体外高频热疗治疗原发性肝癌的中西医护理

目的观察姜黄素对不同肿瘤细胞的作用及光学显微镜下形态学变化、以证实其抑瘤效应。方法应用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞（SMMC-7721）、宫颈癌细胞（Hela）、结肠癌细胞（SW480）、红白血病细胞（K562）、舌癌细胞（Tca-8113）、T淋巴瘤细胞（Jurkat）、喉癌细胞（Hep-2）的影响，且同步观察形态学变化。结果20μmol／L的姜黄素对Jurkat抑制作用较强，对SMMC-7721有抑制作用，对其余细胞无影响。40、60μmol／L姜黄素对SMMC-7721、Hela、K562、Jurkat有抑制作用，对SW480、Tca-8113抑制率较低，对Hep-2无抑制作用；且姜黄素对除Hep-2之外的6种细胞之形态均有影响。结论姜黄素能抑制多种肿瘤细胞增殖且相应引起细胞形态学改变。     

姜黄素体外抗肿瘤作用的观察

目的观察姜黄素对不同肿瘤细胞的作用及光学显微镜下形态学变化、以证实其抑瘤效应。方法应用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞(SMMC-7721)、宫颈癌细胞(Hela)、结肠癌细胞(SW480)、红白血病细胞(K562)、舌癌细胞(Tca-8113)、T淋巴瘤细胞(Jurkat)、喉癌细胞(Hep-2)的影响,且同步观察形态学变化。结果20μmol/L的姜黄素对Jurkat抑制作用较强,对SMMC-7721有抑制作用,对其余细胞无影响。40、60μmol/L姜黄素对SMMC-7721、Hela、K 562、Jurkat有抑制作用,对SW480、Tca-8113抑制率较低,对Hep-2无抑制作用;且姜黄素对除Hep-2之外的6种细胞之形态均有影响。结论姜黄素能抑制多种肿瘤细胞增殖且相应引起细胞形态学改变。     

土贝母制剂诱导Tca8113细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响

目的 探讨土贝母制剂对Tca8113细胞（人舌癌细胞株）诱导分化机制,为舌癌治疗提供依据。方法 应用MTT（塞唑蓝）比色法和流式细胞仪检测不同浓度的土贝母制剂对Tca8113细胞增殖抑制率及细胞周期各相的变化和凋亡率,并通过电子显微镜观察其亚细胞结构改变。结果 土贝母制剂对Tca8113细胞细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性,流式细胞仪分析G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,亚细胞结构,细胞空化。线粒体肿胀,染色质趋边凝集。结论 土贝母制剂能够抑制Tca8113细胞增殖,阻止G1期细胞向S期的转化进程,诱导Tca8113细胞凋亡。     

Livin基因对口腔鳞癌细胞TCA8113增殖及凋亡调控作用的研究

目的研究Livin基因在口腔鳞癌细胞TCA8113凋亡和增殖中的作用。方法通过建立高表达的Livin基因、RNA的干扰载体和脂质体转染的TCA8113细胞,采用Western blot和荧光定量PCR进行转染mRNA及蛋白表达变化的验证。细胞经Annexin V/PI染色,流式细胞仪检测其凋亡;四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析转染后细胞增殖。结果细胞转染pcDNA3.1-Livin后高表达,而pSuper-shLivin转染后Livin基因被有效沉默。MTT增殖检测结果表明,高表达的Livin基因能促进TCA8113细胞增殖,而沉默的Livin基因能抑制细胞的增殖。细胞凋亡检测结果表明,高表达的Livin基因能抑制细胞凋亡,而沉默的Livin基因促进细胞凋亡。转染细胞时与顺铂同时使用后发现沉默的Livin基因能增强顺铂诱导细胞凋亡的能力。结论本研究证实,Livin基因的高表达和沉默能有效调控口腔鳞癌细胞TCA8113系的凋亡和增殖。顺铂与沉默的LIVIN基因联合使用后,诱导细胞凋亡的能力显著增强。     

