柱前衍生化HPLC分析不同来源、不同生长年限铁皮石斛多糖的组成和含量

 目的 建立柱前衍生化HPLC分析不同种植基地、不同生长年限铁皮石斛多糖中单糖的组成和主要单糖的含量,并根据含量水平进行聚类分析及判别分析。方法 铁皮石斛药材用乙醇脱脂,沸水提取得到的铁皮石斛多糖,用3.0 mol·L-1盐酸水解,水解产物加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP进行衍生化,采用HPLC测定单糖衍生物;并利用SPSS16.0进行聚类分析及判别分析。结果 铁皮石斛多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成,不同生长年限、9个种植基地的13批铁皮石斛样品甘露糖的含量范围为19.65%~34.27%,均符合药典标准;并随着生长年限的增加,甘露糖含量降低。不同生长年限的铁皮石斛甘露糖与葡萄糖峰面积比差异较大。聚类分析将13批样品按生长年限聚成3类;并建立了判别函数,回判准确率100％。结论 铁皮石斛多糖中单糖的组成和主要单糖的含量结合化学计量学方法判别铁皮石斛的生长年限是切实可行的,该研究为铁皮石斛的质量评价和开发利用提供了实验依据。     

基于DNA条形码技术对喉红石斛的植物学分类研究

目的 利用DNA条形码技术探索喉红石斛Dendrobium christyanum的分类归属问题,并建立一种新的ITS2二级结构的信息挖掘方法。方法 提取分属5个组14种石斛的DNA,对ITS序列（ITS1-5.8 S-ITS2）进行PCR扩增,测序,获得ITS序列;基于序列信息,计算遗传距离、构建系统发育树,对ITS2的二级结构进行预测,并对其进行量化、聚类分析。结果 喉红石斛与黑毛组的矮石斛D.bellatulum、长距石斛D.longicornu的遗传距离最小,NJ系统发育树与ITS2二级结构的系统聚类图均显示喉红石斛与黑毛组石斛聚为一支,且喉红石斛与黑毛组石斛的二级结构图基本一致。结论 喉红石斛与黑毛组石斛的亲缘关系最近,应归属于黑毛组;新建立的ITS2二级结构量化分析方法可提供更多的分类信息,具有更高水平的分类潜能。这是首次运用DNA条形码进行石斛组间的分类研究,为石斛属植物系统提供了重要依据。     

反相高效液相色谱法测定石斛属植物中7种化学成分及主成分与聚类分析

目的 建立石斛7种化学成分反相高效液相色谱-紫外光谱（RP-HPLC-UV）检测方法,探寻21种石斛属植物中的化学成分组成差异联系,为石斛质量控制和资源开发提供参考。方法 采用Agilent 1200高效液相色谱仪,XDB-C₁₈色谱柱,进样量5 μL,根据不同化学成分选择流动相,采用SPSS 20.0软件进行主成分分析和聚类分析。结果 21种石斛中7种化学成分组成及含量差异明显,有10种石斛未检测出毛兰素,其余11种石斛种质中鼓槌石斛的毛兰素量显著高于其他种;12种石斛未检测出槲皮素,11种石斛未检测出没食子酸,4种石斛未检测出香草醛,1种石斛未检测出柚皮素,21种石斛均检测出丁香酸和香豆素成分,其中以尖刀唇石斛香豆素含量显著高于其他种;通过主成分分析显示21种石斛化学成分在三维空间分布散乱,在类间距离为5左右时才能将21种石斛聚为6类,因此不同的石斛种在这7种化学成分组成及含量上存在明显区别,在使用这7种成分表征药理药效功能时不同石斛应当区别对待。结论 建立的RP-HPLC-UV法检测7种化学成分能在石斛质量控制以及不同种质资源开发策略方面提供参考。     

