宣白承气汤对脓毒症小鼠肺-肠损伤及肠道菌群的调节作用

目的明确宣白承气汤对脓毒症小鼠肺和肠道损伤以及肠道功能的作用, 分析其对脓毒症小鼠肠道菌群的影响。方法健康清洁级C57雄性小鼠36只, 随机(随机数字法)分为三组, 每组12只, 分别为对照组、模型组和宣白承气汤治疗组。通过腹腔注射细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)5 mg/kg制备脓毒症模型, 造模前24 h、造模后0.5 h及造模后12 h宣白承气汤灌胃给药, 造模后24 h采集肺脏、肠道以及血液标本。采用实时荧光定量PCR测定肺部和肠道组织炎症因子白介素1β(interleukin-1β, IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)含量, 通过组织学染色评估肺部和肠道结构损伤和改变, 通过特殊染色评价肠道黏蛋白表达, 分别采用免疫组化和Western Blot分析肠道上皮紧密连接蛋白的表达, 最后使用鲎试剂盒检测各组小鼠血浆中内毒素含量, 并提取小鼠粪便DNA, 通过菌群16S rDNA荧光...     

马方综合征临床实验室基因诊断

目的建立马方综合征(MFS)临床实验室基因诊断流程, 对MFS家系进行临床实验室基因诊断。方法利用二代高通量测序对2020年1月至12月到阜外华中心血管病医院(河南省人民医院心脏中心)就诊的2个MFS家系患者FBN1基因进行测序分析, 然后利用Sanger测序验证二代高通量测序结果, 同时对家系正常人及100名健康人进行突变位点Sanger测序以明确家系中FBN1基因致病性突变, 并于2个家系孕妇孕中期指导其进行产前诊断。结果 MFS临床实验室诊断显示2例MFS患者FBN1基因分别存在c.2560T>C 杂合突变、c.6772T>C杂合突变的致病性突变, 2个家系中正常人及100名健康人均未见此突变;产前诊断显示家系一胎儿存在FBN1基因c.2560T>C杂合突变, 为MFS患儿, 家系二胎儿FBN1基因未见突变, 建议继续妊娠, 产后随访结果与临床实验室诊断结果一致。结论成功建立了MFS临床实验室基因诊断流程, 对明确MFS临床诊断提供重要的参考依据。     

基于高通量测序的蚊媒病毒检测

蚊虫在世界范围内分布广泛, 体内携带高度多样性的病毒, 其中蚊媒病毒可在吸血节肢动物及脊椎动物细胞中进行复制, 能够感染人类或其他脊椎动物, 具有严重的公共卫生危害。多年来, 蚊媒病毒的监测主要依赖病毒分离培养等传统方法, 而随着高通量测序技术的发展, 不仅实现了对蚊虫病毒组本底的了解, 还为蚊媒病原体的快速筛查、新病原体的发现以及蚊媒传染病的预防控制提供了基础。该文将详细介绍用于蚊媒病毒的高通量检测方法及其应用, 以及高通量测序检测蚊媒病原体与传统方法相比的优势与劣势。     

钙卫蛋白对脓毒症患者急性肾损伤的预测价值

目的探讨血清钙卫蛋白对脓毒症患者急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)的预测价值及预后评估作用。方法本研究为前瞻性观察性研究。连续收集2018年12月1日至2020年11月30日中国康复研究中心急诊科收治的脓毒症患者, 记录患者的一般临床资料、入院24 h内急性生理与慢性健康状况评分系统Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ, APACHE Ⅱ)评分、序贯器官衰竭评分(sequential organ failure assessment, SOFA)和血清钙卫蛋白水平。根据入院7 d内是否发生AKI将患者分为AKI组和非AKI组, 比较两组钙卫蛋白及其他临床资料的差异;采用Logistic回归分析探讨脓毒症患者发生AKI的影响因素;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评价钙卫蛋白对脓毒症患者发生AKI的预测价值。根据28 d是否存活将AKI患者分为存活组和死亡组, 比较两组钙卫蛋白的水平。结果共入组207例脓毒症患者, 其中AKI发生...     

