CIK细胞治疗恶性肿瘤的临床观察和护理

目的研究用脐血单个核细胞制备CIK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标及临床应用中的护理规范。方法分离脐血单个核细胞,用IL-2,CD3Ab和IFN-У等细胞因子诱导CIK细胞;测定肿瘤患者用CIK细胞治疗前后外周血单核细胞（PBMC）的NK杀伤活性．静脉滴注过程中严密观察患者的体温和脉博等反应。结果肿瘤患者输注CIK细胞一疗程后,其PBMC的NK杀伤活性由62％升高到83％。平均升高29％．发热反应不到3％,大多在38℃以下,未经处理自行清退。结论（1）CIK细胞输注能明显提高肿瘤患者PBMC的NK活性。（2）CiK细胞输注临床应用安全有效,无明显副作用。（3）肿瘤病人PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数。     

CIK细胞的诱导及其对肝癌细胞毒作用的体外研究

目的体外诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并研究其生物学活性。方法从外周血和脐血分离单个核细胞(PBMC),经过细胞因子诱导、培养并扩增CIK细胞,以LAK作比较,流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD56。3H-TdR释放法检测CIK的增殖能力,MTT法检测对肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402,正常胎肝细胞L-02的杀伤活性。结果CIK细胞第二周进入快速增殖期,到第31d扩增倍数超过60倍,CD3+CD56+细胞扩增倍数达800倍以上;CIK对肝癌细胞的杀伤能力明显优于LAK细胞(65%～81%);对正常胎肝细胞的细胞毒作用(<5%)。结论CIK细胞是一种具有很强杀瘤活性的免疫活性细胞,具有临床应用前景。     

抗原负载树突状细胞对胃癌患者自身肿瘤细胞体外杀伤作用研究

目的探讨用冻融的自身胃癌抗原冲击树突状细胞(DC),体外观察其对自身细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对自身肿瘤细胞杀伤作用的研究。方法从胃癌手术切除肿瘤周围转移引流淋巴结,提取单个核细胞,将贴壁生长的细胞用细胞因子基因重组粒巨集落和生长因子(rhGM-CSF)、基因重组白介素4(rhIL-4)、以及基因重组α-肿瘤坏死因子(rhTNF-α)联合诱导培养DC,然后用经冻融制备的自身肿瘤细胞抗原冲击DC并作用CIK细胞,最后检测CIK细胞体外杀伤三种靶细胞(自身胃癌细胞、K562和SGC-7901细胞)的活性。结果经细胞因子联合诱导培养后,DC含量明显增高,CD1a/CD14和CD80/CD86阳性细胞比刚分离的单个核细胞明显增多。DC和CIK细胞共同培养后,CIK细胞高表达CD3+CD56+。负载胃癌抗原冲击的引流淋巴结DC活化的CIK细胞,杀伤自身肿瘤细胞活性达78.6%,而单纯CIK细胞为35.2%,两者比较有显著性差异p<0.01;而对K562和SGC-7901细胞杀伤活性二者间无明显差异。结论肿瘤周围转移引流淋巴结贴壁细胞在体外能定向诱导扩增出大量DC;胃癌抗原负载的DC和CIK细胞共同培养,可明显提高CIK细胞对自身肿瘤细胞的杀伤活性。     

应用CIK细胞治疗子宫内膜癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞变化的临床观察

目的:观察应用细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)联合化疗、内分泌治疗等治疗子宫内膜癌的临床疗效。方法:子宫内膜癌患者35例给予联合应用CIK细胞生物治疗6个疗程,其中11例患者TP(紫杉醇+顺铂)化疗联合CIK细胞生物治疗,15例患者醋酸甲地孕酮内分泌治疗联合CIK细胞生物治疗,9例患者单纯应用CIK细胞生物治疗。通过流式细胞术检测治疗前后患者T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值以及NK细胞比例、KPS评分等指标变化,用统计学方法进行分析。结果:35例子宫内膜癌患者经联合CIK细胞生物治疗后,CD3+T细胞无显著变化,CD4+辅助T细胞显著增加,CD4+/CD8+比值显著升高,部分患者CD3-/CD16+56+的NK细胞较治疗前升高但无统计学意义,患者平均KPS评分提高10分(P<0.05)。结论:CIK细胞可以提高子宫内膜癌患者机体免疫功能,改善患者一般状态。     

