二氯乙酸钠诱导肺腺癌细胞株 A549 凋亡的实验研究

目的研究小分子药物二氯乙酸钠（DCA-Na）对人肺腺癌细胞株A549体外抗肿瘤及其诱导肿瘤细胞凋亡的作用,探讨其抗肿瘤作用的可能机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察A549细胞在不同浓度DCA—Na处理24、48、72h后生长受抑制情况;使用流式细胞仪、透射电镜和Caspase3试剂盒检测观察DCA-Na对A549细胞凋亡的影响。结果DCA—Na能明显抑制A549细胞生长．呈浓度一时间依赖性;DCA—Na作用后电镜观察到典型的细胞凋亡形态学特征;Caspase3试剂盒检测结果显示,DCA—Na可诱导A549细胞表达Caspase3．其活性随DCA—Na剂量的增加而递增：与对照组比较,线粒体跨膜电位均明显下降,且去极化百分率随DCA-Na剂量及时间的增加而增加。结论DCA-Na可诱导A549细胞株凋亡。线粒体跨膜电位下降可能是其诱导细胞凋亡的重要机制。     

内源性大麻素联用顺铂对人肺腺癌A549细胞的诱导凋亡作用

目的观察内源性大麻素（AEA）、顺铂（DDP）单用或联用对人肺癌A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测AEA和DDP对肺癌A549细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪（FCM）PI单染检测AEA联用DDP对细胞周期的影响,以Annexinv／PI双染法检测AEA联用DDP对细胞凋亡的影响。结果AEA对肺癌细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量、时间依赖性。10,20μmol／L的AEA和1,2mg／L的DDP联合作用24,48,72h后,细胞增殖抑制率显著高于单用组;两药联用后诱导细胞凋亡的作用显著增强,AEA可使A549细胞阻滞于G2／M期。结论AEA及DDP对肺癌A549细胞的增殖具有显著的抑制作用,并可诱导细胞凋亡,在一定范围内呈量效关系,且两者联合应用具有相加或协同作用。     

冬凌草甲素诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡及其机制研究

目的:探讨冬凌草甲素(oridnin)对人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响。方法:利用MTT法检测oridnin对A549细胞增殖作用的影响;Hoechst33258染色观察给药后细胞形态改变;透射电镜观察给药后细胞超微结构改变;FITC-Annexin V/PI双标记检测细胞凋亡率。结果:Hoechst33258染色和透射电镜观察,oridonin给药后A549细胞出现空泡变性,染色质高度凝集;FITC-AnnexinV/PI双标记检测oridnin(25,50,100μmol/L)作用细胞48h后凋亡率分别为1.5%,6.2%,59.7%。结论:Oridonin对A549细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用。     

柚皮素诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的：研究柚皮素对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）观察柚皮素对A549细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33342染色后于倒置荧光显微镜下观察柚皮素对A549细胞形态的影响;通过Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测柚皮素对A549细胞诱导凋亡的作用。结果柚皮素可抑制A549细胞的增殖,且呈现时效、量效依赖关系;Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜下发现不同浓度柚皮素作用细胞48h后出现细胞核破裂、浓染,呈现明显的凋亡形态学特征;200μM、400μM 柚皮素作用细胞48h 后 A549细胞凋亡率分别为（12.15±2.14）%和（25.26±3.37）%。结论柚皮素可能通过诱导细胞凋亡从而发挥其抑制A549细胞增殖的作用。     

顺铂与氯霉素联用增强对人肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的体外观察顺铂和氯霉素对人肺腺癌A549细胞的相互作用。方法采用MTT法,利用中效原理判定联合应用顺铂及氯霉素对人肺腺癌A549细胞的效应。结果顺铂与氯霉素联用可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,两药单用和联用时随着药物浓度增加,其效应也增加;两药联用时的中效浓度明显小于两药单独使用时的中效浓度（顺铂减少43.8%,氯霉素减少79.1%）;两药大剂量合用时为拮抗效应（CI〉1）,小剂量合用时为协同效应（CI〈1）;并且两药合用时的效应与给药的时间先后次序无关（P〉0.05）。结论顺铂与氯霉素的联用可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,两药联用时的中效浓度较单用时明显减小;上述两种药合用时大剂量为拮抗,小剂量为协同;两药合用时的效应与给药的时间先后次序无关。     