甲磺酸加贝酯改善脓毒症急性肺损伤大鼠的代谢组学研究

目的基于代谢组学研究甲磺酸加贝酯(GM)对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠的作用。方法将57只SD大鼠随机(随机数字法)分为3组, 每组19只, 即假手术组(SC组), 盲肠结扎穿刺术诱导脓毒症ALI组(CLP组), CLP后1 h腹腔给药GM组(CLP-GM组)。实验后24 h观察SC, CLP和CLP-GM组大鼠生存状态, 并收集肺组织进行HE染色观察其病理学改变, 收集血浆进行代谢组学检测分析其代谢物特征。结果与SC组相比, CLP大鼠的肺组织炎性细胞浸润明显增多, 血浆的代谢轮廓发生了显著变化;但CLP-GM组的病理学和代谢组学特征显示, 在给药GM后以上变化有明显的逆转趋势。脓毒症ALI大鼠血浆中发现了12个主要差异性代谢物, 发生紊乱的代谢通路主要包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成, 苯丙氨酸代谢, 鞘脂代谢。结论 GM可能通过调控氨基酸代谢、鞘脂代谢等代谢通路发挥改善脓毒症ALI的作用。     

基于生物信息学分析筛选儿科脓毒症关键基因

目的应用生物信息学方法筛选和分析儿科脓毒症关键基因。方法从GEO数据库中下载2015年2月19日上传的儿科脓毒症芯片数据集GSE66099和2020年2月13日上传的儿科脓毒症芯片数据集GSE145227, 使用Limma包筛选儿科脓毒症与正常对照组血液组织差异表达信使核糖核酸(DEmRNA), 随后进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。使用在线网站STRING和Cytoscape软件对DEmRNA构建蛋白互作网络(PPI), 并筛选关键(hub)基因。最后使用R软件进行hub基因差异表达和受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析。结果共发现160个DEmRNA, 包含126个上调mRNA和34个下调mRNA。通过GO功能富集分析, 发现DEmRNA主要富集在中性粒细胞激活和脱粒, T细胞激活以及淋巴细胞活化调节。KEGG富集通路分析显示DEmRNA主要参与自然杀伤细胞介导的细胞毒性和中性粒细胞胞外陷阱的形成。STRING和Cytoscape共筛选出10个hub基因, 通过R软件分析发现10个hub基因(ARG1、RETN、MMP9、C3AR1、LCN2、FP...     

国际指南更新引领血液肿瘤临床诊疗进入精准医学和基因组时代

随着医学研究的进展, 血液肿瘤国际诊疗指南中纳入的基因变异指标越来越多。在2022年更新的多项国际指南中, 都进一步强调基因变异对血液肿瘤分型和预后评估的重要性。血液肿瘤的临床诊疗已开始进入精准医学和基因组时代, 越来越依赖于高通量测序技术的应用。     

脓毒症患者肠道菌群与肠屏障功能紊乱的相关性研究

目的探讨脓毒症患者肠道菌群紊乱与肠道屏障功能障碍之间的关系。方法采用前瞻性对比研究方法, 纳入2017年2月至2017年6月住宁夏医科大学总医院重症医学科的脓毒症患者10例, 同期入住且未并发脓毒症的患者10例, 健康人10例, 依次分组为脓毒症组、非脓毒症组、健康对照组。①记录一般资料。②运用16S rRNA基因测序技术对3组实验对象粪便标本进行菌群检测分析。③采集脓毒症组及非脓毒症组患者静脉血并运用酶法测定血D-乳酸、细菌内毒素水平。④相关性分析得出D-乳酸、细菌内毒素水平同脓毒症患者肠道菌群菌门水平之间的关系。结果①脓毒症患者临床感染致病菌与肠道致病菌属变化一致性的观察分析:脓毒症患者痰培养为鲍曼不动杆菌(对应患者编号为S5、S6、S8)、嗜麦芽窄食单胞菌(对应患者编号为S6、S7)、肠球菌属(对应患者编号为S7), 在对应患者肠道菌群中已有相应菌属OUT丰度升高。脓毒症患者(对应患者编号为S7)血培养为大肠杆菌, 该患者肠道菌群中埃希氏菌属OUT丰度升高。②血D-乳酸及细菌内毒素水平与肠道菌群相关性分析:非脓毒症组和脓毒症组患者血D-乳酸水平与肠道菌群中厚壁菌门比例呈负相关、变...     

脓毒症相关性急性肝损伤的流行病学特点及致病因素分析

目的通过收集脓毒症患者继发急性肝损伤的流行病学资料, 分析其流行病学特点和高危因素并根据测序结果探讨脓毒症急性肝损伤的致病因素。方法选取2018年1月1日至2019年12月31日就诊于空军军医大学学第一附属医院急诊科288例脓毒症患者, 根据是否发生急性肝损伤分为脓毒症肝损伤组(44例)和脓毒症无肝损伤组(244例), 对比分析两组患者入科时的一般资料、血液学指标、病情严重程度等指标的差异, 用Logistic回归分析脓毒症相关性肝损伤的高危因素。并选取8例脓毒症肝损伤患者、4例脓毒症非肝损伤患者, 提取外周血单个核细胞组织核糖核酸(Ribonucleic Acid, RNA), 采用RNA-seq进行检测, 并对差异基因进行筛选并分析。结果与脓毒症无肝损伤组相比, 肝损伤组患者罹患高血压更少(11.4%vs. 30.3%)、慢性肾功能不全相对更多(40.9%vs. 12.1%);因肾脏疾病入住急诊科的比例更多(43.2%vs. 24.6%)、入院时贯序器官衰竭评分(SOFA)、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分更高[SOFA(分)(9.86±3.59 )vs. (5...     

