Ras基因蛋白的表达及基因突变与皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌的相关性

目的探讨Ras基因家族(K-ras、H-ras、N-ras)蛋白的表达和基因突变与病理性瘢痕上皮癌变和瘢痕癌发生的相关性。方法用激光扫描共聚焦显微技术检测皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌组织中K-ras、H-ras、N-ras免疫荧光蛋白表达;免疫组织化学技术(SP)法检测正常皮肤、病理性瘢痕和瘢痕癌组织中K-ras、H-ras、N-ras蛋白的表达;从病理性瘢痕和瘢痕癌组织中提取DNA,分析K-ras、H-ras、N-ras基因第12、13位密码子突变情况。所有数据运用SPSS16.0软件包进行统计学分析。结果①K-ras、H-ras、N-ras3种蛋白在病理性瘢痕上皮中呈现较弱荧光,为弱阳性表达,在瘢痕癌组织中呈现较强荧光,为强阳性表达。②3种蛋白在正常皮肤表皮、病理性瘢痕上皮和瘢痕癌组织中分别呈阴性或弱阳性、弱阳性或阳性和强阳性表达。瘢痕癌组表达水平(阳性面积)、表达强度(平均光密度)与正常皮肤、病理性瘢痕组比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01;P﹤0.05);但正常皮肤组与病理性瘢痕组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。③病理性瘢痕和瘢痕癌中均未发现K-ras、H-ras、N-ras基因12、13位密码子突变。结论①瘢痕癌的发生与K-ras、H-ras、N-ras蛋白的高表达有相关性;②病理性瘢痕上皮和瘢痕癌组织中不存在K-ras、H-ras、N-ras基因12、13位密码子突变。③病理性瘢痕上皮中没有发现癌变早期信号。     

皮肤瘢痕癌中CDK4、CDK6蛋白的表达及意义

目的探讨细胞周期素依赖激酶CDK4、CDK6蛋白在皮肤瘢痕癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测正常皮肤表皮、皮肤病理性瘢痕被覆上皮和瘢痕癌组织中CDK4、CDK6蛋白的表达。结果CDK4、CDK6蛋白在皮肤瘢痕癌组中呈阳性或强阳性表达,在皮肤病理性瘢痕组中呈弱阳性表达,在正常皮肤组中呈阴性或弱阳性表达。瘢痕癌组分别与正常皮肤组和皮肤病理性瘢痕组比较,差别有统计学意义(P<0.01)。结论 CDK4、CDK6蛋白的过表达可能与瘢痕癌的发生具有相关性。     

K-ras基因状态及ras蛋白表达在胃印戒细胞癌免疫表型分类中的意义

目的 探讨K-ras基因状态及ras蛋白表达在胃印戒细胞癌免疫表型分类中的意义.方法 应用组织芯片免疫组织化学技术检测180例胃印戒细胞癌组织中ras蛋白的表达;PCR扩增和DNA直接测序法检测癌组织中K-ras基因12、13密码子的突变情况.结果 ras蛋白阳性50例(27.8％),ras蛋白阳性表达率在肠型印戒细胞癌中显著高于胃型和混合型印戒细胞癌(P<0.05).在淋巴结转移阳性组织中,ras蛋白阳性表达率明显高于无淋巴结转移组织(P<0.05);随着肿瘤侵袭、演进及临床分期的升高,ras蛋白阳性表达率明显增高(P<0.05).K-ras基因突变型22例(12.2％).所有突变位点均位于12密码子,突变类型包括:GGT→AGT 1例,GGT→TGT 1例,GGT→GCT 2例,GGT→GTT 8例,GGT→GAT 10例.13密码子未发现突变.肠型印戒细胞癌K-ras基因突变率显著高于胃型和混合型印戒细胞癌(P<0.05).K-ras基因突变型病例ras蛋白阳性表达率明显高于K-ras基因野生型病例(P<0.05).Spearman等级相关分析显示,ras蛋白表达与K-ras基因突变呈正相关(r=0.61,P<0.05).结论 ras蛋白的过表达可能与胃印戒细胞癌侵袭潜能、淋巴结转移相关,ras蛋白表达和K-ras基因突变与肿瘤的免疫表型变化存在相关性,它们在癌细胞表型转化过程中可能起到一定作用.     

