阿司匹林对缺氧/缺糖大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响

目的观察大鼠皮质神经元细胞在缺氧/缺糖(OGD)时线粒体膜电位(MMP)的变化及阿司匹林的保护作用。方法取体外培养7d的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为正常对照组、缺氧/缺糖模型组、缺氧/缺糖加阿司匹林组。缺氧/缺糖2h后在常氧下继续培养24h。流式细胞术检测不同时间段神经元细胞线粒体膜电位。结果缺氧/缺糖损伤2h,缺氧/缺糖组线粒体膜电位水平较正常对照组显著降低(P<0.01)。缺氧/缺糖加阿司匹林组皮质神经元细胞在缺氧2h及再复氧24h后细胞线粒体膜电位明显高于缺氧/缺糖模型组(P<0.01)。结论阿司匹林可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。     

sRAGE对缺氧/复氧大鼠心肌细胞线粒体膜电位的影响

目的观察可溶性糖基化终产物受体(sRAGE)对缺氧/复氧(H/R)大鼠心肌细胞线粒体凋亡途径的影响。方法取大鼠心肌细胞培养72 h,以缺氧3 h、复氧2 h复制H/R模型,实验分为4组:对照组、对照+sRAGE组、H/R组、H/R+sRAGE组。以荧光探针JC-1方法检测线粒体膜电位,酯化钙黄绿素和氯化钴共孵育测定线粒体通透性转换孔(mPTP)开放,Western blot方法检测心肌细胞凋亡。结果与对照组比较,H/R组mPTP开放增多,线粒体膜电位去极化程度增加,凋亡率升高(P均<0.05);与H/R组比较,H/R+sRAGE组mPTP开放减少,线粒体膜电位去极化程度减轻,凋亡率下降(P均<0.05)。结论 sRAGE可通过抑制线粒体凋亡途径,拮抗心肌H/R损伤。     

缺氧对肺动脉血管内皮细胞线粒体膜电位的影响及Ghrelin的保护作用

目的观察缺氧对人肺动脉血管内皮细胞线粒体膜电位(MMP)的影响及Ghrelin的保护作用。方法将培养的人肺动脉血管内皮细胞分为对照组、单纯缺氧组和缺氧+Ghrelin组。应用激光共聚焦显微镜扫描,并测定标记的人肺动脉血管内皮细胞每秒钟MMP值;采用硝酸还原酶法和放射免疫分析技术检测人肺动脉血管内皮细胞上液中一氧化氮(NO)和内皮素(ET-1)含量。结果与对照组相比,单纯缺氧组MMP水平显著降低(P<0.05);与单纯缺氧组相比,缺氧+Ghrelin组内皮细胞MMP水平显著升高(P<0.05),缺氧+Ghrelin组与对照组内皮细胞MMP水平差异不明显(P>0.05)。单纯缺氧组上清液NO含量明显低于对照组(P<0.05),缺氧+Ghrelin组上清液NO含量明显高于单纯缺氧组(P<0.05)。单纯缺氧组上清液ET-1含量明显高于对照组(P<0.05),缺氧+Ghrelin组上清液ET-1含量明显低于单纯缺氧组(P<0.05)。结论缺氧引起人肺血管内皮细胞MMP降低,Ghrelin可抑制缺氧损伤所致MMP降低;同时Ghrelin还可以促进人肺血管内皮细胞释放NO,抑制缺氧引起的ET-1高释放。     

NMDA受体激动剂对大鼠海马CA1区神经元膜电位影响的研究

缺血缺氧可引起神经元细胞膜电位发生改变，表现为缺血缺氧早期细胞膜超极化，随后细胞膜发生缓慢去极化及快速去极化，最终导致神经元细胞的膜电位维持或接近零水平，即持续去极化。1997年Tanaka等研究发现，大鼠离体海马脑片CAl区神经元一旦发生快速去极化，即使及时给予氧及葡萄糖，其膜电位也不能恢复至正常水平，     

