姜黄素对舌鳞状细胞癌Tca8113侵袭和迁移影响的实验研究

目的 研究姜黄素对舌鳞状细胞癌明胶酶分泌的影响,探讨舌鳞癌侵袭和转移的机制.方法 收集不同浓度(0～100μmol/L)姜黄素作用Tca8ll3 24 h后的细胞上清液,采用明胶酶谱法(gelatin zymography)检测上清液中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9活性的变化;同时采用Transwell小室建立细胞体外侵袭迁移模型,检测不同浓度姜黄素对Tca8113细胞侵袭和迁移能力的影响.结果 25 μmol/L姜黄素作用24 h后,MMP-9活性降低86.8%,50～100μmol/L姜黄素作用24 h后,则检测不到MMP-9的活性,抑制率接近100%;25μmol/L和50μmol/L姜黄素作用24 h后,MMP-2活性降低40%左右,在75 μmol/L和100μmol/L时,抑制率达90%.姜黄素可显著降低细胞的侵袭迁移能力,经分析,以上结果具有统计学意义(P＜0.01).结论 姜黄素可以通过抑制明胶酶的分泌抑制Tca8113细胞的侵袭和迁移.     

4、5、7-三羟基异黄酮对人舌癌细胞株Tca8113体外迁移侵袭能力的影响

目的观察4、5、7-三羟基异黄酮(Genistein)对舌癌细胞株Tca8113体外迁移侵袭能力及金属基质蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法以细胞划痕实验及Transwell侵袭实验检测Genistein对Tca8113细胞侵袭的影响;采用明胶酶谱法及凝胶图像分析系统检测Genistein对胞外分泌MMP-2蛋白的影响;采用WesternBlot及细胞免疫组织化学检测Genistein对胞内MMP-2蛋白表达的影响。结果Genistein可明显抑制Tca8113细胞的迁移侵袭,Genistein组与对照组之间有明显的差异(P<0.01);Genistein可使细胞外分泌的活性MMP-2及MMP-2表达下调,活性MMP-2下调18.75%,MMP-2下调28.31%;WesternBlot及细胞免疫组织化学均检测到Genistein组与对照组相比能降低胞内MMP-2蛋白的表达。结论Genistein可以明显抑制Tca8113舌癌细胞株的体外迁移侵袭能力,并减少Tca8113胞内和胞外分泌的MMP-2蛋白的表达。     

乏氧对人舌鳞癌细胞系Tca8113体外黏附和侵袭能力的影响

目的:研究乏氧及人乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因表达对舌鳞癌Tca8113细胞系黏附和侵袭能力的影响.方法:将化学合成的siRNA_(HIF-1α)转染入Tca8113细胞后进行常氧或乏氧(1% O_2)培养.实验设以下对照组:空白对照组、脂质体组及非特异性siRNA(siRNA_(Irr))组.采用real time-PCR和Western blot法测定细胞中HIF-1α mRNA表达和蛋白含量,并分别检测HIF-1α基因干扰前后细胞对细胞外基质(ECM)的黏附与侵袭力.结果: 乏氧能够诱导Tca8113细胞的黏附与侵袭力增加.乏氧培养条件下,HIF-1α的表达上调主要发生在蛋白水平.siRNA_(HIF-1α)转染后常氧或乏氧培养24 h, HIF-1α mRNA表达显著下调,与各对照组相比有统计学意义(P<0.01),Tca8113细胞内HIF-1α蛋白含量亦显著降低.无论在常氧还是乏氧培养条件下,siRNA_(HIF-1α)转染的Tca8113细胞黏附力与各对照组相比均显著降低(P<0.05或P<0.01);侵袭力也显著降低(P<0.01).乏氧条件下siRNAHIF-1α转染的Tca8113细胞黏附力和侵袭力下降程度高于常氧培养[(36.4±2.7)% vs (26±2.35);(44.2±2.2)% vs (35±1.75), P<0.01)].结论: 化学合成的靶向HIF-1α的siRNA能够下调Tca8113细胞中HIF-1α基因的表达,降低细胞对ECM的黏附和侵袭力,可能成为抑制肿瘤转移的基因治疗的新途径或新靶点.     

