抗人禽流感病毒H5N1人源化单链抗体噬菌体文库的构建和筛选

目的 利用抗人禽流感病毒H5N1 IgG抗体阳性的人禽流感康复患者外周血淋巴细胞,构建人源化Fv段单链抗体(seFv)噬菌体文库,并筛选与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库.方法 提取人外周血淋巴细胞总RNA,逆转录成cDNA,以其为模板,利用家族特异性IgG基因的引物,扩增重链和轻链的可变区基因,并用合成的连接子将轻链和重链基因连接成单链抗体片段后,重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中.将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌TG1,酶切和PCR鉴定抗体库的重组率,通过测定噬菌体抗体库的滴度计算抗体库的库容,用特异性禽流感病毒相关蛋白筛选表达的单链抗体.结果 构建了源于人禽流感康复患者血清的scFv抗体文库,库容为3.75×104;筛选出与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库.结论 成功构建了抗人禽流感病毒H5N1的人源scFv噬菌体抗体库,并筛选出特异性结合人禽流感病毒相关蛋白的单链抗体,为进一步制备快速检测试剂和治疗研究提供了基础数据.     

感冒病毒基因变异也可使人致命

美国威斯康星大学麦迪逊分校研究人员最新的一项研究显示,感冒病毒基因中的微小变化能使病毒成为人类杀手. 据新一期美国<科学>周刊报道,麦迪逊分校研究人员发现,如果一种普通禽流感病毒的10 个基因中有一个基因发生变化,它就会变成能致人于死地的禽流感病毒. 研究人员指出,在动物或人类社会里流行的感冒病毒中有一种被称为PB2的特定基因,当它发生有限变异后,病毒的毒性就会有明显提高.他们警告说,由于感冒病毒在不停地变异, 且只要一些小变化就能使原来只会带来小麻烦的感冒病毒变成新型致命病毒,因此任何一种新感冒病毒爆发都将对人类构成威胁. 引自<羊城晚报>     

2004-2012年我国禽流感流行情况

禽流感病毒(AIV)是一类可以引起禽类感染和(或)致病的A型流感病毒,它能引起大多数家禽、野生水禽的感染.部分禽流感病毒已经跨种属传播感染人群,1997年香港第一次报道禽流感H5N1亚型病毒能感染人类,不断出现的H9N2、H7N2、H7N3、H7N7等禽流感亚型感染人类的报道,并显示不同程度的致病性和病死率[1-3].2013年3月在中国首次报道新的基因重组H7 N9亚型禽流感病毒直接感染人类,导致重症肺炎引起死亡[4].     

H5N1禽流感病毒HA假病毒的构建及特性研究

目的 构建包膜蛋白为H5N1禽流感病毒HA蛋白的假病毒,对其生物学特性进行研究,并将其初步应用于H5N1禽流感病毒的血清检测.方法 将我国分离的高致病性H5N1禽流感病毒的HA基因插入真核表达质粒,得到pLP-HA,与假病毒构建体系的三种质粒pLP1,pLF2和pEmGFP,瞬时共转染人胚肾细胞293T,48 h收集假病毒上清,对其感染性,血凝活性进行测定,并应用于微量中和实验.同时,构建了优化HA基因的假病毒以及一株含有越南禽流感病毒HA基因的假病毒,进行比较.结果 电镜下观察到假病毒颗粒的存在;Western-Blot表明HA蛋白存在于假病毒颗粒中;HA假病毒与野生型活病毒的微量中和实验相比,两者结果具有很好的相关性.结论 成功构建了不同高致病性H5N1禽流感病毒HA蛋白的假病毒,所构建的假病毒可以应用于微量中和实验.研究发现不同禽流感病毒株HA蛋白假病毒的包装效率不同,并且真核表达优化基因并不能显著提高假病毒颗粒包装效率.     

M2蛋白疫苗作为流感广谱疫苗的研究进展

2003年以来,H5N1亚型高致病性禽流感病毒先后在几十个国家暴发,其中有14个国家发现人感染禽流感的病例,甚至出现死亡的情况.时隔不久,2009年3月甲型H1N1流感在墨西哥暴发,这个病毒具有很强的传染性,短时间内在全球迅速蔓延,给世界各国带来了恐慌.     

