亚低温对大鼠缺血性脑损伤后JAK1-STAT1通路的作用

目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同时间点JAK1和STAT1的表达情况及实施亚低温后两者的变化,进一步探讨亚低温的脑保护作用.方法 用线栓法制做大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,同时给予亚低温治疗.免疫组化检测JAK1和STAT1的表达,Western blot检测STAT1蛋白的表达.结果 与假手术组相比,常温缺血再灌注后6 h JAK1和STAT1的表达开始增强,至24 h达高峰;亚低温缺血组各时间点表达均明显少于常温缺血组(P<0.05).结论 脑缺血再灌注损伤激活了具有促凋亡作用的JAK1-STAT1通路,亚低温可能通过抑制JAK1和STAT1的表达发挥缺血后抗神经元凋亡的作用.     

局部亚低温对大鼠局灶脑缺血再灌注后神经营养因子-3表达的影响

目的：观察病变侧缺血至再灌期亚低温(32～33 ℃)对局灶脑缺血再灌注后梗死体积和神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)表达的影响。方法：采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血30 min后应用负反馈控温半导体制冷块对大鼠病变侧给予亚低温治疗并持续至再灌期。处死大鼠前进行神经功能缺陷评分,氯化三苯四氮唑染色及计算机图像分析技术观察脑梗死体积,采用免疫组织化学方法检测NT-3表达,末端脱核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术观察神经细胞凋亡情况。结果：同常温缺血组相比,亚低温缺血组梗死体积明显减少,NT-3阳性细胞数量增加,凋亡的神经细胞明显减少(均P<0.05)。神经功能缺陷评分亚低温缺血组明显低于相应时间点常温缺血组(P<0.05或P<0.01)。结论：病变侧亚低温可通过增加脑缺血后NT-3的表达水平,抑制细胞凋亡而发挥脑保护作用。     

局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型NKCC1 mRNA水平的影响

目的:观察局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型NKCC1 mRNA表达水平的影响,探索局部亚低温的脑保护机制.方法:雄性Wistar大鼠50只,随机分成常温组和亚低温组.应用"线栓法"实现大鼠右侧大脑中动脉阻塞,2h后拔出线栓进行再灌注,于再灌注3h、12h、24h和72h处死大鼠.应用RT-PCR方法观察NKCC1 mRNA水平的变化.结果:与假手术亚组相比,缺血-再灌注亚组大鼠缺血区皮质NKCC1 mRNA水平明显升高,开始于再灌注3h,12h～24h达到高峰,72h开始下降,亚低温组各再灌注时间点NKCC1 mRNA水平均低于常温组中相应亚组的水平.结论:局部亚低温通过抑制缺血-再灌注过程中NKCC1 mRNA水平的上调发挥脑保护作用.     

亚低温对脑缺血再灌注后大鼠海马齿状回MAP-2表达的影响

目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回微管相关蛋白(MAP-2)变化规律及其意义;探讨亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:制备大鼠缺血再灌注动物模型,将大鼠分为亚低温组、常温组、假手术对照组,分别在不同时间点断头取脑,取材前应用神经功能等级评分观察脑缺血再灌注后行为功能的恢复,连续切片作MAP-2的免疫组化染色和HE染色,应用透射电镜观察大鼠海马齿状回超微结构的改变.结果:亚低温组于4d、6d、8d神经功能评分减低与常温组相应时间点比较有显著性差异(P＜0.05);常温组缺血侧海马齿状回再灌注12h MAP-2的光密度值较假手术组明显减低(P＜0.01),4d时逐渐增强,8d达高峰,14d恢复至假手术组水平.亚低温组MAP-2各时间点(1d～6d)其光密度值较常温组明显增强(P＜0.05);亚低温组神经元超微结构损伤较常温组相应时间点明显减轻.结论:脑缺血再灌注后早期MAP-2表达减弱,后持续上升.缺血早期应用亚低温可减轻脑组织损伤,促进脑缺血后神经功能恢复,其机理可能与增强脑组织中MAP-2表达有关.     