慢性乙型肝炎患者CIK细胞生物学特性的研究

目的探讨慢性乙型肝炎外周血CIK细胞的生物学特性,寻求治疗乙型肝炎的一种新方法。方法提取20例慢性乙型肝炎患者和20例健康人外周血单个细胞与IFN-γ、IL-1β、抗CD3mAb和IL-2共同培养诱导CIK细胞,用流式细胞仪检测细胞表型特征和细胞增殖倍数,用LDH酶释放法检测细胞的杀伤活性;同时设立CIK和CD3AK细胞在增殖和杀伤活性作比较。结果慢性乙型肝炎患者CIK细胞的增殖及杀伤活性均低于正常对照组(P<0·01),但较培养前明显增高,于培养后12~24d达高峰。CIK细胞与CD3AK细胞在增殖倍数上无明显差异(P>0·05),但杀伤活性前者比后者有显著提高(P<0·01)。结论慢性乙型肝炎患者CIK细胞的增殖倍数、杀伤活性均低于正常人,但明显高于培养前。诱导12~24d后CIK细胞增殖及杀伤活性均达到高峰,此时期的CIK细胞适合临床应用;CIK细胞其体外杀瘤活性明显优于CD3AK细胞,CIK可作为继CD3AK细胞之后过继免疫治疗乙型肝炎的一种新方法。     

子宫内膜异位症中骨桥蛋白对自然杀伤细胞杀伤功能的抑制作用

目的:观察骨桥蛋白(OPN)对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响,以探讨OPN在子宫内膜异位症中的作用。方法:用乳酸脱氢酶释放法测定不同浓度OPN及其抗体对NK细胞杀伤活性的影响;测定子宫内膜异位症患者腹水以及腹水中加入OPN抗体后对NK细胞杀伤活性的影响。结果:当OPN浓度为25、50、75、100、125、250、500ng/ml时,与对照组相比,NK细胞杀伤活性逐渐降低(P<0.05);但当OPN浓度为1 000ng/ml时,与浓度为500ng/ml时相比,NK细胞杀伤活性有所升高(P<0.05),但仍低于对照组(P<0.05)。当OPN与抗OPN的单克隆抗体共同孵育后,NK细胞的杀伤活性均有所升高(P<0.05)。子宫内膜异位症患者腹水可抑制NK细胞的杀伤活性(P<0.05);当在腹水中加入一定量的抗OPN单克隆抗体后,NK细胞的杀伤活性有所升高,但仍低于对照组(P<0.05)。结论:OPN可抑制NK细胞的杀伤活性,是子宫内膜异位症患者腹水中抑制NK细胞活性的因子之一。     

CIK细胞治疗晚期恶性肿瘤疗效分析

目的研究自体CIK细胞过继性免疫治疗晚期恶性肿瘤的临床疗效。方法从34例晚期肿瘤患者外周血中分离出单个核细胞,加入含有IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗等细胞因子的培养基中进行培养。扩增后的CIK细胞总数在4.5~6×109之间,分三次回输给患者。检测患者回输前后瘤体变化,免疫学指标和肿瘤标志物的改变,观察患者临床症状的改善和毒副反应。结果 34例接受CIK治疗的患者中,外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞(CD16、CD56)均显著上升(P0.05),CD8+下降。有效率(CR+PR+MR)为79.4%。24例CEA升高者19例下降,8例CA125升高者6例下降,4例CA199升高者均下降。患者临床症状改善,毒副反应轻。结论自体CIK细胞过继性免疫治疗能显著提高肿瘤患者细胞免疫功能,改善临床症状,提高生活质量。     

负载肺癌A549抗原的树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞特异性激活研究

目的 观察负载肺癌A549抗原的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)特异性肿瘤杀伤活性的作用.方法 由正常人富含淋巴细胞白膜分离、细胞因子诱导制备DC细胞和CIK细胞.用流式细胞术分析DC细胞和CIK细胞的表型.经混合淋巴反应和体外细胞毒性实验观察负载A549抗原的DC对CIK具有特异性激活作用.结果 表型分析显示,CIK细胞以CD3 CD56 自然杀伤细胞为主,成熟DC细胞高表达CD40、CD80、CD86和HLA-DR,并可刺激CIK细胞的增殖诱导混合淋巴反应,而负载A549抗原的DC细胞能显著增强CIK细胞特异性杀伤靶细胞的能力(P＜0.05).小鼠注射CIK、DCCIK和Ag·DC·CIK后的肿瘤直径分别为(65.34±12.33)、(70.17±13.26)和(36.79±9.19)mm,后者的抗肿瘤作用较高(P＜0.05).结论 抗原负载的DC细胞可活化CIK细胞,并使其具有特异性杀伤肿瘤细胞的能力.     

