血管钙化及其平滑肌细胞表型转化的调节机制

血管钙化常见于高血压、糖尿病血管病变、动脉粥样硬化、慢性肾病、衰老等传统的老年病或慢性病,此外还可见于小儿,如新生儿期血管钙化、肺动脉高压、尿毒症性小动脉钙化等,均可危及生命。最近研究发现,血管钙化是一种多因素介导、可逆的、主动的调节过程,涉及多种细胞因子及信号通路,血管钙化的本质是血管平滑肌细胞向成骨细胞样表型转化,导致血管壁增厚、管腔狭窄、血管硬化重塑,因此血管钙化及其平滑肌细胞表型转化相关的信号转导调节机制成为这一领域的重大研究课题。     

反义c-jun对血管平滑肌细胞表型

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)异常增殖是许多心血管疾病的共同病理基础,位于血管中膜的VSMC由分化型转变为去分化型是其增殖的前提。c-jun产物是参与细胞增殖调控的主要转录因子之一。已经证明,应用反义技术抑制c-jun基因表达可有效抑制细胞增殖,但对VSMC表型转化有无影响尚未见报道。本文应用可表达c-jun反义RNA的真核细胞表达载体转染VSMC,分别以平滑肌α-肌动蛋白(SM α-actin)和平滑肌胚胎型肌球蛋白重链(SMemb)作为分化型与去分化型VSMC的分子标志,观察c-jun反义RNA对VSMC表型转化的影响。     

血管平滑肌细胞快速牵张损伤后细胞缝隙连接功能的变化

目的：探讨牵张损伤时血管平滑肌细胞（A7r5）缝隙连接功能的改变及其影响因素。方法：采用细胞牵张损伤装置建立A7r5细胞损伤模型，通过细胞培养、荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜荧光漂白后恢复技术检测对照组，轻度、中度和重度牵张损伤组细胞活性（Hoechst33342和propidium iodide染色）、细胞内钙（Fluo-4／AM染色）、细胞内氧自由基（H2DCFDA染色）和细胞间通讯功能（5-CFDA染色）的变化。结果：随着细胞牵张损伤的加重，细胞活性降低、细胞内钙及细胞内氧自由基升高、细胞间通讯功能下调。含钙缓冲液和细胞间通道阻断剂甘珀酸可使细胞通讯功能进一步下调，而Ca^2＋鳌合剂——乙二醇四乙酸、氧自由基清除剂——超氧化物歧化酶可使细胞通讯功能上调。结论：牵张损伤可通过细胞内钙超载和活性氧的增多来降低平滑肌细胞缝隙连接的细胞通讯功能。     

脂质沉积刺激血管平滑肌细胞表型转化的研究进展

<正>据《中国心血管病报告2016》统计数据显示心脑血管病死亡占城乡居民总死亡原因的首位,心脑血管病死亡率农村为298.42/10万,城市为264.84/10万[1]。动脉粥样硬化是心脑血管疾病发生发展的最常见,也是最重要的病因。动脉粥样硬化是一个复杂的,多因素参与的慢性炎症过程。富含脂滴的泡沫细胞在血管壁上沉积形成脂质条纹以至斑块是动脉粥样硬化的特征性表现。既往普遍认为巨噬细胞是泡沫细胞的     

血管平滑肌细胞表型转换与动脉粥样硬化关系的研究进展

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心肌梗死、脑卒中等急性心脑血管事件的主要原因,是多种细胞参与的复杂病理过程。作为AS斑块内的主要细胞,血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)由收缩表型向其他表型的转换在AS的形成和进展中发挥着关键作用。     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的:探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的影响.方法:用酶消化法分离大鼠VSMC,采用免疫组织化学法检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白(α-SM actin),RT-PCR 检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGF-β、PDGF、matrix Gla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平.结果:胰岛素组VSMC的3H-TdR掺入值比对照组升高47％(P<0.01), VSMC α- SM actin免疫组化结果显示对照组的α-SM actin比胰岛素组染色深.而matrix Gla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量,胰岛素组明显高于对照组(P<0.05),同时bFGF、TGF-β、PDGF的表达胰岛素组也明显高于对照组(P<0.05).并可明显见到细胞骨架F-actin、G-actin重新分布.结论:在合成表型的matrix Gla和OPN表达量明显高于收缩表型,而合成表型的α- SM actin表达量明显低于收缩表型.提示胰岛素对VSMC的表型转化起了一定作用.胰岛素在促进了VSMC增殖的同时,伴有VSMC由收缩型转变为合成型及细胞骨架F-actin、G-actin重新分布.     

