超抗原SEA诱导T细胞无能的作用机制探讨

目的 探讨超抗原诱导T细胞无能的分子机制。方法 采用ELISA的FACS，分别检测超抗原对诱导T细胞无能的过程中，IL－2，IL－10的产生和IL－2Rα链（CD25）的表达，并以^3H-TdR掺入法，测定无能T细胞对rhIL-2,PMA及ionomycin的应答能力，而L－10的产生则逐渐升高；CD25的表达与活化组相比较无显著差异。rhIL-2的加入可恢复T细胞增殖。PMA单独作用能诱导无能T细胞的部分增殖能力，但PMA＋ionomycin则能更大程度地恢复T细胞的增殖。结论 超抗原SEA对T细胞无能的诱导，可能与降低IL－2的水平和升高IL－10的水平有关。超抗原SEA的反复刺激对T细胞无能的诱导，可能是干扰了TCR信号途径的近端事件，导致Ras/MAPK途径和Ca/calcineurin途径受阻，而使IL－2基因不能转录所致。     

血小板活化因子抑制T细胞早期活化信号的转导

血小板活化因子 (PAF)是一种脂类介质 ,可由多种细胞分泌。PAF除能引起血小板凝集外 ,还能活化嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞。PAF对T细胞的活化亦有调节作用 ,例如 ,PAF可抑制由PHA或CD3McAb诱导的T细胞增殖、IL 2和IL 4的合成、IL 2R(CD2 5 )的表达[1] 。本实验通过分别观察PAF对CD3McAb和PMA/iono mycin诱导的T细胞活化的作用 ,研究PAF对淋巴细胞活化的抑制作用是否与其对早期信号转导过程的调节有关。材料和方法淋巴细胞的制备和培养 :利用Ficoll Hypaque(Biochrom)密度梯度离心技术和E花结形成…     

重症肌无力患者外周血B7：CD28／CTLA4共刺激分子表达的动态变化

目的：研究重症肌无力（MG）患者B7：CD28／CTLA4共刺激通路相关分子表达动态变化及其与MG发病的关系。方法：用流式细胞仪检测18例MG患者和16例健康对照者外周血单个核细胞（PBMC）在经PMA（佛波酯）＋ionomycin(钙离子导入剂）刺激的0h,6h,24h,48h时B7－1、B7－2、CD28、CTLA4分子在CD4^ T细胞和CD8^ T细胞表面的表达。结果：（1）0h,MG患者B7－1、B7－2分子总体表达增加，CD4^ 、CD8^ T细胞表面B7－1、B7－2的表达未见明显增加，PMA＋ionomycin刺激后B7－1、B7－2在CD4^ 、CD8^ T细胞表面也无增加；（2）0h,CD28、CTLA4的表达增强，其中CD28^ 细胞的增多主要表现在CD4^ T细胞亚群，CTLA4的表达增强主要在CD8^ T细胞，在PMA＋ionomycin激活后，CD28表达明显增强，持续到48h都处于较高水平（与对照组相比P＜0．01），CTLA4表达出现短暂增强，6h即达高峰，以后下降，与对照组相比无显著增强（P＞0．05）。结论：MG患者外周血中B7：CD28／CTLA4通路共刺激相关分子表达增高，持续时间延长，检测共刺激分子的表达可反映机体的免疫激活状态，B7：CD28／CTLA4通路在MG发病中可能起重要作用。     

