造血干细胞测定在异基因骨髓移植中的应用

本文研究了23例异基因骨髓移植病人,所输入骨髓的造血干细胞(CFU—MIX)及红,粒系祖细胞(BFU一E、CFU—GM)的总量与移植后病人血粒细胞恢复的关系。发现移植后血粒细胞恢复的速度与接受CFU—MIX和CFU一GM的总量密切相关、而与输入的骨髓有核细胞、BFU—E总数无关。提示输入的CFU—MIX和CFU一GM在造血重建中起重要作用,测定其含量可预测移植后造血重建的速度及体外去除与移植无关细胞操作的效应。     

真皮多能干细胞促进大鼠急性放射损伤造血恢复的研究

目的 观察真皮多能干细胞移植对大鼠急性放射损伤后造血恢复的作用。方法 分离新生大鼠真皮多能干细胞体外培养至第10代用于研究，观察干细胞层体外对正常大鼠骨髓粒-巨噬系祖细胞和红系祖细胞集落生长的影响；进一步将真皮多能干细胞经尾静脉输入5Gyγ射线全身照射的大鼠体内，检测移植后骨髓有核细胞、粒-巨噬系祖细胞集落CFU—GM、红系祖细胞集落CFU—E和外周血白细胞数量、血红蛋白含量等指标的恢复情况，观察4周后动物的存活率。结果 真皮多能干细胞层体外可促进正常大鼠CFU—GM和CFU—E集落的生长；全身输入干细胞促进了5Gyγ射线全身照射动物的外周血白细胞和骨髓有核细胞、CFU-GM和CFU—E集落数的恢复。实验组动物4周后的存活率也明显高于对照组。结论 真皮多能干细胞具有一定支持造血的功能，可促进急性放射损伤大鼠的造血恢复，为造血损伤相关疾病的干细胞治疗提供新的细胞来源途径。     

人脐静脉内皮细胞支持体外造血和造血干／祖细胞扩增

目的 :研究人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcell ,HUVEC)对体外造血和造血干 /祖细胞扩增的支持作用 ,为造血干 /祖细胞体外扩增提供新的实验资料。方法 :用甲基纤维素集落形成实验检测集落形成情况 ,采用HUVEC与脐血单个核细胞和CD34+细胞直接接触共培养的方法观察HUVEC对体外造血和造血干 /祖细胞扩增的支持作用。结果 :HUVEC上清具有集落刺激活性。将HUVEC与脐血单个核细胞直接接触共培养 ,结果表明HUVEC能维持脐血单个核细胞体外存活至少 4周。将脐血CD34+细胞与HUVEC直接接触共培养 ,动态地观察有核细胞扩增倍数、CD34+细胞扩增倍数、CD4 1a+细胞百分比和CFU GM扩增倍数的变化。结果发现 ,有核细胞扩增倍数、CD34+细胞扩增倍数和CD4 1a+细胞百分率均在第 3周达最高 ,分别为 (6 8.1± 14.8)倍、(6 .6± 1.4 )倍和 15.6 % ,而CFU GM扩增倍数则于第 2周达最高 ,为 (5.7± 2 .1)倍。结论 :HUVEC能支持体外造血和造血干 /祖细胞扩增并具有促进巨核系细胞分化的能力     

再生障碍性贫血与急性白血病骨髓纤维母细胞集落生成细胞体外培养的初步观察

目前研究的结果提示骨髓基质细胞对于调节造血干细胞的增殖与分化有重要作用。由骨髓培养生长的纤维母细胞可反映基质细胞的一个结构成分。这种纤维母细胞对造血的调节是复杂的,它不仅可释放一种,可溶性因子,使小鼠造血干细胞(S—CFu)或人类造血祖细胞(GM—CFu)在体外的存活延长,且其形成的集落也刺激粒系祖细     

