血瘀证模型，观察当归多糖对血瘀证动物免疫功能和抗氧化功能的作用。结果：当归多糖可明显改善血瘀证大鼠免疫功能, 其胸腺指数和脾脏指数明显升高，免疫球蛋白IgG、IgM、补体C5含量明显升高，升高心、脑、肾、胰四脏器超氧化物歧化酶(SOD)活性，降低心、脑、肾、胰四脏器丙二醛(MDA)含量（P<0.05或P<0.01）。结论：当归多糖具有抗氧化效应和免疫促进效应。     

黄芪多糖对恶性肿瘤化疗后骨髓抑制的影响

[目的]探讨注射用黄芪多糖对恶性肿瘤化疗所致骨髓抑制的作用。[方法]将48例患者随机分成治疗组26例,对照组22例。治疗组在化疗前给予注射用黄芪多糖250mg,1次/d,连续应用7d,对照组仅给予常规化疗。比较治疗开始后第4、7、10、14天白细胞、中性粒细胞及血小板计数。[结果]治疗组对化疗所致的血象下降较对照组有明显提升。两组比较白细胞、中性粒细胞数在第10、14天时有显著性差异(P<0.05),血小板计数在第14天时有显著性差异(P<0.05)。[结论]注射用黄芪多糖可显著减轻恶性肿瘤化疗后的骨髓抑制,改善患者生活质量。     

人参总皂苷对骨髓造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究

目的 探讨骨髓造血细胞的冷冻保存效果及人参总皂苷(TSPG)降低冷冻损伤的作用。方法 以5％二甲基亚砜(DMSO)为冷冻保护剂，采用逐步降温法将骨髓造血细胞在液氮中保存3～5个月，复苏后应用台盼蓝拒染法、集落形成试验、CD34^ 及细胞总数回收率等，测定骨髓造血细胞生物学活性的变化；将不同剂量的TSPG与复苏的骨髓造血细胞共培养，应用集落形成试验、MTT比色分析法及流式细胞术等方法检测TSPG对骨髓造血细胞冷冻损伤可恢复性的影响。结果 骨髓造血细胞在低温保存时一部分细胞会失去增殖能力，但这种损伤并不与保存时间成正比。细胞复苏后，加入合适剂量的TSPG(25μg／mL)，可明显提高冻存骨髓造血细胞的集落产率；TSPG在一定浓度范围内(25～50μg／mL)能促进冻存骨髓造血细胞的增殖；TSPG(25μg／mL)能促进冻存骨髓造血细胞进入细胞增殖周期。结论 TSPG能促进冷冻骨髓造血细胞的复苏、增殖，提高骨髓细胞冷冻损伤的可恢复性，对应用冻存骨髓造血细胞进行造血移植有一定意义。     

生血增白汤在小鼠骨髓移植后造血重建中的作用

目的 探讨生血增白汤对骨髓移植后小鼠骨髓中细胞间黏附分子(ICAM-1)、干细胞因子(SCF)表达水平的影响.方法 将实验动物采用随机数字表法分为5组各30只:正常组,未做任何处理;对照组、G-CSF组、生血组、生血+G-CSF组,建立小鼠骨髓移植模型,生血组及生血+G-CSF组胃饲生血增白汤浓缩煎剂.骨髓移植后的第9...     

当归多糖对放射损伤小鼠红细胞免疫粘附功能和外周血象的影响

目的 :进一步了解当归多糖的药用价值。方法 :本实验将小鼠分为正常对照组、照射对照组、当归多糖治疗组 ,检测三组的红细胞 C3b受体花环率和外周血象。结果 :照射对照组红细胞 C3b受体花环率和外周血白细胞、血小板数明显低于正常对照组 ,而当归多糖治疗组的红细胞 C3b受体花环率和外周血白细胞、血小板数显著高于照射对照组 (P<0 .0 1) ,有统计学意义。结论 :当归多糖能显著促进放射损伤小鼠的红细胞免疫粘附功能和造血功能