星点设计-效应面法优选石斛酒润蒸制工艺

目的: 采用星点设计-效应面法优选优选石斛的酒润蒸制工艺。方法: 采用HPLC测定石斛碱含量,色谱条件为Diamonsil 钻石二代 C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-水(0.1%三乙胺)梯度洗脱(0~30 min,30%~80%乙腈;30~40 min,80%乙腈),流速1 mL·min^-1,检测波长240 nm,柱温30℃,进样量10 μL。利用UV测定石斛多糖含量,以白酒体积分数、白酒加入量、蒸制时间为自变量,石斛碱与石斛多糖含量的总评归一值为因变量,通过星点设计-效应面法优选石斛的炮制工艺。结果: 石斛碱线性范围0.336~3.36 μg(R²=0.999 8),精密度RSD 1.24%,重复性RSD 1.06%,平均加样回收率97.62%(RSD 1.45%);石斛多糖线性范围0.020 32~0.101 6 g·L^-1(R²=0.997 1),精密度RSD 1.71%,重复性RSD 1.90%。最佳炮制工艺为白酒体积分数48%,白酒加入量17%,蒸制时间6.78 h。石斛碱平均质量分数0.303%,预测值0.292%,相对偏差3.76%;多糖平均质量分数12.3%,预测值11.8%,相对偏差4.24%,建立的模型预测性良好。结论: 优选的石斛酒润蒸制工艺简便、稳定。     

5种不同石斛的多糖与氨基酸及甘露糖的含量比较

目的： 比较不同种石斛部分化学成分的差别。 方法： 采用苯酚-硫酸法测定样品中多糖含量,茚三酮显色法测定样品中氨基酸的含量,内标法测定样品中甘露糖的含量,通过定量测定,比较5种石斛中总多糖、氨基酸和甘露糖的含量差异。 结果： 5种不同种类的石斛中多糖、氨基酸、甘露糖的含量存在较大的差异。多糖含量,细茎石斛、金钗石斛、马鞭石斛相近,其中铁皮石斛明显高于其余4种石斛,鼓槌石斛明显低于其余的4种石斛;氨基酸含量,马鞭石斛高于其他4种石斛;甘露糖含量,铁皮石斛明显高于其余4种石斛。 结论： 5种不同石斛的总多糖、氨基酸和甘露糖的含量存在较大的差异,但就所含的相同化学成分总体而言铁皮石斛的质量好于其他4种石斛。     

铁皮石斛中的酚酸类及二氢黄酮类成分

 目的 研究铁皮石斛的化学成分。方法 利用硅胶、凝胶柱色谱及制备高效液相色谱等方法进行分离,根据光谱数据和理化性质鉴定其结构。并利用1,1-苯基苦基苯肼（DPPH）自由基清除实验评价分得的化合物的抗氧化活性。结果 从铁皮石斛的脂溶性部位分离得到了15个酚性化合物及2个二氢黄酮类化合物,分别鉴定为：N-p-香豆酰酪胺(1),反-N-(4-羟基苯乙基)阿魏酸酰胺(2),二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯(3),二氢阿魏酰酪胺(4),4-羟基-N-[2-(4-羟基苯基)乙基]苯丙酰胺(5),丁香酸(6),丁香醛(7),香草酸(8),对羟基苯丙酸(9),对羟基桂皮酸(10),阿魏酸(11),对羟基苯甲酸(12),灯盏花苷II(13),二氢丁香苷(14),3, 5-二甲氧基-4-羟基苯基-1-O-β-D-葡萄糖苷(15),柚皮素(16)及3′, 5, 5′,7-四羟基二氢黄酮(17)。其中化合物2、3、4、6、11及17具有抗氧化活性,但均弱于阳性对照抗坏血酸的活性。结论 化合物1~17均为首次在铁皮石斛中分离得到,化合物的活性强弱与结构之间存在一定的相关性。     