再生障碍性贫血发病机理的体外研究

再生障碍性贫血(下称再障)是以骨髓功能衰竭、全血细胞减少为特征的临床综合症。其发病机理至今不甚明了。近年来的临床和实验研究提示其发病机理可分为造血细胞,微环境及免疫缺陷三种类型,一些作者体外骨髓粒系造血祖细胞(GM—CFU)培养证实,部分再障确系造血干细胞缺陷和免疫功能失调所致,但对个体病人有微环境缺陷者尚属推测,临床上尚缺乏一种较普遍接受对个体病人发病机理进行可靠分析的方法。近年来,我们以骨髓基质成纤维细胞(F—CFU)体外生长特点作为造血微环境的指标,比较研究了再障骨髓     

rhIL-11对外周血小板数及造血祖细胞增殖的影响

观察rhIL-11在体外对人骨髓造血祖细胞集落形成和对3.0Gy照射猕猴的外周血小板数及骨髓造血祖细胞恢复的影响。结果显示，rhIL-11可明显提高照射猴外周血小板数的最低值，缩短血小板最低值的持续时间，加速血小板数的恢复，但未见到血小板数与rhIL-11剂量间的明显关系。rhIL-11不仅直接刺激CFU－MK增殖和分化，而且还可促进CFU－GM、CFU－e、BFU－e及早期的CFU－Mix的增殖。提示rhIL-11可能是治疗血小板减少和骨髓再生不良的一个有效药物。     

牛膝精(AbE)对血细胞的效应

目的：探讨牛膝精（AbE）对血细胞的效应。方法：用CFU－GM、CFU－Mix体外培养,T、B淋巴细胞转化试验。粒细胞NBT,吞噬试验等手段在体外观察AbE对骨髓造血细胞、淋巴细胞、粒细胞的生物效应。结果：（1）AbE可促进CFU－GM、CFU－Mix的增殖分化。（2）AbE可提高T、B淋巴细胞转化率。（3）AbE可增强粒细胞NBT阳性率,吴噬阳性率与指数。结论：AbE有可能成为一种能改善造血与免疫功能的生物反应调节剂。     

胚胎期受辐射对子鼠造血基质细胞功能的影响

目的　研究胚胎期 2 0Gy137Csγ射线照射后对子鼠造血基质细胞的远期影响。方法　建立胚胎期受辐射小鼠模型 ;以细胞计数检测股骨骨髓有核细胞 (BMNCs)数 ;用免疫组化ABC法检测基质细胞粒单系集落刺激因子 (GM CSF)和干细胞因子 (SCF)的表达 ;用体外小鼠骨髓细胞培养法以粒单细胞系祖细胞集落形成单位 (CFU GM )为指标观察基质细胞对正常骨髓造血的支持功能。结果　胚胎期受辐射小鼠BMNCs数明显低于正常小鼠 (P <0 0 1) ,其骨髓基质细胞生长因子GM CSF和SCF的表达均高于正常小鼠 (P <0 0 5 ) ,同时 ,胚胎期受辐射小鼠骨髓基质细胞对正常骨髓造血的支持能力也高于正常小鼠 (P <0 0 5 )。结论　 2 0Gy137Csγ射线对发育中的小鼠胚胎的造血基质细胞产生了明显影响。     

5Gy60Coγ线照射后小鼠骨髓中红系祖细胞损伤和恢复的动态观察

用体外微量甲基纤维素培养方法观察了LACA小鼠受5Gy⁶⁰Coγ线一次全身照射后0～25灭骨髓中红系祖细胞(CFU—E和BFU—E)损伤和恢复的动态过程。与以往测得的5Gy照射后CFU—E(D), CFU—GM、CFU—S变化的结果进行了比较分析, 结果说明急性照射后CFU.E和CFU—E(D)的变化一致。照后即刻CFU—E明显减少, 照后10天恢复正常。BFU—E变化特点是先下降后上升, 照后20天恢复正常。CFU—E与CFU—GM的变化在时间上一致。CFU—E与CFU—S变化的相关系数为0.8428, BFU—E与CFU—S变化的相关系数为0.9717.     