姜黄素对肝癌细胞Bel7402、QGY7703增殖凋亡及Wnt／β-catenin信号通路的影响

目的观察不同剂量的姜黄素在体外对肝癌细胞Bel7402、QGY7703生长的影响,探讨姜黄素抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡的可能分子学机制。方法 MTT 法检测不同浓度姜黄素对 Bel7402、QGY7703细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析细胞的凋亡率,Western Blot 法检测姜黄素对Wnt通路中β-catenin蛋白表达的影响,PCR法检测下游靶基因c-myc、VEGF、cyclinD1 mRNA在不同浓度姜黄素作用后表达情况的变化。结果 MTT实验显示：经浓度为5、10、20、40、80μmol/L的姜黄素作用48 h后,肝癌细胞Bel7402、QGY7703的增殖明显受到抑制,抑制率与阴性对照组比较有统计学意义（ P＜0.05）。药物浓度越大,增殖抑制率越明显,呈剂量依赖性（ r＝0.9626,r＝0.9720）。 FCM分析显示：实验组肝癌细胞凋亡率均高于阴性对照组（P＜0.05）,且随着药物浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高,呈剂量依赖性（r＝0.9646,r＝0.9949）。 Western Blot结果显示：经姜黄素作用48 h后的Bel7402和QGY7703细胞,其胞质β-catenin蛋白含量低于阴性对照组,除10μmol/L浓度组外,20、40、80μmol/L浓度组与阴性对照组比较均有统计学意义（ P＜0.05）。药物浓度越大,胞质β-catenin蛋白含量越少,呈剂量依赖性（ r＝-0.9594,r＝-0.9488）。 PCR结果显示：经姜黄素作用后的肝癌细胞,c-myc、VEGF、cyclinD1 mRNA表达量较阴性对照组均有所减少（ P＜0.05）。结论姜黄素能够有效地抑制肝癌细胞的增殖并促进其凋亡,其机制可能与姜黄素下调经典Wnt/β-catenin信号通路有关。     

姜黄素调节B淋巴瘤细胞p300和HDAC1的研究

p300是一种具有组蛋白乙酰化酶活性的转录辅助因子，HDAC1是一种组蛋白去乙酰化酶。本研究查明姜黄素对B-NHL细胞株Raji细胞增殖的影响，并探讨这种影响与p300以及HDAC1转录调节表达的关系。以不同浓度（6．25-50μmol/L）的姜黄素作用于体外培养的Raji细胞，用MTT法检测细胞生长抑制率。Annexin．VFITC／PI双标流式细胞术检测细胞的凋亡率和应用RT-PCR和Western blot法检测Raji细胞中HDAC1和p300的mRNA表达和蛋白含量的变化。结果表明：姜黄素对Raji细胞抑制作用呈明显的时效和量效关系。24小时的IC50为25μmol／L；姜黄素能够诱导Raji细胞凋亡，凋亡率为14．38％-61．18％，并呈浓度依赖性。姜黄素明显抑制HDAC1和p300的活性和表达。在IC50浓度时，随着时间的延长，其p300和HDAC1 mRNA表达和蛋白含量逐渐降低，呈时间依赖性，与对照组相比有显著性（P〈0．05）。结论：姜黄素对B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞具有抗肿瘤细胞的增殖作用，并促进其凋亡。姜黄素能够抑制转录共激活因子p300及组蛋白去乙酰化酶HDAC1活性和表达，可能是其作用机制之一。     

siRNA下调VEGF基因沉默对人舌癌细胞株Tca8113的生物学作用

目的利用siRNA干扰技术特异性抑制人舌癌细胞株Tca8113的VEGF基因表达,旨在对口腔舌鳞状细胞癌抗血管生成的基因治疗提供理论依据。方法体外构建两对针对VEGF基因的siRNA重组质粒,利用脂质体转染法导入Tca8113细胞内,MTT法观察转染后的Tca8113细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的改变,RT-PCR技术和western Blot法检测VEGF蛋白表达量。结果本研究设计的两个靶位点siRNA能有效抑制Tca8113细胞增殖,流式细胞术结果显示G0/G1期细胞阻滞,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率增高。VEGF基因蛋白表达率降低,与对照组相比,差异有统计学意义P0.01。结论体外构建siRNA可特异有效的下调VEGF基因蛋白表达。瞬时转染siRNA可不同程度的抑制Tca8113细胞增殖和诱导凋亡。为口腔舌鳞状细胞癌抗血管生成基因治疗提供理论依据。     