鼓槌石斛快繁育苗技术的研究

目的 寻找鼓槌石斛快繁育苗的有效途径。方法 采用组织培养和野生自然栖息的鼓槌石斛诱导高位腋芽萌发等途径进行探索。结果 在组织培养中,改良1/2MS培养基对原球茎形成效果最好,调整不同浓度的N、P、K及外源激素对诱导鼓槌石斛原球增殖、生根壮苗极为明显;外源激素对诱导鼓槌石斛的高位腋芽萌发无明显效果,高位芽萌发与茎株生理年龄和营养状况有关。结论 人工种植鼓槌石斛采用现代生物技术组培和腋芽繁殖是目前快繁育苗的最有效途径,不仅育苗量大、周期短,且生长快、成活率高,两条途径对于鼓槌石斛的产业化发展有重要意义。     

濒危紫皮石斛叶绿体基因组结构及系统发育分析

目的 解析紫皮石斛Dendrobium devonianum叶绿体基因组特征，并探讨石斛属系统发育关系。方法 采用Illumina技术对紫皮石斛进行测序，对其叶绿体基因组进行组装、注释和分析，并基于共有编码基因序列构建系统发育树。结果 紫皮石斛叶绿体基因大小为146 493 bp，总GC含量为37.4%；其大单拷贝区、小单拷贝区长度分别为84 932、13 036 bp，反向互补重复区为24 263 bp；共编码118个基因，包括72个蛋白质编码基因，38个tRNA基因和8个rRNA基因。密码子偏好分析表明，亮氨酸是紫皮石斛叶绿体基因组中使用频次最高的氨基酸。系统发育分析表明，紫皮石斛未形成单系，与兜唇石斛D.aphyllum构成姊妹关系；瘦轴组的重唇石斛D.hercoglossum和钩状石斛D.aduncum与石斛组其他物种聚为一支。结论 紫皮石斛叶绿体基因组呈典型四分体结构，其与兜唇石斛亲缘关系最近；瘦轴组的重唇石斛和钩状石斛与石斛组亲缘关系更近，并入石斛组更合理。     

霍山石斛F1代生长、有效成分和生理特性的研究

目的:比较研究霍山石斛的F₁代与其亲本的生长量、有效成分和生理特性等差别,探讨霍山石斛杂交利用的可能性,筛选保持较高有效成分且产量高的新资源。方法:测定霍山石斛F₁代与其亲本的生长量和有效成分,光合特性、内源激素含量和同工酶谱。结果:F₁代的光合面积大、叶绿素含量高、chla/b比值低,净光合速度高, 生长量高于亲本米斛,接近亲本铜皮石斛,产量略高于2亲本;同时保持较高有效成分,有效成分高于亲本铜皮石斛,接近亲本米斛。F₁代结合了2亲本的优点。结论:霍山石斛F₁代的生理特性和产量、品质得到极大改善,可以通过种间杂交的方法对霍山石斛进行种质改良。     

金钗石斛和铁皮石斛软腐病原菌的分离和鉴定

 目的 确定引起金钗石斛和铁皮石斛软腐病的病原菌,为制定高效、安全的防治措施提供依据。方法 采用普查和定点观察相结合对软腐病发病情况进行田间观察,采集两种石斛典型病株样本,按照柯赫氏法则对其病原菌进行分离、纯化、菌株鉴定及致病性测定。结果 在树皮为基质的苗床上软腐病在不同苗龄上均可发生,病原菌主要侵染幼嫩多汁的嫩芽和新枝,引起幼嫩茎叶的腐烂、萎焉和坏死等症状。通过对病原菌形态学观察,以及核糖体rDNA ITS序列分析,侵染石斛植株的2个分离菌株被鉴定为终极腐霉Pythium ultimum。致病性实验证明,这两个菌株为石斛软腐病的致病菌株。结论 金钗石斛和铁皮石斛是终极腐霉菌的自然寄主。     

