层黏连蛋白α4链中αvβ3整合素结合肽的精细鉴定与功能分析

目的 利用点突变、缺失突变及功能实验确定αvβ3整合素在已鉴定人层黏连蛋白α4链(human laminin alpha4,LNα4)G19肽段中的最小结合位点及关键氨基酸残基.方法 采用同源序列比较确定G19肽中的保守氨基酸残基,点突变确定其中的关键氨基酸残基,缺失突变确定αvβ3整合素结合的最小肽段,并通过人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)管样结构形成实验及鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验验证鉴定肽的生物学功能.结果 同源性比较分析发现,G19肽中共存在10个保守性氨基酸残基位点.点突变分析发现第4位的I、第10位的H及第16位的Y是αvβ3整合素结合的关键位点,缺失突变分析确定G1124-1137肽段(G14肽)是αvβ3整合素结合的最小肽段, 合成的G14肽可以浓度依赖性地促进HUVEC管样结构的形成及CAM的血管生成.结论 成功鉴定了αvβ3整合素在LNα4中的最小结合位点及关键氨基酸残基.所鉴定的肽段具有促HUVEC成管样结构及促CAM血管生成的生物学功能.     

大鼠杏仁核和终纹床核中肽能神经元分布的比较

用免疫组织化学方法研究和比较了大鼠杏仁核和终纹床核中血管活性肠肽(VIP),胆囊收缩素(CCK)、促皮质激素释放激素(CRF)、神经降压肽(NT)、甘丙肽(GAL).P物质(SP)。生长抑素(SOM)。降钙素基因相关肽(CGRP)、α-黑色素刺激激素(α-MSH),β-内腓肽(β-END)。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),亮氨酸-脑腓肽(L-ENK)和甲硫氨酸-脑腓肽(M-ENK)等13种肽能神经元胞体和纤维终末的分布。观察到这些肽能神经元在杏仁核和终纹床核各亚核中的分布有一定相似性。终纹床核前部的肽能神经元分布和中央杏仁核及内侧杏仁核相似,终纹床核后部的肽能神经元分布和外侧杏仁核及基底杏仁核相似。从而进一步证明了大鼠杏仁核和终纹床核的同源性。     

内啡素的一些临床意义

内啡素(Endorphin)亦称为内源性阿片样物质,主要有甲啡肽,亮啡肽,强啡肽,α-内啡肽,β-内啡肽、ν-内啡肽以及一些非肽类的阿片样物质等。它们在体内起着神经介质或神经调质的作用,对体内许多重要的生理功能都有明显的影响。许多学者认为,内啡素的发现为神经生理学的发展开辟了一个新领域。 既往认为β-内啡肽是β-趋脂素分子中61-91位氨基酸片段,而甲啡肽又是β-内啡肽分子的一部分(相当于β-趋脂素61-65位氨基酸片段),因此提出,     

酶催化合成CCK-4三肽片段

目的探讨酶法合成胃泌激素CCK-4 C-末端片段三肽衍生物Phac-Met-Asp(OMe)-Phe-NH2。方法以Phac-Met- OCam为起始原料,采用三种蛋白酶,即α-糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、嗜热菌蛋白酶(α-chymotrypsin, papain,thermolysin),经过三步酶促反应得到目标三肽化合物;研究了酶催化条件下Met-Asp肽键的形成以及天门冬氨酸双酯中α-酯的酶催化条件下的选择性水解;对酶以及反应介质的选择等酶促合成条件进行了研究。结果三步酶促反应均可得到较合适的收率(63%~92%),产物经FAB-MS、FD-MS质谱确认。结论以α-糜蛋白酶为酶催化剂,在含有1.5% 0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液的乙酸乙酯介质中,Phac-Met-OCam和H-Asp(OMe)2缩合可得到收率大于63%的缩合产物;木瓜蛋白酶催化下可选择性水解Phac-Met-Asp(OMe)2中的α-酯而保留β-酯;嗜热菌蛋白酶能有效地催化Phac-Met-Asp(OMe)-OH与H-Phe-NH2生成肽键。     