加强监测是应对流感大流行的基础

高致病性禽流感病毒H5N1自1997年发生18人感染6人死亡疫情以来,一直受到国际社会的高度关注,特别是自2003年以来高致病禽流感病毒H5N1动物疫情在亚洲已成地方性流行,并且已经蔓延到欧洲和非洲.人感染病例以及发生人感染病例的国家和地区不断扩大,2003年底以来,截止2006年3月15日,全球新发人禽流感（H5N1）病例数已上升至176例,其中死亡97例.我国自2005年10月第一例禽流感病毒H5N1感染病例确诊以来一共有15例,其中10例死亡.高致病性禽流感病毒H5N1目前不仅对禽类带来巨大威胁,严重影响国家的经济发展,而且对人类健康也带来巨大的威胁,会不会由H5N1禽流感病毒导致一次流感大流行已引起全球的高度关注.流感大流行的发生一般应包括以下几个条件：（1）一种新的流感病毒亚型感染人或一种已经消失很长时间的旧亚型的重现;（2）人群普遍缺乏免疫力;（3）具有一定的发病率和病死率;（4）能够在人群广泛传播.目前H5N1病毒可以说具备了前3个条件,到目前为止还没有具备人传人的能力,一旦病毒发生变异具备第4条就有可能导致流感大流行,如何应对流感大流行已得到各国政府和各种国际组织的高度重视.流感大流行的应对涉及各个方面,其中包括疫苗、药物、检测技术以及医疗救治和宣传教育等各个方面,而对禽流感病毒的监测是各种应对措施的基础.……     

感冒病毒基因变异也可使人致命

美国威斯康星大学麦迪逊分校研究人员最新的一项研究显示 ,感冒病毒基因中的微小变化能使病毒成为人类杀手 .据新一期美国《科学》周刊报道 ,麦迪逊分校研究人员发现 ,如果一种普通禽流感病毒的 10个基因中有一个基因发生变化 ,它就会变成能致人于死地的禽流感病毒 .研究人员指出 ,在动物或人类社会里流行的感冒病毒中有一种被称为ＰＢ2的特定基因 ,当它发生有限变异后 ,病毒的毒性就会有明显提高 .他们警告说 ,由于感冒病毒在不停地变异 ,且只要一些小变化就能使原来只会带来小麻烦的感冒病毒变成新型致命病毒 ,因此任何一种新感冒病毒爆发…     

禽流感潜在威胁大于非典

又讯　世界卫生组织西太平洋地区总部发言人科丁利透露 ,禽流感“病毒可能转变成一种具有极强传染性的普通人类流感病毒”。他说 ,世卫组织之所以认为禽流感可能比非典更具威胁是考虑到两个因素 ,首先是这种禽流感一旦变异后可能会成为普通人类流感病毒 ,而人体对于新的流感病毒几乎没有免疫力。其次 ,人类的流感病毒远比非典病毒具传染性。流感病毒能在空气中迅速传播 ,而非典病毒则通常在近距离接触后才会被传染禽流感潜在威胁大于非典     

表达H9N2禽流感病毒HA1蛋白的转基因和缓艾美耳球虫的构建

H9N2亚型禽流感病毒已经被证实可以传播到人类,对它存在的潜在危害已受到越来越多的关注。因此,研究安全而有效的H9N2禽流感病毒疫苗已迫在眉睫。为研究和缓艾美耳球虫作为活载体表达及运输禽流感病毒抗原的潜能,本研究构建了可稳定表达H9N2禽流感病毒HA1蛋白的转基因和缓艾美耳球虫。利用黄色荧光蛋白（YFP）及融合的乙胺嘧啶抗性基因（DHFR-TSm2m3）作为报告基因及筛选基因,我们将表达H9N2禽流感病毒HA1抗原的质粒载体核转球虫子孢子,接种鸡后在乙胺嘧啶药物的选择压力下进行筛选并连续传代获得转基因和缓艾美耳球虫系。利用染色体步移和免疫印迹证实了HA1基因的成功插入和表达;利用间接免疫荧光证实HA1蛋白定位于球虫子孢子细胞膜表面和头部。研究进一步发现,转基因球虫的繁殖力与野生球虫相当,感染后亦于第6d达到排卵囊高峰。该转基因和缓艾美耳球虫株具有作为疫苗活载体的潜能。     

H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞表位预测及抗原性分析

目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性.方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列.进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特异性.通过BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清,初步鉴定候选表位抗原性.结果:综合多项预测及空间构象模拟结果,我们获得了三条候选Th和B细胞表位,分别为HA141～155、HA206～223、HA302～316.候选表位处于H5N1亚型禽流感HA1 蛋白序列上相对保守的区域内,且与目前流行的H5N1亚型禽流感病毒HA相应区域具有较好的一致性.而不同候选表位在BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清反应中显示了不同抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能.结论:所筛选的表位具有成为H5N1亚型禽流感病毒HA Th和B细胞相关抗原表位的可能.本研究为深入揭示流感病毒感染与免疫机制,H5N1亚型禽流感功能表位认知及表位疫苗研究奠定了基础.     

人高致病性H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备高灵敏度和高特异性的人高致病性H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白抗体并对其效价进行初步评估.方法 构建含有H5N1亚型禽流感病毒NS1序列的pET-28a(+)重组载体的大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达NS1蛋白,并经Ni-NTA色谱柱亲和层析纯化获得NS1重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定.以纯化的蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,获得兔抗NS1血清,亲和纯化获得多克隆抗体.应用ELISA和Western Blot检测纯化抗体的效价和特异性.结果 NS1融合蛋白得到高表达,且纯度＞90％,用该融合蛋白免疫新西兰大白兔后得到的抗NS1多克隆抗体,效价达1∶80 000,并特异性识别H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白.结论 获得了NS1多克隆抗体,具有较好的效价和特异性.     