苦参碱对唾液腺腺样囊性癌细胞黏附侵袭抑制的影响及机制探讨

目的:研究苦参碱对唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞黏附侵袭能力的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养ACC-M细胞系,MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,应用黏附试验和Matrigel侵袭实验,研究苦参碱注射液及其不同浓度对ACC-M细胞黏附及侵袭能力的影响,采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果:苦参碱注射液浓度在0.25、0.50、0.75、1.00 mg/mL时,对ACC-M细胞均有一定增殖抑制作用,且呈明显的量效和时效关系。不同浓度苦参碱注射液处理ACC-M细胞24h后,其体外黏附和侵袭能力呈剂量依赖性下降。经苦参碱(0.75 mg/mL)作用后,ACC-M细胞的E钙黏素(E-cad蛋白)表达明显增强,与对照组有显著差异。结论:一定浓度的苦参碱可以抑制唾液腺腺样囊性癌细胞生长,降低细胞黏附和侵袭能力,其机制可能与上调E-cad蛋白表达有关。     

基质金属蛋白酶-1在人涎腺腺样囊性癌细胞中的表达

目的:测定基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在人涎腺腺样囊性癌不同转移力细胞系中的表达。方法:以人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞系及其高转移株ACC-M作为研究肿瘤转移分子机制的模型,采用免疫组化法和蛋白印迹(Western blot)法检测MMP-1的蛋白表达水平。结果:MMP-1在ACC-M细胞中的表达水平高于ACC-2细胞。结论:MMP-1在人涎腺腺样囊性癌的侵袭转移过程中可能发挥作用。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与口腔鳞癌颈淋巴结转移的关系

目的:探讨基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)和基质金属蛋白酶抑制剂-1,2(TIMP-1,2)在口腔鳞癌中的表达形式以及其活性与颈淋巴结转移的关系。方法:应用原位杂交法(in situ hybridization,ISH)检测30例口腔鳞癌组织,口腔鳞癌转移细胞系GNM和人舌鳞癌细胞系TSCCa MMP-2,9和TIMP-1,2的表达;应用胶质酶谱法(zomography)分析上述标本MMP-2,9的活性以及应用体外侵袭实验检测两细胞系侵袭力的差异。结果:MMP-2,9和TIMP-1,2 mRNA 在肿瘤细胞和间质细胞均有表达;有转移鳞癌组织MMP-2,9,以及TIMP-1,2阳性率均高于无转移患者(P<0105), GNMMMP-2,9阳性率高于TSCCa;MMP-2,9活性在转移组明显高于未转移组(P<0105);GNM条件培养上清液中 MMP-2,9活性以及体外侵袭力均高于TSCCa。结论:MMP-2,9在口腔鳞癌转移中有重要作用,TIMP-1,2表达上升可能是肿瘤细胞与间质相互作用的结果。     

纤黏连蛋白对舌鳞癌细胞株基质金属蛋白酶-2表达及侵袭力影响的研究

目的 探讨纤黏连蛋白(fibronectin,FN)对舌鳞癌细胞株基质金属蛋白酶(MMP)-2表达及侵袭力的影响。方法 对体外培养的舌鳞癌细胞用不同浓度的FN作为刺激因素,采用免疫组化检测癌细胞中MMP-2蛋白含量的变化;采用RT-PCR技术检测癌细胞中MMP-2mRNA含量的变化;采用Westernblot技术检测癌细胞上清液中MMP-2蛋白含量的变化;采用Transwell小室观察细胞的侵袭能力。结果 不同浓度的FN(10、5、1μg/ml)作用于人舌鳞癌细胞,MMP-2mRNA、MMP-2蛋白表达和细胞的侵袭能力随FN浓度的降低而降低,差异有显著性(P<0·05),且有剂量依赖关系。结论 FN可以诱导舌鳞癌细胞MMP-2的表达及增强其侵袭力。     