酶催化合成CCK-4三肽片段

目的 探讨酶法合成胃泌激素CCK-4 C-末端片段三肽衍生物Phac-Met-Asp(OMe)-Phe-NH2。方法 以Phac-Met-OCam为起始原料，采用三种蛋白酶，即α-糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、嗜热菌蛋白酶(α-chymotrypsin，papain，thermolysin)，经过三步酶促反应得到目标三肽化合物；研究了酶催化条件下Met-Asp肽键的形成以及天门冬氨酸双酯中α-酯的酶催化条件下的选择性水解；对酶以及反应介质的选择等酶促合成条件进行了研究。结果 三步酶促反应均可得到较合适的收率(63％～92％)，产物经FAB-MS、FD-MS质谱确认。结论 以α-糜蛋白酶为酶催化剂，在含有1．5％0．05mol／L Tris-HCl缓冲液的乙酸乙酯介质中，Phac-Met-OCam和H-Asp(OMe)2缩合可得到收率大于63％的缩合产物；木瓜蛋白酶催化下可选择性水解Phac-Met-Asp(OMe)2中的α-酯而保留β-酯；嗜热菌蛋白酶能有效地催化Phac-Met-Asp(OMe)-OH与H-Phe-NH2生成肽键。     

裂蹄木层孔菌菌丝体培养物中的β-分泌酶抑制剂hispidin

阿尔茨海默病(AD)的主要特征是淀粉样蛋白沉积(淀粉样斑块),淀粉斑块主要成分是β-淀粉肽(Aβ)Aβ的形成与β-分泌酶有直接关系,而α-分泌酶则可防止Aβ的形成。因此,抑制β-分泌酶和诱导α-分泌酶可能是减少脑中Aβ形成的标靶。作者测试了256种植物和真菌提取物,从裂蹄木层孔菌Phelli-nus linteus Teng菌丝体培养液中分离、鉴定     

裂蹄木层孔菌菌丝体培养物中的β-分泌酶抑制剂hispidin[英]／Park I-H…∥Planta Med

阿尔茨海默病(AD)的主要特征是淀粉样蛋白沉积(淀粉样斑块)，淀粉斑块主要成分是β-淀粉肽(Ap)。Aβ的形成与β-分泌酶有直接关系，而α-分泌酶则可防止Aβ的形成。因此，抑制β-分泌酶和诱导α-分泌酶可能是减少脑中Aβ形成的标靶。作者测试了256种植物和真菌提取物，从裂蹄木层孔菌Phellinus linteus Teng菌丝体培养液中分离、鉴定了一种小分子β-分泌酶(BACEl)抑制剂hispidin，     

桦褐孔菌多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

[目的]观察桦褐孔菌多糖对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞与小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响.[方法]利用桦褐孔菌多糖(40mg/L)处理被LPS(100μg/L)刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量RT-PCR方法测定促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达;采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β水平.[结果]与给予LPS刺激相比较,给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05);给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株在48 h后与只给予LPS刺激相比较,细胞所分泌的促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平均明显下降(P<0.05).[结论]桦褐孔菌多糖对LPS刺激Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平及Raw264.7细胞株促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌均有抑制作用.     

烫伤大鼠血浆白细胞介素-1β水平的变化及调节

目的观察不同程度烫伤大鼠血浆白细胞介素-1β(IL-1β)水平的变化及可能的调节措施.方法采用ELISA法检测正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠血浆IL-1β的水平.用体内注射TNF-α、IL-1β中和抗体和α-促黑色素细胞刺激激素(α-melanocyte-stimulating hormone , α-MSH)和合成肽KPV(Ac-D-Lys-L-Pro-D-Val)等措施调节其改变.结果与正常对照组(6.36±5.26 pg/ml)相比,烫伤后12h, 轻烫组的血浆IL-1β水平(130.13±26.01 pg/ml)显著升高(P<0.01);与轻烫组相比,重烫组 (214.08±27.25 pg/ml)升高更加明显(P<0.01).体内注射TNF-α、IL-1β中和抗体和α-MSH及KPV均能明显降低重烫组动物血浆IL-1β水平.结论不同程度的烫伤均可使大鼠血浆IL-1β水平显著升高,重度烫伤时,升高更加明显;体内注射TNF-α、IL-1β中和抗体、α-MSH及KPV均可在一定程度上减轻重度烫伤所致的病理性高细胞因子血症.     