促红细胞生成素(EPO)对新生大鼠心肌细胞缺氧-复氧模型线粒体膜电位的影响

目的 观察EPO对培养的新生大鼠心室肌细胞缺氧-复氧后线粒体膜电位影响,探讨其对缺氧心肌细胞能量代谢的保护作用。方法 培养新生大鼠心室肌细胞分成缺氧组和促红细胞生成素（EPO）组。每组根据缺氧-复氧时间分为5个亚组,检测各组细胞线粒体膜电位变化。结果 缺氧-复氧后,缺氧组各时间点线粒体膜电位均较未缺氧时下降,但单纯缺氧期下降较缓;复氧后,缺氧组各时间点的膜电位均低于缺氧前;EPO组只在缺氧2h-复氧2h时下降显著;缺氧-复氧后同一时间点两组间比较,EPO组在复氧后的各时间点均高于缺氧组。结论 早期应用EPO可明显减轻心室肌细胞缺氧／复氧后线粒体膜电位的下降,促进膜电位的快速恢复,从而改善缺氧心肌细胞的能量代谢。     

滋补脾阴法对糖尿病脑病大鼠皮质线粒体膜电位和活性氧的影响

目的研究滋补脾阴法改善大鼠糖尿病脑病及其线粒体相关机制。方法 SD大鼠分为对照组,糖尿病脑病组(DM组),滋补脾阴组(ZBPYR组),健脾益气组(BZYQ组)和滋补肾阴组(LWDH组)。水迷宫评价学习记忆能力,JC-1和DCFH标记法检测线粒体膜电位(△Ψm)高低、活性氧(ROS)含量。结果 ZBPYR组水迷宫潜伏期低于DM组(P0.01),BZYQ和LWDH组与DM组无统计学差异ZBPYR组△Ψm高于DM组(P0.05),BZYQ和LWDH组△Ψm较DM组无统计学意义;DM组ROS高于ZBPYR组(P0.05),与BZYQ和LWDH组相比无统计学意义。结论ZBPYR提高△Ψm,降低ROS改善糖尿病脑病大鼠皮质线粒体功能,提高认知能力。     

醌氧化还原酶2下调对大鼠主动脉平滑肌细胞线粒体膜电位的影响

目的研究醌氧化还原酶2(NQO2)下调对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMCs)线粒体膜电位的影响。方法将RASMCs分为3组:野生型组、阴性对照组和NQO2下调组。利用RNA干扰技术下调体外培养的RASMCs中NQO2,采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)渗入法检测细胞增殖,用阳离子染料JC-1标记RASMCs线粒体内膜并检测线粒体膜电位,试剂盒法检测总超氧化物歧化酶(SOD)活性和细胞色素C水平。结果在野生型组、阴性对照组和NQO2下调组中,Brd U阳性细胞比率分别为(18.94±1.43)%,(18.29±0.92)%和(9.21±1.42)%,NQO2下调组的细胞增殖明显被抑制(P0.01);3组细胞经JC-1标记后红色/绿色荧光比值分别为15.48±0.41,15.96±0.52和13.58±0.12,NQO2下调组细胞线粒体膜电位明显下降(P0.01)。细胞色素C水平在3组细胞中分别为(9.62±0.29)ng/L,(9.36±0.07)ng/L和(15.83±0.83)ng/L,NQO2下调组明显升高(P0.01)。结论 NQO2的下调可降低RASMCs线粒体膜电位,致细胞色素C释放增加,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,发挥抗动脉粥样硬化作用。     

