大麻制剂HU210对实验性急性胰腺炎的干预作用及其与Toll样受体4信号通路的可能关系

目的:研究大麻类制剂HU210对雨蛙肽(caerulein,CAE)诱导的野生型(wild-type,WT)和Toll样受体4基因敲除(tlr4~(-/-))小鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的干预作用,并探讨其作用机制。方法:将成年C57BL/10J小鼠及相同背景的tlr4~(-/-)小鼠各随机分成3组:AP组、AP+HU210组及正常对照组。小鼠腹腔注射CAE(50μg·kg~(-1)·h~(-1))6次及脂多糖(10 mg/kg)1次复制AP模型;AP+HU210组在造模前及造模后各腹腔注射1次HU210(50μg/kg);对照组注射生理盐水替代CAE和脂多糖。造模处理后3 h,取血处死小鼠,取胰腺、肺组织及肠道Peyer’s结。结果:与对照组相比,无论在WT或tlr4~(-/-)小鼠,AP造模后胰腺病理评分,血浆淀粉酶活性,血浆IL-6、TNF-α及MCP-1水平,以及肺MPO活性均明显升高(P0.05),P38蛋白表达明显上调(P0.05)。同时,AP造模后,与WT小鼠相比,tlr4~(-/-)小鼠血浆IL-6、TNF-α及MCP-1水平,以及胰腺P38及p-P38蛋白表达均明显降低(P0.05),Peyer’s结CD3~+、CD4~+T淋巴细胞百分比及CD4~+/CD8~+比值明显降低(P0.05)。HU210干预使2种小鼠AP模型的胰腺病理学评分和肺MPO活性的升高明显得到改善(P0.05);在WT小鼠,而非tlr4~(-/-)小鼠,AP引起的血浆淀粉酶活性和胰腺P38及p-P38蛋白表达的变化在HU210干预后明显逆转(P0.05)。结论:TLR4主要参与AP全身炎症反应,其机制可能依赖TLR4-P38 MAPK信号通路;大麻制剂HU210对AP的干预主要通过抑制炎症细胞的浸润发挥组织保护作用,与TLR4信号通路的关系似乎不明显。     

清胰汤对L-精氨酸诱发的重症急性胰腺炎小鼠胰腺p-STAT3表达的影响

目的: 观察L-精氨酸(L-Arg)诱发的重症急性胰腺炎小鼠胰腺组织p-STAT3表达的变化,以及清胰汤对p-STAT3表达的影响,从而探讨STAT3在急性胰腺炎中的作用和清胰汤治疗急性胰腺炎的机制。方法: 健康雄性成年昆明种小鼠30只,随机分为3组(n=10):对照组、模型组和清胰汤组。除对照组外,其余各组给予腹腔注射20 % L-精氨酸(3 g/kg,间隔1 h再注射1次);清胰汤组在第2 次腹腔注射20 %L-Arg 30 min 后给予清胰汤浓缩液灌胃(10 mL/kg),之后每天灌胃2次。在造模后72 h麻醉处死动物检测血清淀粉酶活性;取胰腺组织计算胰腺湿重比,HE染色观察胰腺病理学改变;取肺组织匀浆检测髓过氧化物酶(MPO)的活性,HE染色观察肺病理学改变; Western blotting及real-time PCR分别检测胰腺组织p-STAT3蛋白及单核细胞趋化蛋白-1(MCP－1)mRNA的表达变化。结果: L-Arg诱发急性胰腺炎72 h后,血清淀粉酶活性明显升高、胰腺湿重比增加、肺组织MPO显著增加,与对照组比较差异显著(P<0.05);而清胰汤组血清淀粉酶的活性、胰腺湿重比、MPO水平明显降低,与模型组相比差异显著(P<0.01);模型组72 h胰腺及肺可见明显病理损伤,胰腺组织p-STAT3蛋白及MCP-1 mRNA的表达明显增强;清胰汤治疗组胰腺及肺病理损伤减轻,胰腺组织p-STAT3蛋白及MCP-1 mRNA的表达减少。结论: L-Arg诱发的重症急性胰腺炎小鼠胰腺组织STAT3蛋白表达明显增加,STAT3活化可能参与了L-Arg诱发的急性胰腺炎进展;抑制胰腺STAT3活化是清胰汤治疗急性胰腺炎的作用机制之一。     