第八届国际药理学术会议内容简介(续)

五、内啡肽的一些展: 内啡肽(Endophins)是一类具有吗啡样作用的内源性多肽物质,它们包括脑啡肽(Enkephin,五肽),β-内啡肽系统的β-内啡肽(β-endophin,三十肽,简写为β-EP),α-内啡肽(α-endophin,十七肽)以及其他不属于这两类而具有吗啡样作用的多肽物质。它们大都分布于神经系统,并直接作用于神经原或释放到外周,进而作用于垂体或其他组织器官。它们具有一般神经肽所     

米菲司酮衍生物的合成及其抗早孕作用

为寻找强效抗早孕药,以米菲司酮(RU-486)为先导化合物,3-乙撑-二氧基-5(10),9(11)-雌甾二烯-3-酮为原料,经5(10)α位环氧化、17α丙炔化、11β格氏加成和水解4步反应,设计并合成了7个11β位具有电性较强、脂溶性较高取代基团的RU-486衍生物。其中6个化合物经初步药理试验都显示对SD大鼠有一定的抗早孕作用。当11β位为对-(N,N-甲基环戊基)氨基苯基时,该化合物的抗早孕作用较强,但弱于RU-486。     

氯氮平对雄性C57BL/6小鼠淀粉酶和促炎性细胞因子表达的影响

目的 研究不同剂量氯氮平对雄性C57BL/6小鼠血清及其胰腺组织中淀粉酶(amylase)和促炎性细胞因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α]表达的影响.方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分成对照组、氯氮平(5、10、20 mg/kg)组,分别给予0.9％氯化钠溶液、氯氮平(5、10、20 mg/kg)灌胃,连续灌胃14 d后采血测定各组小鼠amylase和促炎性细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的水平;随后取小鼠胰腺组织,用Western blot方法检测胰腺组织amylase和促炎性细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)蛋白的表达,用荧光定量PCR方法检测胰腺组织amylase和促炎性细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)mRNA的表达.结果 与对照组相比,氯氮平10、20 mg/kg组血清amylase水平明显升高(P＜0.01,P＜0.001);与对照组相比,氯氮平三组的血清IL-1β水平剂量依赖性地升高(P ＜0.01,P＜0.001);与对照组相比,血清IL-6水平在氯氮平5 mg/kg组有所下降(P＜0.05).氯氮平剂量依赖性地升高小鼠胰腺组织amylase和促炎性细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)蛋白以及mRNA的表达水平,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 氯氮平可以升高血清amylase和促炎性细胞因子IL-1β的水平,并增加胰腺组织中amylase和促炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,可能是氯氮平使用后易出现高淀粉酶血症乃至胰腺炎的发生机制之一.     

介绍一种血人绒毛膜促性腺激素的急诊检测方法

人绒毛膜促性腺激素(HCG)是胎盘绒毛膜滋养层细胞产生的一种具有促性腺发育的蛋白类激素,由α和β两个肽链(或亚基)组成.其中α-肽链与LH、FSH和TSH的α链相似,β-肽链则是特异的.HCG适用于诊断早期妊娠、估计先兆流产的预后、异位妊娠的诊断、滋养细胞肿瘤的诊断和病情监测以及其它肿瘤的辅助诊断及病情监测.     

转化生长因子β1的c-jun氨基端激酶和p38蛋白激酶通路及其抑制剂与纤维化

转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β-)是一个多功能肽类生长因子,对生长、分化、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积和免疫应答有广泛的潜在作用.TGF-β1是体内最有力的促纤维化因子之一,已表明其是多种组织纤维化发生的关键介导者.     