碘过量对大鼠甲状腺细胞线粒体超氧化物生成和膜电位的影响

目的 探讨碘过量对Fisher大鼠甲状腺细胞(FRTL)线粒体超氧化物生成和膜电位(△ψ)的影响.方法 FRTL细胞分别以10-4mol/L碘化钾(KI)、10 U/L促甲状腺素(TSH)、10-4mol/L KI+10 U/L TSH 处理24 h,利用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测FRTL细胞增殖情况,利用MitoSOX探针通过活细胞影像法检测线粒体超氧化物生成,利用罗丹明123(rh123)通过荧光分光光度计检测△ψ的变化.结果 细胞增殖情况,KI组(0.794±0.144)明显低于对照组(1.000±0.183,P<0.05),TSH组(1.215±0.156)明显高于对照组(P<0.05),KI+TSH组(1.025±0.254)与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),但明显高于KI组(P<0.05);细胞MitoSOX平均荧光强度(MFI),KI组和KI+TSH组(18.16±6.57、13.33±2.92)明显高于对照组(9.74±3.24,P均<0.05),TSH组(6.64±2.15)明显低于对照组(P<0.05),但KI+TSH组明显低于KI组(P<0.05);细胞rh123 MFI,KI组和KI+TSH组(210 593±31 328、295 525±34 243)明显低于对照组(407 824±37 198,P均<0.05),而KI+TSH组明显高于KI组(P<0.05),TSH组(411 187±72 852)与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 碘过量(10-4mol/L KI)能造成FRTL细胞线粒体过氧化损伤,抑制细胞增殖,10 U/L TSH能够促进FRTL细胞增殖,减轻碘过量对FRTL细胞线粒体的过氧化损伤.     

碘过量对大鼠甲状腺细胞线粒体超氧化物生成和膜电位的影响

Objective To investigate the effects of iodine excess on mitochondrial superoxide production and mitoehondrial membrane potential(△ψ)changes in Fisher rat thyroid cell line(FRTL)cells.Methods FRTL cells were treated with 10-4mol/L potassium iodine(KI),10 U/L thyrotropin(TSH),10-4 mol/L KI+10 U/L TSH respectively for 24 h.Effects on cell proliferation were assayed by methyl thiazolyl tetrazolium(MTT)colorimetric method.Changes of mitochondrial superoxide production and △ψ were measured by live cell imaging and spectrofluorometer using MitoSOX and rhodamine 123(rh123)respectively.Results Absorbance(A)in the KI group (0.794±0.144)showed a significant decline compared to the control group(1.000 ±0.183,P<0.05),whereas a significant elevation was observed in the TSH group(1.215±0.156,P<0.05).No significant differences was found between the KI+TSH group(1.025±0.254)and the control group(P>0.05),but the former was marked higher than the KI group(P<0.05).Compared to the control group(9.74±3.24).MitoSOX mean fluorescence intensity (MFI)in the KI and KI+TSH groups(18.16±6.57,13.33±2.92)were significantly increased(all P<0.05),which was a significant decline in the TSH group(6.64±2.15,P<0.05).MitoSOX MFI in the KI+TSH group was lower than the KI group(P<0.05).Rh123 MFI in the KI and KI+TSH groups(210 593±31 328,295 525±34 243)showed significant decline than the control group(407 824±37 198,all P<0.05).Compared with the KI group.the KI+TSH group pronouncedly attenuated the reduction of Rh 123 MFI(P<0.05).No significant differences of Rh 123 MFI were found between the TSH group(411 187 ± 72 852) and the control group(P > 0.05). Conclusion Iodine excess (10-4 mol/L KI) may lead to peroxide damage on the mitochondria of FRTL cells, and cell proliferation is inhibited. Combining treatment with 10 U/L TSH may attenuate mitochondrial peroxide damage and inhibition of cell proliferation caused by iodine excess.     

