高能X射线对肺腺癌A549细胞ERCC1表达的影响

目的检测高能X射线对肺腺癌A549细胞与顺铂耐药相关的基因——切除修复交叉互补基因1（ERCC1）表达的影响。方法对A549细胞进行X射线照射,总剂量10 Gy/（5 d.5f）。利用RT-PCR检测照射前及照射开始后第1~4周细胞的ERCC1基因的表达;免疫组织化学SABC法检测照射前后细胞ERCC1蛋白的表达。结果照射后第1~3周A549细胞ERCC1 mRNA及蛋白的表达水平比照射前显著升高,差异有显著性（F=152.00、26.63,q=6.03~28.31,P〈0.01）。结论肺腺癌A549细胞照射后可能出现顺铂耐药。     

重组质粒pcEgr-hp53的构建及在A549和SKOV-3细胞中电离辐射诱导p53基因和蛋白的表达

目的构建重组质粒pcEgr-hp63,并探讨其在A549和SKOV-3细胞中的辐射诱导表达及抗癌作用。方法将野生型p53 cDNA全长插入pcDNA3．1质粒多克隆位点,用Egr-1启动子替代pcDNA3.1质粒CMV启动子,构建成pcEg-hp53重组质粒;通过脂质体介导转染法将重组质粒坶hp53和pcDNA3.1分别转染入A549和SKOV3细胞株,并经G418筛选稳定克隆并扩增培养。采用RT-PCR和流式细胞术的方法检测了不同剂量X-射线照射转染后的A549和SKOV-3细胞053基因转录水平和蛋白表达的变化。结果经限制性内切酶酶切鉴定,辐射诱导表达载体pcEg-hp63构建正确。与0Gy比较,A549-hp53和SKOV-3-hp53经0．5-5Gy照射后,p53mRNA水平增高;A549．hp53在2-5Gy后,p53蛋白表达显著增高（P〈0．01）,SKOV-3-hp63其蛋白表达随剂量（0．5-5Gy）增加而明显增加（P〈0．05-P〈0．01）。A549-hp53与A549-vect相同照射剂量组比较,其p53蛋白表达在0．5Gy照射后明显下降（P〈0．05）,2-5Gy照射后明显增高（P〈0．01）;SKOV-3-hp53与SKOV-3-vect相同照射剂量组比较,其蛋白表达在0Gy时增高,0.5-5Gy照射后明显增高（P〈0．01）。结论X-射线可激活早期反应生长因子Egr-1,无论肿瘤细胞p53基因状态如何,均可诱导其下游基因p53 mRNA及其p53蛋白表达增强。     

β-微管蛋白-Ⅲ在脊髓神经干细胞向神经元定向分化早期的动态变化研究

目的研究脊髓神经干细胞定向分化为神经元过程中细胞骨架蛋白——β-微管蛋白-Ⅲ（β-tubulin-Ⅲ）的表达及意义。方法采用细胞培养技术、免疫细胞化学（SABC）技术鉴定培养细胞,免疫荧光技术观察β-微管蛋白-Ⅲ在脊髓神经干细胞定向分化为神经元过程中的分布情况;采用Western blotting检测β-微管蛋白-Ⅲ在神经干细胞分化过程中的变化。结果分化第1天,β-微管蛋白-Ⅲ表达较弱;随着细胞的发育,分化第4天时β-微管蛋白-Ⅲ表达增强,其阳性反应物分布于核周,并伸出突起;β-微管蛋白-Ⅲ的含量也随着细胞的生长而增多;然而分化第7天时,β-微管蛋白-Ⅲ表达减少。结论在脊髓神经干细胞定向分化为神经元过程中,细胞骨架蛋白——β-微管蛋白-Ⅲ影响和促进细胞的分化。     