1例复发难治性老年急性白血病异体CIK细胞治疗的护理

CIK细胞指细胞因子诱导的杀伤细胞,是外周血单个核细胞在体外经过各种细胞因子共同诱导而获得的一群异质细胞,具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和天然杀伤细胞非主要组织相容性复合物限制杀瘤特点[1].本文总结1例复发难治性老年急性白血病患者应用异体CIK细胞治疗的护理体会.     

香烟提取物对人体NK细胞和LAK细胞活性影响

目的　了解烟雾对人类自然杀伤细胞 (NK)和杀伤细胞 (LAK)活性的影响。方法　抽取 4 0名不吸烟的健康自愿者外周血分离单个核细胞 (PBMC) ,将每名自愿者的PBMC分为A、B、C、D 4份 ,A、B用于检测NK细胞 ,C、D用于检测LAK细胞 ,其中B、D不加香烟提取物作为正常对照 ,A、C加入香烟提取物一起培养 ,以K5 6 2 (NK敏感细胞 )为靶细胞经噻唑蓝 (MTT)法检测NK细胞活性 ,以HL 6 0为靶细胞 (NK耐受细胞 )检测LAK细胞活性。观察香烟提取物对NK细胞和LAK细胞的影响。结果　A组NK细胞平均活性为 (43 95± 5 5 7) %,B组为 (45 84±5 6 1 ) %,二者差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ,两组NK细胞活性段位分布比较差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ,C组LAK细胞平均活性为 (2 0 0 7± 1 78) %,D组为 (2 4 5 0± 2 1 7) %,二者差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论　香烟提取物可影响LAK细胞活性和少数个体NK细胞活性。降低机体免疫监视功能和对癌变细胞清除的能力 ,可能是吸烟者癌症高发的主要原因之一。     

自体DC CIK NK αβT γδT细胞治疗乳腺组织细胞肉瘤的临床研究

目的观察细胞因子诱导的自体DC、CIK、NK、αβT、γδT细胞治疗组织细胞肉瘤疗效。方法抽取患者自体外周血60~100 m L,采用血细胞分离机收集其单核细胞,经细胞因子诱导并扩增C I K、N K、αβT、γδT细胞及DC细胞;用流式细胞仪检测其表型后,静脉回输CIK、NK、αβT、γδT细胞,皮下注射DC细胞,观察组织细胞肉瘤变化。结果患者左乳肿块缩小＞50%,生活质量明显改善。结论细胞免疫治疗是一种化疗后组织细胞肉瘤有效的治疗手段,具有广阔的临床应用前景。     

Chronic marginal vitamin A status reduces natural killer cell number and function in aging Lewis rats.

Natural killer (NK) cells function in the regulation of immune responses and in the surveillance of malignant or other abnormal cells. Little is known of the effects of chronic marginal vitamin A (VA) status or VA supplementation, or their interaction with age, on NK cell number and cytolytic activity. We have conducted a two-factor (diet, age) study in which male Lewis rats were fed AIN-93M diet, modified to contain either 0.3 (designated marginal), 4.0 (control) or 50 (supplemented) mg retinol equivalents (RE)/kg diet, from the time of weaning until the ages of 2.5 mo (young), 8-10 mo (middle-aged) or 18-20 mo (old). Natural killer cells were identified and quantified in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and spleen with the use of flow cytometry, and NK cell cytotoxicity was assayed. The number and percentage of PBMC NK cells increased with age (P < 0.0001 by two-way ANOVA). For all age groups, values were lowest in rats with marginal VA status (P < 0.0001 vs. controls). NK cell lytic activity also declined with age (P = 0. 0003). As a result, NK cell lytic efficiency (lytic activity per NK cell) decreased markedly with age (P < 0.0001). Regardless of the donor's age or VA status, PBMC NK cell cytotoxicity doubled (100 +/- 25% increase) after exposure to interferon-alpha (5 x 10(5) U/L for 1 h before assay), indicating that IFN-stimulated lytic activity was related directly to basal NK cell activity. If the relationships observed in this animal model can be applied to humans, these data suggest that elderly people consuming diets chronically low in VA may be at increased risk for infectious or neoplastic diseases.     