三氧化二砷对肝癌Mahlavu细胞内线粒体跨膜电位的影响

[目的]探讨三氧化二砷（As2O3）作用于肝癌细胞后对其增殖抑制及线粒体跨膜电位（△Ψm）的影响。[方法]用As2O3作用于体外培养人肝癌Mahlavu细胞，用MTT法检测As2O3对人肝癌Mahlavu细胞增殖的影响，并用流式细胞仪观察As2O3对人肝癌Mahlavu细胞△Ψm的影响。[结果]MTT检测显示As2O3能明显抑制人肝癌Mahlavu细胞的增殖，并呈时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析显示As2O3作用后的人肝癌Mahlavu细胞内△Ψm明显降低（P〈0．01），并呈时间和剂量依赖性。[结论]As2O3可降低人肝癌Mahlavu细胞△Ψm并可由此诱导细胞凋亡而抑制其增殖。这可能也是As2O3诱导肝癌Mahlavu细胞凋亡的机制之一。     

纳洛酮对缺血再灌注海马细胞线粒体功能保护作用的研究

目的观察缺血再灌注期间海马细胞内游离钙离子、线粒体膜电位的变化以及纳洛酮对细胞的保护作用。方法20只新西兰大白兔随机分成4组对照组、缺血组、再灌注组、纳洛酮组,每组5只,然后以荧光染色流式细胞仪检测各实验组海马细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位的变化。结果缺血组、再灌注组海马细胞内游离钙离子浓度显著高于对照组和纳洛酮组;其线粒体膜电位则低于对照组和纳洛酮组;再灌注组游离钙离子浓度明显高于缺血组;其线粒体膜电位则低于缺血组;对照组与纳洛酮组间各指标无显著差异。结论纳洛酮对缺血再灌注引起的海马细胞内钙离子浓度升高有抑制作用,对线粒体膜电位下降有一定的保护作用。     

Cerebral cortical capillary basement membrane thickening in galactosaemic rats

Summary Wistar-Kyoto rats fed a diet containing 30% by weight galactose for 15–21 months developed significant thickening of the endothelial basement membranes of capillaries from the frontal cortex of the cerebrum, by comparison with cerebral capillary basement membranes from animals on a standard diet (p<0.001), or animals receiving a diet containing 30% galactose together with 250 mg/kg diet of the aldose reductase inhibitor, Sorbinil (0.001<p<0.01). The effect was similar to that which we have reported previously in the retinal capillaries of these animals. Spontaneously hypertensive rats on the high-galactose diet showed modest cerebral capillary basement membrane thickening (0.02<p<0.05) only for one of the measurement protocols utilised, and the process was not prevented by Sorbinil. Biochemical assays of retina, cerebral cortex, and blood serum from Wistar-Kyoto and spontaneously hypertensive rats maintained on the Sorbinil regimen showed that the drug did cross the blood-retinal and blood-brain barriers. Similar to our previous study on the retinal capillaries, we observed no degeneration of pericyte or endothelial cell cytoplasm, and no alteration in the pericyte/endothelial cell nuclear ratio in the cerebral capillaries of galactosaemic animals, by comparison with controls. Based on immunocytochemical studies in the human retina, it has been claimed that aldose reductase is present in capillary pericytes but absent in the endothelial cells. However, we observe a considerably smaller pericyte/ endothelial cell nuclear ratio in the capillaries of the cerebral cortex of the rat, by comparison with those of the retina. Also, pericyte coverage of the cerebral cortical capillaries is much less than that of the retinal capillaries of these animals. Therefore, it appears that the biochemical process(es) responsible for basement membrane thickening are unlikely to reside within the pericytes.     

血管内皮细胞在传代中的衰老与线粒体膜电位的变化

目的探讨血管内皮细胞在传代过程中的衰老过程及机制。方法新鲜人脐静脉内皮细胞体外培养,免疫组织化学鉴定;电镜观察细胞结构;流式细胞术检测传代细胞周期;特异染料法检测细胞线粒体膜电位,流式细胞仪分析。结果在传代过程中,细胞结构逐渐退化。随着传代次数的增多,细胞从DNA合成前期进入DNA合成期的比例逐渐降低,从DNA合成后期进入分裂期的比例逐渐增加。其中,处于静止期和DNA合成前期的细胞由第2代的74.17%增加至第8代的88.80%,处于DNA合成期的细胞由第2代的20.04%降低至第8代的7.95%。细胞增殖指数由第2代细胞的25.83%降低至第8代细胞的11.41%。代表线粒体膜电位的平均荧光强度逐步降低。结论内皮细胞传代过程中,细胞结构退化,细胞生长渐趋停滞,出现衰老特征。线粒体膜电位降低,线粒体功能下降,可能是细胞衰老的机制之一。     