结直肠癌K-ras基因状态及P21 ras蛋白表达的意义

目的 探讨结直肠癌K-ras基因状态和P21 ras蛋白表达及其与临床病理特征的关系.方法 分别应用免疫组化Envision二步法检测160例结直肠癌组织芯片中P21 ras蛋白表达及PCR扩增、DNA直接测序法检测癌组织中K-ras基因12、13和61密码子的突变状态.结果 P21 ras蛋白阳性表达率为48.1％ (77/160),淋巴结转移阳性组P21 ras蛋白阳性表达率(61.9％)显著高于无淋巴结转移组(39.2％),差异有统计学意义(P＜0.05).K-ras基因突变56例,突变率为35％,突变位点均位于12、13密码子,61密码子未发现突变.突变类型包括:GGT→GTT(17例)、GGT→GAT(12例)、GGT→AGT(15例)、GGT→TGT(8例)、GGC→GAC(4例).淋巴结转移阳性组和Dukes'分期为C+D期的K-ras基因突变率分别为47.6％和39.5％,明显高于无淋巴结转移组(26.8％)和Dukes'分期为A+B期组(20.5％),差异有统计学意义(P＜0.05).其中K-ras基因突变型组P21ras蛋白阳性表达率(91.1％)明显高于K-ras基因野生型组(25.0％),差异有统计学意义(P＜0.05).Spearman等级相关分析显示,P21 ras蛋白表达与K-ras基因12密码子突变呈正相关(r=0.63,P＜0.05).结论 K-ras基因突变和P21 ras蛋白的过表达可能与结直肠癌淋巴结转移相关,P21 ras蛋白表达与K-ras基因12密码子突变具有一定相关性;K-ras基因突变与高的肿瘤分期有关.检测K-ras基因突变对评价结直肠癌患者临床病理特征、个体化治疗及预后有指导意义.     

TGF-β1／Smad 信号通路在皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌组织中的变化

目的：探讨TGF-β1/Smad信号通路在皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌组织中的变化。方法：将20份病理性瘢痕组织标本设为观察A组、20份瘢痕癌组织标本设为观察B组,20份正常皮肤组织设为对照组,分别使用蛋白免疫印迹（Western blotting）和实时荧光PCR（real time PCR）观察三组组织标本TGF-β1和Smad蛋白和基因的变化情况。结果：①Western blotting：观察B组的TGF-β1和Smad蛋白显著高于观察A组和对照组（ P＜0．01）,TGF-β1和Smad在观察A组与对照组之间无统计学差异（ P＞0．05）;②Real time PCR：观察B 组的TGF-β1和Smad 基因显著高于观察A组和对照组（ P＜0．01）,TGF-β1和Smad在观察A组与对照组之间无统计学差异（P＞0．05）;③相关性分析：在皮肤瘢痕癌标本中TGF-β1与mRNA TGF-β1（r＝0．727 P＜0．01）,Smad与mRNA Smad（r＝0．812 P＜0．01）的表达均呈正相关。结论：瘢痕癌变上调TGF-β1、Smad的表达,在瘢痕癌中TGF-β、Smad 同时存在蛋白水平和基因水平的异常表达,可将改变TGF-β1/Smad信号通路的标志蛋白的表达做为治疗疤痕癌的靶方向。     

散发性甲状旁腺癌一例分子遗传学分析

目的 通过对一例散发性甲状旁腺癌患者的临床特点、病理特点、基因突变分析研究和免疫组化分析研究,初步探讨散发性甲状旁腺癌的发病机制.方法 收集患者临床资料、病理标本及外周血,提取外周血和石蜡包埋组织标本的DNA,PCR扩增HRPT2基因的17个外显子及其与内含子的边界,测序确定HRPT2基因的突变位点,应用免疫组化的方法检测该基因编码的蛋白表达.结果 患者临床表现、内分泌功能检查及病理特点均符合甲状旁腺癌,以其血液和肿瘤组织基因组DNA为模板的PCR产物测序发现,患者携带-HRPT2基因杂合性胚系突变,其HRPT2基因第222位密码子从CGA变成TGA终止密码子,导致其编码的蛋白成为一个只包含221个氨基酸的截短蛋白.免疫组化结果示HRPT2编码的蛋白(parafibromin)表达完全缺失.结论 HRPT2基凶突变导致其编码的蛋白不能正常表达,为散发性甲状旁腺癌发病的分子机制之一.     