亚低温对局灶性脑缺血再灌注大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的:研究亚低温对局灶性脑缺血再灌注大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)表达的影响,进一步探讨亚低温对局灶性脑缺血再灌注损伤脑保护作用的机制.方法:线拴法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,分为假手术组、假手术+亚低温组、模型组及模型+亚低温组.应用Western blotting和免疫组化技术分别检测再灌注后不同时相缺血侧皮层PPARγ蛋白的含量和空间分布.结果:假手术组、假手术+亚低温组PPARγ蛋白有少量表达.脑缺血2h再灌注3h,PPARγ蛋白表达开始增加,随再灌注时间的延长表达量逐渐增加,至再灌注24h达高峰,然后明显减少,再灌注72h时仍高于假手术组的水平.每一相同再灌注时间点,模型+亚低温组PPARγ蛋白表达量均明显低于模型组.结论:亚低温可通过抑制PPARγ的表达上调而发挥一定程度的脑保护作用.     

NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马CHOP mRNA及蛋白表达的影响

探讨NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马神经元CHOPmRNA及蛋白表达的影响。用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO),应用原位杂交方法检测CHOPmRNA的表达;应用免疫组织化学SABC法检测CHOP蛋白表达;应用显微图像分析系统进行分析。结果显示:假手术组大鼠海马CHOPmRNA及蛋白表达极少;缺血组较假手术组CHOP表达mRNA和蛋白均显著增加(P<0.01),缺血再灌注3h后CHOPmRNA表达明显增加,24h达高峰,48h开始显著下降,72h接近对照组水平,CHOP蛋白在缺血再灌注12h时明显表达增高,24h达到高峰,72h显著下降,但仍高于对照组水平(P<0.01);在缺血再灌注12、24、48h,NGF组CHOPmRNA及蛋白表达明显低于缺血组(P<0.01)。本研究表明,外源性NGF能显著抑制局灶性脑缺血再灌注后CHOPmRNA及蛋白表达,提示NGF可能对脑缺血再灌注损伤后的海马神经元有保护作用。     

电针对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑皮质eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响

 摘要:目的 探讨电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠脑内缺血皮质区eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响。方法 采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血/再灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组。缺血2h后把模型组和电针组分为再灌注1、3和7d 3个时间点。取双侧“合谷”穴（LI 4）为电针刺激穴位。免疫组化法检测eNOS蛋白的表达;逆转录聚合酶链法检测eNOS mRNA的表达;Western blot法检测eNOS 、MMP-9蛋白的表达。结果 与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区eNOS蛋白及mRNA表达增加显著（P<0.01）;与模型组比较,电针组各时间点eNOS 蛋白及mRNA增加明显（P<0.01）。eNOS蛋白表达于再灌注3d达高峰,假手术组表达为 (0.4291±0.0173),模型组再灌注3d表达为 (0.7374±0.0252),电针组表达为 (0.8536±0.0212),各组比较差异显著（P<0.01）。与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区MMP-9蛋白的表达增加显著（P<0.01）;与模型组比较,电针组MMP-9蛋白的表达于再灌注1d低于模型组（P<0.01）,再灌注3、7 d电针组MMP-9蛋白的表达明显高于模型组（P<0.01）。 结论 电针可上调局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血皮质区eNOS蛋白及mRNA、MMP-9蛋白的表达。     