三羟基异黄酮对ACC2及ACCM细胞株侵袭能力的影响

目的:观察4,5,7-三羟基异黄酮(Genistein)对腺样囊性癌细胞株(ACC2)及腺样囊性癌肺转移株(ACCM)的侵袭能力,和对两细胞株金属基质蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法:采用细胞划痕实验及Transwell小室侵袭实验,检测Genistein对ACC2和ACCM细胞侵袭能力的影响;采用明胶酶谱法及流式细胞术分别检测Genistein对两种细胞株MMP-2蛋白胞外分泌及胞内表达的影响。结果:Genistein能显著抑制ACC2及ACCM两种细胞株的侵袭能力(P<0.01),但两细胞株之间不存在差异(P>0.05)。同时,Genistein可使两细胞株细胞外分泌MMP-2蛋白的水平下调,及胞内MMP-2蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:Genistein可对ACC2及ACCM的侵袭产生明显的抑制作用,该作用可能与诱导胞内外侵袭相关蛋白MMP-2的表达降低有关。     

环氧化酶-2抑制剂对舌癌细胞侵袭及基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨环氧化酶-2（Cox-2）抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌细胞系Tca8113侵袭、黏附及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）分泌的影响。方法Tca8113细胞经塞来昔布作用24 h后,免疫组织化学方法检测细胞Cox-2蛋白表达,细胞外基质黏附实验检测细胞黏附力,Boyden侵袭小室测定细胞的侵袭力,酶联免疫吸附法检测培养液中MMP-2的水平。结果Tca8113细胞经塞来昔布作用24 h后,Cox-2蛋白表达明显受到抑制,Boyden侵袭小室细胞穿膜数和细胞外基质黏附率明显降低,同时,培养液中MMP-2水平也明显降低。结论Cox-2抑制剂塞来昔布可抑制Tca8113细胞Cox-2蛋白表达,其抑制细胞侵袭力和黏附率作用可能与抑制MMP-2分泌有关。     

人腺样囊性癌细胞系体外NT-3分泌水平的测定

目的研究体外培养的ACC细胞系中神经营养素-3（neurotrophin-3,NT-3）的分泌情况。方法应用酶联免疫吸附测定法检测NT-3在ACC细胞系体外的分泌水平。收集ACC-M、ACC-2、M3SP4、L929 4个细胞系无血清培养的上清液,用ELISA法检测上清液中NT-3的含量。将各组细胞培养上清液中NT-3的分泌水平采用SNK-q检验进行实验组之间、实验组与对照组之间的多重比较。结果阴性对照组未检测到NT-3的表达;ACC-M、ACC-2细胞培养上清液中NT-3的分泌水平与阴性对照组比较有显著统计学意义（P〈0.01）;M3SP4,及L929细胞培养上清液中NT-3的分泌水平与阴性对照组比较无显著统计学意义（P〉0.05）。ACC的两个细胞系ACC-M、ACC-2细胞分别与其他细胞系（人粘液表皮样癌高转移M3SP4细胞系、小鼠肺纤维瘤L929细胞系）NT-3的分泌水平两两比较均存在显著性差异（P〈0.01）。ACC-M细胞培养上清液中NT-3的含量与ACC-2细胞比较无显著性差异（P〉0.05）。结论体外培养的ACC细胞能分泌一定浓度的NT-3,NT-3可能在ACC的嗜神经侵袭中发挥重要作用。     

