大鼠视网膜光损伤与视细胞凋亡关系的研究

目的：研究细胞凋亡与视网膜光损伤的相互关系，以探讨视网膜光损伤的发生发展机制。方法：所有SD大鼠经循环光环境适应7天，实验前暗适应36小时，分别于光照3、6、9、12、15、18小时，灌流固定，摘除眼球。光镜标本在常规脱水、透明、石蜡包埋切片后，行HE、TUNEL法染色，光镜观察；电镜标本在树脂包埋、超薄切片、醋酸－柠檬酸铅双重染色后，透射电镜观察；应用CLAS－1000图像分析系统定量检测外核层面积和视细胞凋亡指数，所得数据作统计学分析。结果：视网膜只见视细胞出现光损伤和细胞凋亡，随着光照时间的延长，视网膜光损伤逐渐加重，视细胞凋亡逐渐增多。在外核层，透射电镜观察及核染色质浓集，而无炎性反应。外核层面积和视细胞凋亡指数作相关性分析有显著意义。结论：视细胞凋亡是视网膜光损伤的重要机制。光损伤启动了视细胞凋亡的发生，外核层细胞核的丢失是视细胞凋亡的结果：视网膜光损伤与视细胞凋亡有着密不可分的联系。     

大鼠视网膜光损伤与细胞凋亡

目的 本文通过动物实验的方法,建立视网膜光损伤的动物模型,取材后进行光镜组织切片采用HE染色和TUNEL标记方法 观察视网膜光损伤后的病理改变,探讨普通日光灯对大鼠眼视网膜损伤的发病机制.方法 利用自制光照箱[中央平均光度(5680±146)lux],20只SD封闭群大鼠和1只RCS大鼠,随机建立实验组和对照组(实验组三组,阴性对照一组,阳性对照一组),实验组分别在光照后12、24、36h取材摘除眼球,解剖显微镜下取视网膜组织,固定、脱水、包埋,制作光镜组织切片进行HE染色和核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口翻译法(TUNEL)标记凋亡细胞,在光镜下观察的方法 .结果 (1)实验大鼠在暗适应后,鼠视网膜形态结构正常,层次清楚,视杆细胞内外节排列整齐,界限清楚,TUNEL标记阴性.(2)光照12h后,视杆细胞外节轻度空泡变性,外核层细胞核浓缩不明显,TUNEL标记细胞较少.(3)光照24h后,视杆细胞外节结构不清,外核层细胞核明显破碎,浓染,TUNEL标记较多,色素上皮细胞核浓染.(4)光照36h后,视杆细胞内外节溶解,外核层细胞稀疏,色素上皮核破碎,细胞核标记明显减少.结论 普通日光灯在一定强度下,经过一定时间的照射,对视网膜有损害,视网膜光损伤的病理变化中有细胞凋亡现象发生,视细胞凋亡是大鼠实验性视网膜光损伤的重要机制之一;视网膜凋亡细胞的出现位置主要集中在视网膜外核层,内核层和视神经节细胞层,随着损伤后时间的推移,调亡细胞逐渐被清除,视网膜组织则变薄,造成功能损害.     

牛磺酸对大鼠视网膜光损伤保护作用的实验研究

目的 探讨牛磺酸对大鼠视网膜光损伤和视细胞凋亡的保护作用及其作用机制。方法 所有大鼠被随机分为牛磺酸用药组、阳性对照组、正常对照组。通过持续光照射24h，形成视网膜光损伤模型。光照后3d，通过光镜观察视网膜组织病理学结构，流式细胞仪测定细胞凋亡的情况。结果 组织病理学结果显示，阳性对照组视网膜结构破坏严重，感光细胞内外节消失，外核层变薄，细胞核明显减少，而牛磺酸用药组无明显改变。牛磺酸治疗组视网膜细胞凋亡数明显低于阳性对照组(P＜0．05)。结论 牛磺酸对视网膜光损伤具有保护作用，其可能的机制是通过抑制视细胞的凋亡。     