模拟微重力对肺T淋巴细胞激活功能的影响

目的 探讨模拟微重力对肺T淋巴细胞活化功能的影响及机理.方法分离肺T淋巴细胞,利用的旋转式细胞组织培养系统(RCCS,即旋转生物反应器)模拟微重力条件.培养T淋巴细胞后,采用PepTag非放射性PKC检测试剂盒测定PKC活性;采用免疫组织化学染色观察表达核因子-cB(NF-κB);酶联免疫吸附技术(双抗体夹心ELISA法)测定白介素-2(IL-2)生成;采用流式细胞技术检测表面抗原CD25.结果普通细胞培养容器组培养的T淋巴细胞,刀豆素蛋白A(ConA)组与对照组比较,T淋巴细胞PKC活性增强,NF-κB的免疫组化染色阳性细胞的百分比增加,IL-2生成增加,表面表达CD25的细胞增多(P＜0.01);模拟微重力条件下,与普通细胞培养容器培养的T淋巴细胞相比较,ConA刺激后,PKC活性降低,NF-κB免疫组化染色阳性细胞百分比减低,IL-2生成下降,表面表达CD25细胞减少(P＜0.01);模拟微重力条件下,加入PKC特异的激动剂PMA,和ConA共同培养的T淋巴细胞组,与同样条件下ConA组相比,PKC活性略增强、NF-κB的免疫组化染色阳性细胞百分比、IL-2生成的量、表面表达CD25增加(P＜0.01).结论 模拟微重力条件下,T淋巴细胞的激活受到抑制;PKC的活性降低,表达NF-κB细胞数减少,表面表达CD25的细胞数降低,T淋巴细胞分泌的IL-2降低;同样条件下,PMA对T淋巴细胞的上述指标有部分恢复作用.     

PKCθ激活γδT细胞转录因子NF-κB的作用

目的:探讨经T细胞受体(TCR)途径激活人γδT细胞时,新型蛋白激酶PKCθ在促进转录因子NF-κB活化中的作用.方法:常规分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),用结核杆菌耐热性多肽抗原(MtbAg)诱导扩增,获得Vγ9Vδ2 T细胞富集的细胞群(MtbAT).PKCθ抑制剂(Rottlerin)预处理MtbAT,抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激后收集细胞,通过电泳迁移率变动分析(EMSA)检测转录因子NF-κB活性变化;经流式细胞术(FCM)检测T细胞活化分子CD69的表达情况.结果:γδT细胞经抗CD3 mAb刺激,NF-κB活性增强;Rottlerin预处理使抗CD3 mAb诱导的NF-κB活化程度显著减弱,并抑制T细胞活化分子CD69的表达.结论:PKC0在人γδT细胞经TCR途径激活NF-κB过程中具有重要作用.     

凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞对抗原特异性CTL的激活

为探讨凋亡Daudi细胞负载的树突状细胞 (DC )激发诱导肿瘤抗原特异性CTL及其生物学特性 ,采用常规方法从人外周血单个核细胞 (PBMC )诱导DC ,激发型CD40mAb联合 50Gyγ射线辐照诱导Daudi凋亡后负载DC ,然后与自体T细胞共育 ,并联合IL 2激发诱导肿瘤特异性CTL ;采用免疫荧光标记和流式细胞仪测定分析膜分子的表达 ;ELISA检测细胞因子的产生 ;Dextran FITC内吞实验分析DC的抗原摄取能力 ;3H掺入试验和51 Cr释放试验分别测定CTL的增殖和细胞毒效应。结果 :(1 )细胞因子序贯体外诱导 7d的DC ,对Dextran吞噬能力最强 ;(2 )CD40mAb诱导联合γ射线辐照 ,能有效介导Daudi细胞的凋亡 ;(3 )抗原负载联合CD40mAb激发可使DC上调表达CD1a、CD80、CD86和HLA DR ,并能促进IL 1 2的分泌 ;(4)凋亡Daudi负载后的DC在激发型CD40mAb作用下 ,能激发和扩增对Daudi细胞具有高效和特异杀伤作用的细胞毒性T细胞。因而认为凋亡肿瘤细胞负载联合CD40mAb刺激的DC可有效激活和扩增肿瘤特异性CTL。     

CD3/TCR复合物抗体诱导不成熟胸腺细胞亚群的凋亡

目的：采用AnnexinV,PI染色，流式细胞仪分析的方法、DNA琼脂糖电泳法检测不同CD3/TCR复合物抗体对小鼠胸腺T淋巴细胞亚群的促凋亡作用。方法：新鲜分离胸腺细胞，加入PMA、anti-TCR anti-CD28 mAb,anti-TCR mAb等培养20小时，AnnexinV,PI,CD4,CD8细胞染色以及TCR三染，进行FACS分析，同时抽提培养细胞DNA进行琼脂糖电泳。结果：PMA IONO诱导胸腺T细胞的凋亡作用最强，anti-TCR anti-CD28 mAb次之，anti-TCR mAb最弱。结论：AnnexinV,PI细胞染色，流式细胞仪分析的方法可以灵敏检测T淋巴细胞的凋亡；anti-TCR anti-CD28 mAb能明显增强anti-TCR mAb促不成熟的CD4^ CD8^ TCR^ 和CD4^ TCR^ 细胞的凋亡作用；不成熟T细胞经TCR与自身抗原结合的活性过程能产生克隆删除从而产生自我耐受。     

