微卫星稳定或错配修复正常结直肠癌的新辅助免疫治疗

免疫治疗已成为微卫星高度不稳定（MSI-H）或错配修复缺陷（dMMR）结直肠癌的重要治疗方案,从晚期疾病的后线治疗到一线治疗,甚至在早期结直肠癌的新辅助治疗,均展现出优异的疗效。在微卫星稳定（MSS）或错配修复正常（pMMR）结直肠癌中,新辅助免疫治疗的研究探索也是未曾中断。本文重点评述近年来MSS或pMMR结直肠癌新...     

结直肠癌新辅助免疫治疗的应用现状以及争议和挑战

新辅助治疗在直肠癌、局部进展期结肠癌和可切除的转移性复发性结直肠癌中应用广泛。错配修复缺陷（dMMR）和微卫星高度不稳定（MSI-H）结直肠癌能从免疫检查点抑制剂治疗中获益,有望进一步提高以放化疗为基础的传统新辅助治疗效果。本文在综述免疫治疗（着重于免疫检查点抑制剂）现状的同时,分析了其用于新辅助治疗的机遇,包括dMM...     

免疫检查点抑制剂在结直肠癌中的应用：当前和未来的策略

免疫检查点抑制剂（ICIs）主要包括帕博利珠单抗、纳武单抗和伊匹木单抗,已经改变了多种类型肿瘤的标准治疗方案。对于结直肠癌（CRC）,肿瘤中微卫星不稳定（MSI）或错配修复（MMR）的状态是影响ICIs疗效的最关键因素。高水平MSI（MSI-H）或MMR缺陷（dMMR）的转移性CRC（mCRC）通常有浸润T细胞的肿瘤微环境,与对ICIs的良好反应相关,但MSI-H/dMMR的比例不足5%。帕博利珠单抗和纳武单抗联合或不联合伊匹木单抗已被纳入MSI-H/dMMR mCRC的标准治疗方案。与此相反,微卫星稳定（MSS）或错配修复稳定（pMMR）的mCRC的肿瘤微环境中T细胞浸润程度低被认为是ICIs的主要耐药机制。笔者回顾现有ICIs治疗CRC的临床数据和正在进行的部分临床试验,讨论可能存在的不足。     

程序性死亡蛋白-1抑制剂单药新辅助治疗局部进展期错配修复缺陷或微卫星高度不稳定结直肠癌的安全性及其疗效

目的:探究程序性死亡蛋白-1（PD-1）抑制剂用于局部进展期错配修复缺陷（dMMR）或微卫星高度不稳定（MSI-H）结直肠癌新辅助治疗的安全性与疗效。方法:采用描述性病例系列研究方法,回顾性分析2020年6月至2021年3月间,中山大学附属第六医院结直肠肛门外科收治的8例初诊影像学分期为T 3~4N ...     

结直肠癌免疫检查点治疗现状与展望

免疫检查点抑制剂(ICIs)的出现, 开启了肿瘤免疫治疗的新时代。对于高度微卫星不稳定(MSI-H)结直肠癌患者, ICIs往往有较好疗效, 其临床应用也逐渐从晚期后线移至一线治疗;然而对于微卫星稳定(MSS)结直肠癌患者, ICIs单药并无明显作用。近年来, 随着ICIs联合放化疗等治疗方案的应用, ICIs治疗MSS型结直肠癌患者效果得到改善。本文拟对近年来免疫检查点治疗在结直肠癌上的应用进行总结与展望。     

MSI-CRC抗PD-1免疫治疗的研究进展

程序性细胞死亡受体1(PD-1)抗体已被用于多种恶性肿瘤的治疗,其中结直肠癌由于被视为免疫"冷"肿瘤而对抗PD-1治疗不敏感。错配修复缺陷(dMMR)/高度微卫星不稳定(MSI-H)的分子特征是筛选免疫检查点抑制剂(ICIs)治疗患者的重要分子标志物。然而,只有部分患者能从ICIs治疗中获益,有部分患者甚至出现疾病进展...     