人参皂甙Rb1阻止大鼠局灶性脑缺血细胞凋亡和诱导NAIP表达

人参皂甙Rb1(GRb1)是人参中一个最重要的有效成分(人参属五加科中一属),能减少大鼠暂时性脑缺血梗塞面积和改善神经功能缺失症状,这种神经保护作用的机制不完全清楚。本实验研究GRb1的神经保护作用是否与防止神经元凋亡和调控神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)的表达有关。通过阻塞大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型,再灌注开始后立即给予腹腔注射GRb1(40mg/kg)。具有神经功能缺失的大鼠被随机分成2组:缺血组和GRb1组,每个组根据再灌注时间(3h,12h,1d,2d,3d,5d,10d,n=4/每时间点)分为亚组。正常大鼠和假手术组做为对照组。TUNEL标记分析凋亡细胞,用免疫组织化学的方法检测NAIP的表达。结果显示再灌注3h凋亡细胞数量开始升高,24h达高峰,后下降,但再灌注10d的凋亡细胞数量显著高于对照组(P<0.01)。与缺血组相比,GRb1各亚组的凋亡细胞数减少,但再灌注12h至3d,其差异具有统计学意义。在对照组,NAIP弱或阴性的免疫反应广泛出现在脑实质神经元。再灌注3h,NAIP阳性细胞增加,12h时达高峰,后下降。再灌注5d,NAIP阳性细胞数量比对照组少(P<0.05)。NAIP阳性神经元出现缺血性改变如扇形或三角形,纹状体星形胶质细胞强表达NAIP。在GRb1组,NAIP阳性细胞数量从再灌注12h到10d,显著高于缺血组。本实验结果提示大鼠局灶性脑缺血时,GRb1能减少细胞凋亡,其机制可能与增加NAIP的表达有关。     

亚低温对脑缺血再灌注后大鼠海马齿状回S100β蛋白表达的影响及临床意义

目的:研究大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回S100β蛋白的变化规律,探讨亚低温对脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:采用线栓法制备大鼠缺血再灌注动物模型,将大鼠分为亚低温组、常温组,假手术对照组.分别在不同时间点断头取脑,取材前应用神经功能等级评分观察脑缺血再灌注后行为功能的恢复,连续切片作S100β的免疫组化染色,行S100β阳性细胞计数,应用透射电镜观察大鼠海马齿状回超微结构的改变.结果:常温组再灌注4d开始、亚低温组于再灌注2d开始神经功能等级评分逐渐减低,亚低温组于6d、8d、10d评分减低与常温组相应时间点比较有显著性差异(P＜0.05);常温组缺血侧再灌注1d～4d S100β阳性细胞数明显增多,4d时达高峰,此后逐渐减少,10d时降至假手术组水平.亚低温组缺血侧S100β蛋白其阳性细胞数在2d、4d、6d、8d均显著高于常温组的相应时间点(P＜0.01);亚低温组脑组织超微结构损伤较常温组相应时间点明显减轻.结论:脑缺血过程中早期应用亚低温可减轻脑组织损伤,促进脑缺血后神经功能恢复,其机理可能与增加脑组织中S100β表达有关.     

复方丹参对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA表达的影响

为了探讨中药复方丹参对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞凋亡及Bcl-2mRNA表达的影响和保护作用,本研究采用大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术检测大鼠大脑皮层神经细胞凋亡和神经细胞Bcl-2mRNA的表达,并进行图像分析。结果显示:缺血再灌注组凋亡神经细胞主要位于缺血侧大脑皮层缺血边缘区(半暗区);缺血侧大脑皮层缺血边缘区神经细胞Bcl-2mRNA的表达在缺血再灌注2h后升高,随着缺血再灌注时间的延长逐渐增强;复方丹参保护组神经细胞Bcl-2mRNA的表达明显强于缺血再灌组(P<0.01),凋亡神经细胞数明显低于缺血再灌组(P<0.01)。上述结果说明复方丹参可通过上调神经细胞Bcl-2mRNA的表达,抑制神经细胞凋亡,减轻缺血再灌注对大鼠大脑皮层神经细胞的损伤。     

亚低温对急性脑缺血再灌注大鼠TNF-α表达的影响

目的：探讨亚低温对大鼠急性脑缺血／再灌注损伤后神经功能及缺血脑组织中TNF—α表达的影响。方法：取健康成年雄性SD大鼠150只。随机均分为假手术组、脑缺血再灌注常温组、脑缺血再灌注亚低温组；根据再灌注时间不同，每组分别于再灌注8h，24h，3d，7d，30d各处死10只大鼠，并取其缺血脑组织，其中5只用于免疫组化染色，另外5只用于RT—PCR检测TNF—αmRNA。结果：脑缺血再灌注后，TNF—α阳性细胞数在再灌注1d时即达高峰，3d后迅速下降，再灌注7d时即降到较低水平，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。TNF—α及其mRNA表达假手术组很弱，缺血再灌注后TNF—α及其mRNA在8h表达为顶峰，随后有所下降，但直到再灌注7d仍然保持相对高的表达水平，一个月基本恢复正常；其表达在亚低温组较常温脑缺血组有显著地下降（P〈0．05），但仍较假手术组高（P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注损伤后TNF—α明显升高，应用亚低温可以降低TNF—α升高的程度；亚低温可以明显减少缺血再灌注后脑梗死的区域，并能明显改善缺血再灌注大鼠的神经功能。提示亚低温治疗对脑的保护作用有可能通过降低TNF—α水平来实现的。     