高糖对THP-1细胞及平滑肌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体4表达的影响

目的：探讨高糖对单核/巨噬细胞系THP-1细胞及人主动脉平滑肌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体4(TRAIL-R4)表达的影响。方法：用PMA孵育THP-1细胞，诱导其分化成为巨噬细胞。流式细胞仪检测成功诱导的巨噬细胞粘附分子CD11b及CD11c。采用不同糖浓度干预THP-1细胞，用Western blotting技术检测TRAIL-R4的表达。用25 mmol/L 高糖培养液在不同时点孵育人主动脉平滑肌细胞，观察TRAIL-R4蛋白表达的变化。用PKC激动剂干预THP-1细胞后，用Western blotting技术检测TRAIL-R4的表达。结果：佛波酯(PMA)孵育THP-1细胞48 h可诱导其分化成为巨噬细胞。20 mmol/L 高糖明显上调人THP-1细胞TRAIL-R4的表达。高糖对人主动脉平滑肌细胞TRAIL-R4表达上调的影响随着刺激时间的增加而增加。PKC激活后THP-1细胞TRAIL-R4的表达明显上调。结论：高糖上调TRAIL-R4蛋白表达，TRAIL-R4通过抑制巨噬细胞及平滑肌细胞的凋亡促进动脉粥样硬化。     

结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径

目的探讨Ras/Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径.方法分离获取PBMC,用佛波醇酯(PMA)和离子霉素(IM),CD3mAb或Mtb-Ag刺激不同时间,或PBMC先经PD98059处理后再刺激培养;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD69分子的表达;计数培养扩增10天的细胞数量.结果PBMC用PMA+IM刺激6小时,总T细胞和γδT细胞中的CD69表达均达高峰(均＞99%),用CD3mAb刺激24小时,均达高峰(均在55%左右),用Mtb-Ag刺激24小时,亦均达高峰,但总T细胞和γδT细胞中CD69分别为16.0%和75.2%;用PD98059预处理PBMC,可明显抑制Mtb-Ag激活的γδT细胞CD69表达和γδT细胞的增殖.结论Mtb-Ag可特异性激活γδT细胞,其活化信号转导需通过Ras/Erk通路.     

天花粉蛋白抑制T细胞增殖的免疫学机制研究

目的研究天花粉蛋白(Tk)诱导免疫抑制的免疫学机制。方法应用淋巴细胞体外增殖抑制试验，分别对丝裂原ConA、可溶性抗原OVA及CD3联合CD28 McAb三种T细胞增殖系统进行Tk诱导免疫抑制的剂量依赖性试验。建立OVA特异性的T细胞系(Tova)，观察Tk对由IL-2-IL-2R信号介导的T细胞增殖的抑制作用。用FACS测定Tk处理过的脾脏单个核细胞(SMC)的凋亡。分离骨髓诱导产生未成熟的DC(iBDC)，比较Tk冲击处理前后DC激活T细胞增殖能力的差异。用Tk冲击处理Tova，观察Tk冲击处理前后T细胞增殖能力的变化。结果低剂量的Tk(1ng，ml～500ng/ml)对OVA增殖系统有强烈的抑制作用，对ConA增殖系统抑制较弱，而对CD3联合CD28 McAb及IL-2增殖系统的T细胞增殖几乎无抑制作用。在5μg/ml的Tk浓度以下，Tk不诱导SMC凋亡。Tk冲击处理过的iBDC提呈OVA激活特异性T细胞的能力明显下降；而Tk冲击处理过的Tova增殖能力没有受到影响。结论Tk通过影响APC来诱导免疫抑制。     