Gi蛋白真核表达载体的构建及表达检测

目的:克隆抑制腺苷酸环化酶G蛋白(Gi蛋白)3个亚基α、β和γ基因,构建pEYFP-N-Giα1和pECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,完成其在真核细胞中的表达检测.方法:培养肝癌细胞HepG2,提取总RNA后反转录成cDNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增α、β和γ的编码基因,在α亚基两端添加酶切位点,在β和γ亚基两端分别添加酶切位点和连接肽,经酶切和连接得到Giα1和Giβ1-γ2,再将Giα1和Giβ1-γ2基因分别构建到荧光蛋白报告载体pEYFP-N1和pECFP-C1中,利用脂质体法将真核表达载体转染到肝癌细胞中,激光共聚焦显微镜观察分析其表达活性.结果:PCR扩增获得Gi蛋白α、β和γ亚基的编码基因,在两端添加酶切位点和连接肽后获得的Giα1和Giβ1-γ2基因,成功构建了pEYFP-N-Giα1和pECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,并在肝癌细胞中实现其真核细胞表达.结论:成功构建Gi蛋白的真核表达载体,并鉴定其在活细胞中具有表达活性.     

β-淀粉样肽激活小胶质细胞分泌TNFα的研究

目的研究β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞分泌TNFα的合适方案。方法分离纯化小胶质细胞,再以不同浓度可溶性β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞生存率,光学显微镜下观察不同时间点的细胞形态,同时以酶联免疫吸附法检测不同时间点小胶质细胞分泌TNFα的含量。结果细胞生存率试验结果显示β-淀粉样肽对小胶质细胞无明显的毒性作用。在浓度分别为0.1、1.0、10、50、100μmol/L时,β-淀粉样肽均可诱导激活小胶质细胞分泌TNFα,TNFα分泌量随β-淀粉样肽的浓度增加而升高,但在β-淀粉样肽浓度高于10μmol/L后TNFα分泌量的增加并不显著。β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞2h后开始分泌TNFα,24h达到高峰,此后逐渐下降。结论β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞具有浓度及时间依赖性,以10μmol/Lβ-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞24h是合适的激活方案。     

油酸-内毒素序贯致伤大鼠血浆和肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化

目的探讨促炎症细胞因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平的变化,在全身炎症反应和急性肺损伤中的作用.方法采用油酸加内毒素脂多糖(LPS)序贯致伤大鼠,在油酸致伤后1、4、12和24h实施小剂量LPS第2次致伤,收集血浆和肺泡灌洗液,采用酶联免疫法(ELISA)检测TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量.以单油酸致伤和单小剂量LPS致伤作为对照组进行比较分析.结果 TNF-α和IL-1β在油酸致伤4 h LPS第2次致伤后水平最高,IL-6的最高水平在油酸12 h加LPS致伤组;2次序贯致伤后IL-1β水平变化最大,增高最显著,血浆浓度达到(1 526±39.69)pg/ml,肺泡灌洗液内浓度为(840.4±95.29)pg/ml.结合肺组织病理学研究,肺组织损伤最严重大鼠,血浆和肺泡灌洗液TNC-α、IL-1β和IL-6水平最高.结论 TNF-α和IL-1β是早期释放的促炎症细胞因子,其中IL-1β的血浆和肺泡灌洗液中水平最高,它可能在全身炎症反应发生、发展和急性肺损伤中起非常重要的作用.肺组织损伤程度与这些促炎症细胞因子水平有密切关系.     