西红花主要活性成分含量变异规律

目的： 提示西红花中主要活性成分的变异规律。 方法： 采用高效液相色谱法测定西红花苷含量,并分析了产地、施肥方式、采收时间、遮覆方式、叶形态特征、产量性状与西红花苷含量的关系。 结果： 不同产地种源、施肥方式、遮覆方式的西红花中西红花苷含量存在显著差异（P<0.05）,西红花苷含量与柱头重、种球重、叶片数、叶长呈负相关性,与采收时间没有显著的关系。 结论： 西红花主要活性成分含量存在一定的变异规律,覆草不遮阴、配合施用有机肥与无机肥有利于西红花苷含量积累,针对产量筛选优良品系时,应优先考虑在叶较长、叶片少的品系中选择,本文的研究为西红花优质栽培与优良品系筛选提供了依据。     

新疆3种植物不同提取部位的抗氧化活性及其对PTP1B的抑制作用

目的:考察新疆树莓、黑果悬钩子和天山茶藨不同萃取部位的抗氧化活性及其对蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)的抑制作用,筛选具有抗氧化及降血糖活性的有效部位。方法:采用甲醇提取、分步萃取的方法分别制备了不同的极性部位。测定了3种植物不同部位的总黄酮含量,果实提取物经AB-8型大孔树脂纯化后制备了果实花青素部位;利用2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐法,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼法及PTP1B抑制活性实验比较了不同部位的相关活性,并分析了黄酮含量和活性的相关性。结果:经AB-8型大孔树脂纯化后,树莓果实花青素含量由(12.72±0.14) mg·g^-1提高到(238.13±1.18) mg·g^-1,天山茶藨果实的花青素含量由(35.36±0.45) mg·g^-1提高到(548.05±1.11) mg·g^-1,随着花青素含量的升高,其抗氧化活性和PTP1B抑制活性也显著升高。黑果悬钩子茎乙酸乙酯部位总黄酮含量最高,为(658.65±11.43) mg·g^-1;黑果悬钩子茎水部位抗氧化活性最高,ABTS和DPPH自由基清除能力分别为(4.53±0.07),(2.82±0.09) mmol Trolox·g^-1当量;黑果悬钩子茎水部位对PTP1B的抑制率最高,半数抑制浓度为(0.08±0.01) mg·L^-1。结论:这3种植物不同萃取部位均具有良好的抗氧化活性和PTP1B抑制作用,黑果悬钩子茎水部位为主要的抗氧化活性和PTP1B抑制活性的有效部位,树莓和天山茶藨果实中花青素是主要的活性成分,天山茶藨茎叶中黄酮是主要的抗氧化活性成分。     

百蕊草地上茎分枝数量对其药材品质的影响

目的研究2龄级百蕊草Thesium chinense地上茎不同分枝数量对其药材品质的影响。方法以江苏句容、谷里、茅山等地野生2龄级百蕊草为材料,按照其根茎分枝数量划分为5个级别。其中1~3分枝为1级,4~6分枝为2级,7~9分枝为3级,10~20分枝为4级,20分枝以上为5级。采用HPLC法测定其有效成分量,同时结合其生长指标、产量等因素综合分析。结果不同分枝数量百蕊草之间的药材品质存在显著差异,其中5级分枝百蕊草单株干质量最高,可达5.710 6g,而1级分枝最低,为0.224 5 g,单株产量相差高达25.4倍;百蕊草植株内总黄酮量总体随分枝数量的增加而减少,其中1级分枝质量分数最高,为4.02%,显著高于其他级别。山柰酚量也随着分枝数的增大而减少,其中1级分枝量最高为3.38mg/g,显著高于4级分枝和5级分枝;在不同分枝级别中,百蕊草总黄酮和山柰酚之间为显著正相关关系。山柰酚与百蕊草根直径之间为显著负相关。结论百蕊草分枝数量对其药材品质影响较大,从外在品质考虑,百蕊草分枝数量越多其产量越高,且种子数量也越多,但其有效成分的量却越低。     