小鼠对雨蛙肽诱发急性胰腺炎易感性的品系差异

目的: 小鼠是常用于胰腺炎研究的模式动物。然而不同品系的小鼠似乎对胰腺炎有着不同的易感性,但缺乏系统的对比研究。我们因此比较了C57BL/6J、BALB/c和ICR 小鼠对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎易感性的差异。方法: 2月龄C57BL/6J、BALB/c和ICR雌鼠各12只,随机分为实验组(n=6)和对照组(n=6)。实验组予以腹腔注射雨蛙肽(50 μg/kg),每小时1次,共注射7次;对照组同法注射等量生理盐水。分别于第1次注射后的0、3、6、9、12、24 h取小鼠血浆,并于24 h处死小鼠取其胰腺组织。测定各组小鼠的血浆淀粉酶和脂肪酶活性;观察其胰腺组织的病理形态学改变程度及炎症因子表达水平。结果: 雨蛙肽诱导胰腺炎后,BALB/c和ICR小鼠的血浆淀粉酶和脂肪酶水平较C57BL/6J小鼠升高更为显著;C57BL/6J小鼠与其它2种品系的小鼠相比,其胰腺病理形态学改变程度较轻,胰腺组织炎症因子表达水平也较低。结论: BALB/c和ICR小鼠对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎的敏感性比C57BL/6J小鼠高。这一结果对急性胰腺炎研究中小鼠品系的合理选择具有指导意义。     

葡萄多酚对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎胰腺组织的保护作用

 目的:研究葡萄多酚对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎（AP）的保护作用。方法: 2月龄ICR雌鼠共21只,随机分为正常对照组（NC组）、AP模型组（AP组）和药物处理AP组,每组7只。造模前,药物处理AP组小鼠连续7 d胃内灌注葡萄多酚（1.5 g/kg）水溶液,NC组和AP组小鼠则以同法给予生理盐水作为对照。第7天开始造模。AP组以及药物处理AP组小鼠予以腹腔注射雨蛙肽(50 μg/kg)造模,每小时1次,共注射7次;NC组小鼠同法注射等量生理盐水。于24 h处死小鼠取其胰腺及肺组织。测量各组胰腺组织的相对重量、病理形态学改变、巨噬细胞的浸润情况及炎症因子、氧化应激分子的表达水平;检测肺脏组织的髓过氧化物酶（MPO）活性以考察远隔器官的炎症。 结果: 与AP组小鼠相比,药物处理AP组小鼠胰腺组织的水肿、炎症以及空泡的评分明显降低（P<0.05）,但坏死和病理总评分没有明显变化;巨噬细胞的浸润明显减少;肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达水平也明显降低(P<0.05);超氧化物歧化酶1（SOD-1)、SOD-2和NADPH氧化酶2（NOX-2）的表达水平也明显降低（P<0.05, P<0.05, P<0.01）。此外,药物处理AP组小鼠肺组织的MPO活性显著降低（P<0.01）,提示中性粒细胞的浸润减少。结论: 葡萄多酚对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎胰腺组织具有明显保护作用,机制与下调炎症因子和氧化应激分子的表达有关。     