胃癌外周血CD4^＋-CD25^high-Foxp^3＋-调节性T细胞异常增高与TGF-β1、PGE2的相关性分析

目的：探讨胃癌患者外周血中CD4^＋-CD25^high-Foxp^3＋-调节性T细胞（Treg）的比例与血清中转化生长因子131（TGF-β1）、前列腺素E2（PGE2）表达水平的相关性。方法：采用流式细胞术检测26名健康体检者（对照组）和39例胃癌患者（胃癌组）外周血中CD4^＋-CD25^high-Foxp^3＋-细胞比例，同时运用ELISA法检测其血清中TGF-β1、PGE2的表达水平。结果：胃癌患者的CD4^＋-CD25^high-Foxp^3＋-细胞比例与其TNM分期相关，该比例随TNM分期上升而上升，其中TNMⅢ、Ⅳ期患者与健康对照者间的细胞比例差异有统计学意义（P〈0．01）。胃癌组和健康对照的组血清TGF-β1[（14．85±6．16）μg／L比（10．33±3．25）μg／L]和PGE2表达[（100．46±47．52）ng／L比（74．12±44．96）ng／L]间差异亦有统计学意义（P〈0．01），其中TNM Ⅲ、Ⅳ期患者TGF-β1水平与Treg相关（r=0．750，P〈0．01），而PGE2在TNM Ⅰ、Ⅱ期和TNMⅢ、Ⅳ期均与Treg相关（r=0．704，P〈0．01；r=0．748，P〈0．01）。结论：胃癌患者外周血中CD4^＋-CD25^high-Foxp^3＋-细胞比例随肿瘤的进展而增高，而其血清TGF-β1、PGE2表达水平与CD4^＋-CD25^high-Foxp^3＋-细胞116例相关。     

吡格列酮对X线照射后成纤维细胞分泌的基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶抑制物-1表达的影响

目的观察并分析吡格列酮对X射线导致的小鼠肺成纤维细胞(L929细胞)中的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)表达的影响。方法采用RT-PCR法证实L929细胞中具有过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)表达。采用剂量为10 Gy X射线照射L929细胞,用RT-PCR方法观察照射前与照射后0 h、2 h、7 h、24 h、48 h表达MMP-9和TIMP-1的情况。采用吡格列酮处理上述照射处理过的L929细胞,同上法观察不同时点如上两个指标的表达。结果 RT-PCR检测结果表明L929细胞中存在PPAR-γ的表达。L929细胞经10 Gy照射后其MMP-9表达随照射后时间的延长逐渐增加,在照射后48 h表达最高(F=4. 135,P=0. 022); TIMP-1随照射后时间的延长表达逐渐减少,在照射后48 h表达最低(F=3. 646,P=0. 041)。上述L929细胞经吡格列酮处理后48 h其MMP-9表达降低最明显[0. 76∶0. 52 (F=3. 735,P=0. 024)],其TIMP-1表达升高最明显[0. 17∶0. 27(F=3. 908,P=0. 032)]。结论小鼠L929细胞经X射线照射后出现纤维化相关因子MMP-9表达的升高和TIMP-1表达的降低。吡格列酮可使上述MMP-9高表达降低,使TIMP-1低表达升高。     

实时定量PCR检测低剂量X射线对小鼠睾丸中CHOP和caspase-12 mRNA表达的影响

目的通过检测低剂量X射线照射后小鼠睾丸中CHOP和caspase-12 mRNA表达的变化,在mRNA水平探讨内质网通路参与凋亡调控的可能。方法健康雄性昆明小鼠经过低剂量（0、0.050、0.075、0.100和0.200 Gy）照射后12 h和0.075 Gy照射后不同时间（0、3、6、12和24 h）,应用实时定量PCR（real time quantitative PCR）检测小鼠睾丸中C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein,CHOP）和胱天蛋白酶-12（caspase-12）mRNA表达剂量与时程效应关系。结果 0-0.200 Gy X射线照射后12 h,小鼠睾丸中CHOP mRNA表达随剂量逐渐增高并一直维持较高水平,其中0.050和0.100 Gy组较0 Gy显著增高（P〈0.05）;caspase-12 mRNA表达随剂量逐渐增高,0.075和0.100 Gy组较0 Gy组显著增高（P〈0.05,P〈0.01）。0.075 Gy照射后0-24 h CHOP mRNA表达随时间延长逐渐增高,在24 h到达峰值,较0 h显著增高（P〈0.05）;caspase-12 mRNA表达在3和6 h稍有降低后,12 h到达峰值,较0 h显著增高（P〈0.05）,24 h时回降。结论低剂量X线照射诱导小鼠睾丸CHOP和caspase-12 mRNA表达具有剂量-时程-效应规律性,二者可能参与低剂量X线照射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的调控。     