辛伐他汀联合顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用

目的研究辛伐他汀联合顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L顺铂和3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L辛伐他汀对A549细胞增殖抑制率的影响;考察2.5μmol/L顺铂与3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L辛伐他汀联用对A549细胞增殖抑制作用的协同效果;Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测5μmol/L顺铂与25μmol/L辛伐他汀联合应用对对A549细胞凋亡率的影响;分光光度法检测辛伐他汀(25μmol/L)联合顺铂(2.5μmol/L)对A549细胞caspase-3活性的影响。结果辛伐他汀或顺铂对A549细胞的增殖有显著的抑制作用,随着浓度的增加、时间的延长,呈时间、剂量相关性,其抑制作用增强(P0.01)。顺铂(2.5μmol/L)与不同浓度(3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L)辛伐他汀联用对A549细胞的增殖有抑制作用,随着时间的延长,辛伐他汀剂量的增加,两者联用抑制作用呈增强的趋势(P0.01),2.5μmol/L顺铂联用辛伐他汀25μmol/L的抑制作用具有协同效果。25μmol/L辛伐他汀和2.5μmol/L顺铂能有效地诱导A549细胞的凋亡,而且两者联合使用可以显著增加A549细胞的凋亡率。25μmol/L辛伐他汀联合2.5μmol/L顺铂应可以显著增加A549细胞的caspase-3酶活性。结论辛伐他汀能够显著增强顺铂对A549细胞增殖抑制、诱导凋亡的作用,可能通过上调caspase-3活性诱导A549细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的探讨丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人肺腺癌A549作用及其可能作用机制。方法通过细胞形态学和MTT法观察TanⅡA对A549细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察细胞凋亡;采用荧光分光光度计检测细胞内钙及线粒体膜电位;RT-PCR检测Bad和MT-1A mRNA的表达。结果 TanⅡA能抑制A549细胞增殖,且随TanⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强,TanⅡA作用A549细胞24、48和72h的IC50分别为117.85、14.87和6.89μmol·L-1。TanⅡA作用A549细胞24h后,A549细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随TanⅡA剂量的增加,A549细胞凋亡百分率逐渐增大。TanⅡA作用后,A549细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达下调。结论 TanⅡA具有抗A549作用,其诱导细胞凋亡可能与钙依赖性通路和MT-1A表达下调有关。     

维生素C联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响

目的探讨维生素C（VC）联合顺铂（DDP）对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响。方法体外培养肺癌A549细胞,给予不同浓度（0.025、0.25、2.5 m M）VC联合5.0 mg·L^-1 DDP处理,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测A549细胞的增殖情况,采用Transwell实验检测A549细胞的侵袭能力,采用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测A549细胞的凋亡率。结果 VC与DDP联合用药可显著抑制A549细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,经VC与DDP联合处理的A549细胞,发生侵袭的细胞数目显著减少,细胞凋亡率显著升高。结论 VC与DDP联合用药可抑制肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的 探讨白藜芦醇（Res）对肺腺癌A549细胞凋亡的作用及其机制。方法 常规培养肺腺癌A549细胞（购于中国科学院细胞生物学研究所）至对数生长期,加入不同浓度的Res （终浓度分别为3、10、30、60、100、200、300 mg/L）,以Res 0 mg/L为对照组,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的Res对A549细胞的吸光度值,计算细胞的生长抑制率;采用Annexin-Ⅴ/PI双染法检测Res对肺腺癌A549细胞凋亡的影响;采用逆转录酶-聚合酶联反应（RT-PCR）检测端粒酶mRNA和β-actin mRNA的相对活性。结果 MTT检测显示Res呈剂量依赖性抑制A549细胞增殖。与对照组比较,不同浓度（10、30、100 mg/L） Res可抑制A549细胞增殖;Annexin-Ⅴ/PI检测结果显示,与对照组比较,随着Res剂量（10、30、100 mg/L）的增加,A549细胞的凋亡数升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,不同剂量Res （10、30、100 mg/L）诱导端粒酶mRNA相对含量明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 Res可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