雨蛙素及脂多糖诱导小鼠急性胰腺炎效果分析

目的观察雨蛙素(CAE)诱导小鼠急性胰腺炎模型中胰腺及肺组织损伤时间变化规律;对比雨蛙素及脂多糖(LPS)不同给药方案诱导的小鼠急性胰腺炎模型效果。方法雨蛙素不同给药频次以及雨蛙素联合脂多糖诱导小鼠急性胰腺炎模型,收集小鼠血浆以淀粉-碘比色法检测淀粉酶活性;取胰腺及肺组织行HE染色观察组织损伤严重程度。结果 CAE7组小鼠胰腺及肺组织损伤在4 h达高峰,24 h开始修复,5 d基本恢复正常;造模后4 h,CAE7组和CAE9组小鼠血淀粉酶活性较对照组升高[(6 461±1 078)U/dl比(3 093±331)U/dl;(6 821±495)U/dl比(3 093±331)U/dl,P0.001],且CAE7+LPS组较CAE9组更高[(8 912±465)U/dl比(6 821±495)U/dl,P0.001],CAE7组和CAE9组小鼠胰腺组织病理评分较对照组升高(4.750±0.524比0±0;4.917±0.664比0±0,P0.001),且CAE7+LPS组较CAE9组更高(7.167±0.258比4.917±0.664,P0.001)。结论雨蛙素50μg/kg连续7次给药可诱导出小鼠急性胰腺炎模型,增加给药频次未见胰腺组织损伤加重,而联用脂多糖可加重急性胰腺炎模型严重程度。     

新型大麻制剂O-1602和CBD减轻小鼠 实验性急性胰腺炎的机制研究

目的: 观察2种新型大麻类制剂O-1602和大麻二酚(CBD)对雨蛙肽(CAE)诱导的小鼠急性胰腺炎(AP)的抗炎作用,并通过其对热休克蛋白60(HSP60)表达的影响,探讨其可能的机制。方法: 以CAE腹腔注射(50 μg·kg^-1·h^-1,共6次)复制小鼠AP模型,对照组用生理盐水(NS)替代CAE;给AP小鼠腹腔注射O-1602或CBD作为治疗组。组织学检查评估不同处理组胰腺组织形态学改变;测定血浆淀粉酶及脂肪酶活性(生化法)、血浆细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)的水平(ELISA法),以及肺脏中髓过氧化物酶(MPO)活性的变化(生化法);同时,用 real-time PCR和Western blotting测定胰腺组织热休克蛋白(HSP60) mRNA和蛋白的表达特点。结果: AP组小鼠胰腺组织出现明显损伤及炎症表现;此类表现在AP+O-1602及AP+CBD治疗组得到明显改善。AP组血浆淀粉酶及脂肪酶活性、TNF-α及IL-6水平、肺脏MPO水平较NS组均有显著升高(P<0.05);而在AP+O-1602及AP+CBD组,这些指标均较AP组明显降低(P<0.05)。同时,胰腺组织HSP60 mRNA和蛋白的表达量在AP组均降低(P<0.05), O-1602或CBD处理可一定程度提高HSP60的表达(P<0.05)。结论: CAE可成功诱导小鼠AP的发生,并伴有一定程度的全身炎症反应,O-1602和CBD可改善胰腺局部损伤程度及全身炎症程度,其机制可能与大麻类物质对炎症介质、细胞因子的抑制以及提高细胞保护因子HSP60的表达有关。     

Egr-1基因剔除减少炎性相关因子在实验性胰腺炎中的表达

目的：探讨Egr-1基因剔除对实验性胰腺炎小鼠胰腺组织中炎性相关因子表达的影响。 〖HTH〗方法：利用Egr-1基因剔除小鼠，采用大剂量雨蛙素诱导的实验性胰腺炎模型，观察Egr-1基因剔除后，胰腺组织水肿、MPO水平、血清淀粉酶水平、肺组织MPO水平的改变。并利用定量PCR的方法，检测胰腺组织中炎症相关因子组织因子（TF）、纤维蛋白溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）、单核细胞趋化吸引蛋白1（MCP-1）、Gro-1、IL-6和细胞间黏附分子-1（ICAM-1） mRNA的表达。 〖HTH〗结果：Egr-1基因剔除小鼠胰腺组织水肿明显轻于野生型，但组织MPO水平与血清淀粉酶与野生型组间相比无明显差异；肺组织MPO水平明显低于野生型。定量PCR检测结果表明， Egr-1基因剔除组，胰腺组织中TF、PAI-1，以及MCP-1、ICAM-1和IL-6　mRNA的表达，明显少于野生型组。 〖HTH〗结论：Egr-1基因剔除可明显减轻急性胰腺炎的严重程度，其作用可能通过减少胰腺组织中TF、PAI-1，以及MCP-1、ICAM-1和IL-6的表达而实现。     