线粒体TOM系统在心血管疾病中的研究现状

线粒体内稳态的维持与其内部蛋白密切相关,而绝大多数蛋白进入线粒体内部发挥作用均需通过线粒体的线粒体外膜转位酶(translocase of the outer mitochondrial membrane,TOM)系统的转运。研究表明,线粒体TOM系统相关组成亚基Tom70、Tom20和Tom40等参与了心血管疾病的发生发展,这为我们从线粒体蛋白水平研究心血管疾病的机制及开发新的治疗措施提供了思路。本文针对线粒体TOM系统在心血管相关疾病(如心肌缺血/再灌注、高血压及心功能衰竭)方面的研究现状进行了综述。     

氟桂利嗪对体外培养海马神经元缺血缺氧损伤的影响及其机制的初步研究

目的　利用氟桂利嗪 (FNZ)研究钙离子拮抗剂对体外培养海马神经元缺血缺氧损伤的作用及其作用机制。方法　利用体外培养的海马神经元 ,通过去除培养液中的糖和氧气来模拟脑缺血缺氧 ,观察不同浓度FNZ对缺血缺氧海马神经元的形态学、乳酸脱氢酶 (LDH)和细胞存活率的影响 ,并观察FNZ对Bcl 2、BDNF蛋白表达的影响。结果　在一定浓度范围之内 ,FNZ可对缺血缺氧神经元起到保护作用 ,过高浓度不但没有保护作用 ,反而加重损伤。缺血缺氧可使Bcl 2蛋白表达明显下降 ,BDNF蛋白表达明显上升 ,FNZ(5 0 μmol/L)可使缺血缺氧神经元Bcl 2表达明显升高 ,BDNF表达下降。结论　在一定浓度范围之内FNZ可保护缺血缺氧神经元 ,可能与诱导Bcl 2蛋白表达和抑制BDNF蛋白表达有关 ;过高浓度FNZ有可能存在某种潜在毒性。     

间歇低氧对大鼠海马神经细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的通过模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的发病特征,建立大鼠间歇性低氧(IH)模型,观察IH后大鼠海马CA1区神经细胞线粒体自噬及相关蛋白的表达。方法 72只雄性Wistar大鼠随机分为对照组36只和间歇低氧(5%IH)组36只,对照组向低氧箱内持续注入压缩空气,5%IH组每天放入低氧箱内IH暴露7h,模型完成后分别于1、3、5、7、10和14d采用透射电镜观察大鼠海马CA1区神经细胞线粒体超微结构的改变;免疫组织化学法检测Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达。结果与对照组比较,5%IH组3d开始出现线粒体超微结构的明显改变,可见线粒体自噬体形成;1、3、5、10和14dBeclin-1及LC3蛋白表达均明显升高(P<0.05),于10d达高峰(P<0.05),14d开始下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IH早期可诱导大鼠海马神经细胞线粒体发生自噬及自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达。     