脓毒症患者外周血中lncRNA和miRNA表达谱及功能分析

目的本研究利用二代测序(next-generation sequencing, NGS)技术, 对脓毒症患者外周血液进行测序分析, 探讨非编码小RNA(microRNA, miRNA)和长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)的差异表达及其功能网络。方法本研究采集2021年6月至9月在盐城市第一人民医院招募的重症医学科7例泌尿系统感染的脓毒症患者和3例健康职工志愿者的全血进行NGS分析, 筛选差异表达的mRNA、lncRNA和miRNA, 并对差异表达进行生物信息学分析(差异倍数FC>2, P<0.01)。本研究筛选并下载GEO数据库中4个脓毒症患者基因组数据集, 筛选共同差异表达基因, 对筛选基因进行京都基因组百科全书分析。使用Cytoscape 3.7.0进行构建miRNA-mRNA和IncRNA-miRNA-mRNA网络。结果差异表达mRNAs主要富集于炎症反应相关通路。131个差异基因显著富集在PD-1/PD-L1信号通路, 发现调控PD-1/PD-L1信号通路的TLR2、LAT和CD247等靶基因, 以及参与调控的miRNA(hsa...     

高通量测序技术在肿瘤精准诊疗中的临床应用

高通量测序技术与传统的基因检测技术相比, 实现了多样本、多位点、多变异类型的大规模平行检测, 在提供临床诊疗信息的同时还能挖掘大量具有研究价值的信息, 其在临床的应用范围日益广泛。另一方面, 基于基础研究的不断深入, 医药产业的转化产出也逐渐加大, 靶向治疗、免疫治疗等新型方式将肿瘤带入个体化精准诊疗时代, 从病种管理逐渐发展到基因管理, 以患者基因组大数据为核心, 实现疾病的分类、诊断、治疗与预后方案的制定, 因此基因检测在整个肿瘤的管理过程中占据了不可替代的重要作用。目前, 高通量测序在肿瘤临床应用中涉及了靶向治疗、辅助诊断、评估预后、复发或耐药监测等诸多方面, 本文对以上各方面的临床实践现状和进展进行详细介绍。     

急性肺损伤时Ⅱ型肺泡上皮细胞相关基因的生物信息学分析

目的探索多种因素致急性肺损伤(acute lung injury, ALI)/急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)时Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar type Ⅱ, ATⅡ)损伤的相关分子标志物, 为ALI/ARDS的疾病认知及治疗提供新依据。方法从美国国立生物技术信息中心公共数据GEO获得RNA-Seq数据集, 应用R语言包筛选差异表达基因(DEGs), 进行GO功能注释和KEGG富集分析。通过STRING数据库和Cytoscape软件计算蛋白互作网络分析中节点度排名前10及MCODE得分最高模块, 取交集为核心基因, 通过DGIdb数据库预测其潜在治疗药物。结果最终在不同的数据集中筛选出了78个共表达DEGs。GO分析发现其产物主要作为宿主细胞成分及蛋白酶体核心复合体等参与粒细胞迁移、细菌源性分子反应及细胞因子介导的信号通路等生物学过程, 具有细胞因子活性、趋化因子活性及受体-配体活性等。KEGG分析发现其相关通路主要为TNF信号通路、NF-κB信号通路及细胞因子-细胞因子受体作用信号通路等;蛋白网络分析最终确定...     