脂多糖诱导大鼠急性肺损伤时核因子-κB信号转导及盐酸氨溴索的作用

目的探讨脂多糖（LPS）诱导的大鼠急性肺损伤（acute lung injury,ALI）时核因子κB（NF-κB）的信号转导,以及盐酸氨溴索（AMB）对其的作用。方法雄性SD大鼠108只,实验分为两部分：第一部分选择其中90只,采用随机排列表法分为6组（n=15）：A组无菌生理盐水（NS）0．5ml腹腔注射1h后,再腹腔注射NS0．5ml;B组腹腔注射AMB10mg／kg 1h后腹腔注射NS0．5ml;C组腹腔注射NS0．5ml 1h后腹腔注射LPS5mg／kg;D、E、F组分别腹腔注射AMB5、10、20mg／kg后1h腹腔注射LPS5mg／kg。各组分别按1、2、4h再分为3个亚组,每组5只。采用酶联吸附免疫法（ELISA）测定肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）和巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）水平,并测定BALF中乳酸脱氢酶（LDH）与总蛋白量的变化。采用蛋白印迹法（Western blot）测定肺组织细胞胞核中NF-κBp65、胞浆中NF-κB抑制蛋白-α（IκBβ）及C—Jun氨基末端激酶（JNK）的表达。第二部分选择18只大鼠按上述分组法随机分为6组（n=3）,A、B、C、D、E、F组,给药方法同第一部分,腹腔注射NS（A组、B组）或腹腔注射LPS（C、D、E、F组）后4h观察大鼠肺组织病理形态学变化。结果第一部分：与A组比较,C、D、E、F组BALF中LDH、总蛋白量、总蛋白量、TNF-α、IL-1β和MIP-2均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）：与C组比较,E、F组上述指标均降低（P〈0．05或P〈0．01）。与A组比较,C、D、E、F组肺组织细胞中的NF-κB p65与JNK表达明显增多（P〈0．01）,而IκBα的表达量减少（P〈0．01）;与C组比较,E、F组NF-κB p65与磷酸化JNK的表达减少（P〈0．05或P〈0．01）,而IκBα的表达量增多（P〈0．05或P〈0．01）。第二部分：A、B组肺组织形态学正常,C组呈明显的肺损伤病理形态学改变,D组肺损伤程度与C组相似,E、F组肺损伤程度较C组减轻。结论AMB可以减轻LPS诱导大鼠ALI．其机制可能与抑制肺组织细胞NF-κB065与JNK的活化,并促进IκBα的表达,以及下调TNF-α、IL-1β和MIP-2的表达有关,且呈剂量依赖性。     

β-catenin和MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨β连环素（β-catenin）和MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测39例肺癌组织及8例正常对照肺组织中β-catenin和MMP-2的表达,并结合临床和病理资料进行分析。结果1．β-catenin和MMP-2在非小细胞肺癌组织中的胞质表达明显高于对照组,差异具有显著性（P〈0．005）;2．肺鳞癌组织中争catenin的胞质表达低于肺腺癌,胞膜表达高于肺腺癌,差异具有显著性（P=0．02,P=0．041）;3．N1—2肺癌组MMP-2的表达明显高于NO肺癌组,差异具有显著性（P=0．019）;4．非小细胞肺癌细胞β-catenin胞质表达和胞膜表达与MMP-2表达之间不具有相关性（P=0．123）。结论非小细胞肺癌细胞胞质中β-catenin和MMP-2表达明显高于正常人,肺鳞癌组织中β-catenin的胞质表达低于肺腺癌,N1—2肺癌组MMP-2的高表达可能与肺癌转移有关,非小细胞肺癌细胞β-catenin胞质表达和胞膜表达与MMP-2表达之间无相关关系。     