转化生长因子β1/细胞外信号调节激酶/基质金属蛋白酶通路对腺样囊性癌侵袭和迁移的影响

目的 探讨转化生长因子β1/细胞外信号调节激酶/基质金属蛋白酶2(TGF-β1/ERKl/2/MMP-2)通路在腺样囊性癌(ACC)侵袭和迁移过程中的作用及机制.方法 以腺样囊性癌ACC-2细胞株为研究对象.用转化生长因子β1(TGF-β1)以及ERK通路抑制剂UO126处理ACC-2细胞.MTT检测ACC-2细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Westem blot蛋白印迹检测ACC-2细胞中ERKI/2的活化及MMP-2的表达情况,实时荧光定量聚合酶链反应检测ACC-2细胞中MMP-2的mRNA的表达情况.结果 TGF-β1及UO126干预后,ACC-2细胞增殖能力无明显变化;TGF-β1刺激可增强ACC-2细胞迁移、侵袭能力,增加ACC-2细胞p-ERKI/2和MMP-2蛋白以及MMP-2 mRNA的表达.而UO126阻断ERK磷酸化后,抑制了TGF-β1刺激的增强作用,ACC-2细胞的迁移、侵袭能力降低,MMP-2蛋白和mRNA的表达均下降.结论 TGF-β1/ERKl/2/MMP-2通路参与了人唾液腺ACC侵袭和迁移能力的调节.TGF-β1可通过上调ERK1/2,继而上调MMP-2,促进人唾液腺ACC细胞的侵袭和迁移能力,ERKl/2可能成为人唾液腺ACC侵袭防治的新靶点.     

TGF-β1对人唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞体外增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨TGF-β1在腺样囊性癌的增殖、迁移和侵袭、浸润过程中的作用和相关机制。方法:以腺样囊性癌ACC-2细胞株为研究对象,采用TGF-β1刺激ACC-2细胞,MTT法检测ACC-2细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western蛋白印迹检测ACC-2细胞MAPK(P38、JNK、ERK)的活化及MMP-2表达的变化,实时定量PCR检测ACC-2细胞中MMP-2的mRNA表达变化。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:TGF-β1刺激后,ACC-2细胞增殖能力无显著变化(P>0.05),但迁移、侵袭能力增强(均为P<0.01);同时,ACC-2细胞p-ERK1/2、p-P38和MMP-2蛋白表达升高(均为P<0.05),MMP-2 mRNA表达亦升高(P<0.01),但p-JNK1/2蛋白无显著变化(P>0.05)。结论:TGF-β1可增强人唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞的迁移和侵袭能力,活化p-ERK1/2和p-P38,上调MMP-2的表达。TGF-β1/MAPK/MMP-2通路可能参与人唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞侵袭能力的调节。     

金属蛋白酶及其组织抑制剂在涎腺腺样囊性癌细胞株表达的 …

为了研究金属蛋白酶（ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＭＭＰ）及其组织抑制剂（ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＴＩＭＰ）对涎腺腺样囊性癌细胞（ａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＡＣＣ）转移的影响，本研究应用斑点印迹杂交的分子生物学方法检测ＡＣＣ－２细胞系及高转移细胞株ＡＣＣ－Ｍ中ＭＭＰ－２，ＭＭＰ－９和ＴＩＭＰ－２的表达，结果显示，ＭＭＰ－２，Ｍ     

CXCL12/CXCR4在涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭中的作用

目的:探讨CXCL12/CXCR4在人涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭机制中的作用。方法:在基因水平上,应用real-timePCR法检测人施万细胞(human Schwanncell,HSC)和涎腺腺样囊性癌ACC-3细胞中趋化因子CXCL12及其受体CXCR4的表达。在蛋白水平上,应用流式细胞术检测HSC和ACC-3细胞膜上CXCR4的表达。应用ELISA检测HSC培养上清液中CXCL12的表达。应用趋化实验观察HSC培养上清液对ACC-3细胞的趋化作用。结果:HSC中CXCL12基因有较高的表达,而ACC-3细胞中表达量极少;HSC和ACC-3细胞中CXCR4基因均有表达。HSC和ACC-3细胞膜上CXCR4蛋白均有表达;HSC培养上清液中CXCL12蛋白的质量浓度约为(403.4±16.4)～(785.3±32.3)pg/mL;HSC培养上清液能够对ACC-3细胞产生趋化作用,应用CXCR4单克隆抗体或CXCR4受体激活拮抗剂AMD3100能明显抑制这种作用。结论:CXCL12/CXCR4可能与涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭有关。     