血管内皮细胞调控血管平滑肌细胞表型的机制及其在动脉血管疾病中的作用研究进展

血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)在结构上紧密相连,在功能上互相影响。VECs可通过直接(Notch信号通路)或间接(细胞因子、外泌体)方式调控VSMCs表型转变,以应对缺氧、炎症或异常机械力等刺激并维持血管稳态,该过程异常是导致动脉粥样硬化、主动脉瘤、主动脉夹层等动脉血管疾病的重要原因。本文将对VECs调控VSMCs表型转变的机制及其在动脉血管疾病中的作用做一综述。     

老年大鼠膀胱排尿功能及平滑肌细胞表型变化

目的探讨老年大鼠膀胱排尿功能及平滑肌细胞表型变化。方法选取3、24月龄SD大鼠各8只,采用膀胱穿刺测压法行膀胱排尿功能检测,Masson染色法检测膀胱组织胶原纤维占比。采用酶消化法分离培养8周龄SD大鼠膀胱平滑肌细胞（BSMC）,构建复制性衰老细胞模型,观察细胞形态及表型变化。结果与3月龄组比较,24月龄组大鼠膀胱内残余尿量（RUV）明显升高,而排尿率（VE）、最大排尿压力（MVP）均明显降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。Masson染色可见3月龄组大鼠逼尿肌排列整齐,胶原纤维较少,而24月龄组大鼠膀胱组织中逼尿肌纤维排列紊乱、松散,胶原纤维较多;24月龄组大鼠膀胱组织胶原纤维占比明显高于3月龄组（P＜0.05）。在倒置显微镜下观察,随着细胞代数的增长,细胞从原来的细长梭形变为宽大畸形,α平滑肌肌动蛋白、肌间线蛋白表达均明显减少（均P＜0.05）,但Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达均明显增加（均P＜0.05）。结论老年大鼠存在膀胱排尿功能减退及胶原比例失衡等,衰老所致BSMC表型转化可能是其中的病理、生理机制之一。     

反义c-jun对血管平滑肌细胞表型标志基因表达的影响

血管平滑肌细胞 (ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌ,ＶＳＭＣ)异常增殖是许多心血管疾病的共同病理基础 ,位于血管中膜的ＶＳＭＣ由分化型转变为去分化型是其增殖的前提。ｃ ｊｕｎ产物是参与细胞增殖调控的主要转录因子之一。已经证明 ,应用反义技术抑制ｃ ｊｕｎ基因表达可有效抑制细胞增殖 ,但对ＶＳＭＣ表型转化有无影响尚未见报道。本文应用可表达ｃ ｊｕｎ反义ＲＮＡ的真核细胞表达载体转染ＶＳＭＣ ,分别以平滑肌α -肌动蛋白 (ＳＭα ａｃｔｉｎ)和平滑肌胚胎型肌球蛋白重链 (ＳＭｅｍｂ)作为分化型与去分化型ＶＳ…     

