荧光探针定量PCR在检测HBV-DNA的应用

目的　用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)方法准确地定量检测血清中的HBV DNA数量和免疫指标 ,以指导临床。方法　用FQ PCR方法和酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法分别检测 184份临床血清标本的HBVDNA和免疫指标。结果　用 (ELISA)作对照 ,经FQ PCR检测 ,HBeAg(+)组 (82份 )的阳性率为 10 0 % ,HBV DNA阳性拷贝数范围在 10 5～ 10 10 /ml;HBeAb(+)组 (5 2份 )的阳性率为 5 5 8% ,HBV DNA阳性拷贝数范围在 10 4～ 10 7/ml;HBsAb(+)组 (2 0份 )的阳性率为 15 % ,HBV DNA阳性拷贝数范围在 10 4～ 10 5/ml;对照组 (30份 )的阳性率为 0。HBeAg(+)组血清中HBV DNA含量 (10 7 2± 1 13 )显著高于HBeAb(+)组 (10 5 8± 1 4)和HBsAb(+)组 (10 4 67± 0 58)。结论　FQ PCR检测HBV DNA具有较高的灵敏度和特异性 ,且能准确定量 ,FQ PCR可以检测HBV的真实感染和复制情况 ,对乙型肝炎临床诊断 ,治疗及疗后观察有重要意义。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA的临床价值

目的探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA的临床价值.方法用FQ-PCR检测860份血清标本中HBV-DNA含量,同时用ELISA法检测乙肝血清学指标,即两对半(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb).结果HBsAg( )HBeAg( )HBcAb( )组(大三阳),HBV-DNA阳性率为97.00%,HBV-DNA平均含量为7.34±0.73;HBsAg( )HBeAb( )HBcAb( )组(小三阳),HBV-DNA阳性率37.93%,HBV-DNA平均含量为4.36±1.34;HBsAg( )HBcAb( )组,HBV-DNA阳性率为61.11%,HBV-DNA平均含量为4.82±1.47;HBsAg( )HBeAg( )组,HBV-DNA阳性率为100%,HBV-DNA平均含量为7.03±0.83;HBsAb( )HBeAb( )HBc( )模式HBV-DNA也有低水平复制.结论荧光定量PCR在乙肝的诊断、判断传染性强弱及抗病毒治疗效果方面具有较大的价值.     

荧光定量PCR检测慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA及其意义

随着医学分子生物学的发展,荧光定量(FQ)-PCR技术已逐渐应用于临床实验诊断,应用FQ-PCR检测慢性乙型肝炎患者血清中的HBV-DNA,从方法学上提高了检测的灵敏度,通过观察HBV-DNA动态变化对乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择以及抗病毒疗效观察均有很重要的临床指导意义。     

HBV-DNA荧光定量PCR检测的临床意义

目的:荧光定量聚合酶反应(FQ-PCR)检测血清中乙型肝炎病毒(HBV-DNA)的临床意义。方法:用荧光探针技术相结合所产生的实时荧光定量聚合酶反应。结果:150例乙型肝炎标本中,有91例大三阳(HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+),患者血清HBV-DNA阳性率100%,平均浓度2.8×106Copies/ml;有19例小二阳(HBsAg+,HBcAb+),患者血清HBV-DNA阳性94.7%,平均浓度4.3×l05Copies/ml;有40例小三阳(HBsAg+,HBeAb+,HBcAb+)患者血清HBV-DNA阳性率77.5%,平均浓度1.2×104Copies/ml。结论:FQ-PCR是了解HBV-DNA在体内复制和判断疗效的有利手段,并具有快速、特异、灵敏等优点,可真实反应HBV-DNA复制情况及病情变化,对乙肝临床诊断及治疗有较大的指导意义。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA与血清标志物的关系探讨

目的:探讨乙型肝炎血清HBV-DNA水平与乙肝抗原抗体模式的关系。方法:对320例血清标本同时用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV DNA和用酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝标志物,根据不同检测结果进行对比分析。结果:320份血清中,乙型肝炎病毒标志物不同组合HBV-DNA阳性率有差异(P<0.01),320份血清中,有188例HBV-DNA阳性,占56.2%,HBsAg HBeAg HBcAb阳性者HBV-DNA阳性率占98.6%,>10copies/ml占64.5%,HBsAg HBeAb HBcAb阳性者HBV-DNA阳性率占37.5%,10 copies/ml占18.2%。结论:HBeAg和HBV-DNA有明显的相关性,PCR定量检测HBV-DNA含量更有助于判断体内HBV复制的情况及传染性强弱,在临床上有重要意义。     