黄芪多糖联合顺铂对人肺癌A549细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的：观察黄芪多糖与顺铂对人肺癌A549细胞增殖、细胞周期、诱导凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法采用四甲基偶氮唑盐法检测黄芪多糖、顺铂及两药联合对细胞增殖的影响;用流式细胞仪分析对细胞周期及凋亡率的影响;用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法检测对人肺癌A549细胞B细胞淋巴瘤-白血病2（Bcl-2）、Bcl相关X蛋白（Bax）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）基因表达水平的影响。结果黄芪多糖、顺铂及两药联合对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用呈时间-浓度依赖关系;与阴性对照组比较,黄芪多糖作用后可出现G1期细胞阻滞,顺铂作用后出现S期细胞阻滞,两药联合出现G1、S期细胞阻滞,差异均有统计学意义（P<0.01）。两药联合较阴性对照组及单用黄芪多糖、顺铂明显上调Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达,下调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论黄芪多糖可协同顺铂增强对人肺癌A549细胞的促凋亡作用,其作用机制与上调Bax、Caspase-3的表达、下调Bcl-2的表达有关。     

异鼠李素诱导A549细胞凋亡的研究

目的观察异鼠李素是否能诱导人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡及相关基因的变化。方法20μg/ml异鼠李素处理A549细胞,光镜电镜下观察细胞形态;进行集落形成实验,MTT法测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测凋亡峰及bax,bcl-2等凋亡相关基因的表达。结果10～640μg/ml异鼠李素可抑制A549细胞生长,抑制率有剂量依赖性。流式细胞仪检测20μg/ml异鼠李素处理后出现明显凋亡峰;药物可使bax表达上调,bcl-2表达明显下降,表达改变有浓度依赖性。结论异鼠李素可抑制A549细胞生长,诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用与凋亡相关基因抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,bax表达上调有关。     

Multi-walled carbon nanotubes induce oxidative stress and apoptosis in human lung cancer cell line-A549

Abstract

Multi-walled carbon-nanotubes (MWCNTs)-induced apoptotic changes were studied in human lung epithelium cell line-A549. Non-cytotoxic doses of MWCNTs were identified using tetrazolium bromide salt (MTT) and lactate dehydrogenase (LDH) release assays. Cells were exposed to MWCNTs (0.5–100 μg/ml) for 6–72 h. Internalization and characterization of CNTs was performed by electron microscopy. Apoptotic changes were estimated by nuclear condensation, DNA laddering, and confirmed by expression of associated markers: p⁵³, p^21WAF1/CIP1, Bax, Bcl₂ and activated caspase-3. MWCNTs induced the production of reactive oxygen species and malondialdehyde along with significant decrease in the activity of catalase and glutathione. MWCNTs-induced ROS generation was found not to be associated with the mitochondrial activity. In general, the changes were significant at 10 and 50 μg/ml only. Results indicate the involvement of oxidative stress and apoptosis in A549 cells exposed to MWCNTs. Our studies provide insights of the mechanisms involved in MWCNTs-induced apoptosis at cellular level.     

塞来昔布对人肺癌A549细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用观察

目的 体外研究选择性环氧化酶2 (COX-2)抑制剂塞来昔布对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT比色法)观察不同浓度的塞来昔布对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用,TUNEL染色检测细胞凋亡,并用含半胱氨酸的门冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)活性检测试剂盒检测其活性变化.结果 塞来昔布能够以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖,药物的Ic50为33.98 μmol·L-1;TUNEL染色分析显示给予不同浓度塞来昔布的细胞与未给予塞来昔布的细胞相比凋亡率有差异(P＜0.05),经塞来昔布处理的A549细胞内caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(P＜0.05).结论 塞来昔布能够抑制A549细胞增殖,并呈药物浓度依赖性;塞来昔布能以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡,其机制涉及caspase-3活化的信号转导途径.     