MMP-2��MVD���������԰��еı�Ｐ�ٴ�����

目的研究CD105及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在腺样囊性癌中的表达及临床意义。方法2005年1月至2008年12,在山西医科大学第一临床医院口腔颌面外科采用免疫组化二步法检测CD105、MMP-2在涎腺正常组织、多形性腺瘤及腺样囊性癌中的表达及定位,计算微血管密度(MVD)值及MMP-2评分,并进行数据分析。结果涎腺正常组织、多形性腺瘤与腺样囊性癌之间的MVD值及MMP-2评分差异均具有统计学意义(P<0.05);以腺样囊性癌的肿瘤大小、临床分期、病理类型、神经症状分组,MVD值差异有统计学意义(P<0.05);按病理类型和肿瘤大小分组的MMP-2之间差异具有统计学意义(P<0.05);以MMP-2评分分组的MVD均数差异具有统计学意义(P<0.05)。结论MMP-2和CD105在腺样囊性癌中的表达均升高,有可能成为其治疗的新靶点。     

唾液腺腺样囊性癌中TRPM的表达及意义

目的检测唾液腺腺样囊性癌(ACC)中瞬时受体势M(TRPM)的表达及分布情况的变化,以探究ACC的发病机理。方法采用免疫印迹和免疫组织化学方法,检测TRPM在培养的ACC-2细胞及ACC组织中的表达,采用方差分析,利用OriginPro 7.0软件进行统计学分析。结果ACC-2细胞和ACC组织中TRPM7蛋白的表达水平明显高于正常组织。TRPM7蛋白表达量经灰度值分析,正常腮腺组织为0.42±0.044,多形性腺瘤组织为0.413±0.085,而腺样囊性癌组织为0.85±0.045,差异有显著性意义(P<0.001)。结论ACC中TRPM表达水平的增高可能是ACC发病的组织病理学基础。     

MMP-9在不同浸润方式舌鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在不同浸润方式的舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)中的表达差异。方法:参照Anneroth等描述的肿瘤浸润方式对65例舌鳞状细胞癌进行分型,运用免疫组化链霉卵白素-过氧化酶法观察MMP-9在舌鳞状细胞癌中的表达。结果:在不同浸润方式的舌鳞状细胞癌,MMP-9的表达不同。在Ⅲ、Ⅳ型的舌鳞状细胞癌中,MMP-9的表达明显高于Ⅰ、Ⅱ型,而且临床易出现淋巴结转移。结论:MMP-9与舌鳞状细胞癌的浸润方式密切相关,其在舌鳞状细胞癌中的高表达可能与舌癌的浸润与早期淋巴转移密切相关。     

Photodynamic therapy down-regulates the invasion promoting factors in human oral cancer

Squamous cell carcinomas of the head and neck are characterized by their high tendency for invasion and metastasis. Several studies have identified the roles of matrix metalloproteinases (MMPs), vascular endothelial growth factors (VEGF) and urokinase plasminogen activators (uPA) in this process. Photodynamic Therapy (PDT) is an emerging treatment currently in clinical practice for the treatment of early cancer. Here we evaluate, in vitro, the influence of PDT on the expression of these molecules. A series of human keratinocyte cell lines derived from human oral squamous cell carcinomas (OSCC) were used as the PDT ‘targets’ in this study. Each cell line was subjected to sublethal dose of PDT. Activity of MMP-2, MMP-9, MMP-13, uPA and VEGF were evaluated at protein levels using zymography and ELISA on culture medium. For uPA, a chromogenic assay was performed. Gelatin zymography results revealed that, in control medium, MMP-9 and MMP-2 were secreted in proform. MMP-2 was highly expressed by H376 cells while VB6 and UP cells relatively show similar MMP-2 with comparatively low expression. For MMP-9, the latent type was highly expressed by VB6 cells and only slightly by H376, while active-MMP-9 was expressed by VB6 cell line only. Following PDT, both active and latent MMP-2 and MMP-9 were down regulated by UP and VB6 cells (p < 0.001), while H376 showed an increase in active-MMP-2. These observations were supported by ELISA. This study has demonstrated that, PDT causes the suppression of factors responsible for tumour invasion which may be of therapeutic value.