荧光定量PCR与ELISA法检测HBV-DNA结果分析

目的 :应用荧光定量PCR方法精确检测HBV -DNA的拷贝数 ,为临床判断病毒复制程度提供指标 ;对比分析荧光定量PCR方法和ELISA方法检测HBV -DNA的结果。方法 :用荧光定量PCR法检测 10 14例用ELISA法诊断为乙型肝炎病人的血清HBV -DNA拷贝数。结果 :10 14例病人中 ,病毒拷贝数≥ 1× 10 5的 4 99例 ,阳性率4 9.2 % ;HBeAg阳性患者的HBV -DNA拷贝数≥ 1× 10 5的阳性率显著高于HBeAg阴性患者。结论 :荧光定量PCR检测HBV病毒复制情况结果准确 ,对临床工作指导意义更大 ;HBeAg是一项重要指标。     

Taq Man荧光定量PCR检测HBV-DNA的假阴性原因分析

聚合酶链式反应(PCR)技术用于乙型肝炎病毒基因(HBV-DNA)的诊断,早期由于技术不成熟及实验室条件不合要求(尤其是污染)而可引起假阳性[1].随着鸟苷酶(Uracil-DNA glycosylase)防污染技术及荧光定量分析技术等的应用,PCR技术的假阳性已逐步减少,但新近又发现有较多的假阴性标本存在.本文探讨Taq Man荧光定量PCR检测HBV-DNA时可能引起假阴性的原因.     

荧光定量PCR检测肝病患者血清HBV-DNA的对比研究

[目的]探讨荧光定量PCR检测HBV-DNA的应用价值.[方法]采用荧光定量PCR检测309例不同肝病患者血清HBV-DNA含量,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定乙肝病毒血清免疫标志物HBeAg.[结果]肝硬变、肝癌患者血清HBV-DNA含量低于慢性乙型肝炎患者(x2=10.8,P＜0.01).309例肝病患者的HBV-DNA的阳性率为73.8%(228/309),其中HBeAg阳性组的DNA阳性率为87.7%(136/155),HBeAg阴性组的DNA阳性率为59.7%(92/154),两组的差异具统计学意义(x2=31.3,P＜0.0001).236例慢性乙型肝炎中HBeAg阳性患者血清HBV-DNA含量与HBeAg阴性患者的差异具统计学意义(t=-2.45,P＜0.05).[结论]荧光定量PCR是直接检测HBV-DNA水平,能够更精确直观的反映人体体内病毒复制情况及所带病毒量.     

荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA的探讨

目的　用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)定量检测血清中乙型肝炎病毒的数量以指导临床。方法　以荧光探针杂交技术为基础的实时定量PCR法。结果　所检的 5 12份HBV的HBsAg( )、HBeAg( )、HBcAb( )的标本 ,HBV -DNA阳性率为 98.1% (10 3/ 10 5 ) ,平均拷贝数为 2 .4× 10 8/ml;HBsAg( )、HBeAb( )、HBcAb( )的标本 ,HBV -DNA阳性率为 6 8.5 7% (82 / 10 5 ) ,平均拷贝数为 8.9× 10 5/ml;HBsAg( )、HB cAb( )的标本 ,HBV -DNA阳性率为 5 6 .6 % (30 / 5 3) ,平均拷贝数为 3.2× 10 5/ml;HBsAb( )、HBeAb( )、HB cAb( )的标本 ,HBV -DNA阳性率为 31.4% (2 1/ 6 7) ,平均拷贝数为 3.2× 10 5/ml;非乙型肝炎和健康者没有检出HBV -DNA。结论　FQ -PCR具有简便、快速、特异性强、准确定量的优点 ,能够有效识别假阳性、假阴性 ,可以检测HBV的真实感染和复制的情况 ,对于乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义     

定量PCR检测血清HBV-DNA与血清HBV标志物关系的研究

目的 :探讨定量PCR检测血清HBV -DNA与血清HBV标志物之间的关系及其临床意义。方法 :35 2例血清标本运用荧光定量PCR检测血清HBV -DNA及放射免疫法 (ELISA)检测血清HBV标志物。结果 :经荧光定量PCR检测 94例HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性的标本 ,其血清HBV -DNA全部阳性 ,DNA测值范围 4 .8× 10 5～ 2 .8× 10 8copy/ml;81例HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性的标本 ,其血清HBV -DNA4 3例阳性(阳性率为 5 3% ) ,DNA测值范围 1.0× 10 4～ 1.4× 10 7copy/ml;39例HBsAg、HBcAb阳性的标本 ,其血清HBV-DNA2 4例阳性 (阳性率为 6 1% ) ,DNA测值范围 3.5× 10 3 ～ 1.6× 10 7copy/ml;10 0例HBVM全阴性的标本 ,血清HBV -DNA全部阴性。结论 :荧光定量PCR检测血清HBV -DNA准确灵敏 ,可反映乙肝患者病程变化 ,对于乙肝临床诊断、治疗方案的选择、疗效观察及预后判断有极其重要的作用。     