葡萄糖转运体3在脑缺血/再灌注后半影区表达的变化及意义

目的:研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达。方法:用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用Kontron IBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗塞体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定GLUT3 mRNA水平的变化;用免疫组织化学方法半定量测定GLUT3蛋白水平的变化。结果:脑缺血1 h后再灌注组的脑梗塞体积明显小于缺血3 h再灌注组梗塞体积。GLUT3自3 h即开始升高,24 h到达高峰,1周时仍高于假手术对照组;缺血3 h再灌注组在3 h有一下降点,然后升高,24 h到高峰,1周时接近正常水平。GLUT3蛋白水平的表达与mRNA相符合。结论:GLUT3在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血／再灌注的保护性反应。     

大鼠局灶性脑缺血/再灌注后缺血脑区缓激肽含量的变化

目的研究大鼠局灶性脑缺血/再灌注后缺血脑区缓激肽含量的变化。方法用线栓法制作SD大鼠大脑中动脉阻塞的脑缺血/再灌注动物模型,用免疫细胞化学法结合图像分析技术,检测缺血脑区缓激肽样免疫反应阳性物的平均光密度(A)值作为缓激肽的相对含量,比较局灶性脑缺血3h组、假手术对照组、正常对照组和再灌注30min、2h、4h、16h组缓激肽的相对含量。结果缺血脑区缓激肽样免疫反应阳性物的A值于脑缺血3h/再灌注2h后明显增高(P<0.05),随后下降至增高前水平。结论大鼠局灶性脑缺血/再灌注后,缺血脑区缓激肽含量于再灌注2h后明显增高,其可能在脑缺血后脑水肿的发生中起着重要作用。     

小鼠脑皮质p-Akt、p53在缺血再灌后处理脑保护机制中的作用

目的 观察p-Akt、p53在小鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)及缺血后处理(IPO)后在脑皮质区的表达规律,探讨p-Akt、p53与IPO保护作用的关系.方法 采用线栓法制备大脑中动脉栓塞的局灶性脑缺血模型,将272只小鼠随机分为假手术(Sham)组、缺血再灌(I/R)组、PI-3K/Akt抑制剂LY294002(LY)组和缺血后处理(IPO)组.I/R组、LY组与IPO组均实施缺血90min之后再灌注,IPO组在持续再灌前采取再灌15s、缺血15s、再灌15s的循环,共3个循环.于再灌后30min、1h、3h、6h、24h、48h分别取材,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死体积;免疫组织化学法观察p-Akt,p53蛋白的表达及分布;免疫印迹法检测皮质区p-Akt和p53蛋白表达量.结果 Sham组、I/R组和IPO组的非缺血脑半球皮质p-Akt有微量表达.与Sham组相比,I/R组再灌后30min缺血区皮质p-Akt增加,1h达高峰,6h逐渐降低,24h降至Sham组水平并持续;p53再灌后6h增加,24h达高峰,48h回落.各相应时间点IPO组较I/R组p-Akt增高(P＜0.05),p53降低(P＜0.05).LY组p-Akt低于I/R组(P＜0.05),p53高于I/R组(P＜0.05).顶叶脑组织的免疫印迹分析结果与免疫组织化学结果规律一致.结论缺血后处理对缺血再灌注性脑损伤有保护作用,其机制与降低p53表达及增强p-Akt表达有关.     