微卫星不稳定状态对散发性直肠癌预后的影响

目的 研究汉族人散发性直肠癌的微卫星不稳定状态(microsatellite instability,MSI)及其与临床病理学和预后的关系.方法 应用PCR扩增患者肿瘤组织和对应正常组织的DNA,分析微卫星不稳定状态,并采用单因素、多因素分析评估预后.结果 MSI分为高频率微卫星不稳定(microsatellite instability.high,MSI-H)、低频率微卫星不稳定(microsatellite instability-low,MSI-L)、微卫星稳定(microsatellite stability,MSS).93例直肠癌患者中,MSI-H 11例(12%),MSI-L和MSS分别为23例(25%)和59例(63%).与MSI-L和MSS相比,大多数MSI-H为高分化肿瘤、患者年龄小、术前CEA水平高、总的生存率高.结论 在汉族人群散发性直肠癌中,MSI-H发生率高,且MSI是一个相对较好的预后预测指标.     

结直肠癌中错配修复蛋白的表达及临床意义

目的探讨错配修复蛋白在结直肠癌中的表达情况及其临床意义。方法回顾性分析安阳市肿瘤医院2016-01—2017-05间行手术治疗的结直肠癌患者287例,按错配修复蛋白的表达情况分为缺失组和正常组。比较2组患者的临床病理资料。结果 287例结直肠癌中,dMMR蛋白表达的共42例(14.6%),其中右半结肠肿瘤16例(33.3%)、直肠癌21例(11.4%)、乙状结肠及左半结肠肿瘤5例(9.3%),其余均为pMMR。不同位置肿瘤间的dMMR的表达差异有统计学意义(P<0.05)。临床病理特征方面,中、晚期患者中dMMR蛋白表达率(19.0%)高于早期患者(10.3%),分化程度较差患者dMMR表达率(20.7%)高于分化程度较好的患者(11.8%),差异均有统计学意义(P<0.05)。2组患者的年龄、性别、Ki-67指数、CEA、术后辅助化疗及术后3 a生存率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论右半结肠肿瘤、分化较差及晚期结直肠癌中dMMR表达率较高,但dMMR对肿瘤预后评估的作用仍需进一步研究。     

免疫检查点抑制剂治疗结直肠癌的临床试验梳理

结直肠癌是全球第三大肿瘤,治疗手段包括手术、化疗、放疗和靶向治疗等。免疫检查点抑制剂的出现改写了许多瘤种的诊治指南。免疫检查点抑制剂在不同微卫星状态结直肠癌中有着显著的疗效差别,微卫星高度不稳定（MSI-H）结直肠癌无论是在后线、一线、辅助还是新辅助治疗方面,均取得了突破。KEYNOTE-177研究已经成功地改写了指南...     

散发性结直肠癌微卫星不稳定与hMHL1和hMSH2基因突变的研究

目的:探讨散发结直肠癌组织微卫星不稳定性与错配修复基因hMHL1和hMSH2蛋白表达的关系。方法:结直肠癌患者病理标本和正常肠壁组织(距肿瘤边缘10cm取材各40例)。选取微卫星位点(D2S123、BAT-26、D17S261、D17S799)进行PCR,PCR产物行毛细管电泳法检测。用免疫组化染色方法分析错配修复基因hMHL1和hMSH2在肿瘤组织的蛋白表达情况。结果:1)4个位点(D2S123、BAT26、D17S261、D17S799)的微卫星不稳定性检出率分别为:12.5%、17.5%、10%、7.5%。总的微卫星不稳定率为9/40(22.5%)。MSI-H表达为7例,均表现BAT26位点不稳定。MSI-L表达2例。2)所有标本错配修复基因hMSH2检测均正常表达。错配修复基因hMHL1表达阴性11份,结肠比直肠hMLH1蛋白的阴性表达率高(P0.01)。3)hMLH1表达阴性,是出现MSI的重要分子因素,hMLH1不表达和MSI相关显著(P0.01)。结论:1)错配修复基因突变引起微卫星不稳定性是散发性结肠癌发生的重要机制;2)部分微卫星不稳定性是由错配修复基因hMLH1不表达引起,其余的微卫星不稳定性可能涉及到其它错配修复基因。     

微卫星状态对结直肠癌根治术(微创)淋巴结检出数量的影响

目的:探讨微卫星状态对结直肠癌根治术淋巴结检出数量的影响.方法:回顾性收集2015年1月至2019年12月收治的1280例结直肠癌患者的临床资料.采用PCR方法检测肿瘤标本的微卫星状态,分为高度微卫星不稳定性(MSI-H)、低度微卫星不稳定性(MSI-L)与微卫星稳定性(MSS).观察指标:人口学特征、手术标本病理学检...     