荧光定量聚合酶链反应检测血清HBV DNA及临床应用价值

目的：应用光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）技术检测血清HBV DNA,评价其临床应用价值。方法：选取乙型肝炎病毒感染各时期血清标本331例,用荧光定量PCR法测定HBV DNA浓度。结果：119例HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性标本,HBV DNA阳性率为98．3％;182例HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性的血清标本,阳性率为52．3％;HBsAg,HBeAg阴性标本20便,1例阳性。结论：FQ－PCR技术检测血清HBV DNA,可以反映乙肝病毒感染的实际情况及复制水平,为确定乙型肝炎的临床诊断,可为选择治疗方案和评估药物疗效提供较可靠的理论依据。     

两种HBV—DNA荧光定量PCR检测试剂比较

目的比较及评价两种HBV—DNA荧光定量PCR试剂特异性、灵敏度、重复性及检测结果的相关性。方法用深圳匹基生物工程有限公司生产的两种HBV—DNA荧光定量PCR试剂（试剂A,试剂B）对已知结果的质控血清、标准品及本院154份HBsAg阳性的临床标本进行平行检测,比较两种试剂检测结果的特异性、灵敏度、重复性及结果的相关性。结果试剂A与试剂B的特异性均为100％,灵敏度分别为90．91％和95．45％,符合率分别为93．33％和96．67％;对强阳性、临界阳性标本,试剂A重复性试验批内CV值为3．16％、5．61％,批间为3．18％、6．32％。试剂B批内CV值为2．11％、5．36％,批间CV为3．58％、4．59％;两种试剂对临床标本的检测结果相关性良好（r=0．93、P〈0．01）,但试剂A检测的灵敏度和符合率均低于试剂B（P〈0．01）。结论试剂B总体性能优于试剂A,适于临床使用;试剂A有待校准及（或）改进。实验室必须选择质量好且符合自己实验室要求、与本实验室仪器相匹配的试剂以保证检验质量。     

乙型肝炎血清学标志物与HBV-DNA含量关系的探讨

目的:为了进一步探讨乙型肝炎患者血清中HBV-DNA含量与HBV血清学标志物之间的关系,了解荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒的应用价值。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测510例来自我院门诊就诊者和住院患者血清标本中的特异性抗原抗体,并同时应用荧光定量PCR分析系统测定血清标本中HBV-DNA的含量进行分析。结果:经ELISA法与FQ-PCR法检测的510例血清标本中,51例"大三阳"(HBsAg+HBeAg+HBcAb)的血清标本,其HBV-DNA检出数均呈阳性,阳性率为100%,其HBV-DNA的拷贝数范围为105~109/ml;76例"小三阳"(HBsAg+HBeAb+HBcAb)的血清标本,其HBV-DNA检出的阳性率为47.4%,HBV-DNA的拷贝数范围为104~107/ml。结论:HBV-DNA是乙型肝炎病毒感染和复制的特异性指标,应用FQ-PCR技术检测乙型肝炎病毒,具有较高的灵敏度和特异性,其操作简便,定量准确,结果可靠,它比HBV血清学标志物更能反映乙型肝炎病毒在体内的存在和真实复制状况,在HBV-DNA感染诊断,特别是药物疗效的观察中,具有良好的应用价值。因此,HBV-DNA与血清学标志物的相互关系是本文研究的课题。     

荧光定量聚合酶链反应诊断乙型肝炎病毒感染研究进展

荧光定量聚合酶反应（FQ－PCR）是国内外近年发展起来的核酸检测技术，它在常规PCR基础上，加入了一条用荧光基因标记的特异性探讨。能克服常规PCR易受污、不可定量、准确度低的缺点，能更好地用于乙型肝炎病毒（HBV）的检测。本文就FQ－PCR的原理，标本收集和处理以及在HBV诊断中的影响因数和临床意义进行综述。     

荧光定量PCR法检测234例HBV-DNA结果分析

目的用FQ-PCR检则血样中HBV-NDA拷贝数,了解用ELISA法检测HBV-M不同的标志组合时,其对应的HBV-DNA阴、阳性及阳性的DNA拷贝数。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测234例血样。结果97例HBsAg(+),HBeAg(+),抗-HBc(+)者,其HBV-DNA阳性为96例,定量结果对数值的靶值为7.91;60例HBsAg(+),抗-HBc(+),抗-HBe(+)者,其HBV-DNA阳性为37例,定量结果对数值的靶值为4.73;13例抗-HBc(+)者,其HBV-DNA阳性为2例,定量结果对数值的靶值为3.22;而4例HBV-M全(-)的HBV-DNA也全阴性。结论FQ-PCR能快速,特异,灵敏地定量检测血液及各种体液中病原体的DNA或RNA,对疾病的诊断,治疗过程监测,愈后监控及药效评价等都具有很高的实用价值。     