植物血凝素（PHA）对小鼠骨髓粒—巨噬祖细胞的保护作用

以体外半固体琼脂培养方法,观察了PHA对小鼠骨髓CFU—GM的保护作用.结果显示 小鼠经腹腔往射PHA后,对小鼠CFU—GM的自杀率有明显提高,提示适量的PHA在体内可以促进小鼠CFU—GM增殖.使更多的CFU—GM由Go进入S期.我们发现4mg/kg三尖杉酯碱(Ha)明显抑制小鼠CFU—GM增殖,若先用PHA(30mg/kg处理小鼠,则可对抗上述剂量的Ha,使CFU—GM产率维持于对照组水平.提示PHA能有效地保护粒-巨噬系免受Ha的损害,     

聚羟基烷酸酯、聚丁二酸丁二酯及其共混材料的细胞相容性评价比较

取家兔的骨髓间充质干细胞(MSCs)分别种植到聚羟基烷酸酯(PHBV)、聚丁二酸丁二酯(PBS)、及其二者共混材料(PHBV/PBS)上,每组材料又分为有孔和实心两种构型。用MTT实验、乳酸脱氢酶(LDH)实验、甲苯胺蓝染色和电镜等方法,观察MSCs在材料上的生长情况。比较三种材料六种构型分别对MSCs黏附和增殖的影响。结果以共混物实心材料的毒性最低,细胞增殖率最高。甲苯胺蓝染色结果显示兔MSCs在共混实心材料上的生长最佳,扫描电镜结果显示兔MSCs与共混实心材料黏附良好。共混物实心材料很有希望成为制备组织工程血管新型的支架材料。     

痫样放电大鼠颅内脑电信号的同步分析

迄今为止,我们对人类癫痫发作的机制还知之甚少,然而,普遍公认癫痫发作与神经元的异常同步放电密切相关。我们对匹罗卡品诱发的痫样放电大鼠皮层和海马脑电信号采用似然同步方法进行了分析,结果发现:从无痫样放电向连续性痫样放电转换时,左皮层—左海马(LC-LH)、右皮层—右海马(RC-RH)、左皮层—右皮层(LC-RC)、左海马—右海马(LH-RH)间的同步性显著增强(P<0.05);从连续性痫样放电向周期性痫样放电转换时,LC-LH、LH-RH间的同步性显著降低(P<0.01)。提示似然同步可以用于评估痫样放电中脑电信号同步的动力学特性并有助于理解其起源机制。     

中国汉族人群抗原肽运载体（TAP）基因结构的多态性及其在类风湿关节炎易感性中的意义

抗原肽运载体（ＴＡＰ）基因位于ＭＨＣ┐Ⅱ类区，与ＭＨＣ┐Ⅰ类基因的表达及内源性抗原加工后运输有关。类风温关节炎（ＲＡ）作为一种自身免疫病被认为与遗传背景及一些内源性和自身抗原有关。本文对１４２名上海地区汉族人（正常人８８名，ＲＡ病人５４例）ＴＡＰ基因进行了分析，结果显示，ＴＡＰ１基因至少存在Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４种亚型，其中Ｄ型尚未见报道，ＴＡＰ２基因至少存在Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ８种亚型，其中后５种亚型尚未见报道。此外尚有４．５％正常人ＤＮＡ用白种人ＴＡＰ１探针无法定型，２．３％的ＴＡＰ２无法定型，呈杂交空白（Ｂｌａｎｋ），说明中国人ＴＡＰ基因具有高度多态性。对ＲＡ病人ＴＡＰ基因比较研究发现，ＴＡＰ２基因６８７位密码子在ＲＡ易感性中至关重要，６８７位为终止码纯合子者（表型为短链ＴＡＰ２纯合子）表现为ＲＡ易感生（χ２＝６．０５，Ｐ＜０．０２５），６８７位为终止码和谷氨酰胺杂合子者（表型为短链和长链ＴＡＰ２杂合子）呈ＲＡ抗性（χ２＝９．１８，Ｐ＜０．００５）。     

磺化聚醚砜对光敏剂-亚甲蓝的吸附去除研究Ⅱ.磺化聚醚砜对血浆中亚甲蓝的吸附去除研究

研究了磺化聚醚砜吸附柱对血浆中亚甲蓝的吸附效果,并检测了流经吸附柱的牛血清白蛋白随时间变化的规律以及过柱前后血浆中主要生化指标的变化情况.结果:磺化聚醚砜对亚甲蓝的吸附效果明显优于聚醚砜对亚甲蓝的吸附效果;其对白蛋白的吸附较小;对血浆中主要生化指标的影响可以忽略不计.     