应用荧光多重聚合酶链反应法检测结直肠癌微卫星不稳定

目的建立一种敏感、稳定、高通量的结直肠癌微卫星不稳定(MSI)检测技术。方法105例散发性结直肠癌患者取其新鲜癌组织及正常肠黏膜,DNA提取,荧光多重聚合酶链反应(PCR)扩增5个微卫星位点,应用GeneScan方法分析PCR产物。结果105例结直肠癌患者26例(24.7%)存在微卫星不稳定,其中MSI-H 14例(13.3%),MSI-L 12例(11.4%),MSS 79例(75.3%)。D5S346、BAT26、BAT25、D17S250、D2S123突变率分别为5.6%、8.6%、10.5%、8.6%、10.5%。结论应用荧光多重PCR可以高通量检测结直肠癌微卫星不稳定,敏感性高,结果可靠,适合临床应用。     

pMMR局部进展期中低位直肠癌行新辅助放化疗联合替雷利珠单克隆抗体的探索研究

目的 探索长程放化疗联合替雷利珠单克隆抗体作为错配修复基因蛋白无缺失型（pMMR）局部进展期中低位直肠癌病人新辅助治疗方案的安全性和有效性。方法 前瞻性分析2021年4月至2021年12月首都医科大学附属北京友谊医院11例临床分期为cT3-4N0M0或cT1-4N+M0接受全直肠系膜切除手术且术前行新辅助放化疗联合替雷利珠单克隆抗体治疗的pMMR中低位直肠癌病人临床资料。研究主要终点为病理完全缓解,同时分析药物不良反应发生率,手术安全性,术后并发症发生率以及病理组织学改变。结果 11例病人均完成放化疗,10例病人接受3次替雷利珠单克隆抗体治疗,1例接受2次替雷利珠单克隆抗体治疗。1例（9.1%）病人出现3级免疫性肠炎的不良反应。保肛手术率为100.0%。1例病人术后出现Clavien-DindoⅡ级吻合口漏。所有病人肿瘤均为pMMR,共有6例（54.5%）病人达到病理完全缓解,3例（27.3%）达到主要病理缓解,客观缓解率达100.0%。6例病理完全缓解的病人中,有2例（18.2%）达到临床完全缓解。结论 pMMR局部进展期中低位直肠癌病人行长程放化疗联合靶向程序性细胞死亡受体-1（P...     

程序性死亡蛋白-1抑制剂联合新辅助放化疗治疗微卫星稳定极低位直肠癌的安全性及其疗效

目的探究程序性死亡蛋白-1(PD-1)抑制剂联合新辅助放化疗治疗微卫星稳定(MSS)极低位直肠癌的安全性和疗效。方法本研究为前瞻性二期、单臂、开放性临床研究的初步结果报道。筛选2021年1—10月间海军军医大学附属长海医院收治的cT1～3aN0～1M0、无法保肛的极低位直肠癌患者。研究纳入标准:(1)具有强烈的保肛意愿, 愿意接受新辅助治疗的患者;(2)18～75周岁, 体质指数≤30 kg/m2, 性别不限;(3)经肠镜、腔内超声和盆腔高分辨率MRI(增强CT)检查确诊为肿瘤下缘距齿线≤2 cm内的极低位直肠癌, 治疗前分期cT1～3aN0～1M0;(4)错配修复蛋白(MMR)检测为MSS患者;(5)经组织病理学诊断为直肠腺癌;(6)患者依从性较好, 能按要求来医院复查;(7)美国东部肿瘤协作组体力状况评分0～1分;(8)常规实验室检查指标正常;(9)自愿签署知情同意书。排除标准:(1)既往具有恶性结直肠肿瘤病史;(2)合并肠梗阻、肠穿孔、肠出血等需急诊手术的患者;(3)已知对卡培他滨、PD-1单抗等药物过敏者;(4)病理提示为低分化腺癌、印戒细胞癌患者。新辅助放化疗联合免疫治疗方法...     

微卫星高度不稳定结直肠癌的免疫治疗

微卫星高度不稳定（MSI-H）结直肠癌约占所有结直肠癌患者的10%~15%,而晚期患者中MSI-H人群仅占5%。既往研究显示,早中期MSI-H结直肠癌预后佳,但晚期患者预后差,对化疗不敏感。程序性死亡蛋白-1（PD-1）抗体的出现显著改变了该人群的预后和治疗格局,不仅在后线治疗获得良好疗效,而且在一线治疗中疗效也显著优...     

