天然药物抑制晶状体上皮细胞增殖及其信号转导机制

目的：探讨天然药物榄香烯（Ele）、姜黄素（Cur）、雷公藤内酯醇（Tri）对重组人表皮生长因子（rhECF）诱导的晶状体上皮细胞（LEC）增殖的抑制作用及其信号转导机制。方法：用rhEGF诱导体外培养的牛LEC增殖，将高、中、低不同浓度的Ele、Cur、Tri与增殖状态的LEC共同孵育后，进行以下研究：1、四甲基偶氮唑蓝法（MTT）法检测LEC增殖情况。2、流式细胞仪（FCM）检测增殖细胞核抗原（PCNA）表达。3、荧光分光光度法检测LEC内游离Ca^2＋浓度。4、放射免疫法检测LEC内环化腺苷酸（cAMP）和环化鸟苷酸（cGMP）含量。     

雷公藤内酯醇抑制晶状体上皮细胞增殖及其机制的研究

目的：探讨天然药物雷公藤内酯醇（Triptolide，Tri）对表皮生长因子诱导的牛晶状体上皮细胞（trovine Lens epithelial cell，BLECs）增殖的抑制作用以及它们的量效和时效关系，并进一步研究其抑制牛晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制，为临床上防治后发性白内障提供实验依据。，方法：取第4代对数生长期的牛LECs，加入重组人表皮生长因子（Recombinant Human Epithelial Growth Factor，rhEGF）（终浓度50μg／L）和不同浓度的Tri（40、20、10μg／L），再分别作用6h、12h、24h、48h、72h后，采用MTF法及流式细胞仪检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）在LECs的阳性表达率，观察Tri对LECs增殖的抑制作用及其量效与时效关系，同时用荧光分光光度计测定其细胞内Ca^2＋浓度，γ-放射免疫计数器测定其细胞内cAMP、cGMP浓度的改变，从而探讨Tri抑制LECs增殖的信号转导机制。     

HBx及其羧基末端40个氨基酸对SMMC-7721肝细胞增殖的影响

目的研究HBx羧基末端40个氨基酸对肝癌细胞增殖的影响及作用机制。方法用HBx及去除羧基末端40个氨基酸HBx3′40转染含野生型(wt)p53的SMMC7721细胞,经稳定筛选后,通过细胞生长曲线绘制以及平板克隆形成实验来观察HBx对细胞增殖的影响,并通过裸鼠体内的成瘤实验观察各移植瘤的大小及重量、增殖细胞核抗原(PCNA)表达的变化。结果细胞生长曲线表明HBx及HBx3′40的细胞生长速度明显较空载体增快;平板克隆形成试验表明克隆形成率,HBx组(48.7±8.1)%及HBx3′40组(82.8±6.0)%较对照组(26.9±3.5)%明显增多(P<0.05),pcDNA3HBx3′40组又较pcDNA3HBx组增多(P<0.05)。裸鼠成瘤实验pcDNA3HBx3′40组肿瘤的大小及重量(1.476±0.232、0.987±0.279)%及pcDNA3HBx组(0.412±0.212、0.395±0.159)%较对照组(0.051±0.024、0.033±0.004)%明显增大(P<0.05),肿瘤细胞的PCNA表达率pcDNA3HBx3′40组(69.25±3.77)%及pcDNA3HBx组(59.00±2.58)%也较对照组(37.67±2.52)%明显增强(P<0.05),且以HBx3′40组的表现更为明显(P<0.05)。结论HBx的羧基末端40个氨基酸可刺激细胞增殖,其突变可能与肝癌细胞发生过程中促进癌细胞的恶性转化有关。     

细胞凋亡抑制剂防护晶状体上皮细胞氧化损伤的信号转导机制

目的：旨在探讨细胞凋亡抑制剂阿魏酸钠（SF）、五味子乙素（Sch B）、菊花（FC）、车前子（SP）对氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内Ca^2＋、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响，揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制。方法：将四种药物与H202造成氧化损伤的体外培养牛LEC共同孵育后，进行以下研究：1、采用四甲基偶氮唑兰（MTT）法观察在不同时间和浓度条件下LEC活性的变化。2、采用荧光分光光度法测定不同时间细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）。3、采用放射免疫法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量。观察药物的剂量效应与时间效应。     

星形细胞肿瘤p53蛋白和PCNA免疫组化及其临床病理意义

应用免疫组化和图象分析技术对人脑星形细胞肿瘤中抑癌基因ｐ５３蛋白（４７例）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）（９７例）的定位、分布及反应强度与分级和预后的关系进行了研究。结果显示；３种ｐ５３蛋白抗体的阳性率为２３．４％～６６．７％，其中ＣＭ－１抗体阳性率高于ｐＡｂ１８０１和ｐＡｂ２４０；ｐ５３表达水平在Ⅱ～Ⅳ级高于１级，并与ＰＣＮＡ标记指数之间相关。ＰＣＮＡ反应强度既与分级相关，又与预后相关，对于分析星形细胞瘤增殖活性和恶性程度有重要意义。     

回阳生肌膏对慢性皮肤溃疡成纤维细胞c-fos、c-myc表达的影响

慢性皮肤溃疡缠绵难愈，治疗棘手，其发生发展与成纤维细胞增殖障碍有关。多年来有关其发病机理以及成纤维细胞的增殖与修复为国内外研究的热点。目的：建立慢性皮肤溃疡创缘成纤维细胞（uHFB）细胞系，观察回阳生肌膏水、醇提取物对成纤维细胞增殖的影响，并探讨c-fbs、c-myc及增殖细胞核抗原（PCNA）表达在回阳生肌膏调控创面愈合中的信号转导作用。方法：组织块法培养并建立uHFB细胞系；alarmar blue摄入法检测回阳生肌膏水、醇提取物对uHFB的增殖作用；免疫细胞化学法检测回阳生肌膏水、醇提取物对uHFB c-fos、c-myc及PCNA表达的影响。     

磷酸化信号转导和转录激活因子3(Y705)在子宫腺肌症中的表达及其临床意义

目的通过检测磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)(Y705)和血管内皮生长因子(VEGF)在正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜中的定位与表达,探讨p-STAT3(Y705)和VEGF在子宫腺肌症中发生发展中的作用。方法免疫组织化学SP法检测14例正常子宫内膜和14例子宫腺肌症在位内膜中p-STAT3(Y705)和VEGF的定位和表达情况;Real-time PCR检测正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜组织中STAT3 mRNA表达情况;Western blotting检测正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜组织中p-STAT3(Y705)、STAT3和VEGF蛋白的表达水平。结果 p-STAT3(Y705)主要在正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜腺上皮细胞核中表达,子宫腺肌症在位内膜蛋白表达高于正常子宫内膜(P0.05),正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜相应的增殖期和分泌期p-STAT3(Y705)的表达无显著性差异(P0.05)。正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜中,STAT3在mRNA和蛋白表达水平差异均无显著性(P0.05)。VEGF主要表达在腺上皮细胞中,子宫腺肌症在位内膜蛋白表达高于正常子宫内膜(P0.05),正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜相应的增殖期和分泌期VEGF的表达差异无显著性(P0.05)。结论 p-STAT3(Y705)促进血管生成对子宫腺肌症的发生发展有一定的作用。