nm23-H1基因转染对人舌癌Tca8113细胞株生物学行为的影响

目的研究nm23-H1基因转染对人舌癌Tca8113细胞株生物学行为的影响。方法采用脂质体转染法将真核表达载体pAdEasy-nm23-H1转染Tca8113细胞,分为Tca8113-Ad-nm23-H1组(转染pAdEasy-nm23-H1)、Tca8113-Ad组(转染空载体pAdEasy)和Tca8113组(未转染)。采用RT-PCR检测nm23-H1基因在细胞中的表达,噻唑蓝比色法检测转染前、后细胞体外增殖能力的变化,流式细胞术分析转染前、后细胞周期及凋亡的改变,采用Transwell小室和冲刷实验观察细胞侵袭、黏附、趋化运动能力的变化,克隆形成实验观察转染前、后细胞克隆形成能力。结果与Tca8113-Ad组和Tca8113组比较,Tca8113-Ad-nm23-H1组细胞体外增殖能力、细胞侵袭、黏附、趋化运动能力、克隆形成率及细胞S期比例下降(P<0.05);细胞G2/M期比例及凋亡率明显增高(P<0.05)。结论 nm23-H1基因转染后对人舌癌Tca8113细胞的增殖能力、侵袭转移能力均有明显抑制作用;nm23-H1基因可明显抑制人舌癌Tca8113细胞G2期向M期过渡,同时促进癌细胞凋亡。     

姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响

目的探讨姜黄素对体外培养SMMC-7721人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法选用SMMC-7721人肝癌细胞进行体外培养至对数生长期,以5～160μmol/L姜黄素(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)分别处理SMMC-7721人肝癌细胞24、48、72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验测定细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测不同浓度药物对细胞周期及凋亡率的影响。结果 MTT显示姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。流式细胞术显示,随着浓度的升高细胞凋亡率提高,但姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞并不发生周期阻滞作用。结论姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞的生长有显著的抑制作用,并能诱导其凋亡,但不产生周期阻滞作用。     

姜黄素抑制Hedgehog信号诱导胃癌细胞凋亡

目的探讨姜黄素对胃癌细胞MKN45的作用及可能机制。方法不同浓度的姜黄素作用胃癌细胞MKN45后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot技术检测索尼克刺猬信号(Shh)、脑胶质瘤相关癌基因1(GLI1)的表达水平。结果不同浓度的姜黄素与胃癌细胞MKN45共培养后,随着姜黄素浓度的逐渐增加,MKN45细胞的增殖抑制也逐渐增加,经统计学分析发现,姜黄素5μmol/ml组与对照组比较,姜黄素10μmol/ml组与对照组比较,姜黄素20μmol/ml组与10μmol/ml组、5μmol/ml组、对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=16.24、14.57、21.16、25.00、38.20,P均<0.05)。胃癌细胞MKN45经姜黄素处理后,姜黄素20μmol/ml组的细胞凋亡率与10μmol/ml组、5μmol/ml组、对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=57.05、59.93、61.98,P均<0.05)。经姜黄素处理的MKN45细胞,Shh和GLI1表达均明显降低,与对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.76、3.55,P均<0.05)。结论姜黄素能通过抑制Hedgehog信号通路,抑制胃癌细胞的增殖,诱导其凋亡。     

Downregulation of miR-221 enhances the sensitivity of human oral squamous cell carcinoma cells to Adriamycin through upregulation of TIMP3 expression

Aberrantly expressed microRNAs (miRNAs) are involved in oral tumorigenesis since they can alter the expression of proteins involved in cancer progression. It remains unclear whether miRNA-221 influences the resistance of human oral squamous cell carcinoma cells to Adriamycin. We therefore investigated the role of miR-221 in the sensitivity of oral squamous cell carcinoma cells to chemotherapy. Tca8113 and UM2 cells were treated with different concentrations of Adriamycin. Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) revealed miR-221 upregulation after Adriamycin treatment of Tca8113 and UM2 cells. By using miR-221 inhibitor mimics, we found that depleting cells of miR-221 increases the sensitivity of the cells to Adriamycin. The expression of tissue inhibitor of metalloproteinase-3 (TIMP3), a target of miR-221, was decreased in cells treated with Adriamycin. TIMP3 depletion reversed the effect of a miR-221 inhibitor mimics on cell survival rates and apoptosis. Together, these results reveal that silencing of miR-221 enhances the sensitivity of human oral squamous cell carcinoma cells to Adriamycin through upregulation of TIMP3 expression.     