荧光定量PCR在丙型肝炎病毒感染检测中的应用

目的　观察荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)在丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus ,HCV )感染检测中的临床应用情况。方法　用FQ PCR检测 3 15份怀疑HCV感染的临床血清标本 ,并同时采用酶联免疫吸附测定法 (ELISA)检测抗HCV ,用生化仪测定血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)水平 ,了解样本中HCV RNA含量与抗HCV及ALT的相关性。结果　 3 15份标本中有 2 2 5份HCV RNA含量高于 80拷贝·ml-1,2 5 0份抗HCV阳性 ,14 5例ALT异常 ,HCV RNA含量与抗HCV阳性率间有显著的相关性 (r =0 .682 ,P =0 .0 0 2 ) ;HCV RNA含量与ALT异常率间也有显著的相关性 (r =0 .92 3 ,P =0 .0 3 2 )。结论　FQ PCR技术检测HCV RNA特异性强 ,灵敏度高 ,具有良好的临床应用价值。     

乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR检测的临床应用

乙型肝炎病毒 (HBV)DNA是反应HBV复制的最直接、最可靠指标。在评价治疗乙型肝炎药物的疗效与预后判定方面 ,HBVDNA的检测具有至关重要的作用[1] 。目前定量核酸检测方法可以对病毒核酸进行相对的定量检测 ,但检测方法有很多。近年来发展起来的荧光定量聚合酶链反应 (Fluo rescencequantitativePCR ,FQ -PCR) [2 ] 不仅可以避免常规PCR扩增产物易污染而导致的假阳性 ,简化操作 ,还可以给出HBVDNA体内复制的定量结果 ,为临床正确诊断和及时采取恰当的治疗措施提供依据[3 ] 。为此我们采用FQ -PCR对 337例肝炎患者进行HBVDN…     

影响HBV DNA荧光实时定量PCR测定的标本因素

目的 :探讨影响HBVDNA荧光实施定量PCR测定的标本因素。方法 :按不同要求收集特定的临床标本 ,用沉淀煮沸裂解法提取DNA模板 ,用荧光实时定量PCR法测定HBVDNA的含量。结果 :经EDTA、中等含量肝素、枸橼酸钠抗凝血浆标本与相应血清标本测定HBV DNA的含量差异无显著性 (F值分别为 2 .13、3.94、0 .76 ;P均 >0 .0 5 ) ,但高浓度肝素 (10 0 0U/ml)抗凝管则显著性减低 (F =2 5 .96 ,P <0 .0 5 ) ;溶血、高血脂标本对HBVDNA含量测定无显著影响 (F值分别为 0 .6 5、0 .0 1;P均 >0 .0 5 ) ;标本反复冻融对HBV DNA含量无明显变化 ,血浆 (清 )样本可在室温下短期储存 (4 8h内 ) ,对HBV DNA含量无明显影响 (F值为 3.5 3和 0 .76 ;P >0 .0 5 )。结论 :不同样本收集、储存条件对HBVDNA定量结果准确性的影响有重要意义 ,而提取DNA会间接决定收集、储存条件对定量结果的干扰。用沉淀煮沸裂解法可使抗凝剂及其他PCR反应抑制物质对HBVDNA测定结果影响减到最低 ,从而降低对标本采集的要求。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA与血清HBV标志物关系探讨

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA与血清HBV标志物(HBV-M)之间的关系。方法:对801例患者采用FQ-PCR法测HBV-DNA含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV-M。结果:HBV-DNA在各种模式的HBV标志物中均可检出。HBsAg+、HBeAg+、抗HBc+组患者血清中HBV-DNA检出率为97.6%,且多处在高拷贝HBV-DNA;HBsAg+、抗HBe+、抗HBc+组患者血清HBV-DNA检出率为47.12%,多数是低拷贝HBV-DNA;另发现抗HBs+组阳性率为13.33%;全阴组中阳性率为11.11%。不同HBV-M患者血清HBV-DNA的检出率差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.001)。结论:FQ-PCR法检测HBV-DNA对乙型肝炎的诊断、传染性的判断有临床实用意义,可反映HBV真实感染的各种复制状态,对于乙肝的临床诊断、治疗方案的选择和预后具有重要的指导意义。