二甲基亚砜与羟乙基淀粉对血小板的冷冻保护作用

目的 观察二甲基亚砜(DMSO)与羟乙基淀粉(HES)联用保护剂冷冻保护血小板的效果,探寻更适合冷冻血小板的保护剂.方法 实验设未冷冻组,DMSO组,HES组,DMSO与HES联用组.各组加血小板混匀后置-80℃冰箱保存,38℃水浴融化,检测血小板回收率,MPV值,观察血小板超微结构,测定CD42b、CD62p的表达水平.结果 HES单独使用对血小板的保护作用不强;DMSO单独使用组与DMSO与HES联用组对血小板的外部形态和内部结构的保护及CD62p的表达水平,MPV增加值,后者优于前者,CD42b表达水平DMSO组优于DMSO与HES连用组.结论 DMSO与HES联用对血小板的冷冻保护有一定协同作用,它与DMSO联用可作为冷冻血小板的保护剂进一步研究.     

二甲基亚砜联合羟乙基淀粉的非程控降温法冻存脐血造血干细胞研究

为了探索有效低温保存脐血造血干／祖细胞的冷冻保护剂和技术，进行了二种方法试验。第一种方法联合使用二甲基亚砜(DMSO)和羟乙基淀粉(HES)(分子量120000)作为冷冻保护剂并用非程控降温冷冻技术；第二种方法只使用DMSO作为冷冻保护剂并用程控降温仪冷冻技术保存脐血。对二种方法的效果进行比较。结果表明：15份脐血冻存后细胞存活率、CFU—GM回收率，无论在使用非程控降温的第一种方法和使用程控降温仪的第二种方法均无显著性差异。183份脐血质量检测结果及21例临床移植结果也显示两种方法无显著性差异。结论：联合使用DMSO和HES作为冷冻保护剂并用非程控降温冷冻的方法对脐血造血干细胞有良好的保护作用，是一种简单易行、省时省力、适合于脐血造血干细胞库大批量冻存脐血的方法。     

-80℃条件下不同时间外周血干细胞冻存效果的观察

目的 观察外周血干细胞在-80℃条件下保存时间与细胞活性的关系.方法 采用一种简便的-80℃干细胞冻存方法,其干细胞保护剂终浓度为5%二甲基亚砜(DMSO),3%羟乙基淀粉(HES)和4%人血白蛋白(HAS),不经程序降温,直接-80℃冰箱冻存,并调整细胞浓度为(2～4)×107/mL,分别对冻存1、3、6、9、12个月干细胞活性进行检测,观察台盼蓝拒染率和MNC、CD34+细胞的回收率.结果 干细胞活性在12个月内均无明显下降,其台盼蓝拒染率和MNC、CD34+ 细胞的回收率都在80%以上.不同时间冻存的干细胞活性比较无明显统计学差异(P＞0.05).结论 5% DMSO、3% HES 和4% HAS作为干细胞冷冻保护剂直接在-80℃冰箱冻存外周血干细胞的方法能有效地保护外周血干细胞活性.     

-80℃直接冻存人造血干细胞的实验研究和临床应用

以5％二甲基亚砜(DMSO)和6％羟乙基淀粉(HES)作为冷冻保护剂,非程控降温、-80℃冷冻保存人造血干细胞的简化方法用于骨髓移植(BMT)及外周干细胞移植(PBSCT)自80年代起已获成功。该方法冻存的造血干细胞活性与传统的10％DMSO作为冷冻保护剂、程控降温、液氮冷冻保存的相当。其主要优点为操作简便,费用低,便于普及。实验研究表明简化法冻存外周血干细胞5年后,BFU-E、CFU-GM的回收率无明显下降,细胞活性约为贮存前的80％。目前临床上推荐该方法用于短期(<1年)冻存造血干细胞。本文就其发展过程、作用机理、技术实施及应用现状作一介绍。     

超低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存造血干细胞的比较

背景：在造血干细胞整个冷冻保存过程中,受到降温速率、储存温度深浅、冷冻保护剂组合等因素影响,各国学者在提倡选择何种保存方法上面存在不同的主张。目的：比较-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存外周造血干细胞的效果。方法：将采集的造血干细胞分两组,第一组细胞浓度为1×1011L-1,加入10%二甲基亚砜,放入程序冷冻仪内程序设置为室温至-4℃按1℃/min的速率降温,按35℃/min快速降至-45℃,再以15℃/min升至-21℃,然后以5℃/min降至-90℃,取出冷冻管置-196℃液氮罐内。第二组细胞浓度为1×1011L-1,加入5%二甲基亚砜、3%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白,将冷冻管置-80℃冰箱过夜后取出,置-196℃液氮罐内的气相,再过夜后置液氮罐液相内。结果与结论：两组冷冻方法保存细胞的锥虫蓝拒染率、回收率、凋亡率和死亡率差异无显著性意义（P〉0.05）。结果显示用5%二甲基亚砜、4%白蛋白、3%羟乙基淀粉组成的冷冻保护剂,通过-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法冷冻保存造血干细胞与传统10%二甲基亚砜作为冷冻保护剂用程序降温的方法取得一样效果,操作简便易于临床应用。     