重组人IL-2激活外周血干细胞移植物的抗白血病细胞毒作用

目的 :观察重组人IL 2体外激活G CSF动员的健康供者外周血干细胞 ( peripheralbloodstemcell,PBSC)移植物的抗白血病细胞毒作用 ,以及rhIL 2处理对PBSC移植物造血功能的影响。方法 :细胞培养条件下 ,PBSC移植物与不同浓度rhIL 2 ( 10 0 0 ,50 0和 2 50U /ml)共培养 2 4及 72h ,采用乳酸脱氢酶 (LDH)释放法测定激活的PBSC移植物细胞毒作用 ,并应用流式细胞术分析细胞表型变化 ;采用集落形成试验测定PBSC移植物形成CFU GM、BFU E的能力。结果 :经rhIL 2体外处理的PBSC移植物 ,其细胞毒作用显著增强 ,不同rhIL 2浓度之间无显著差异 ,培养 2 4及72h则有显著差异。rhIL 2体外处理对PBSC移植物形成CFU GM、BFU E能力无抑制作用 ,且有一定的促进。结论 :提示在临床异基因外周血干细胞移植 (allo PBSCT)前 ,体外以rhIL 2处理移植物 ,可显著增强其抗白血病细胞毒作用 ;有可能在输入体内后诱导和 (或 )增强移植物抗白血病和移植物抗肿瘤效应。     

胎肌条件培养液对白血病细胞的体外效应

以髓系(HL-60)与淋系(Molt-4)细胞为观察对象,用细胞计数、细胞集落培养、台酚蓝拒染及溴化二甲噻唑二苯四唑试验为观察手段,研究胎肌条件培养液(FMCM)对白血病细胞的影响.实验标本分为4组:①对照组.②20%FMCM处理组.③阿糖胞苷(Ara-C,1×10~(-7)M/L)处理组.④混合处理组(经FMCM与Ara-C二者的处理).发现:①FMCM对两个细胞株均无明显的直接作用.②当HL-60细胞经FMCM预处理或在用Ara-C处理同时加入FMCM,Ara-C对其抑制作用可为FMCM加强,已受Ara-C抑制的HL-60细胞则无此现象.③Ara-C对Molt-4的抑制作用不受FMCM的影响.由此而初步认为:①FMCM对白血病细胞似无明显直接作用.②某些(非全部)白血病细胞对Ara-C的敏感性可为FMCM加强.③在己受抑制的细胞中不呈现这种致敏现象.①提示FMCM有可能用于白血病临床治疗.     

人外周血中造血祖细胞(CFU-C)的测定

正常人的外周血中,经过体外培养证实,存在着具有形成细胞团能力的细胞。Rickard等实验证明,在体外培养条件下生成细胞团的原始细胞是一类造血祖细胞(如CFUC、CFU-E等),而不是多向性造血干细胞(CFU-S)。不过定向性祖细胞是来源于多向性造血干细胞的,由于目前除啮齿类动物外,尚不能测定其它动物造血组织和外周血中的多向性干细胞,因此对CFU-C或CFU-E     

骨髓分离方法的比较及在自体骨髓移植中的应用

本研究首次使用0.05%甲基纤维素分离骨髓有核细胞与5%羧甲基淀粉钠、自然沉降及Ficoll分离法等方法比较,甲基纤维素法具有方法简便易行,分离速度快,有核细胞及CFU—GM回收率高(分别为79.0±17.7%和93.0±10.7%)等特点.将此方法应用于4例恶性血液病病人的大容量骨髓的体外分离进行自体骨髓移植(ABMT)均重建了造血,取得了移植成功.我们认为此方法适于国内推广应用进行ABMT.     

人类骨髓纤维母细胞集落形成细胞的体外培养研究

近年来,对小鼠研究的结果证实骨髓基质细胞对于造血干细胞的增殖和分化有重要作用。骨髓基质细胞主要包括纤维母细胞、内皮细胞、脂肪细胞和网状细胞。由骨髓培养生长的纤维母细胞可反映基质细胞的一个结构成分。因此利用体外培养,观察骨髓中纤维母细胞集落形成细胞(F—CFU)生长特点,研究它与各种造血细胞之间的关系,从而探讨造血生理及某些血液病的发病机理是目前实验血液学的重要进展之一。随着这一工作的深入进展,有关人类骨髓F—CFU体外培养的研究也积累了许多资料,本文就其培养方法,F—CFU的生长特点,对造血的调节及在某些疾病中研究的近况作一综述。     

rhM—CSF与单核细胞协同对残留白血病祖细胞抑制作用的研究

应用造血祖细胞体外甲基纤维素培养法,观察基因重组人巨噬细胞集落刺激因子(rhM-CSF)对急性早幼粒细胞白血病(APL)完全缓解后骨髓残留白血病祖细胞(L—CFU)的抑制作用,培养前用rhM—CSF与去单核和未去单核的骨髓单个核细胞作用。结果表明:rhM—CSF对L—CFU有明显的抑制作用和诱导分化作用,且与单核细胞的协同作用有关。     

