大青叶提取物抗登革病毒Ⅱ型的体外实验研究

为检测大青叶提取物体外抗登革病毒Ⅱ型（ DENV-Ⅱ） 的作用.本实验以白纹伊蚊C6/36细胞为宿主细胞, 阿昔洛韦为阳性对照药物, 通过观察细胞病变效应（CPE）和改良MTT法来测定药物的细胞毒性、药物对DENV-Ⅱ的直接灭活作用、以及药物抗DENV-Ⅱ对细胞的吸附和对DENV-Ⅱ在细胞内复制增殖的抑制,并算出药物抗 DENV-Ⅱ的治疗指数.结果 显示该提取物在体外对DENV-Ⅱ无直接灭活作用,也无抗DENV-Ⅱ吸附细胞的作用;但能抑制DENV-Ⅱ在细胞内的复制增殖,其治疗指数达1.57.说明该药物在体外有一定的抗DENV-Ⅱ感染效果,主要是通过抑制病毒在细胞内的复制增殖而发挥作用.     

大青叶提取物抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的体外实验研究

目的 检测大青叶提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-Ⅱ） 的作用. 方法 以Vero 细胞为宿主细胞,阿昔洛韦为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应（CPE）和改良MTT比色法来测定药物的细胞毒性、药物对HSV-Ⅱ的直接灭活作用,以及药物抗HSV-Ⅱ对细胞的吸附和对 HSV-Ⅱ在细胞内复制增殖的抑制,算出药物抗HSV-Ⅱ的治疗指数. 结果 大青叶提取物在体外对HSV-Ⅱ无直接灭活作用,也无抗HSV-Ⅱ吸附细胞的作用,但能抑制HSV-Ⅱ在细胞内的复制增殖,其治疗指数达3.56. 结论 大青叶提取物在体外有一定的抗HSV-Ⅱ感染效果,主要是通过抑制病毒在细胞内的复制增殖而发挥作用.     

茵陈水溶性提取物体外抗巨细胞病毒效应的实验研究

目的:探讨茵陈水溶性提取物溶液体外抗人巨细胞病毒(HCMVAD169)的效应。方法:采用细胞病变(CPE)抑制法观察茵陈水溶性提取物溶液对HCMVAD169毒株的抑制作用,使用MTT比色法检测细胞的损伤程度,并利用吸光度(A)值评价茵陈水溶性提取物溶液的抗HCMV的效应。结果:茵陈水溶性提取物溶液半数中毒浓度(TC50)为904.49mg·L-1,半数有效浓度(IC50)为195.11mg·L-1mg·L-1,治疗指数(TI)为4.64。茵陈水溶性提取物溶液具有抗HCMV的作用,且其作用随药物浓度的增高而增强。结论:体外实验证实,茵陈水溶性提取物是理想的抗HCMV中药。     

金蒲抑瘤片诱导体外培养的人肝癌BEL-7404细胞凋亡的实验研究

目的：探讨金蒲抑瘤片体外对肝癌细胞的诱导凋亡作用。方法：应用MTT法、生长曲线、荧光染色、血清药理学、DNA凝胶电泳等实验技术研究金蒲抑瘤片体外对BEL－7404细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用。结果：金蒲抑瘤片体外对BEL－7404细胞有明显的抑制作用，且这种抑制作用呈浓度依赖性。经体内代谢的含药血清也具有抑制细胞生长的能力。药物作用后的细胞出现荧光染色增强、胞核碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。结论：金蒲抑瘤片及其含药血清，在一定浓度下能诱导BEL－7404细胞凋亡。     

尖吻蝮蛇毒小分子多肽对人卵巢癌A2780细胞增殖和黏附的影响

目的探讨尖吻蝮蛇毒小分子多肽(K组分)对体外培养的人卵巢癌A2780细胞株的增殖抑制作用及机制。方法MTT法观察K组分对人卵巢癌A2780细胞增殖的影响;采用光镜、电镜观察细胞形态变化;荧光染色法测定和观察K组分对A2780细胞凋亡影响;采用结晶紫染色法测定K组分对A2780与FN黏附作用的影响。结果MTT显示K组分呈剂量与时间依赖性抑制人卵巢癌A2780细胞株的增殖,电镜观察给药组细胞出现明显凋亡,荧光显微镜下可见细胞形态发生改变,K组分对A2780细胞在FN基质上的黏附有一定的抑制作用,并呈浓度依赖关系。结论K组分对体外培养的人卵巢癌A2780细胞株有较明显的抑制作用,该作用与诱导细胞凋亡和抑制细胞和细胞外基质黏附的能力有关。     