姜黄素对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的观察姜黄素对肺腺癌细胞A549生长的抑制作用,并探索其机制。方法四氮唑蓝法测定姜黄素作用于肺腺癌细胞A549的吸光值,计算细胞抑制率;流式细胞仪测定40μmol.L-1姜黄素或空白对照培养液的肺腺癌细胞凋亡率与凋亡相关蛋白Caspase-9表达;比色法测定凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-8表达;观察加用Caspase-9抑制剂后Caspase-3的表达。结果姜黄素对肺腺癌A549细胞有抑制作用,存在剂量依赖(r=0.619;P<0.01)与时间依赖(r=0.618;P<0.01);姜黄素对肺腺癌A549的凋亡率(30.25%)明显高于对照组(1.32%)(P<0.001);姜黄素组肺腺癌细胞A549的凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达明显高于对照组(P<0.001);姜黄素组加用Caspase-9抑制剂后Caspase-3表达明显下降,仍高于对照组(P<0.001)。结论姜黄素诱导肺腺癌A549细胞凋亡可能与激活Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3有关。     

藤茶双氢杨梅树皮素诱导人肺癌A549细胞凋亡及其机制研究

目的：探讨藤茶双氢杨梅树皮素（ampelopsin,APS）抗人肺癌A549细胞的作用。方法：以MTT法和集落形成法观察APS对人肺癌A549细胞的体外抑制作用;采用RT-PCR技术测定APS对人肺癌细胞株A549抑瘤基因p53表达的影响。结果：APS能明显抑制体外培养的A549细胞的生长,MTT法中IC50为9.8μg·mL^-1;细胞生长曲线法提示其对A549细胞的生长也有明显的抑制作用;集落形成试验中,当药物浓度为14.84,9.90,6.60,4.40μg·mL^-1时,抑制率分别为100%,91.6%,64.5%和23.4%;当浓度为25μg·mL^-1时,APS能显著增强p53基因的表达水平。结论：APS对体外培养的人肺癌A549细胞的生长有明显的抑制作用,对抑癌基因p53表达的影响是其抗肿瘤的作用机制之一。     

GSNO对人肺腺癌A549细胞的作用

目的：观察S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)对人肺腺癌A549细胞的作用,为GSNO作为药物来治疗肺癌提供依据。方法培养的A549细胞分别给予0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/L GSNO 5个剂量,并分别培养24、48、72 h,应用CCK8试剂检测IC50;应用CCK8试剂检测二硫苏糖醇(DTT)逆转GSNO作用的给药时间点;应用原位凋亡荧光检测试剂盒检测GSNO给药组和GSNO联合DTT给药组中A549细胞的凋亡情况。结果 GSNO分别处理24、48、72 h后检测,结果IC50分别为18.174、2.020、1.836 mmol/L;在GSNO给予20、40 min后给予DTT,结果OD值显著提高(P<0.05),因而确定DTT给药时间点为GSNO给药后20 min;GSNO给药组显示凋亡细胞大量增加,GSNO联合DTT给药组则逆转了A549细胞的大量凋亡。结论 A549细胞凋亡可能是GSNO抑制细胞生长的一个重要机制,GSNO诱导的A549细胞凋亡可能与巯基-亚硝基化修饰作用有关。GSNO能促使A549细胞凋亡,该过程对于人肺腺癌的治疗具有明显的指导意义。     

单用肝再生磷酸酶-3抗体或联合培美曲塞对人肺腺癌细胞A549凋亡的作用机制研究

目的 探讨单用肝再生磷酸酶-3(PRL-3)抗体或联合培美曲塞(Pem)对人肺腺癌细胞A549凋亡的作用机制.方法 将体外培养的A549细胞分为4组:PRL-3组(PRL-3抗体,164 ng·mL-1)、Pem组(Pem,180 ng·mL-1)、联合组(PRL-3抗体+Pem)、溶剂对照组(二甲基亚砜)和空白组(不...