宏基因组高通量测序在猪链球菌感染中的应用1例

报道1例由宏基因组高通量测序技术(mNGS)诊断的猪链球菌败血症并链球菌中毒性休克综合征。患者男, 50岁, 于2021年6月25日就诊南方医院增城院区, 流行病学史典型, 主要临床表现为发热、腹泻、休克, 结合血液mNGS诊断为猪链球菌败血症并链球菌中毒性休克综合征。初始采用美罗培南经验性治疗, mNGS结果回报后调整抗菌药物为美罗培南联合克林霉素, 后续感染好转, 降级抗菌药物为哌拉西林他唑巴坦联合克林霉素。猪链球菌后续经血培养确证。患者后期出现双足足趾干性坏疽和突发性耳聋, 经治疗后好转出院。mNGS与传统诊断技术相比, 具有及时性和准确性等优势, 在严重感染和罕见病原体感染领域中起着关键作用。建议将mNGS和传统的诊断技术相结合, 早期诊断、早期治疗。     

克隆异质性分析在急性髓系白血病中的应用及临床研究

目的探讨急性髓系白血病(AML)的克隆异质性特征及其临床价值。方法采用高通量测序技术靶向检测2016年1月至2019年6月河南省肿瘤医院收治的465例AML患者的68种相关基因,将检出的基因突变位点根据变异等位基因频率(VAF)及同期流式细胞学结果进行克隆异质性分析,并分析其与预后的关系。结果 338例(81.4%)初诊患者检出基因突变,其中携带DNMT3A、NRAS和RUNX1突变患者出现2个及以上克隆比例显著增加(DNMT3A:χ2=15.231,P<0.001;NRAS:χ2=19.866,P<0.001;RUNX1:χ2=23.647,P<0.001)。不同年龄组间克隆数差异有统计学意义(χ2=17.505,P=0.022),其中>60岁患者携带2个和≥3个克隆的比例增加。初诊患者与复发或继发AML患者间克隆分布差异具有统计学意义(χ2=11.302,P=0.010),且患者多克隆的比例随预后危险度增加而逐渐增加(χ2=17.505,P=0.022)。而主克隆分析中,RUNX1突变标志的主克隆比例较高(χ2=4.527,P=0.033)。克隆异质性与疗效...     

百草枯中毒患者急性肾损伤风险预测

目的构建百草枯(paraquat, PQ)中毒引起急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)的风险预测模型。方法回顾性分析2010-09-20至2022-01-16期间因急性PQ中毒就诊于四川大学华西医院急诊科的患者, 收集患者基本特征及实验室检查结果, 根据住院期间是否发生AKI分为AKI组和非AKI组。按照7∶3的比例, 将患者随机分为训练集和验证集。采用多因素Logistic回归筛选变量, 列线图建立预测模型。采用受试者工作特征曲线(ROC)、校准曲线评价预测模型的区分度和校准度, 决策曲线分析(DCA)评估预测模型的临床有效性。结果纳入符合标准的PQ患者718例, 323例(45.0%)患者院内发生AKI, 378例(52.6%)院内死亡, AKI组患者病死率高于非AKI组(72.8%vs. 36.2, P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示中毒至就诊时间(OR=1.018, 95%CI:1.006～1.030)、入院时白细胞计数(OR=1.128, 95%CI:1.084～1.173)、天门冬氨酸氨基转移酶(OR=1.017, 95%CI...     

脓毒症急性肺损伤模型中肺组织细胞焦亡与大麻素2型受体的相关性分析

目的探讨在小鼠脓毒症急性肺损伤模型中, 焦亡相关指标与大麻素2型受体(cannabinoid 2 receptor, CB2R)表达量的相关性。方法采用随机数字表法把实验小鼠随机分为4组(n=6):假手术组(sham)、轻度脓毒症组(ALIMi)、中度脓毒症组(ALIMo)、重度脓毒症组(ALIS)。采用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture, CLP)建立小鼠的脓毒症急性肺损伤模型。术后12 h采集肺组织标本, 测定肺组织湿干重比及肺组织损伤评分;检测肺组织CB2RmRNA及蛋白表达水平、焦亡相关指标(NLRP3、caspasse-1、caspase-11、GSDMD)的mRNA转录水平及肺组织炎症因子(IL-6、TNF-α)的水平;利用SPSS软件进行数据分析, 采用单因素方差分析法进行各项指标的多组间比较, 分别采用LSD或Games-Howell检验进行两组间比较, 利用Pearson法分别分析炎症因子和焦亡相关指标与CB2R之间的相关性。结果通过单因素方差分析获得统计量F值, 并进行两组间比较。与sham组比较, 在脓毒症模型中, IL-6、T...     