小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞对粒系造血祖细胞增殖的影响

本文应用体外液体培养方法建立小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞贴壁层,在贴壁细胞层上做粒系造血祖细胞集落(GM-CFU-C)培养,观察胎肝造血基质细胞和骨髓造血基质细胞对粒系造血祖细胞生长的影响。实验结果表明,培养1～2周的胎肝造血基质细胞贴壁层能抑制 GM-CFU-C 的集落生成,此抑制作用可被消炎痛拮抗。随贴壁培养时间的延长,胎肝造血基质细胞贴壁层转而增加 GM-CFU-C 产率。不同培养时间的骨髓造血基质细胞贴壁层均能明显地促进 GM-CFU-C 的生长。文中讨论了造血基质细胞与造血的关系以及两种来源造血基质细胞作用不同的可能原因。     

梁金菇多糖对辐射损伤小鼠造血功能的影响

目的：研究梁金菇多糖（LJPS）对造血功能辐射损伤的治疗作用及机理。方法：用造血祖细胞克隆法，内源性脾结节形成法，骨髓有核细胞计数及脾脏指数等方面观察了LIPS对60^Coγ射线照射5．5Gy小鼠造血功能的影响，并用免疫组化法检测辐射骨髓及脾脏细胞的 bcl-2蛋白的表达。结果：LJPS辐射后第7天骨髓CFU－GM，CFU－E，CFU－F数量增加，辐射第14天的骨髓有核细胞数，脾脏指数，CFU－S明显增多，辐射第3，7，14天骨髓，脾脏bcl-2蛋白表达上升。结论：LJPS对小鼠造血功能辐射损伤具有治疗作用，其机理与调节骨髓，脾脏bcl-2蛋白表达有关。     

脐带血造血干细胞(DCPC与CFU—GM)的辐射敏感性

业已证明,经过有丝分裂原刺激的淋巴样细胞,其辐射耐受性比分裂间期的淋巴样细胞高。脐带血造血祖细胞的DNA自发合成率高,且能在体外培养下自发生成集落。因此有必要和有条件去研究其辐射敏感性。实验用健康足月胎儿分娩后5小时内的脐带血。对照为健康成人外周血。把经分离提纯的单个核细胞和加或不加CSF的血沉棕黄层细胞用15Mev的电子感应加速器生成的加速电子分别照射10、100、200、400、600、800、1200、1500拉德(剂量率为200拉德/分)。照射后的细胞用甲基纤维素培养体系检测CFU—GM;     

脐带血清与细胞因子在造血细胞培养中的效应比较

目的：比较人脐带血清（CBS）与细胞因子在骨髓血细胞培养中的效应。方法：在体外人骨骨CFU－GM、CFU－E、BFU－E、CFU－GEMM、CAFC、LTC－IC培养体系中,加入CBS或／和细胞因子,观察所形成的集落。结果：与细胞因子比,CBS中含有较高的GM－CSF、EPO、SCF、IL－3、IL－6等活性,能直接刺激骨髓造血细胞形成。结论：CBS内的造血刺激活性能刺激CFU－GM、CFU－E、BFU－E、CFU－GEMM的生长,使CAFC、LTC－IC、得到明显扩增,具有一定应用前景。     

程控降温后液氮保存对自体外周血造血干细胞含量和活性的影响

目的：观察程控降温后液氮保存对自体外周血干细胞含量和活性的影响。方法：13例接受APBSCT患者分离的造血干细胞利用程控降温仪进行冷冻,然后置液氮液相内（－196℃）保存,检测患者冻存前后的有核细胞数,CFU－GM,CD34＋细胞。结果：冻存前后CFU－GM,有核细胞数,CD34＋细胞统计学之间无显著性差异。结论：自体外周血干细胞体外冷冻处理和保存是有效和适当的。