TUNEL法检测Vc对光照后兔RPE细胞凋亡的影响

目的体外分离纯化色素兔视网膜色素上皮(RPE)细胞。观察可见光引起的细胞凋亡和维生素C(Vc)对凋亡的影响。方法用酶消化法分离、培养色素兔的RPE细胞，可见光照射造成其凋亡。观察不同剂量的Vc在不同的给药时间对细胞凋亡是否具有预防和治疗作用。结果可见光照射可引发色素兔RPE细胞的光损伤，其性质为凋亡；Vc对这种损伤具有明确的治疗作用，且疗效与其剂量呈正相关。结论可见光对色素兔RPE细胞有明显的损伤作用，Vc可以减少光照引起的RPE细胞的凋亡。     

不同光照时长对体外培养人视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡的影响

目的 研究不同光照时长对体外培养的人视网膜色素上皮细胞（hRPE）凋亡的影响,筛选出最佳建造光损伤模型的光照时长,为后续研究视网膜光损伤机制及光损伤保护提供必要的实验基础.方法 体外培养人视网膜色素上皮细胞（h RPE）,用三基色冷光灯模拟自然光源,选取（2500 ±500） Lux作为基础光照强度,以不同光照时长（2、4、6h）对细胞进行照射,建立光损伤模型.分别采用MTS法和流式细胞术检测细胞活力及早期凋亡率,比较给予不同光照时长后,hRPE的活力及早期凋亡率的差异.结果 与空白对照组比较,不同光照时长（2、4、6h）均能抑制细胞活力及引起细胞凋亡;光照时间越长,细胞损伤越严重,光照6h组细胞活力下降明显（P＜0.05）;光照组细胞早期凋亡率较空白对照组升高（P＜0.05）,光照组间比较,光照4h组早期凋亡率升高明显（P＜0.05）.结论 不同光照时长均可造成hRPE不同程度的损害;给予4h时长光照后,hRPE损伤以早期凋亡为主,同时又保有较高的细胞活力,故选取4h作为最佳建造光损伤模型的光照时长.     

肾上腺素诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的实验研究

目的　观察肾上腺素对体外培养人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡的影响 ,探讨细胞凋亡与中心性浆液性脉络膜视网膜病变的关系。方法　通过流式细胞技术 (FCM )、光镜、TUNEL细胞凋亡原位末端标记法检测肾上腺素和 β 受体阻滞剂普萘洛尔对体外培养的人RPE细胞凋亡的作用。 结果　人RPE细胞对低浓度的肾上腺素有一定耐受作用 ,10 pg/ml～ 10 4pg/ml肾上腺素组无明显凋亡的发生 ;10 5pg/ml～ 10 8pg/ml肾上腺素诱导RPE细胞 72h可以检测到凋亡峰 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;加入 10 3 pg/ml普萘洛尔可以提高RPE细胞对肾上腺素毒性作用的耐受 ,未检见RPE细胞凋亡的发生。TUNEL法光镜下观察到细胞核被蓝色染料标记的凋亡细胞。结论　肾上腺素可以诱导培养的人RPE细胞凋亡 ,这可能是中心性浆液性脉络膜视网膜病变早期病理改变的机制之一。     

铁死亡机制与蓝光引发小鼠视网膜光损伤病理变化的联系

目的 探究铁死亡机制与蓝光引发小鼠视网膜光损伤病理变化的联系。方法 将40只SPF级雄性C37小鼠随机分为4组,每组10只。自制蓝光光照箱,建立小鼠视网膜光损伤模型,检测小鼠血清丙二醛(MDA)含量,绘制ROC曲线评估血清MDA含量预测视网膜光损伤中铁死亡脂质过氧化发生的效能。取各组小鼠视网膜HE染色后显微镜下观察,免疫组织化学方法检测视网膜Bcl-2蛋白含量。FerrDb数据库获取铁死亡相关基因,GeneCards数据库获取视网膜光损伤相关基因,绘制Venn图,进行GO与KEGG富集分析。结果 接受蓝光照射的小鼠血清中MDA含量升高(P<0.05),曲线下面积(AUC)为0.990。视网膜组织总厚度和IPL、INL、ONL、PRL厚度均减小(P<0.05),Bcl-2蛋白含量降低。筛选得到铁死亡与视网膜光损伤相关基因17个,GO富集分析得到170个条目,KEGG富集分析得到80条通路。结论 蓝光可对小鼠视网膜造成光损伤,其可能是通过铁死亡脂质过氧化途径。     