伴侣因子60在实验性急性胰腺炎肝胰组织中的表达及意义

目的：探讨不同严重程度的实验性急性胰腺炎（AP）时动物肝脏和胰腺组织中伴侣因子60（Cpn60）的表达特点及可能的意义。方法：用雨蛙肽腹腔注射复制急性轻型胰腺炎（MAP）小鼠模型；用去氧胆酸钠逆胰胆管注射复制急性重型胰腺炎（SAP）大鼠模型；分别设各自正常对照组（control）和假手术对照组(sham组)。造模后1、5、10 h分批处死动物，取肝、胰组织。病理切片观测胰腺组织病变情况；免疫共沉淀（IP）及Western blotting技术确定肝、胰组织Cpn60蛋白条带位置及表达的改变。结果：MAP及SAP组的胰腺组织分别出现水肿性和出血坏死性改变。MAP组及其sham组1 h Cpn60表达量明显低于正常小鼠，而5 h的表达量显著升高。SAP组和相应的sham组1 h Cpn60表达量明显增高，随后降低，从1 h到10 h SAP组的下降幅度明显大于相应sham组。结果还发现，小鼠、大鼠胰腺和肝脏组织Cpn60蛋白有两条带，在各组及其不同时段，该蛋白条带的变化各有不同。结论：大鼠、小鼠胰腺和肝脏组织中Cpn60蛋白表达呈双带，且在AP时变化不一，提示AP时不仅有Cpn60蛋白量的表达异常，还可能存在质的异常，这些异常与AP发生、发展的关系有待研究。     

急性胰腺炎胰酶胞内激活机制中Cpn60的可能作用

目的:进一步探讨急性胰腺炎(AP)时胰酶胞内激活的机制及蛋白伴侣因子(Cpn60)在其中的可能作用。方法:用去氧胆酸钠逆行注入大鼠胰胆管复制AP模型,5h、10h分批采血、取胰腺,测血清及胰腺组织中淀粉酶活性及炎症介质TNF-α的含量;取5h胰腺作光镜、电镜切片,检测胰腺组织和腺泡细胞各细胞器形态学的变化;用蛋白金标免疫细胞化学技术检测各细胞器中Cpn60及胰酶含量的变化。结果:血清淀粉酶活性及胰腺组织匀浆TNF-α含量在5h明显高于正常对照组,持续达10h;AP5h的光镜病理检查见胰腺水肿、出血、坏死;电镜检查见腺泡内溶酶体增多,形态各异,散在于各处,甚至位于高尔基体中;内质网、高尔基体、酶原颗粒等细胞器中Cpn60明显减少,然而胰脂肪酶含量升高,糜蛋白酶原保持在高浓度水平。结论:AP时腺泡细胞内溶酶体增多,分布异常,尤其胰脂肪酶以及蛋白酶含量增多,Cpn60含量减少,提示蛋白伴侣相对不足,这些异常变化可能引起胰酶在腺泡内的聚积和激活,从而参与AP的发生和发展。     