痰热清对呼吸道合胞病毒体外抑制作用研究

目的研究中草药痰热清注射液对呼吸道合胞病毒体外抑制作用。方法以利巴韦林为阳性对照药,采用细胞培养技术及四氮唑蓝（MTT）比色法,观察在痰热清干预下,感染呼吸道合胞病毒Hep-2细胞的病变效应（CPE）及光密度值（D）,计算各组细胞的病毒抑制率。比较不同药物剂量及不同给药方式（预防给药、直接灭活及治疗给药）下痰热清对呼吸道合胞病毒的抑制作用。结果 3种给药方式下,CPE法及MTT比色法测得痰热清抗呼吸道合胞病毒的半数有效浓度（EC50）分别为0.735、0.815、0.766g/L和0.854、0.842、0.887g/L,治疗指数（TI）分别为11.32、10.21、10.86和9.74、9.88、9.38;3种方式给药下痰热清对呼吸道合胞病毒的抑制作用无差异（P〉0.05）。结论痰热清对呼吸道合胞病毒有直接灭活及抑制增殖作用,对其感染靶细胞有阻断作用,并呈明显量效关系。     

广西眼镜蛇毒蛋白Natrin在体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用的研究

目的观察广西眼镜蛇毒蛋白Natrin在体外对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及凋亡诱导作用。方法以不同浓度的Natrin作用于SMMC-7721细胞24 h后,用MTT法检测细胞的生长抑制率;AO/EB双染色法、透射电子显微镜法观察细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。结果 Natrin对人肝癌SMMC-7721细胞有体外抑制作用,随着药物浓度的增大抑制率也随之增大,24 h半数抑制浓度IC50为138.69 mg·L-1;给药后,荧光显微镜下与透射电子显微镜下细胞呈现典型的凋亡形态改变;流式细胞仪检测到随着药物浓度的增大凋亡百分数也随之增大;Natrin能诱导SMMC-7721细胞发生S期和G2/M期阻滞。结论Natrin在体外能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡。     

大蒜素抗白血病作用的研究

目的研究大蒜素(allicin)对急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的作用并探讨其机制。方法采用大蒜素在体外作用于AML患者BMMNC,经MTT法、TdT缺口末端标记(TUNEL)技术、RT-PCR等方法检测大蒜素对AML患者BMMNC的影响。结果不同浓度大蒜素对AML患者BMMNC有不同程度的生长抑制、诱导凋亡和抑制iNOSmRNA表达的作用。①MTT法检测大蒜素对细胞的增殖抑制作用,发现大蒜素在3个浓度范围内对细胞均有增殖抑制作用,并呈量效关系。②TUNEL检测见阳性细胞核深染,大蒜素处理组与对照组比较,凋亡细胞明显增多。③RT-PCR检测发现大蒜素能显著抑制iNOSmRNA表达。结论大蒜素可抑制AML患者BMMNC生长、诱导期凋亡及抑制iNOSmRNA表达。     

蒙药梅花草乙醇提取物体外抗肿瘤实验研究

目的：研究蒙药梅花草乙醇提取物对人宫颈癌细胞（Hela细胞）的体外增殖抑制作用。方法：采用MTT法检测梅花草乙醇提取物的不同剂量组对Hela细胞增殖的抑制作用;以单克隆抗体ELISA法检测凋亡细胞。结果：梅花草乙醇提取物处理Hela细胞24h后,可以明显抑制Hela细胞的增殖。与对照组相比,梅花草乙醇提取物可以明显促进Hela细胞的凋亡。结论：蒙药梅花草的乙醇提取物体外对Hela细胞的增殖有抑制作用,其作用机制可能与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。     

痰热清抗呼吸道合胞病毒作用体外实验研究

目的研究中草药注射液痰热清对呼吸道合胞病毒(RSV、Long株)的抑制作用。方法以病毒唑为阳性对照药,采用细胞培养技术,观察不同药物浓度及不同给药方式下RSV攻击后各组Hep-2细胞的病变效应(CPE),在此基础上采用MTT比色法,测定各组细胞的病毒抑制率。以CPE法计算药物的半数中毒浓度TC50,分别以CPE法及MTT法计算药物的半数有效浓度EC50及治疗指数TI,比较不同药物浓度及不同给药方式下热毒宁对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用效果。结果痰热清注射液半数中毒浓度TC50为3.972g/L,预防给药方式、细胞外直接灭活及治疗给药方式均有抗RSV作用,其抗RSV的半数有效浓度(EC50)分别为0.428/1.160/1.189g/L,治疗指数TI分别是9.28、3.42和3.34,痰热清对RSV的抑制作用存在着明显的量效反应关系。结论痰热清对RSV有直接灭活作用,对RSV侵入Hep-2细胞有阻断作用,对RSV在Hep-2细胞内增殖有抑制作用,相同浓度下,以预防作用更显著。     