Notch1受体蛋白在成人肺癌中的表达

【目的】研究Notchl蛋白在成人小细胞肺癌（SCLC）及非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达,探讨Notchl受体在原发性支气管肺癌发生中的作用。【方法】采用免疫组织化学方法分别检测肺鳞癌、腺癌、小细胞癌及阴性组织切缘各组肺组织中Notch1蛋白的表达,并用Image-Pro Plus6．0图像分析系统进行定量分析,比较Notchl蛋白在各组中的表达。【结果】肺鳞癌及腺癌标本中Notchl的表达强于相应的阴性组织切缘标本（P〈0．05及P〈0．01）;肺小细胞癌标本中Notchl的表达弱于相应的阴性组织切缘标本,但组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。在三组肺癌标本中,以肺腺癌中Notch1的表达最强（P〈0．01）;鳞癌组中Notchl的表达亦强于小细胞癌组（P〈0．01）。[结论]Notchl信号在支气管肺癌的发病机制中可能发挥一定作用,且在不同的病理类型中起到的作用有差异。     

γ-射线诱导Jurkat细胞凋亡过程中催乳素对Bcl-2及Bax表达的调节

背景：国内外文献表明．催乳素可通过调节细胞内凋亡相关蛋白的表达促进免疫细胞增殖并抑制细胞凋亡。目的：拟验证催乳素是否能通过调节T细胞Bax和Bcl-2的表达来影响Jurkat细胞凋亡。设计、时间及地点：以细胞为对象的对比观察实验，于2006—07／2007—05在新乡医学院免疫学实验室完成。材料：人白血病T细胞株Jurkat细胞为上海生工产品，人催乳素为sigma公司产品。方法：以10Gyγ-射线照射Jurkat细胞建立细胞凋亡模型。在射线照射前30min内，于模型中分别加入20μg/L．300μg/L和1000μg／L的人催乳素进行干预，同时设不含人催乳素的对照组，以及不进行辐射处理且不加催乳素的正常组。于辐射后的0，24，48h收集细胞。主要观察指标：以四甲基偶氮唑盐法检测Jurkat细胞的增殖情况；以流式技术检测细胞凋亡情况；以琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞凋亡DNA：以Western Blot法检测Jurkat细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。结果：①在γ射线处理后24和48h，与对照组比较，300μg／L和1000μg/L催乳素组和正常组的细胞数量明显增多（P〈0．01）。②在细胞经Y-射线处理后48h，与对照组比较，300μg／L和1000μg／L催乳素组和正常组细胞凋亡率显著降低（P〈0．05）。③在γ-射线处理后的24和48h，与对照组比较，各质量浓度催乳素组Bcl-2／β-actin灰度比值均明显升高（P〈0．01）；300μg/L和1000μg/L催乳素组Bax／β-actin灰度比值明显降低（P〈0．01）。结论：在γ-射线诱导的Jurkat细胞凋亡过程中，催乳素可通过提高Bcl-2的表达并下凋Bax的表达，来抑制Jurkat细胞凋亡。     