淫羊藿水分和灰分的近红外快速检测

目的建立基于近红外漫反射光谱的淫羊藿Epimedium Herba水分、灰分快速检测新方法,调查我国市售淫羊藿药材的水分、灰分量。方法采用标准正常化+去散射处理(SNV+D)进行散射校正,采用主成分分析(PCA)进行聚类分析,采用"2,4,4,1"方式进行数学处理,采用改进偏最小二乘法进行回归分析。结果建立的淫羊藿药材水分与灰分近红外定标模型预测效果较好,稳定性较高,水分与灰分的定标决定系数分别为0.884 3、0.938 7,交叉验证相关系数分别为0.8009、0.851 9,预测相关系数达到了0.9,剩余预测差超过了3.0。采用近红外分析方法首次测得我国市售淫羊藿药材水分合格率为100%,灰分合格率为82%。结论近红外分析方法具有快捷、精确、无损等优点,在淫羊蕾药材质量控制中具有参考意义。     

2种近缘中药翻白草和仙鹤草的化学成分和降血糖活性比较

翻白草Potentilla discolor和仙鹤草Agrimonia pilosa是蔷薇科(Rosaceae)2种近缘的药用植物,具有明确的降血糖活性,作为治疗糖尿病的中药材应用于临床。基于药用植物亲缘学(pharmaphylogeny)的理论,总结二者主要活性成分的生物合成途径,进而比较二者活性成分的共性及差异,并对物质基础与疗效之间的相关性进行总结。结果表明,2种近缘中药共有的生物合成途径占到60%,刺蒺藜苷、槲皮素等共有成分及翻白叶苷A、蔷薇酸等差异性成分同时也是活性成分,而特征成分及其量的差别可能引起功效及作用方式的不同。     

双向固体发酵对板蓝根和大青叶抑菌的增效作用初探

目的探讨25种不同食(药)用真菌菌株对板蓝根和大青叶的双向固体发酵的转化作用,得到具有较好抑菌作用的发酵菌质产物。方法经过板蓝根和大青叶平板初筛法和三角瓶复筛法,获得能在大青叶和板蓝根上生长的优势菌株;进一步通过抑菌实验和薄层色谱(TLC)实验,确定发酵得到的菌质产物的抑菌作用。结果复筛得到能够在板蓝根(灵芝11、灵芝13、灵芝7)和大青叶(灵芝2、灵芝11、灵芝3)上生长良好的菌株,其中含灵芝3和灵芝11的发酵液与空白对照相比具有较好的抑菌作用。TLC结果显示,灵芝2发酵大青叶的甲醇提取物有蓝色斑点为发酵后新增成分。结论板蓝根和大青叶经药用真菌进行双向固体发酵后能够有效提高其抑菌作用,而且有新物质产生。     

桃儿七茎部产鬼臼毒素类成分的内生真菌筛选及鉴定

目的:筛选和鉴定濒危藏族药桃儿七茎部产鬼臼毒素类成分的内生真菌,为保护桃儿七植物资源和发现新的天然活性菌株提供参考。方法:采用组织块法对桃儿七茎部的内生真菌进行分离,利用TLC和HPLC检测其代谢产物中的鬼臼毒素类成分,检测波长254 nm,流动相乙腈-水(40∶60)。采用形态学和分子生物学相结合的方法对产鬼臼毒素类成分的内生真菌进行鉴定。结果:共分离得到9株内生真菌,其中菌株J-1,J-2,J-3的发酵液中含有鬼臼毒素类成分,分别鉴定为Chaetomium globosum strain MF564,C.sp.4RF3和Pseudallescheria sp.T55。结论:从桃儿七茎中分离到3株产鬼臼毒素类成分的内生真菌,分别来源于2个新属的不同种菌株,为开发新绿色生物能源和实现内生真菌工业发酵生产鬼臼毒素类成分奠定了理论基础。     