犀角地黄汤对脓毒症小鼠肝组织microRNA表达的影响

目的基于转录组学探讨犀角地黄汤抗脓毒症性肝损伤的机制。方法将60只C57BL/6小鼠按随机数字表法等分为对照组、脓毒症组和脓毒症犀角地黄汤治疗组。采用脂多糖腹腔注射复制脓毒症小鼠模型;对照组予等量生理盐水腹腔注射。脓毒症犀角地黄汤组于建模前2 d犀角地黄汤(生药187.5 mg)灌胃, 2次/d, 建模后继续胃饲(2次/d), 对照组及脓毒症组予等量生理盐水胃饲。LPS干预后72 h每组随机取9只, 麻醉后取部分肝脏做Small RNA及RNA-seq测序分析, 部分肝脏做病理检查。结果犀角地黄汤有改善脓毒症小鼠肝组织病理学改变。缓解部分异常表达的microRNA(mmu-miR-292a-5p、mmu-miR-871-3p、mmu-miR-653-5p、mmu-miR-293-5p、mmu-miR-155-3p, mmu-miR-346-5p、mmu-miR-187-5p、mmu-miR-3090-3p)及其靶基因。结论犀角地黄汤可减少脓毒症小鼠肝组织病理学改变, 其机制可能与犀角地黄汤调节mmu-miR-187-5p及其靶基因Adam8、Irak3、Pfkfb3等关键基因的表达有关...     

早期持续肾脏替代疗法对脓毒症患者院内死亡的影响

目的探讨早期24 h内持续肾脏代替疗法(continuous renal replacement therapy, CRRT)对脓毒症患者院内死亡的影响。方法本研究回顾性分析温州医科大学附属第一医院急诊重症监护病房2013年1月至2017年12月收治的脓毒症患者, 根据患者的预后分为存活组与死亡组, 对比两组患者的一般资料数据, 并进行多因素Logistic回归分析, 筛选出脓毒症患者死亡危险因素, 评估CRRT对病死率的影响。按入院24 h内是否行CRRT, 将研究对象分为CRRT组和非CRRT组, 比较液体平衡情况。结果在612例患者中, 男性416例(占67.9%), 整体中位年龄66岁;死亡250例, 存活362例, 病死率40.8%。多因素Logistic回归分析示脓毒症患者死亡的独立危险因素为性别、简化急性生理评分Ⅱ、序贯器官衰竭评分、乳酸、降钙素原、合并慢性阻塞性肺病。多因素Logistic回归分析显示24 h内接受CRRT治疗的患者具有更高的死亡风险(OR=1.981, 95%CI:1.120～3.504, P=0.019)。脓毒症患者液体平衡情况对比, 结果显示CRR...     

S1PR3特异性激动肽GPS-725.017对小鼠急性肺损伤的作用研究

目的设计新型S1PR3特异性激动剂GPS-725.017, 并研究其通过促进巨噬细胞对细菌的清除能力, 保护急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的作用。方法以来源于S1PR3受体胞内区段的短肽为母核结构, 在其N末端修饰正亮氨酸(norleucine, Nle)和肉豆蔻酸(myristic acid, myr), 命名为GPS-725.017。实验小鼠分为假手术组、溶剂组和GPS-725.017治疗组, 每组5或10只, 各组气管内注射5×106 CFU(colony forming unit)大肠杆菌诱导急性肺损伤, GPS-725.017治疗组按10 mg/kg剂量给予GPS-725.017治疗。观察各组小鼠48 h生存率;造模5 h后, 检测外周血及肺脏细菌负荷及炎性因子, Western blot法测定肺泡巨噬细胞内Vps34蛋白含量;造模12 h后, 取肺组织进行H&E染色, 并病理学评分。结果与溶剂组相比, GPS-725.017治疗组小鼠生存率显著提高(P<0.01), 血液、肺泡灌洗液细菌CFU低于溶剂组(P<0.001), 血...     

光甘草定调控NETs抑制细胞焦亡缓解脓毒症肺损伤机制

目的探讨传统中药光甘草定对脓毒症肺损伤中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)形成及细胞焦亡影响。方法将24只雄性Wistar大鼠, 按照随机数字表法分为3组:脓毒症组采用盲肠结扎穿孔术(cecalligation and puncture, CLP)建立脓毒症大鼠模型;光甘草定组(CLP+GLA)行CLP及光甘草定灌胃(30 mg/kg);假手术组(Sham)行盲肠探查术, 仅进行盲肠翻动后关腹。12 h后留取血浆、肺泡灌洗液及肺组织标本检测。测定肺泡灌洗液蛋白含量;测定肺组织湿重/干重(W/D)比值;用苏木精-伊红(HE)染色后观察肺组织病理学改变;用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血浆中NETs标志物MPO-DNA复合物水平、焦亡相关炎症因子IL-18、IL-1β的表达水平;Western blot技术检测大鼠肺组织Caspase-1及Cleaved-caspase-1焦亡蛋白的变化。结果脓毒症组肺泡灌洗液总蛋白浓度较假手术组明显升高(P<0. 01), 光甘草定组肺泡灌洗液总蛋白浓度较脓毒症组下降(P<0. ...