口腔鳞癌K-ras基因测序分析及p21~(ras)蛋白的表达

目的:探讨K-ras基因在口腔鳞癌中的序列改变和p21ras蛋白的表达。方法:采用聚合酶链反应直接测序检测口腔鳞癌K-ras基因外显子1、2突变,免疫组织化学法检测口腔鳞癌组织、癌旁正常组织p21蛋白的表达。结果:30例口腔鳞癌中4例(13.3%)存在K-ras基因突变,突变方式为C→T转换,突变位点在第6位和第79位密码子,口腔鳞癌组织p21ras蛋白阳性率为73.3%(22/30),高于癌旁正常组织20%(6/30)。结论:口腔鳞癌中K-ras基因的突变谱较广,K-ras基因突变和p21蛋白表达与口腔鳞癌发生发展有关。     

细胞周期调控因子p21 WAF1/CIP1在瘢痕癌组织中的表达及意义

目的探讨细胞周期调控因子p21在皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌组织中的作用。方法 1采用激光扫描共聚焦显微技术,对瘢痕癌和病理性瘢痕石蜡切片组织进行p21免疫荧光双标记,同时采集三维立体图像;2应用免疫组织化学染色(SP)法,检测瘢痕癌组织、病理性瘢痕被覆上皮和正常皮肤表皮3组组织中p21蛋白的表达;3采用核酸分子原位杂交技术检测p21m RNA在3组组织中的表达;4对各项指标进行相关性分析,计算平均光密度和阳性面积,并结合图像分析,所有数据运用SPSS 17.0软件包进行统计学分析。结果 1免疫荧光双标记结果:p21蛋白在瘢痕癌癌组织中呈较强荧光,为高表达;在病理性瘢痕上皮中呈微弱荧光,为阴性表达;2免疫组织化学和原位杂交结果:p21蛋白和p21m RNA在瘢痕癌癌组织中呈高表达,在病理性瘢痕上皮中呈低表达,在正常皮肤表皮呈阴性表达。瘢痕癌组表达强度(平均光密度)和表达水平(阳性面积)分别与病理性瘢痕及正常皮肤组相比较,差异均有统计学意义(P<0.01);但病理性瘢痕组与正常皮肤组比较,差异无统计学意义(P>0.05);3相关性分析:在瘢痕癌组织中,p21蛋白与p21m RNA的表达呈正相关。结论瘢痕癌中细胞周期调控因子p21的过表达,其凋亡抑制调控作用有待进一步探讨,p21的表达可能具有组织特异性。     

皮肤瘢痕上皮及瘢痕癌癌巢中Cx26Cx26mRNA的表达及意义

目的 探讨连接蛋白26在皮肤瘢痕上皮及瘢痕癌癌巢中的表达及其意义.方法 对15例皮肤瘢痕和22例瘢痕癌,用免疫组织化学方法(SP法)检测Cx26蛋白,用原位杂交技术检测Cx26 mRNA.利用计算机图像分析系统采集、分析图像,并对数据进行统计学处理.结果 Cx26蛋白、Cx26 mRNA在正常皮肤表皮的表达呈阳性,在病理性皮肤瘢痕上皮呈强阳性表达,在瘢痕癌癌巢中呈弱阳性或阴性表达.正常皮肤组、皮肤瘢痕组及瘢痕癌组两两比较,其表达(阳性面积和平均光密度)差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ①Cx26蛋白及Cx26 mRNA的高表达,对皮肤瘢痕上皮增生具有促进作用;②Cx26蛋白及Cx26 mRNA的低表达,与皮肤瘢痕癌的发生相关.     

结直肠癌组织中K-ras基因的检测及其意义

目的 观察结直肠癌组织中K-ras基因的表达情况,并分析其与临床病理学的相互关系,为临床筛选出能从生物靶向治疗中获益的人群.方法 对208例结直肠癌组织标本,使用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因(包含12和13密码子),并对扩增产物进行Sanger法测序,进行K-ras基因的检测,结合相关的临床病理学资料,分析K-ras基因的表达状况同临床病理学的关系.结果 208例结直肠癌组织中K-ras基因12或13密码子突变为91例,突变率为43.8%,突变率在男女性别之间、肿瘤位置、组织分化类型和Duke's分期间差异无统计学意义.结论 对结直肠癌组织K-ras基因的表达状况进行检测有助于临床筛选出针对抗EGFR靶向治疗药物有效的结直肠癌患者.