血管平滑肌细胞表型转化与骨架蛋白表达之间的关系

目的:探讨体外培养血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型与细胞骨架蛋白表达之间的生物学意义.方法:体外培养大鼠主动脉VSMCs,实验分组为:对照组、血清饥饿组、血清再培养组,RT-PCR检测表型基因平滑肌22α(smooth muscle 22 alpha,SM22α)mRNA的表达;免疫细胞化学检测细胞骨架蛋白F-肌动蛋白(F-actin)的表达.结果:在体外培养条件下,对照组SM22α表达较低,细胞呈多角形或短梭形,细胞多有板状突起,F-actin的荧光强度明显减低;血清饥饿组SM22α表达恢复上调,VSMCs多细长,呈梭形,少见分裂相细胞,F-actin的荧光强度升高;血清再培养后SM22α表达减少,细胞呈增殖状态,见核分裂现象,F-actin的荧光强度减低.结论:VSMCs的表型和细胞骨架形态和数量表达之间有着重要的相互联系,它们在维持细胞功能、血管重构及在心血管疾病(高血压、动脉粥样硬化)的发生、发展中起重要作用.     

PPAR-γ在高血压血管平滑肌细胞表型转化中的作用

目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator activated reeeptors-γ,PPAR-γ)在高血压血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用.方法 应用基因重组技术使PPAR-γ过表达和表达抑制,Western blot方法 检测分化型VSMC标志物α-SMA和末分化型VSMC标志物OPN的蛋白表达,应用DNA合成率检测和细胞计数的方法 测定细胞增殖率,常规病理切片和HE染色观察血管形态学改变.结果 ①PPAR-γ激动剂罗格列酮可降低SHR大鼠血压,并改善丰动脉血管重构.②SHR大鼠主动脉中OPN表达增多而α-SMA表达减少,应用罗格列酮可抑制上述改变.③SHR大鼠来源的VSMC中OPN表达增多而α-SMA表达减少,细胞增殖率升高,PPAR-γ过表达使细胞增殖率降低,并抑制OPN和α-SMA的表达改变.结论 PPAR-γ可抑制高血压VSMC向未分化表型的转化,可能是其改善高血压血管重构的重要机制.     

主动脉疾病中血管平滑肌细胞表型转化调控机制研究进展

主动脉疾病(aortic disease,AD)指由于主动脉壁病变所致的一类疾病,往往高度致命.目前非遗传性AD的发病机制尚未完全阐明.血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)是主动脉壁中层的主要细胞成分,通常认为其存在收缩型与合成型两种表型,且可相互转化.VSMC由收缩型向合成型的过度转化在AD的发生发展过程起重要作用.尽管关于VSMC表型转化研究较多,但众多调控机制如何协调运作以及相互之间的关系仍然有待阐明.本文就目前已知的VSMC表型转化调控机制作一综述.     

血管平滑肌细胞表型转化影响因素及中药干预研究进展

成熟分化的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)受机体不同刺激时具有表型可塑性,VSMCs由分化型和收缩表型转化为去分化型的过程称之为表型转化.VSMCs表型转化在动脉粥样硬化、高血压、血管成型术后再狭窄、糖尿病血管病变等增殖性血管疾病中具有重要作用.本文主要介绍VSMCs表型转化影响因素及中药干预VSMC表型转化的研究进展,为中药防治增殖性血管疾病提供新思路.     

PDGF-BB诱导肺动脉平滑肌细胞表型转换时细胞骨架的变化

目的 研究血小板衍生生长因子（PDGF-BB）诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）表型转换时细胞骨架构象的改变,探讨PASMCs表型转换的机制。 方法 原代培养并鉴定SD大鼠PASMCs,将PASMCs分为对照组（细胞不加诱导剂培养24 h）、实验组（细胞用PDGF-BB 10 ng/mL诱导培养24 h）;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）及Western blot检测细胞表型转化标志基因[α-肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌22α蛋白（SM22α）]mRNA及相关蛋白的表达;免疫荧光法检测细胞骨架微丝F-actin及微管α-tubulin、β-tubulin的构象;CCK-8法检测细胞增殖能力及划痕实验观察细胞迁移能力。 结果 与对照组相比,PDGF-BB下调α-SMA及SM22α表达水平;细胞骨架荧光强度明显减弱,F-actin排列紊乱、边缘不规则、呈毛刺样,α-tubulin、β-tubulin形态模糊,表现为共定位;明显增强PASMCs增殖与迁移能力。 结论 PDGF-BB可能通过影响细胞骨架构象诱导PASMCs表型转换,进而改变细胞增殖及迁移能力。     