热休克蛋白在结肠炎和胰腺炎时的表达特点及大麻类物质WIN和O-1602的影响

目的: 观察几种热休克蛋白(heat-shock proteins, HSPs)在实验性结肠炎和实验性急性胰腺炎炎症组织中表达的变化,同时研究大麻经典受体1和受体2激动剂WIN55和212-2(WIN),以及新型受体GPR55激动剂O-1602对HSPs表达的影响及可能的意义。方法: 用C57/BL小鼠,通过连续饮用7 d 4%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)复制结肠炎模型;通过腹腔注射雨蛙肽(cerulein,50 μg/kg,每小时1次,连续 6次)复制急性胰腺炎模型。同时设各模型组及WIN、O-1602治疗组,检测不同处理组小鼠结肠和胰腺组织形态学改变、血浆促炎细胞因子包括白细胞介素-6(IL-6)及细胞因子诱导的中性粒细胞化学趋化因子-1(cytokine-induced neutrophil chemoattractant-1,CINC-1) 的水平和淀粉酶活性,同时用免疫组化方法检测结肠和胰腺组织HSPs(HSP27、HSP60、和HSP70)的表达特点。结果: 在DSS诱导的小鼠结肠炎及 cerulein 诱导的小鼠胰腺炎模型,其结肠和胰腺组织分别出现典型的炎症及损伤,血浆促炎因子水平升高(P<0.05),在胰腺炎小鼠还有血浆胰淀粉酶活性的升高。在结肠炎症组织,HSP27表达明显升高,HSP60和HSP70表达降低;WIN具有一定的抗炎作用,并能显著提高结肠炎结肠组织HSP27和HSP70的表达(P<0.05)。在急性胰腺炎的胰腺组织,HSP27和HSP70表达升高,HSP60表达有所降低; O-1602有一定的抗炎作用,也能提高HSP70的表达,但总体来看,对这3种HSPs的影响均不太明显(P>0.05)。结论: DSS和cerulein分别诱导小鼠结肠炎和急性胰腺炎的发生;在这2种模型的炎症组织中HSPs的表达变化不一。大麻类物质WIN和O-1602均有一定的抗炎作用,也在一定程度上提高部分HSPs的表达。HSPs的高表达是否与大麻类物质的抗炎作用有关值得进一步的研究。     

中国人内源性高甘油三酯血症与脂蛋白脂酶基因PvuⅡ多态性关联的研究

目的：探讨中国人内源性高甘油三酯血症（hypertriglyceridemics,HTG)与脂蛋白脂酶基因PvuⅡ多态性是否关联。方法：采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法,对成都地区135例内源性高甘油三酯血症患者和193名血脂正常者脂蛋白脂酶基因内含子6PvuⅡ多态性及其对血脂及载脂蛋白（apo)水平的影响进行了研究。结果：HTG患者和正常人均以P＋等位基因为主,HTG组以P＋P＋基因型为主,而正常对照组P＋P－基因型为主。HTG组的P＋P＋基因型分布频率及P＋等位基因分布频率则显著高于正常对照组（0.460vs0.337,P＜0.05;0.689vs0.565,P＜0.01)。P＋P＋基因型者的血清甘油三酯（TG）、apoCⅡ、apoCⅢ、apoE水平及TG／HDL－C比值较P－P－基因型者显著增高（P＜0．05）。结论：脂蛋白酯酶基因P＋P＋基因型与中国人内源性高甘油三酯血症的遗传易感性有一定关联。     

清胰汤Ⅱ号冲剂对急性胰腺炎小鼠的保护作用及机制

目的:探讨清胰汤Ⅱ号冲剂(QYT)对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)小鼠的保护作用及机制。方法:成年C57BL/6小鼠24只,雌雄各半,随机均分为3组。AP组和AP+QYT组首先经腹腔注射雨蛙肽(50μg/kg)及脂多糖(10 mg/kg)复制重症AP模型,AP组小鼠给予饮用水灌胃,AP+QYT组给予QYT灌胃;正常对照组小鼠给予等量生理盐水注射及饮用水灌胃。于末次注药后3 h麻醉处死动物。检测和分析胰腺组织的病理改变、肠道细菌总数和分类、Peyer’s结T淋巴细胞亚群的变化、血浆淀粉酶、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平以及胰腺和肺脏组织髓过氧化物酶(MPO)活性等。结果:与对照组相比,AP小鼠的胰腺组织病理学评分、肠道细菌数量、血浆淀粉酶活性、IL-6及MCP-1水平、胰和肺组织的MPO活性都有明显升高(P0.05);QYT可在一定程度上逆转AP时相关指标的变化(P0.05)。小肠Peyer’s结数量在各组无明显差异,但AP组的CD3+T淋巴细胞百分比较对照组明显降低(P0.05),而且,AP组和AP+QYT组,尤其是后者CD4+T淋巴细胞百分比和CD4+/CD8+比值较对照组明显升高(P0.05)。结论:清胰汤II号冲剂对雨蛙肽和脂多糖诱导的小鼠急性胰腺炎具有明显的拮抗作用,其机制可能与其抑制炎症反应、促进肠内细菌的清除和调节肠道T淋巴细胞功能有关。     