高血压脑出血患者急性期血中TNF-α、IL-1β、ACTH、GC含量测定及其相互作用机制的研究

目的 测定高血压脑出血患者急性期血中肿瘤坏死因子-α(TMF-α)、白细胞介素-1(IL-1β)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(GC)的含量。方法 采用EIASA法测定32例脑出血患者晨间7-8时和夜间23-24时外周血耵TNF-α、IL-1β、ACTH、GC的含量。结果 脑出血组血中4种物质含量均高于正常对照组、TNF-α和IL-1β、ACTH、GC含量变化有正相关关系。对照组晨间4种物质含量均高于夜间水平，脑出血组晨间的含量均低于夜间。结论 TNF-α、IL-1β、ACTH、GC之间存在相互作用机制，构成神经内分泌和免疫调节网络，参与脑出血急性期的应激反应。     

大柴胡汤联合奥曲肽对急性胰腺炎模型大鼠血清细胞因子的影响

目的:观察大柴胡汤联合奥曲肽对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)模型大鼠血清细胞因子表达水平的影响。方法:采用5%牛黄胆酸钠复制急性胰腺炎大鼠模型。将60只SD大鼠随机分为假手术组、AP组、奥曲肽组、大柴胡汤组和联合用药组。比较各组大鼠血清中淀粉酶(amylase,AMY)、脂肪酶、丙氨酸氨基转移酶(alainine aminotransferase,ALT)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、β-半乳糖苷酶的表达水平,各组大鼠存活率及腹水量。结果:联合用药组腹水量少于奥曲肽组和大柴胡汤组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。假手术组大鼠全部存活,联合用药组存活率为91. 67%,与其他几组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。与假手术组比较,AP组大鼠β-半乳糖苷酶显著降低,TNF-α、IL-6表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P 0. 05)。与大柴胡汤组比较,联合用药组可显著升高大鼠血清β-半乳糖苷酶水平,降低TNF-α、IL-6表达水平,差异均有统计学意义(P 0. 05)。与假手术组比较,AP组大鼠血清AMY、脂肪酶、ALT表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P 0. 05)。联合用药组能明显降低大鼠血清AMY、脂肪酶、ALT的表达量,与奥曲肽组及大柴胡汤组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:AP模型大鼠外周血TNF-α、IL-6异常升高,诱导β-半乳糖苷酶急剧下降,导致胰腺组织内AMY、脂肪酶的表达异常,进一步刺激胰腺腺泡细胞的凋亡;联合用药(奥曲肽+大柴胡汤)可在保护肝功能的基础上明显改善外周血的炎症反应,抑制胰腺组织细胞凋亡,改善血清指标的异常表达。     

大柴胡汤联合奥曲肽对急性胰腺炎模型大鼠血清细胞因子的影响

目的:观察大柴胡汤联合奥曲肽对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)模型大鼠血清细胞因子表达水平的影响。方法:采用5%牛黄胆酸钠复制急性胰腺炎大鼠模型。将60只SD大鼠随机分为假手术组、AP组、奥曲肽组、大柴胡汤组和联合用药组。比较各组大鼠血清中淀粉酶(amylase,AMY)、脂肪酶、丙氨酸氨基转移酶(alainine aminotransferase,ALT)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、β-半乳糖苷酶的表达水平,各组大鼠存活率及腹水量。结果:联合用药组腹水量少于奥曲肽组和大柴胡汤组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。假手术组大鼠全部存活,联合用药组存活率为91. 67%,与其他几组比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。与假手术组比较,AP组大鼠β-半乳糖苷酶显著降低,TNF-α、IL-6表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P <0. 05)。与大柴胡汤组比较,联合用药组可显著升高大鼠血清β-半乳糖苷酶水平,降低TNF-α、IL-6表达水平,差异均有统计学意义(P <0. 05)。与假手术组比较,AP组大鼠血清AMY、脂肪酶、ALT表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P <0. 05)。联合用药组能明显降低大鼠血清AMY、脂肪酶、ALT的表达量,与奥曲肽组及大柴胡汤组比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:AP模型大鼠外周血TNF-α、IL-6异常升高,诱导β-半乳糖苷酶急剧下降,导致胰腺组织内AMY、脂肪酶的表达异常,进一步刺激胰腺腺泡细胞的凋亡;联合用药(奥曲肽+大柴胡汤)可在保护肝功能的基础上明显改善外周血的炎症反应,抑制胰腺组织细胞凋亡,改善血清指标的异常表达。