褪黑素抑制人血管平滑肌细胞的巨噬样表型转化

目的探究褪黑素在人血管平滑肌细胞(VSMC)巨噬样表型转化中的作用。 方法VSMC分为对照组、胆固醇组(水溶性胆固醇)、褪黑素组(水溶性胆固醇+褪黑素)。水溶性胆固醇诱导VSMC建立巨噬样表型转化模型。定量PCR检测VSMC巨噬样表型相关基因表达水平;油红O染色观察各组VSMC脂质吞噬能力;Edu染色观察各组VSMC增殖情况;细胞划痕实验观察VSMC迁移情况。 结果10 mg/L水溶性胆固醇显著降低平滑肌收缩表型相关标志基因α-actin和α-tropomyosin mRNA表达,并显著升高巨噬细胞相关标志基因CD68和MAC2 mRNA表达,诱导VSMC巨噬样表型转化。0.5 μmol/L褪黑素可抑制水溶性胆固醇引起的VSMC脂质蓄积和细胞增殖,但对VSMC迁移无影响。 结论褪黑素抑制VSMC的巨噬样表型转化。     

同型半胱氨酸对大鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的： 验证同型半胱氨酸（Hcy）是否具有促进大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）去分化的作用。 方法： SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4～7代细胞用于实验。VSMCs分为对照组、100 μmol/L Hcy干预组、500 μmol/L Hcy干预组、1 000 μmol/L Hcy干预组共4组。MTT法测各组VSMCs的增殖情况;划痕法和Transwell法检测各组VSMCs的迁移情况;ICC法检测各组VSMCs的细胞形态;Western blot法检测各组VSMCs中SM-actin、SM-MHC、Calponin、骨桥蛋白（OPN）的表达情况。 结果： 相比于对照组,Hcy组VSMCs增殖迁移增加;细胞形态变圆;SM-MCH和Calponin表达减少（ P＜0.01〉;OPN表达增加（ P＜0.01）,Hcy的这一作用与浓度呈正相关。 结论：Hcy可以促进VSMCs去分化,这可能是其促进VSMCs增殖和迁移的机制之一。     

颅内动脉瘤雌激素受体与血管平滑肌细胞表型蛋白的表达

目的：探讨正常人体动脉血管和颅内动脉瘤的血管平滑肌（VSMC）雌激素受体（ERs）和VSMC表型蛋白的表达变化。方法：采用免疫组化法检测了15例颅内动脉瘤和7例正常对照动脉血管中ERs、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和结蛋白（Desmin）的表达。结果：颅内动脉瘤VSMC的ERα和ERβ表达均高于对照动脉血管表达水平,具有显著性差异;颅内动脉瘤VSMC的α-SMA和Desmin表达均低于对照动脉血管表达水平,具有显著性差异。结论：人类颅内动脉瘤VSMC表达ERs水平升高与VSMC表型蛋白表达降低,可能与颅内动脉瘤的形成有关。     