JUP对人口腔鳞状细胞癌生物学特性及预后的影响及机制分析

目的分析心肌桥粒盘状珠蛋白(JUP)的表达水平对人口腔鳞状细胞癌细胞的相关生物学特性和预后的影响,并对其影响机制进行探讨。方法回顾性抽取2016年12月至2018年12月格尔木市人民医院口腔科收治的65例口腔鳞状细胞癌患者癌组织及距离癌组织病灶2 cm左右的癌旁组织标本为研究对象。定量即时聚合酶链锁反应(qRT-PCR)检测口腔鳞状细胞癌患者癌组织及癌旁组织中JUPmRNA的表达情况。构建JUP干扰(对照组:未感染细胞组;shNC组:无关序列片段对照组;shJUP组:JUP沉默慢病毒组)和过表达(对照组:未感染细胞组;NC组:空载体对照组;JUP过表达组:过表达组)载体,包装成慢病毒,感染人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞,建立该基因沉默和过表达的稳转细胞株,并通过qRT-PCR和Western blot分别检测JUP在基因和蛋白水平上的表达情况。CCK-8和细胞划痕实验分别检测两种稳转细胞株的增殖、迁移以及侵袭能力。利用K-M曲线数据库资料分析JUP的表达与口腔鳞状细胞癌病人的预后相关性。结果 JUP基因在口腔鳞状细胞癌中的表达量较癌旁组织显著降低(P <0. 01)。与对照组细胞(sh NC)相比,稳定沉默JUP的人口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113,其增殖能力无显著差异(P> 0. 05);与对照组细胞(shNC)相比,稳定沉默JUP的人口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113(shJUP),其细胞凋亡能力明显降低(P <0. 05);与对照组(NC)相比,划痕愈合实验显示,外源性导入JUP的Tca8113细胞其迁移、侵袭能力显著下降(P <0. 05);K-M曲线结果显示低表达JUP与人口腔鳞状细胞癌病人的不良预后相关。结论 JUP的低表达与口腔鳞状细胞癌病人的转移密切相关,且与口腔鳞状细胞癌病人的不良预后相关。     

RNAi targeting CXCR4 inhibits tumor growth through inducing cell cycle arrest and apoptosis

CXC chemokine receptor 4 (CXCR4) is involved in many human malignant tumors and plays an important role in tumor growth and metastasis. To explore the effects of CXCR4 expression on the malignant cells of oral squamous cell carcinoma (OSCC), Tca8113 and SCC-9 cell lines, as well as their xenograft models, of nude mice were used to detect cancer cell proliferation alteration. This study also examined the corresponding molecular mechanism after CXCR4 knockdown using a recombinant lentiviral vector expressing small interference RNA (siRNA) for CXCR4. RNA interference-mediated knockdown of CXCR4 in highly aggressive (Tca8113 and SCC-9) tumor cells significantly inhibited the proliferation of the two cell lines in vitro and in vivo. The expression levels of >1,500 genes involved in cell cycle, apoptosis, and multiple signaling pathways were also altered. These results provide new evidence of CXCR4 as a promising tumor gene therapeutic target.     

叶酸阿霉素纳米颗粒对舌癌细胞超微结构的影响

目的探讨叶酸阿霉素纳米颗粒对体外培养的舌癌细胞超微结构的影响。方法体外培养的舌癌Tca8113细胞株分别采用阿霉素、叶酸纳米微粒、叶酸阿霉素纳米颗粒干预,透射电镜观察各组细胞超微结构变化。结果对照组细胞呈多角形,细胞内超微结构清晰;叶酸纳米微粒组细胞内内质网略减少;阿霉素组细胞失去多角形结构,线粒体肿胀,内质网脱颗粒,核糖体减少,可见少量凋亡小体;叶酸阿霉素纳米颗粒组细胞核膜崩解,细胞器消失,细胞核染色质固缩,细胞内可见较多凋亡小体。结论叶酸阿霉素纳米颗粒能够抑制口腔鳞癌细胞生长,引起舌癌细胞凋亡,其诱导细胞凋亡作用优于阿霉素单体。     

The molecular mechanisms of XBP-1 gene silencing on IRE1α-TRAF2-ASK1-JNK pathways in oral squamous cell carcinoma under endoplasmic reticulum stress