热毒宁对流感病毒FM_1的抑制作用

目的:研究中草药热毒宁注射液对流感病毒FM_1的抑制作用。方法:以利巴韦林为阳性对照药,采用细胞培养技术及四氮唑蓝(MTT)比色法,观察在热毒宁干预下,受FM_1感染的犬肾传代细胞(MDCK细胞)的病变效应(CPE)及光密度值(D),计算各组细胞的病毒抑制率。比较不同药物剂量及3种不同给药方式(预防给药、直接灭活及治疗给药)下热毒宁对流感病毒FM_1的抑制作用。结果:热毒宁注射液半数中毒浓度(TC_(50))为10.11g·L~(-1)。预防给药、直接灭活及治疗给药方式下,CPE法测得其抗流感病毒FM_1的半数有效浓度(EC_(50))分别为0.625、0.725、0.629 g·L~(-1),治疗指数(TI)分别为16.17、13.94、16.07;MTT比色法测得其抗流感病毒FM_1的EC_(50)分别为1.135、0.770、0.661 g·L~(-1),TI分别为8.91、13.12和15.29。3种方式给药,MTT法测定时,热毒宁对流感病毒FM_1的抑制作用无差异;CPE法测定时,热毒宁浓度在0.812 51 g·L~(-1)及以上对流感病毒FM_1的抑制作用无差异。结论:热毒宁对流感病毒FM_1有直接灭活及抑制增殖作用,对其感染靶细胞有阻断作用,且呈明显量效关系。     

峨参石油醚提取物对肺癌细胞A549和H460增殖的抑制作用观察

目的探讨不同浓度的峨参石油醚提取物对体外培养的人肺癌细胞A549、H460的增殖及凋亡的抑制作用。方法不同浓度的峨参石油醚提取物作用于肺癌细胞A549和H460,48 h后MTT法观察药物对肺癌细胞A549和H460生长的抑制效应;用倒置显微镜观察细胞形态学的改变,应用DAPI染色法观察不同浓度峨参石油醚提取物作用于癌细胞24 h后对细胞凋亡的影响。结果峨参石油醚提取物对肺癌细胞A549和H460的半数有效抑制浓度IC50值分别为6.13μg/ml和0.97μg/ml;通过倒置显微镜可观察到细胞的形态学改变,细胞荧光染色出现了明显的凋亡细胞,表现为细胞生长明显受到抑制,荧光增加,有明显的细胞核断裂和皱缩。结论 峨参石油醚提取物对肺癌细胞增殖具有明显的抑制及诱导凋亡的作用。     

淫羊藿苷联合丝裂霉素对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用

目的通过将淫羊藿苷(ICA)联合丝裂霉素(MMC)联合作用肝癌HepG2细胞的实验研究,探讨联合药物对HepG2细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法 MTT法检测不同浓度ICA、MMC或两药联合处理48 h后及未处理组HepG2细胞的增殖活性,通过两药相互作用系数CDI评价两种药物的相互作用性质;RT-PCR检测药物处理后HepG2细胞内凋亡抑制蛋白质FLIP mRNA水平的变化。结果单独ICA或MMC处理后,均可抑制HepG2细胞的增殖,其抑制率随着药物剂量增加而增强(P<0.05),呈剂量依赖性;两药联合应用对HepG2细胞增殖的抑制作用明显,其抑制率呈剂量依赖性(P<0.01),且两药作用具有协同效应(CDI<1);与未处理组相比,ICA或MMC处理后HepG2细胞内FLIP mRNA水平降低,尤其以联合药物处理组降低更加显著(P<0.001)。结论 ICA与MMC联用可在体外抑制肝癌细胞的增殖,两药具有协同效应,其抑制机制可能通过抑制凋亡抑制蛋白FLIP的表达,从而增加癌细胞的凋亡而实现的。     

白芍总苷对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的探讨白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测TGP对SMMC-7721增殖的影响;应用荧光显微镜观察药物作用后的细胞的形态。结果白芍总苷(0.5~2.5g.L-1)能抑制SMMC-7721细胞生长,且呈浓度依赖性;TGP(1.0、1.5 g.L-1)分别作用72 h后,SMMC-7721细胞出现体积缩小,荧光染色增强,胞核或胞质中可见致密浓染的块状或颗粒状黄绿色荧光染色。结论白芍总苷在体外能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并能诱导细胞凋亡。     