亚低温减少大鼠短暂性全脑缺血后皮质iNOS诱导的神经元凋亡

为研究亚低温对大鼠脑缺血再灌注后皮质iNOS表达、NO产生及神经元凋亡的影响及探讨亚低温的神经保护机制,用大鼠短暂全脑缺血模型,采用Nissl染色观察存活神经元、免疫组化法检测iNOS、硝酸还原酶法检测NOx-水平和TUNEL染色结合电子显微镜观察检测凋亡神经元。结果显示:常温缺血组额叶皮质iNOS表达、NOx-水平增高,出现凋亡神经元;低温缺血组iNOS表达、NOx-水平明显低于常温缺血组,未检测到凋亡神经元。上述结果提示,脑缺血后iNOS来源的NO参与了神经元的凋亡过程,亚低温可减少大鼠短暂性全脑缺血后iNOS诱导的神经元凋亡。     

大鼠脑缺血/再灌注过程中葡萄糖转运体1在缺血半影区的表达

目的:研究局灶性脑缺血大鼠在不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体1(GLUT1)转录水平和蛋白水平的表达。方法:用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用KontronIBAS2.5全自动图像分析系统进行图像分析脑梗塞体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定GLUT1mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT1蛋白水平的变化。结果:脑缺血1h后再灌注脑梗塞体积明显小于缺血3h再灌注。GLUT1mRNA自1h即开始升高,24h到达高峰,1周时仍高于假手术对照组;缺血3h再灌注组在3h开始升高,24h到高峰,1周后仍高于正常,但升高幅度不及MCAO1h/R组。MCAO1h/R组GLUT1蛋白水平自3h开始升高,24h达到高峰,1周时接近正常;MCAO3h/R组GLUT1在3h下降,继之升高,24h到高峰,1周时接近正常。结论:GLUT1在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血损伤的保护性反应。     

缺血后处理局灶性脑缺血再灌注模型大鼠相关通路以及白细胞介素8的表达

背景：缺血后处理能够激发内源性保护作用,抑制缺血再灌注后的炎症反应,但具体机制目前尚不明确。目的：观察缺血后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠Toll样受体4-核因子κB信号转导通路以及白细胞介素8表达的影响,进一步阐述缺血后处理的神经保护机制。方法：将110只大鼠随机分为假手术组10只、模型组和缺血后处理组各50只,将大鼠按照Zea-Longa法建立局灶性脑缺血再灌注模型,再进行缺血后处理,即大脑中动脉闭塞2 h后进行3个循环的再灌注15 s/缺血15 s,设模型组和假手术组作对照。对各组进行神经行为学评分,TTC染色测定脑梗死体积,免疫组织化学法检测脑组织Toll样受体4、核因子кB和白细胞介素8蛋白表达,原位杂交法检测其mRNA表达。结果与结论：模型组、缺血后处理组大鼠都出现神经行为学缺失及缺血侧大脑半球梗死。再灌注6,12,24,48,72 h,与模型组相比,缺血后处理组大鼠神经行为学评分显著改善(P < 0.05)、脑梗死体积明显减少(P < 0.05)。模型组和缺血后处理组Toll样受体4、核因子кB、白细胞介素8蛋白和mRNA表达于再灌注6 h时已升高,24 h达峰值。再灌注6,12,24,48,72 h,与模型组各对应时间点亚组比较,缺血后处理组上述各因子表达均显著降低(P < 0.05)。结果证实,缺血后处理可抑制缺血再灌注引起的炎症反应,通过抑制Toll样受体4-核因子κB信号转导通路和下调白细胞介素8的表达,以此发挥神经保护作用。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程     

亚低温对脑缺血再灌注损伤的治疗作用及其机制的初探

目的 观察亚低温对脑缺血再灌注损伤的治疗效果,初步探讨其治疗机制.方法 本实验利用物理降温法,将术中大鼠体温维持在(32.0 ～ 33.0)℃,于缺血再灌注后选取5个时间点(6h、12h、24h、48h和72h)取材进行组织及基因学检测.结果 亚低温有降低脑缺血再灌注术后大鼠死亡率,同时亚低温对于缺血再灌注后的脑组织具有保护作用,基因芯片筛选出亚低温组与常温组表达量变化幅度较大的基因及通路.结论 亚低温能够降低脑缺血再灌注后的损伤,并通过免疫相关反应进行调节.