BackgroundProteasome inhibitor Carbobenzoxy-Leu-Leu-leucinal (MG132) induces the unfolded protein response (UPR) in oral squamous cell carcinoma (OSCC). X-box binding protein 1 (XBP1) is a key UPR component that regulates endoplasmic reticulum stress (ER) homeostasis. This study was aimed to investigate the activation of IRE1α-TRAF2-ASK1-JNK pathway by silencing the XBP1 expression in an OSCC cell line.MethodsThe XBP1 specific short hairpin RNA (shRNA) plasmid vector was constructed and then transfected into the Tca-8113 cells. The effect of XBP-1 gene silencing on IRE1α-TRAF2-ASK1-JNK pathway under MG132 induced endoplasmic reticulum stress in Tca-8113 were investigated by real-time RT-PCR or western blot. Cell apoptosis was detected by flow cytometry.ResultsXBP1 expression was reduced in transfected groups and MG132 groups. shRNA-XBP1 induces IRE1α-TRAF2-ASK1 signaling activation to activate pro-apoptotic ASK1-JNK signaling. Moreover, combined shRNA-XBP1 with MG132 further enhanced downregulated XBP1 expression and upregulated activation of ASK1-JNK signaling.ConclusionsSilencing XBP1 expression under MG132 induced ER stress block the XBP1 survival pathway and synergism with MG132 to promote Tca8113 cell apoptosis. These findings provide a therapeutic option in oral squamous cell carcinoma by inhibition of proteasome and XBP1 splicing.     

蜂毒肽对口腔鳞癌细胞的增殖及迁移能力的影响

目的 探讨蜂毒肽对人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞系Scc-15、Tca8113、Cal-27增殖性、迁移性的影响及其作用机制.方法 以用四种不同浓度梯度(2、4、8、16 μg/ml)的蜂毒肽分别处理的OSCC细胞系为蜂毒肽组,以不含药的培养液处理的细胞系为对照组.采用MTT实验检测蜂毒肽对OSCC细胞系Scc-15...     

Sporamin induce apoptosis in human tongue carcinoma cells by down‐regulating Akt/GSK‐3 signaling

We investigated the effects of sporamin, the major soluble protein with a kunitz‐type trypsin inhibitory activity in the root tuber of the sweet potato, on cell proliferation, apoptosis, Akt/GSK‐3 signaling and its related genes to provide more insights in the mechanism behind the inhibitory effects of sporamin in a human tongue cancer line Tca8113. In this study, sporamin inhibited cell proliferation and induced apoptosis in Tca8113 cells in a concentration‐dependent and time‐dependent manner. Consistently, Bax was up‐regulated and Bcl‐2 was down‐regulated in sporamin‐treated cells. Furthermore, Akt/GSK‐3 signaling was down‐regulated in sporamin‐treated cells. Consistently, the phosphorylated Bad was significantly declined in sporamin‐treated Tca8113 cells. These results suggest the antiproliferative effects of sporamin in Tca8113 cells might result partly from induction of apoptosis by down‐regulating Akt/GSK‐3 pathway.     

Apo-2L对放射线诱导鼻咽癌CNE细胞凋亡作用

目的了解凋亡素2配体（Apo-2L）与放射治疗协同对体外培养鼻咽癌CNE细胞增殖周期及凋亡率的影响。方法 MTT法检测不同浓度Apo-2L对鼻咽癌CNE细胞的影响,确定Apo-2L与细胞作用时间及浓度。将细胞随机分为对照组、Apo-2L组、Apo-2L＋放射组及单纯放射组,分别给予相应的处理后制成细胞悬液,流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞周期变化。结果鼻咽癌CNE细胞的抑制率与Apo-2L的浓度呈正相关（r=0.91,P〈0.05）,当用浓度为100μg/L的Apo-2L处理CNE细胞24h,Apo-2L＋放射组凋亡率较其他各组明显升高,差异有显著性（F=8.64,P〈0.05）。Apo-2L＋放射组G2-M期比率较其他各组显著降低（F=7.74,P〈0.05）。结论Apo-2L对体外培养鼻咽癌CNE细胞有抑制增殖和促进凋亡作用;Apo-2L联合放射线治疗可以使细胞周期同步化,并明显提高CNE细胞的凋亡率。