SIP1在TGF—β1诱导的人腹膜间皮细胞转分化的作用

【目的】阐明Smad作用蛋白1（Smad interacting proteinl,SIP1）与转化生长因子－β1（transforming growth factor－β1,TGF-β1）诱导的人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells）转分化（epithelial—mesenchymal transition,EMT）的关系,探讨TGF－β1可能通过调控SIP1引起腹膜间皮细胞EMT的机制。【方法】培养的人腹膜间皮细胞株（HMrSV5）随机分为对照组（TGF-β1刺激Oh）和TGF－β1刺激组,通过western blot及realtime PCR检测细胞中E－钙粘素（E－eadherin）、紧密连接蛋白（claudinl）、波形蛋白（vimentin）及纤维连接蛋白（fibronectin,FN）在不同时间点（12h,24h,48h,72h）的表达;并通过western blot及realtime PCR检测相应时间点细胞中SIP1的表达。【结果】5ng／ml TGF－β1刺激后,HMrsV5细胞E-cadherin、claudinl蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性降低（P〈0．01）;vimentin、FN蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性升高（P〈0．01）;SIP1蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性上调（P〈0．01）。【结论】TGF-β1可能通过上调HMrSV5细胞SIP1表达诱导HMrSV5细胞EMT及细胞外基质（extracellular matrix,ECM）沉积,将为进一步研究腹膜纤维化的分子机制提供新的靶点。     

二烯丙基三硫对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响

目的 探讨二烯丙基三硫（DATS）对脂多糖（LPS）诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响。方法 体外培养MH-S细胞，用DATS和（或）LPS进行干预。酶联免疫吸附法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）浓度。反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表迭。结果 LPS（1mg／L）孵育细胞1、2、3、6h，TNF-α、IL-1β的蛋白生成及其mRNA表达均较对照组明显增加（P〈0．01），呈时间依赖性。用DATS（0．1、0．5、2．5、5．0ms／L）预处理细胞30min后再给予LPS刺激3h，可使TNF-α、IL-1β含量及其mRNA表达明显降低，并呈剂量依赖性，其中TNF-α含量仍高于对照组（P〈0．05），但IL-1β含量在2．5、5mg／LDATS作用下可降至对照组水平。单独DATS对TNF-α及IL-1β的生成及其mRNA表达无明显影响（P〉0．05）。结论 DATS通过抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α、IL-1β mR-NA表达而减少其蛋白生成，具有直接的抗炎效应，这是DATS预防ALI发生、减轻肺组织损伤的重要机制。     

阿魏酸钠对淀粉样β蛋白致神经细胞损伤的保护作用

目的：通过检测阿魏酸钠对联合培养的神经细胞和巨噬细胞中神经细胞的乳酸脱氢酶漏出量和微管相关蛋白-2的影响，观察阿魏酸钠对淀粉样B蛋白激活巨噬细胞引起神经细胞损伤的保护作用。 方法：实验于2004-05／12在锦州医学院药理实验室和解剖实验室完成。选择8～10周龄的小鼠进行巨噬细胞培养，出生两三天的大乳鼠进行神经细胞培养。单独培养的神经细胞和巨噬细胞：将加入10μmol／L淀粉样β蛋白和未加入淀粉样β蛋白的巨噬细胞上清液分别移入单独培养的神经细胞中，通过Hoechst33258染色检测神经细胞的凋亡百分比。联合培养的神经细胞和巨噬细胞：联合培养24h后，加入10μmol／L的淀粉样β蛋白，阿魏酸钠组同时加入不同浓度（10μmol／L，100μmol／L，500μmol／L）阿魏酸钠共孵育。48h后．采用免疫组织化学方法和乳酸脱氢酶检测试剂盒检测微管相关蛋白-2表达水平和乳酸脱氢酶漏出量。 结果：将淀粉样β蛋白激活的巨噬细胞上清液移入到单独培养的神经细胞48h后，可使凋亡神经细胞的百分比明显增加，从正常11.3％增加到74．0％．（P〈0．01）。在巨噬细胞和神经细胞联合培养中，淀粉样β蛋白组与空白对照组相比，乳酸脱氢酶漏出量明显增加，由375nkat／L增加到2859nkat／L，微管相关蛋白-2表达阳性的神经元数目相应减少，与淀粉样B蛋白组相比，阿魏酸钠（10μmol／L，100μmol／L，500μmol／L，1mmol／L）能显著地降低乳酸脱氢酶漏出量，使微管相关蛋白-2表达阳性的神经细胞数目明显增加，呈剂量依赖性（P〈0．05）。 结论：①淀粉样β蛋白是通过激活巨噬细胞，使其释放毒性物质，从而引起神经细胞的损伤。②阿魏酸钠对淀粉样β蛋白引起的神经细胞损伤具有保护作用.     