裂隙灯致视网膜损伤的病理学观察

作者用国产裂隙灯对1只恒河猴双眼黄斑周围视网膜8个部位进行随机持续光照。视网膜照度为226.8mW/cm~2。照射时间分别为105,150min。通过光镜、电镜对光照后即刻到1mo的病灶区视网膜进行观察。光照性视网膜病变主要表现为光感受器和RPE细胞损害,脉络膜血管有大量白细胞渗出。裂隙灯致视网膜损伤主要是光化学反应造成,同时有光凝及炎症反应参与。并提出节省动物和实验时间,避免个体差异的多部位病理取材方法。     

rhEPO对光损伤诱导的RPE细胞Bcl-2表达影响

目的 研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对光损伤诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞Bcl-2表达的影响及其作用机制.方法 取成人ARPE-19细胞株传代培养的2～5代细胞建立光损伤模型,采用酶联免疫吸附实验和免疫组织化学方法检测不同浓度rhEPO干预治疗前后RPE细胞Bcl-2表达的变化;并添加特异性Jak2激酶抑制剂AG490,检测RPE细胞Bcl-2表达的变化.结果 rhEPO可明显增强RPE细胞光损伤后Bcl-2的表达,与光损伤模型组相比较,rhEPO各药物干预组细胞Bcl-2表达均增强,差异有显著意义(F=18.756,q=36.028～44.285,P<0.01),以40 kU/L rhEPO组作用最明显.而加入AG490后,rhEPO对Bcl-2的上调作用被明显阻断(q=42.171,P<0.01).结论 rhEPO可能是通过增强Bcl-2的表达而抑制光损伤诱导的人RPE细胞的凋亡,rhEP0上调Bcl-2的表达可能是通过Jak2 PIK3/PKB途径实现的.     

大鼠视网膜光损伤模型中小胶质细胞的迁移及活化

 目的 探讨大鼠视网膜光损伤模型中小胶质细胞的迁移、活化及其与光感受器凋亡的关系。方法 将SD大鼠分为光照组（n=78）和正常对照组（n=15）,光照组大鼠在自制的光损伤箱中接受强度为2500 lux的宽谱蓝光照射24 h,建立光损伤模型。在光照结束后2 h、6 h、1天、3天、7天和14天时（每一时间点,n=13）,用原位末端标记法（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）染色观察两组大鼠视网膜细胞凋亡情况;用免疫荧光染色观察视网膜OX42(+)小胶质细胞的形态改变和迁移活动,并对视网膜外层的TUNEL(+)细胞和OX42(+)细胞分别计数并绘制时间-数量曲线;用透射电镜观察进入光感受器层的小胶质细胞的吞噬行为;用real-time PCR法定量分析光照后视网膜胶质源性神经毒性物质IL-1β mRNA的表达变化。结果 光照结束后2 h视网膜外核层（out nuclear layer,ONL）即可见TUNEL(+)细胞,1天后达高峰,3天后逐渐减少;光照结束后6 h视网膜ONL开始出现少量OX42(+)细胞,逐渐增多并于3天后达高峰,7天后渐消失,其形态转变为肥大细胞体的激活型。从时间-数量曲线可见OX42(+)细胞的迁移高峰落后并紧随凋亡高峰;强光照射上调了视网膜IL-1β mRNA的表达,其随时间变化的趋势同小胶质细胞的激活和迁移趋势基本一致;透射电镜显示进入ONL的小胶质细胞吞噬了光感受器的外节膜盘。结论 视网膜光损伤模型中光感受器的凋亡诱导小胶质细胞向ONL的迁移、活化及吞噬行为,并伴有视网膜IL-1β表达水平的升高,小胶质细胞的活化可能在加速光感受器变性过程中起重要作用。