瑞舒伐他汀抑制血管平滑肌细胞表型转化的机制研究

摘要：目的  研究瑞舒伐他汀是否可以抑制大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）表型转化及其机制。方法  SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4～7代细胞用于实验。用不同浓度的瑞舒伐他汀干预VSMCs,Western blot检测各组标本中骨骼肌肌动蛋白（SM-actin）、平滑肌22α（SM-22α）、滑肌肌球蛋白重链（SM- MHC）、骨桥蛋白（OPN）的表达,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况,划痕试验观察细胞迁移情况。通过免疫组织化学法（ICC）检测SM-actin的表达从而观察VSMC的形态。转染过表达KLF-4或空白对照质粒至离体培养的VSMCs中,用瑞舒伐他汀干预,并采用上述实验方法检测VSMCs表型转化情况。结果  MTT结果显示,与对照组比较,瑞舒伐他汀组VSMCs增殖能力降低,差异有统计学意义（P <0.05）。划痕试验结果显示,与对照组比较,他汀组VSMCs迁移减少,差异有统计学意义（P <0.05）。Western blot检测显示,与对照组比较,他汀组VSMCs中SM-22α、SM-MHC、OPN表达增多,差异有统计学意义（P <0.05）。ICC结果显示,与对照组VSMCs的细胞形态比较,他汀组VSMCs形态变细、变长。转染KLF-4过表达质粒后,与对照组比较,转染KLF-4过表达质粒可以增加VSMCs的增殖和迁移,差异有统计学意义（P <0.05）,逆转他汀对VSMCs表型转化有抑制作用。结论  瑞舒伐他汀通过下调KLF-4,抑制大鼠主动脉VSMCs表型转化。

     

黑木耳多糖对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞表型转化及bFGF和PDGF表达变化的研究

目的通过黑木耳多糖对血管平滑肌细胞表型转化及bFGF和PDGF表达变化的影响,探讨黑木耳多糖降血脂和抗氧化以外的抗动脉粥样硬化形成作用。方法将30只新西兰白兔随机分为正常对照组、模型组和实验组3组,分别给予普通饲料(正常组)、高胆固醇饲料(模型组)以及高胆固醇加黑木耳多糖饲料(实验组)喂养。第12周末处死动物,取主动脉行组织形态学观察及用透射电镜和免疫组织化学方法分析平滑肌细胞表型转化及bFGF和PDGF表达变化。结果实验组主动脉斑块面积明显小于模型组,模型组和实验组分别为(0.44±0.10)和(0.30±0.83),两组比较差异有统计学意义(P<0.01);透射电镜和免疫组化结果显示:模型组动脉粥样硬化斑块的平滑肌细胞内内质网、线粒体增多,主要为合成表型;而实验组平滑肌细胞内内质网、线粒体少,主要为收缩表型,并且斑块内bFGF和PDGF的表达减少。结论黑木耳多糖可抑制动脉粥样硬化过程中血管平滑细胞从收缩表型向合成表型的转化,从而抑制平滑肌细胞合成和分泌bFGF、PDGF和其他细胞外基质的能力,从而减少动脉粥样硬化形成中血管平滑肌细胞参与的过程。     

PPAR-γ激动剂抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的表型转化

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptorgamma,PPAR-γ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化的抑制作用及其可能的机制.方法 体外培养小鼠血管平滑肌细胞,应用AngⅡ诱导VSMCs的表型转化,给予罗格列酮预处理后用Transwell检测细胞迁移并在激光共聚焦显微镜下观察细胞微丝骨架,用RT-qPCR和Western blot分别检测PPAR-γ、PKG Ⅰ α以及VSMCs收缩型标志因子(smooth muscle 22 alpha,SM22α)mRNA和蛋白水平.应用PPAR-y抑制剂预处理后再给予罗格列酮刺激,Western blot检测PKG Ⅰ α和SM22α蛋白水平.结果 ①罗格列酮(20 μmol/L)预处理可抑制AngⅡ诱导VSMCs的迁移(P＜0.05).②罗格列酮(20 μmol/L)预处理后可抑制AngⅡ诱导VSMCs微丝骨架的形成.③RT-qPCR检测结果显示:罗格列酮(20 μmol/L)预处理后可抑制AngⅡ诱导PKG Ⅰα和SM22α mRNA的下调作用(P＜0.05).④Western blot检测结果显示:罗格列酮(20 μmol/L)预处理后可抑制AngⅡ诱导PKG Ⅰ α和SM22α蛋白水平的下调作用(P＜ 0.05);PPAR-y抑制剂GW9662可减弱罗格列酮对PKG Ⅰα和SM22α的促表达作用(P＜0.05).结论 罗格列酮通过激活PPAR-y来抑制AngⅡ诱导VSMCs的表型转化,激活PPAR-y可能通上调PKG Ⅰ α表达发挥上述作用.