两种细胞外基质分子在慢性肾衰中的变化

目的 :检测慢性肾衰 (CRF)患者血清透明质酸 (HA)及层粘蛋白 (LN)的含量 (x±s,μg L) ,并探讨它们在CRF病理过程中的作用。方法 :用放射免疫法检测 31例CRF患者及 4 0例健康人血清HA及LN浓度 ,统计分析用t检验。结果 :CRF血清HA和LN均比正常对照组显著升高 (P <0 0 1)。其中HA在少尿或无尿期CRF中高于正常对照 5～ 10倍。 11例CRF患者经血透析治疗后血清HA与LN均明显下降 (P <0 0 1)。结论 :HA和LN是构成ECM的重要成分 ,其含量异常增多是致ECM分子过度沉积 ,进而导致肾纤维化及肾功衰竭的因素之一。血液透析治疗可清除或减少ECM的过度蓄积并有助于改善肾功能 ,提示可通过抗ECM或刺激基质分解等途径 ,给CRF患者的治疗带来新的希望     

聚乳酸/聚乙二醇-聚乳酸新型亲水支架的制备与研究

利用热致相分离/粒子沥滤结合法,制备了聚乳酸(PDLLA)以及聚乳酸与聚乙二醇-聚乳酸共聚物(PELA)复合的PDLLA/PELA组织工程支架。讨论了聚乙二醇(PEG)分子量、PELA含量及组成比对于支架内部结构、力学性能、降解行为和细胞毒性的影响。结果表明,热致相分离/粒子沥滤结合法制备的支架,具有100~250μm大孔与5~40μm小孔兼备的特殊内部结构,PEG含量愈高、PEG分子量愈小,支架的孔隙率愈大。PDLLA/PELA比率的减小,PEG/PLA比率的增大会引起支架力学性能的下降和降解的加速。材料无细胞毒性。当支架中PDLLA/PELA为3∶1,PEG 5000/PLA为25∶75时,其内部孔形态最为理想。     

震颤信号分析的研究现状及展望

震颤是人身体某一个或多个功能区肌肉的节律性、不自主振动,是运动神经元异常同步化的结果。用信号处理的方法检测分析震颤患者加速度(accelerometer,ACC)、表面肌电(electromyography,EMG)、脑电(electroencephalography,EEG)信号对震颤临床诊断、等级评定、疾病早期发现等方面具有重要意义。介绍了时域分析、频域分析、人工神经网络、高阶谱、近似熵、模糊、浑沌、判别分析等方法在震颤信号研究中的应用情况,最后展望了震颤信号分析的应用前景。     

Studies on the structure and function of the apolipoprotein(a) gene

Lp(a) is an LDL-like lipoprotein that is a major inherited risk factor for atherosclerosis. It is distinguished from Lp(a) by the addition of apolipoprotein(a). The gene structure of apolipoprotein(a) is homologous to plasminogen, and competition with plasminogen activity may account for some of the pathophysiology associated with Lp(a). Six highly related genes have now been identified, and at least four are found in close proximity in overlapping genomic clones. Studies have begun on the regulation of apolipoprotein (a) gene expression, and the human apolipoprotein(a) gene has been inserted into transgenic mice, where it leads to the development of arterial lesions.     

蝮蛇毒抗栓酶的促纤溶和抗凝血作用的实验研究

本工作利用大鼠衄管灌流及异丙肾上腺素(ISP)性AMI模型,以体外纤维蛋白溶解活性、纤溶酶原激活剂(PA)活性,血浆纤溶酶(PL)活性、凝血酶原时间(PT)、白陶土部分凝血活酶时间(KPTT)等变化,观察蛇毒抗栓酶(SVATE)的促纤溶、抗凝血和心肌保护作用。结果表明,SVATE有缴活纤溶怍用,它能逆转ISP性AMI大鼠PL活性的降低,这种作用是由于激活PA导致PL生成增加。同时对内源凝血系统有一定抑制作用。此外保护心肌、降低死亡率。