婴幼儿支气管炎中药洗液质量稳定性研究

目的通过加速实验和长期实验,以婴幼儿支气管炎中药洗液中的主要药材麻黄及白芍的有效成分量作为主要考察指标,考察洗液的稳定性。方法根据婴幼儿支气管炎中药洗液药品质量标准指标,通过薄层色谱法鉴别样品中的麻黄、茯苓、白芍、枳壳、淫羊藿,HPLC法测定样品中麻黄(盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量)和白芍(芍药苷量)的有效成分量,平皿法检测样品中微生物的限度,并评定中药洗液样品的稳定性。结果洗液样品经加速和长期实验测定,性状为深褐色液体;均可检出麻黄、茯苓、白芍、枳壳、淫羊藿;麻黄和白芍的有效成分量分别高于0.18、0.72 mg/m L;需氧菌总数、霉菌酵母菌总数均未超过100 cfu/m L,均未检测出大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及金黄色葡萄球菌,符合质量标准规定。结论 3批婴幼儿支气管炎中药洗液的加速稳定性和长期稳定性良好,可为本品的包装、运输、贮存及有效期的制订提供必要依据。     

GC-MS技术分析红车轴草和白车轴草种子挥发性成分

目的:分析与比较红车轴草和白车轴草种子挥发性成分的差异。方法:采用顶空固相微萃取(HS-SPME)法萃取挥发性成分,结合气相色谱质谱联用(GC-MS)技术分析其组成,面积归一化法计算各成分的相对含量。结果:红车轴草种子中鉴定出46种化合物,挥发性成分总峰面积为3. 48×109。其中相对质量分数较高的化合物为1-辛烯-3-醇(30. 24%),正己醇(11. 94%),2,2,4,6,6-五甲基庚烷(11. 00%),壬醛(7. 74%),辛醛(6. 79%)和己酸(6. 04%)。白车轴草种子中鉴定出44个化合物,挥发性成分总峰面积为6. 37×109。其中相对质量分数较高的化合物为1-辛烯-3-醇(42. 98%),十七烷(14. 47%),3-辛醇(9. 42%),己酸乙烯酯(8. 82%)和5-甲基-4,6-二羟基嘧啶(6. 59%)。红车轴草和白车轴草种子共有20种成分相同,但各成分的含量具有较大差异。1-辛烯-3-醇为共有成分中含量最高的物质。红车轴草种子有26种特有成分,占挥发性组分的54. 85%。白车轴草种子有24种特有成分,占挥发性组分的46. 79%。结论:红车轴草和白车轴草种子中含有较为丰富的挥发性成分,两品种之间挥发性成分的种类、峰面积和相对含量具有较大差异。     

影响巫山淫羊藿品质的施肥指标体系构建

目的建立N、P、K施肥量与巫山淫羊藿Epimedium wushanense品质的回归模型,探索巫山淫羊藿的最佳施肥方案。方法采用3因素4水平设计施肥方案,布置巫山淫羊藿N、P、K肥料效应实验,并对实验数据进行整理与统计分析。结果建立了N、P、K肥配施效应模型与巫山淫羊藿产量和质量之间的关系,并对各因子之间的交互作用进行了分析,对模型进行了优化。在不同施肥措施中N_2P_2K_2处理效果最佳,不施或者少施N、P、K中的任何一种养分均不同程度导致巫山淫羊藿减产和质量下降;单因子效应分析表明,随着N、P和K施肥量的提高,产量和有效成分的量呈先升后降的趋势;双因素交互效应分析表明,以巫山淫羊藿产量为考察对象,N、P、K肥间相互作用都存在一个值域,低于这个值域时都表现为协同促进作用,高于这个值域时则都表现为拮抗作用;以淫羊藿苷和朝藿定C的量为考察对象,N、K和P、K肥间相互作用存在一个值域,有效成分的量表现出与产量相同的趋势。结论模型优化结果表明,大阳实验适宜的N、P、K肥施用量分别为224.154~269.461、176.324~214.651、152.624~197.354 kg/m~2。