Mechanisms linking hypertriglyceridemia to acute pancreatitis

Hypertriglyceridemia (HTG) is a metabolic disorder, defined when serum or plasma triglyceride concentration (seTG) is >1.7 mM. HTG can be categorized as mild to very severe groups based on the seTG value. The risk of acute pancreatitis (AP), a serious disease with high mortality and without specific therapy, increases with the degree of HTG. Furthermore, even mild or moderate HTG aggravates AP initiated by other important etiological factors, including alcohol or bile stone. This review briefly summarizes the pathophysiology of HTG, the epidemiology of HTG-induced AP and the clinically observed effects of HTG on the outcomes of AP. Our main focus is to discuss the pathophysiological mechanisms linking HTG to AP. HTG is accompanied by an increased serum fatty acid (FA) concentration, and experimental results have demonstrated that these FAs have the most prominent role in causing the consequences of HTG during AP. FAs inhibit mitochondrial complexes in pancreatic acinar cells, induce pathological elevation of intracellular Ca²⁺ concentration, cytokine release and tissue injury, and reduce the function of pancreatic ducts. Furthermore, high FA concentrations can induce respiratory, kidney, and cardiovascular failure in AP. All these effects may contribute to the observed increased AP severity and frequent organ failure in patients. Importantly, experimental results suggest that the reduction of FA production by lipase inhibitors can open up new therapeutic options of AP. Overall, investigating the pathophysiology of HTG-induced AP or AP in the presence of HTG and determining possible treatments are needed.     

载脂蛋白CⅢ转基因小鼠表现明显的高甘油三酯血症

目的: 建立人载脂蛋白CⅢ(hApoCⅢ)转基因小鼠模型,探讨ApoCⅢ在代谢调节中的作用。方法: 应用受精卵显微注射hApoCⅢ基因组片段方法制备转基因小鼠,筛选繁育出稳定遗传的转基因小鼠品系。通过血浆脂质检测、快速蛋白液相色谱脂蛋白分析、口服脂肪负荷试验、肝素后血浆脂蛋白脂酶活性测定以及葡萄糖耐量试验,分析转基因小鼠的脂质和糖代谢特点。结果: 成功制备hApoCⅢ转基因小鼠并建立稳定表达的品系,该小鼠表现出显著的高甘油三酯血症 ,并有随年龄增长的趋势。与非转基因小鼠相比,转基因小鼠对甘油三酯(TG)的清除显著延迟,且肝素后血浆脂蛋白脂酶活性也显著降低 ,糖耐量未改变。结论: hApoCⅢ转基因小鼠有明显的高甘油三酯血症,可能与血浆脂蛋白脂酶活性降低所致的血浆TG清除延缓有关。     

α2-Macroglobulin- and Murinoglobulin-1- Deficient Mice : A Mouse Model for Acute Pancreatitis

Mice deficient in either or both mouse alpha2-macroglobulin (MAM) and murinoglobulin-1 (MUG1) were generated and proved phenotypically normal under standard conditions. Acute pancreatitis was induced with a diet deficient in choline and methionine, supplemented with ethionine. The mortality was less than 25% in wild-type mice, as opposed to at least 56% in knockout mice, and was highest (70%) in MAM-/- mice, with earliest onset at 2 days. Plasma amylase and lipase levels were increased, but pancreatic tissue appeared histologically variable in individual mice. The clinical symptoms were most severe in MAM-/- mice and, surprisingly, were not aggravated in the double knockout mice, suggesting that the lack of proteinase inhibition capacity was not the major problem. Therefore, we analyzed the expression of 21 different cytokines and polypeptide factors in the pancreas of all experimental groups of mice. Interleukin-1-receptor antagonist mRNA was consistently induced by the diet in the pancreas of MAM-/- mice, and transforming growth factor-beta, tumor necrosis factor-alpha, tumor necrosis factor-beta, beta-lymphotoxin, and interferon-gamma mRNA levels were also increased. The data demonstrate the important role of alpha2-macroglobulin (A2M) in acute pancreatitis as both a proteinase inhibitor and a cytokine carrier. Mice deficient in MAM and/or MUG thus offer new experimental models for defining in vivo the role of the macroglobulins in pancreatitis and in other normal and pathological processes.