基于机器学习的结直肠癌微卫星不稳定基因挖掘及其应用价值分析

背景与目的 结直肠癌（CRC）是全球第三大最常诊断的恶性肿瘤和第二大癌症死亡原因。最新指南推荐所有的CRC患者需要进行微卫星不稳定（MSI）的检测。MSI患者往往具有错配修复蛋白缺失（dMMR）。MSI/dMMR状态已被用作生物标志物预测对免疫治疗的有利反应和预后。然而MSI特征基因及其与肿瘤浸润的免疫细胞的关系未进行阐述。因此本研究通过使用机器学习的方式发掘CRC中新型的MSI特征基因,并且验证其的诊断价值及其与免疫细胞浸润的关系。方法 按照纳入排除标准,将GEO数据库中GSE39582数据集作为训练集,将TCGA数据库中COAD数据集作为外部验证集。使用机器学习的方法（LASSO回归、SVM-RFE算法）,在GSE39582结直肠癌数据集中筛选MSI特征基因,并在TCGA结直肠癌数据中进行验证。采用受试者工作特征（ROC）曲线和曲线下面积（AUC）评价基因对MSI的诊断效能。CIBERSORT算法评估肿瘤样本浸润的免疫细胞成分,Spearman相关性分析验证MSI特征基因和免疫细胞的关系。结果 训练集共纳入536例CRC患者,其中高频MSI（MSI-H）77例（14.37%）。在验证集中,共计389例CRC患者,其中MSI-H 67例（17.22%）。基线资料分析显示,MSI-H/dMMR CRC的TNM分期存活率优于低频MSI（MSI-L）或微卫星稳定（MSS）/错配蛋白完整（pMMR）CRC（P<0.05）。在GSE39582数据集中,LASSO回归筛选MSI特征基因21个,SVM-RFE算法筛选基因6个,结合两种算法确定MSI特征基因为EIF5A、CXCL13、HNRNPL、HOXC6、RPL22L1、Y16709。在TCGA数据库中进一步验证MSI特征基因的诊断效能,研究发现EIF5A的诊断效能最高。在训练集和验证集中,EIF5A的AUC值分别为0.922和0.805。同时,Spearman相关性分析发现,EIF5A主要与CD8⁺T细胞,活化的树突状细胞,辅助性T细胞,M1型巨噬细胞,γδT细胞,中性粒细胞成正相关;与CD4⁺记忆性T细胞,M2型巨噬细胞,静止树突状细胞,嗜酸性粒细胞,调节性T细胞呈负相关。结论 CRC的新型MSI特征基因分析结果表明,EIF5A对CRC MSI的诊断具有较好的诊断作用和临床价值,同时提示EIF5A与免疫细胞及免疫微环境相关。因此,EIF5A可能成为免疫检查点治疗的新型标志物。     

结直肠癌环氧化酶-2、错配修复酶-1微卫星不稳定与基因调控的关系

目的 检测临床手术切除42例结直肠癌及相应正常组织环氧化酶-2(COX-2)、错配修复酶-1(hMLH1)微卫星不稳定状态(MSI)及二种基因启动子甲基化,探讨它们与结直肠癌发生的关系.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术检测5个位点的MSI状态;甲基化特异性PCR(MSP)方法检测结直肠癌及正常组织COX-2、hMLH1二种基因启动子CpG岛甲基化状态.结果 42例结直肠癌中MSI总检出率为42.86%(18/42),5个位点的MSI检出率差异无统计学意义(P＞0.05).COX-2和hMLH1基因启动子CpG岛甲基化在42例结直肠癌中分别有13例和15例.MSI-H组中COX-2基因启动子CpG岛甲基化8例,且有6例结直肠癌同时出现hMLH1和COX-2基因启动子CpG岛甲基化.结论 MSI结直肠癌hMLH1基因启动子CpG岛甲基化率高于MSS结直肠癌,hMLH1基因启动子CpG岛甲基化有助于判断肿瘤类型.     