H7N9禽流感疫情引发人们的思考

2003–2004年,在亚洲广袤地区的家禽中流行了H5N1禽流感,并传染给人类,人们仍然记忆犹新。从2013年2月开始,在中国部分地区又掀起了不祥的波澜,H7N9和H10N8禽流感病毒袭击了人类。H7N9禽流感曾在禽类发现,但从未传染给人。2013年春天,该病毒首次袭击了人类。H7N9病毒对禽类致病力很低,禽作为传染源十分隐蔽。而人类患上H7N9禽流感后,易引发多脏器衰竭,病     

呼吸道病毒感染多重、快速检测技术

众多资料显示急性呼吸道感染中90％～95％是由病毒感染所致，其中多种病毒具有感染力强、传播快、潜伏期短、发病急等特点，并且近来新的致病性病毒还在不断地被发现，如人类偏肺病毒、SARS病毒、高致病性禽流感病毒等，给临床疾病诊断和治疗造成极大的困难。     

呼吸道病毒检测方法的研究进展

呼吸道病毒是一组能够通过呼吸道感染引起呼吸系统及其他系统疾病的病毒.常见的呼吸道病毒有正粘病毒科的流感病毒,副粘病毒科的副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒,以及冠状病毒科的冠状病毒,披膜病毒科的风疹病毒和腺病毒科的腺病毒等.近年来新的致病性病毒不断地被发现,如人类偏肺病毒、人博卡病毒、SARS病毒、高致病性禽流感病毒等.对于呼吸道病毒来讲,同一种病毒可引起多种临床症状,不同的病毒可引起同一种临床症状,给临床诊断和治疗造成很大的困难,所以这类病毒的检测确诊对于采取有效的预防和治疗措施极为重要.     

浅谈地方医院发热门诊的消毒隔离管理

传染性非典型肺炎是一种目前病因尚不明确的严重急性呼吸综合征(SARS),在我同部分地区有病例发生.禽流感(Bird Flu或Avian Influenza)是由禽流感病毒引起的一种急性传染病,也能感染人类,病死率很高.     

人类流感与禽流感

从2003年12月开始,在亚洲广袤地区家禽中发生禽流感流行,发病率和病死率都很高,对家禽是一场毁灭性的灾害.个别国家还发生了从禽到人传播的疫情,使人发病并死亡.迄今为止,尚无迹象表明,禽流感病毒能在人际间传播.加强人类流感和禽流感的防治是当前畜牧兽医部门和卫生防疫部门的重要任务.     

是什么导致禽流感病毒的突变?

导致禽流感病毒突变的原因是病毒在复制时缺少硒蛋白。其缺硒的原因是禽类饲料中缺硒加上产蛋的高耗硒,使体内严重缺硒。而饲料缺硒是当地农作物产地缺硒,经调查研究2005年高致病禽流感暴发区与缺硒地有关,初步证明禽流感病毒突变与缺硒有关。与其同类的另一种RNA病毒——柯萨奇病毒的突变为高致病病毒曾用补硒控制其(克山病)流行,在营养方面创造过奇迹,其研究方法在研究禽流感病毒突变时可借鉴。     

《国际病毒学杂志》稿约

马尔堡病毒病是由马尔堡病毒引起的一种致死率极高的烈性传染病.马尔堡病毒(marburg virus,MARV),也称绿猴病毒,形状象长丝,有时候盘绕成奇怪形状的粒子,是人类发现的第一种丝状病毒属病毒,与1976年发现的埃博拉病毒同属于丝状病毒科,是人类最为致命的病原体之一.马尔堡病毒死亡率非常高,2005年非洲暴发的马尔堡病毒致死率高达90％,给人类社会带来了沉重的灾难.对于马尔堡病毒目前尚无特异性治疗措施,但是及早地检测和预防对防治马尔堡病毒病具有重要的意义.     

禽流感与公共卫生

近年来，H5N1亚型高致病性禽流感在东南亚多个国家爆发，给养禽业带来沉重打击。H5N1亚型禽流感病毒还在越南、泰国、印尼、柬 埔寨和中国引起160多人感染，导致半数以上感染者死亡。禽流感这一重大禽类疫病，目前已成为公共卫生面临的最大威胁。本文对流感及流感病毒、H5N1亚型禽流感病毒跨越禽-哺乳动物种间屏障的分子机制进行了综述，并对今后禽流感的防治提出了建议。     

高致病性禽流感病毒实验室检测方法研究进展

禽流感作为一种世界范围的禽类疫情,现已出现致病力高、宿主范围扩大(可感染哺乳类,甚至人类)的变异趋势,由此引发的公共卫生问题引起了国际社会的高度重视.及时、准确的检测已成为有效防控禽流感的前提.禽流感病毒的检测方法主要分为病毒分离培养、抗原检测、抗体检测及核酸检测四个主要方面,文章围绕这四个方面对禽流感病毒检测方法的研究进展进行简要综述.