罗汉松种子提取物对人胃癌细胞的体外抑制作用

目的初步研究罗汉松种子提取物对人胃癌细胞MGC-803的抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法测定不同浓度梯度的罗汉松种子提取物作用人胃癌MGC-803细胞24,48,72 h的增殖抑制率。采用RT-PCR检测MGC-803细胞凋亡相关基因bcl-2和p53 mRNA的表达。结果不同质量浓度罗汉松种子提取物对MGC-803细胞均有增殖抑制作用,且随着质量浓度的增加和作用时间的延长,抑制率呈上升趋势。RT-PCR结果显示,不同质量浓度罗汉松种子提取物作用于MGC-803细胞,bcl-2 mRNA水平随质量浓度的增加而明显下降,而p53 mRNA水平则随质量浓度的增加而显著增强。结论罗汉松种子提取物对人胃癌细胞MGC-803有明显的体外抑制作用,其抑制作用与药物的质量浓度和作用时间呈正相关,可能与其调控相关凋亡基因的表达有关。     

虎耳草抗前列腺癌生物活性部位筛选研究

目的筛选虎耳草抗前列腺癌生物活性部位。方法采用MTT法研究虎耳草不同极性提取物对PC-3细胞的增殖抑制作用,运用流式细胞法检测受试药对PC-3细胞周期分布的影响以及凋亡情况,应用电镜观察PC-3细胞凋亡的形态学特征,探讨抗前列腺癌作用机制。结果虎耳草不同提取部位对PC-3细胞的增殖均有一定抑制作用,随着药物浓度和作用时间的增加而增强。结论虎耳草乙醇提取后乙酸乙酯萃取部位具有很好的抗前列腺癌活性。     

选择性COX-2抑制剂celecoxib对子宫肌瘤细胞的增殖抑制及其分子机制

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对子宫肌瘤细胞的增殖抑制作用和分子机制.方法 给予原代培养的子宫肌瘤细胞不同浓度的celecoxib处理,MTT法测定细胞生长抑制率;半定量RT-PCR法检测子宫肌瘤细胞Wnt信号通路的关键基因Wnt5b、β-catenin、c-myc的表达及塞来昔布对子宫肌瘤细胞增殖活化的影响.结果 塞来昔布可显著抑制体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖,随着药物剂量的增加和时间的延长,子宫肌瘤细胞的增殖和活化明显抑制,呈剂量和时间依赖性,而这种作用是通过抑制Wnt信号通路实现的.结论 子宫肌瘤细胞中存在Wnt信号通路且celecoxib在体外能抑制此通路活化,从而抑制肌瘤细胞的增殖.     

蒲公英花提取物的体外抗肿瘤活性研究

目的研究蒲公英花提取物的不同溶剂萃取部分的体外抗肿瘤作用。方法设蒲公英花提取物的各萃取部位的不同浓度组、细胞对照组及空白对照组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法考察蒲公英花提取物的各萃取部位在不同时间内对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,并采用显微镜观察药物对上述细胞株细胞形态的影响。结果蒲公英花提取物的各萃取部位在体外对肝癌细胞HepG2有比较显著的细胞增殖抑制作用,呈现明显的剂量-时间-效应关系;并且可使肿瘤细胞株的细胞形态发生显著变化,引起细胞株的凋亡或坏死。结论蒲公英花提取物的各萃取部位能抑制肝癌细胞HepG的增殖,在体外有一定的抗肿瘤活性。     

紫草组分的抗肿瘤活性及其凋亡机制研究

目的研究紫草组分的体外抗肿瘤作用及其作用机制。方法用MTT法、流式细胞仪,观察1.25～10.00μg.mL-1紫草组分对B16F10及HepG2细胞作用24 h的生长抑制作用及凋亡诱导作用;用激光共聚焦显微镜,观察药物的细胞分布;用Western-blot法检测细胞凋亡相关蛋白分子的变化。结果紫草组分能够抑制HepG2和B16F10细胞的增殖并诱导其早期凋亡,并呈浓度与时间依赖性。药物主要分布于细胞质中,在给药后30 min,给药组的p-JNK与p-p38分子明显增加。结论紫草组分可抑制HepG 2和B16F10细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

熊果酸对HL60细胞作用机制的初步研究

目的探讨熊果酸在体外对急性早幼粒白血病HL60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用体外细胞培养技术,荧光显微镜观察细胞结构变化、MTT法观察细胞生长抑制作用、流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化。结果 MTT法证实熊果酸对HL60细胞具有增殖抑制和杀伤效应,并呈浓度和时间依赖性。显微镜下可见HL60细胞出现典型凋亡细胞形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期阻滞于G0/G1期。结论熊果酸在体外可抑制急性早幼粒白血病HL60细胞增殖,诱导细胞凋亡。