神经网络预测模型辅助诊断结直肠癌微卫星状态的研究

背景和目的：微卫星不稳定（MSI）已经成为结直肠癌（CRC）临床诊断、辅助治疗和预后指导的重要生物学标志物。MSI往往伴随DNA错配修复蛋白（dMMR）的缺失。目前错配修复蛋白缺失的诊断主要依靠4种修复蛋白（MLH1、MSH2、MSH6和PMS2）病理免疫组化的结果,而且MSI已经成为CRC免疫治疗重要的生物学标志物。然而MSI精准预测模型和新型特征基因的研究很少。随着人工智能（AI）在医学的发展,精准预测和数据挖掘成为研究的热点。本研究的目的是建立MSI预测的神经网络模型和挖掘新型MSI特征基因。方法：将3个CRC的GEO数据集（GSE39582、GSE29638和GSE75315）作为模型训练集,将1个TCGA CRC数据集作为独立的外部验证集。基于数据集测序数据和芯片数据,使用差异分析,随机森林算法和弹性反向传播算法建立CRCMSI的神经网络预测模型。用K-临近算法（KNN）和支持向量机（SVM）算法建立MSI传统机器学习网络模型。用混淆矩阵,受试者工作特征曲线（ROC）与曲线下面积（AUC）评价模型的预测能力。结果：在训练集中,共纳入787例,其中微卫星高不稳定（MSI-H） ...     

错配修复蛋白表达缺失在结直肠癌中的意义

目的检测结直肠癌组织中错配修复（MMR）蛋白表达情况，探究错配修复缺陷（dMMR）与患者临床病理特征的相关性及其对预后的影响。 方法回顾性收集2019年1月至2021年5月于攀枝花市中心医院就诊且行根治术治疗的214例结直肠癌患者临床资料及病理组织标本进行研究。采用免疫组织化学染色法和免疫印迹法分别检测临床肿瘤组织、对应癌旁正常组织中MMR蛋白（hMSH2、hMSH6、hMLH1、hPMS2）的表达情况，任一蛋白表达缺失则判定为dMMR。分析MMR蛋白表达与患者临床病理特征的相关性；Pearson检验结直肠癌组织中四种MMR蛋白表达缺失的相关性；绘制Kaplan-Meier生存曲线，分析dMMR对患者预后生存的影响。 结果（1）四种MMR蛋白阳性染色均主要分布于细胞核中，呈棕黄色或棕褐色。结直肠癌组织中dMMR发生率为15.4%（33/214），显著高于对应癌旁正常组织的3.3%（7/214），差异有统计学意义（χ²=18.642，P<0.001）。hMLH1蛋白表达缺失25例，hPMS2 20例，hMSH2 12例，hMSH6 9例；MMR蛋白常协同表达缺失，以hMLH1/hPMS2协同缺失为主。（2）dMMR与肿瘤位置有关，多位于右半结肠；错配基因功能正常（pMMR）患者则多位于直肠和左半结肠，表现为高-中分化腺癌。hMLH1表达缺失多为中-低分化腺癌，与肿瘤直径、分化程度和TNM分期密切相关；hMSH2表达缺失与肿瘤直径密切相关；hPMS2表达缺失与分化程度、TNM分期及浸润深度密切相关；hMSH6表达缺失与肿瘤形态密切相关（均P<0.05）。（3）结直肠癌组织中四种MMR蛋白表达缺失呈正相关关系，以hMLH1/hPMS2、hMSH2/hMSH6协同表达缺失最为显著（P<0.05）。（4）dMMR患者的术后累积总生存率为84.8%，显著高于pMMR患者的61.3%，差异有统计学意义（Log-rank χ²=2.985，P=0.043）。 结论结直肠癌组织中dMMR发生率高于癌旁正常组织，在右半结肠癌患者中比例更高，以hMLH1/hPMS2协同表达缺失较为多见；dMMR患者预后更好。dMMR对于判断结直肠癌临床恶性程度、选择治疗方案及预测患者预后有重要意义。     

结直肠癌患者抗程序性死亡受体1/程序性死亡受体-配体1治疗相关生物标志物的研究进展

近年来, 抗程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体-配体1(PD-L1)的免疫治疗给中晚期结直肠癌患者带来了新的曙光, 但研究者却发现并非所有的结直肠癌患者都能从抗PD-1/PD-L1的免疫治疗中获益。因此, 精准筛选出结直肠癌患者抗PD-1/PD-L1治疗的获益人群成为当前重大难题。随着精准诊疗理念的迅速发展以及循证医学证据的不断积累, 为筛选结直肠癌免疫治疗的获益人群提供了有力帮助。通过人体生物标志物的差异来预测结直肠癌患者免疫治疗的疗效成为当下热点。生物标志物是免疫治疗的重大突破, 不仅可以筛选出结直肠癌免疫治疗的获益人群, 还能够避免无效治疗以及不良反应。本文通过回顾近期文献, 阐述结直肠癌患者抗PD-1/PD-L1治疗下生物标志物的研究现状及未来发展。