肺癌病人外周血NK细胞与TNF检测及其临床意义

为探讨肺癌患者体内肿瘤坏死因子（TNF）与自然杀伤（NK）细胞活性水平及影响二者活性的临床因素。采用外周血诱生TNF测定法检测TNF活性;应用荧光检测法分析细胞毒性效应DNA以观察NK细胞活性。结果发现肺癌患者NK细胞活性显著低于正常人和非癌胸病病人,并随病期进展、肿瘤增大及淋巴结转移而加重,不受病理学类型影响。TNF活性水平显著高于非癌胸病人与正常人,而与病期、肿瘤大小、淋巴结转移与否及病理学类型无关。结果认为肺癌病人体内细胞免疫功能处于严重失衡状态,表现为NK细胞活性下降,全血诱生TNF活性呈高水平状态,检测二者活性可为肺癌病人的综合治疗提供理论依据。     

Natural killer cell cytotoxicity is not regulated by folic acid in vitro

ObjectivesFolate supplementation may be associated with an increased risk of developing several types of cancer and a derangement of immune function. Among the latter, Natural killer (NK) cells are involved in non–MHC-restricted natural immunity against malignant target cells. Abnormalities in NK cell number or function have been associated with a higher cancer risk. The aim of this study was to study in vitro the possible effect of different concentrations of 5-methyltetrahydrofolic acid (5-MTHF) or folic acid on NK cell cytotoxic function, and expression of the stimulatory and inhibitory receptors KIRDL4, KIRDL3, and NKG2D.MethodsVolunteer-derived peripheral mononuclear cells (PBMC) and highly enriched NK cells (95% CD56+ CD16+) were grown in folic acid free–RPMI 1640, supplemented either with folic acid or 5-MTHF (15–100 nM) during 72 h to 96 h.ResultsNo differences in the cytolytic activity of PBMC and enriched NK cells were observed. After 96 h of in vitro culture without folate or supplemented with FA or 5-MTHF (30 or 100 nM), there were no changes in the percentage of HPNK receptor-positive cells.ConclusionsOur data indicate that a high dose of 5-MTHF or folic acid does not influence NK cell function in vitro.     

精氨酸对结肠,直肠癌病人免疫功能及肿瘤细胞增殖活性的影响

目的：研究精氨酸（Ａｒｇ）对结肠、直肠癌病人的免疫功能和肿瘤细胞增殖活性的影响。方法：结、直肠腺癌病人３０例，随机分为实验组、对照组。实验组每天静脉输注Ａｒｇ２５ｇ，连续３天。检测细胞免疫指标〔Ｔ细胞亚群（ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋）、ＮＫ细胞活性、淋巴细胞转化率〕、红细胞免疫指标〔红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ）、红细胞免疫复合物花环率（ＲＢＣ－ＩＣＲ）〕、体液免疫指标（免疫     

Cigarette smoking is associated with the reduction of lymphokine-activated killer cell and natural killer cell activities

Lymphokine-activated killer (LAK) cell and natural killer (NK) cell activities were determined in a group of healthy individuals with differing smoking habits. The study population consisted of 54 Japanese males, including 23 smokers, 8 ex-smokers and 23 non-smokers. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated and used as effector cells. LAK cells were generated by incubation of PBMC with interleukin-2 for 72 h. LAK cell activity against NK-resistant Raji cells and NK cell activity against NK-sensitive K562 cells were examined by 4-h51Cr-release assay. LAK cell activity in the smokers was significantly lower than that in the nonsmokers. The smokers showed significantly lower NK cell activity than the nonsmokers, whereas NK cell activity of the ex-smokers was comparable to that of the non-smokers. The proportion of NK cells (CD3-16+56-, CD3-16-56+, or CD3-16+56+ cells) in the smokers was significantly lower than that in the nonsmokers. The present study demonstrates for the first time that cigarette smokers have lower LAK cell activity than nonsmokers.     

自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗苯中毒的临床研究

目的比较自体细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokines induced killer，CIK）对不同程度苯中毒患者骨髓造血功能恢复的疗效及对免疫功能的影响。方法对轻度（10例）、中度（9例）和重度（13例）慢性苯中毒者采用CIK细胞治疗，另外选择轻度、中度苯中毒患者19例采用升自细胞药物治疗作为对照组。观察轻度、中度苯中毒患者治疗效果及治疗前后T淋巴细胞亚群的变化；统计重度苯中毒致再生障碍性贫血患者12例CIK细胞治疗效果（有效率、病死率），并观察其治疗前后T淋巴细胞亚群的变化、血细胞及骨髓恢复情况。结果轻度、中度苯中毒患者CIK细胞治疗后，白细胞和血小板恢复程度均明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），而且治疗时间较对照组明显缩短。32例CIK治疗组患者治疗前CD/CDs的比值均倒置（〈1），而治疗后在外周血细胞恢复正常时，CD/CDs的比例也恢复正常。重度苯中毒患者采用CIK细胞治疗有效率高达91．7％（12／13），病死率为0％。结论CIK细胞治疗对苯中毒引起的骨髓造血功能障碍有明显疗效，且无毒副作用。该疗法为苯中毒治疗被开辟了新的途径。