氟桂利嗪对原代培养大鼠皮质神经元钠离子通道电流的影响

目的探讨氟桂利嗪对大鼠皮质神经元电压门控钠离子通道电流的影响及机制。方法选择孕17¹8d SD胎鼠培养皮质神经元,应用全细胞记录式膜片钳技术记录神经元钠离子通道电流,先加入0.1、1.0、10.0和100.0μmol/L氟桂利嗪刺激,后续实验使用1μmol/L氟桂利嗪刺激,比较加药前后钠电流相关曲线的变化。结果 0.1、1.0、10.0和100.0μmol/L氟桂利嗪对峰值电流抑制率分别为(14.70±4.39)%,(43.48±3.21)%,(61.91±7.41)%和(77.01±5.80)%,差异有统计学意义(P<0.05),氟桂利嗪达到半数最大抑制率时的药物浓度为0.94μmol/L。与加药前比较,加药后钠电流失活曲线向超极化方向移动了17.03mV;钠通道复活时间常数由(7.51±0.05)ms增至(19.46±0.03)ms,差异有统计学意义(P<0.05);10Hz、50Hz脉冲频率下,加药后钠电流较加药前减少幅度分别为[(21.63±7.36)%至(9.44±5.13)%]和[(45.83±10.04)%至(12.56±6.72)%,P<0.05]。结论氟桂利嗪对皮质神经元钠电流的抑制效应,或能解释其预防偏头痛发作的另一可能机制。     

右美沙芬对培养海马神经元缺氧损伤的保护作用及对Bcl-2表达的研究

目的　观察谷氨酸NMDA受体拮抗剂右美沙芬对体外培养海马神经元缺氧损伤的保护作用及对Bcl 2表达的影响。方法　以不同浓度 (10、5 0及 10 0 μmol L)的右美沙芬处理培养的大鼠海马神经元 ,10min后给予缺氧处理4h。停止处理后 2 4h ,以细胞存活率、乳酸脱氢酶 (LDH)流出量和Bcl 2免疫阳性细胞表达为指标进行观察。结果与正常对照组比较 ,缺氧损伤使细胞存活率下降、LDH流出量增加、Bcl 2免疫阳性细胞减少 (P <0 .0 5 ) ;而右美沙芬组与缺氧组相比细胞存活率改善、LDH流出量减少、Bcl 2免疫阳性细胞增加 (P <0 .0 5 )。结论　右美沙芬对体外培养海马神经元缺氧损伤具有保护作用 ,其机制可能与阻止由损伤引起的Bcl 2蛋白表达下调有关。     

Expression of mitochondrial uncoupling protein 3 and adenine nucleotide translocase 1 genes in developing rat heart: putative involvement in control of mitochondrial membrane potential

Postnatal maturation of the heart depends on the switch from glycolytic to oxidative metabolism and it is associated with decreasing tolerance to oxygen deprivation. Therefore, changes in composition and function of cardiac mitochondria during postnatal development require detailed characterization. Left-ventricular myocardium of prenatal, and 1-, 2-, 5-, 10-, 20-, 28-, 50-, 60-, and 90-d-old male Wistar rats was studied. The expression of uncoupling proteins (UCPs), adenine nucleotide translocase (ANT), and peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) genes was characterized by northern blotting (UCP2), real-time quantitative RT-PCR (UCP2, UCP3, ANT1, ANT2, and PPARalpha), and by immunoblotting (UCP3). In isolated mitochondria, cytochromes a + a(3) were quantified by a spectrophotometry, and mitochondrial membrane potential (MMP) was measured using Rhodamine 123 (by spectrofluorimetry and flow cytometry). The specific content of cytochromes in mitochondria increased two-fold between birth and day 30, similarly, as the expression of ANT1 and PPARalpha genes. Postnatal activation in the expression of UCP2, UCP3, ANT1 and PPARalpha genes resulted in the expression maxima between days 20 and 30. The content/expression declined following day 20 (UCP2, UCP3, and PPARalpha) or 30 (cytochromes and ANT1), while expression of ANT2 declined continuously during the first month of life. In 1-d-old animals a single population of mitochondria with a relatively high MMP was observed; with increasing age, a second population of mitochondria with a significantly lower MMP appeared. The results support the view that mitochondrial energy conversion in heart changes during ontogeny and suggest the involvement of UCP3 and/or ANT1 in the control mechanism.