超低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存造血干细胞的比较

背景:在造血干细胞整个冷冻保存过程中,受到降温速率、储存温度深浅、冷冻保护剂组合等因素影响,各国学者在提倡选择何种保存方法上面存在不同的主张。目的:比较-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存外周造血干细胞的效果。方法:将采集的造血干细胞分两组,第一组细胞浓度为1×1011L-1,加入10%二甲基亚砜,放入程序冷冻仪内程序设置为室温至-4℃按1℃/min的速率降温,按35℃/min快速降至-45℃,再以15℃/min升至-21℃,然后以5℃/min降至-90℃,取出冷冻管置-196℃液氮罐内。第二组细胞浓度为1×1011L-1,加入5%二甲基亚砜、3%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白,将冷冻管置-80℃冰箱过夜后取出,置-196℃液氮罐内的气相,再过夜后置液氮罐液相内。结果与结论:两组冷冻方法保存细胞的锥虫蓝拒染率、回收率、凋亡率和死亡率差异无显著性意义(P>0.05)。结果显示用5%二甲基亚砜、4%白蛋白、3%羟乙基淀粉组成的冷冻保护剂,通过-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法冷冻保存造血干细胞与传统10%二甲基亚砜作为冷冻保护剂用程序降温的方法取得一样效果,操作简便易于临床应用。     

不同冷冻保护剂对低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响

背景：非程序降温-80℃低温冰箱保存方便快捷,程序降温-196℃液氮保存可靠长久,将两者合二为一简化流程已成功用于临床。目的：观察不同冷冻保护剂对-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响。方法：分设10%二甲亚砜组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉组、5%二甲亚砜联合0.25mol/L海藻糖组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉及0.25mol/L海藻糖组。采用-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法对单采外周造血干细胞进行冷冻保存,通过透射电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞仪观察Annexin-V、PI、Caspase-3水平。结果与结论：4组冷冻保存细胞的存活率、凋亡率和死亡率差异均无显著性意义（P〉0.05）。透射电镜下各组细胞超微结构变化差异不明显。单个核细胞群落冷冻保存后存活率在90%以上,含成熟细胞较多的CD45＋细胞群落凋亡发生率可达50%左右。造血干祖细胞群落中,早期细胞较晚期细胞更能耐受冷冻损伤。提示在基础冷冻保护剂二甲亚砜的基础上,加入羟乙基淀粉和海藻糖并未显示出对冷冻保存效果的增强作用。     

不同冷冻保护剂对低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响

背景:非程序降温-80 ℃低温冰箱保存方便快捷,程序降温-196 ℃液氮保存可靠长久,将两者合二为一简化流程已成功用于临床.目的:观察不同冷冻保护剂对-80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响.方法:分设10%二甲亚砜组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉组、5%二甲亚砜联合0.25 mol/L海藻糖组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉及0.25 mol/L海藻糖组.采用 -80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温法对单采外周造血干细胞进行冷冻保存,通过透射电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞仪观察Annexin-V、PI、Caspase-3水平.结果与结论:4组冷冻保存细胞的存活率、凋亡率和死亡率差异均无显著性意义(P > 0.05).透射电镜下各组细胞超微结构变化差异不明显.单个核细胞群落冷冻保存后存活率在90%以上,含成熟细胞较多的CD45+细胞群落凋亡发生率可达50%左右.造血干祖细胞群落中,早期细胞较晚期细胞更能耐受冷冻损伤.提示在基础冷冻保护剂二甲亚砜的基础上,加入羟乙基淀粉和海藻糖并未显示出对冷冻保存效果的增强作用.     

一种简便的外周血干细胞冷冻保存法

为了简化传统的细胞冷冻方法。即用10%二甲基亚砜（DMSO）作为冷冻保护剂并用程控降温仪-196℃液氮保存,研究了用5%DMSO,3%羟乙基淀粉（HES）和4%人血白蛋白（HSA）作为冷冻保护剂,而不用程控降温仪直接-80℃冰箱冷冻细胞的方法。对比了不同方法冷冻保存外周血干细胞（PBSCs)的细胞活性,单个核细胞数,CFU-GM和CD34^ 细胞回收率。结果发现,简便冷冻法可获得更高的单个核细胞（MNC）和CFU-GM回收率,无凝集现象;并且经长达24个月冷冻保存后仍可获得满意的CFU-GM和CD34^ 细胞回收率,37℃融冻和20℃室温融冻法之间各项指标无明显差别。细胞融冻后在室温下暴露于5%DMSO中1小时,CFU-GM回收率并不降低。而细胞活性从93.2%降至84.5%,所以,这种简便的细胞冷冻保存法简便易行。可替代传统的液氮保存法,对于没有程控降温仪的单位具有实用价值。而且还可减少病人DMSO输入量第一线决策。     

不同冷冻保护剂和冷冻方法对小鼠胚胎发育的影响

目的 评价不同冷冻保护剂和不同冷冻方法对小鼠2-细胞胚胎发育的影响。方法 采用丙二醇（PROH）、乙烯乙二醇（EG）、二甲基亚砜（DMSO）和甘油（G）4种不同冷冻保护剂,慢速冷冻、Vit-Master玻璃化冷冻两种冷冻方式冷冻小鼠2-细胞胚胎,观察胚胎的成活率。结果 采用慢速冷冻方式冷冻小鼠2-细胞胚胎时,以PROH为冷冻保护剂的胚胎成活率、囊胚形成率、囊胚孵出率显著高于以DMSO、G为冷冻保护剂的结果（P〈0.05）,而以DMSO、G、EG为冷冻保护剂的结果比较差异无显著性意义（P〉0.05）;采用Vit-Master玻璃化冷冻方式冷冻小鼠2-细胞胚胎时,以EG为冷冻保护剂的胚胎成活率、囊胚形成率、囊胚孵出率显著高于以PROH、DMSO、G为冷冻保护剂的结果（P〈0.05）,而以PROH、DMSO、G为冷冻保护剂的结果比较差异无显著性意义（P〉0.05）。结论 PROH是慢速冷冻小鼠2-细胞胚胎理想的冷冻保护剂;EG是Vit-Master玻璃化冷冻小鼠2-细胞理想的冷冻保护剂,有可能替代慢速冷冻法。