高能X线照射对肺癌转移相关基因的影响

目的探讨高能X线照射对肺癌转移相关基因的影响。方法建立Lewis肺癌模型，将荷Lewis肺癌的C57BL／6雄性小鼠35只随机分为照射组（n=18）和对照组（n=17），照射组接受30Gy的X线肿瘤局部照射，对照组不接受照射，2周后采用免疫组化法检测瘤组织中E-钙黏素（E—Cad）蛋白和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表达。结果与对照组比较，照射组MMP-9蛋白表达水平显著降低，E—Cad蛋白表达水平显著升高，差异均有显著性（t=9．53、20．68，P〈0．01）。结论X线照射可能通过抑制肿瘤组织内MMP-9蛋白表达和促进E—Cad蛋白表达阻止肿瘤细胞的侵袭和转移。     

Tempol对紫外线照射所致HaCaT细胞损伤保护作用

目的观察氮氧化物4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶（Tempol）对中波紫外线（UVB）照射所致人角质形成细胞（HaCaT细胞）损伤的保护作用,并探讨其发生机制。方法在HaCaT细胞培养系统中加入不同浓度的Tempol进行培养,12h后洗掉培养液中的Tempol,用30mJ／cm^2 UVB照射细胞后,重新加入培养液继续培养24h。用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡率。RT—PCR方法测定FoxO3a和BubR1基因的表达。结果UVB照射组与正常对照组相比,细胞增殖活性明显降低（F=27．71,q=13．57,P〈0．05）,FoxO3amRNA的表达明显增强（F=13．93,q=9．79,P〈0．05）,BubR1mRNA的表达明显减弱（F=29．69,q=14．54,p〈0．05）,凋亡率明显增高（x^2=93．69,P〈0．05）;与UVB照射组相比,不同浓度的Tempol可以恢复UVB照射细胞的增殖能力（q=3．24～13．60,P〈0．05）,降低照射细胞的凋亡率（x^2=12．02～101．02,P〈0．05）,下调FoxO3amRNA的表达（q=2．92～9．95,P〈0．05）,上调BubR1mRNA的表达（q=2．97～14．61,P〈0．05）。结论Tempol可以保护HaCaT细胞免受uVB照射造成的损伤。     

穿膜肽-凋亡蛋白融合蛋白导入人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌Anip973细胞的生物学特性

目的：在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白，观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性，并了解其是否有剂量依赖性。 方法：实验于2005-08／2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni^2＋亲和层析纯化。②细胞增殖抑制实验：取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中，培养12h后加入终浓度分别为0，10，20，30，40，50mg／L融合蛋白培养48h，弃上清，每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液（5g／L）20μL，继续孵育4h，检测吸光度，计算肿瘤生长抑制率。③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞，每种细胞分成两组：给药组加入终浓度为30mg／L穿膜肽-凋亡蛋白，对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液，继续培养48h。苏木精-伊红染色，光镜下观察细胞形态；溴乙啶／丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率。 结果：①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50mg／L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用，对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用，半数抑制浓度为27mg／L。②30mg／L穿膜肽-凋亡蛋白作用48h后，人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变，对照组和给药组的凋亡率分别为（2．9&;#177;0．4）％和（3．1&;#177;0．6）％，没有显著差异（P〉0．05）；Anip973细胞可见到细胞皱缩，染色质浓缩和出现凋亡小体等凋亡特征性形态变化，给药组和对照组凋亡率分别为（36．8&;#177;1．7）％和（6．7&;#177;0．5）％，差异显著（P〈0．01）。 结论：穿膜肽-凋亡蛋白能诱导肿瘤细胞凋亡，这种作用呈剂量依赖性，而对正常细胞没有毒性作用。     

P53基因在电离辐射诱导的非小细胞肺癌细胞死亡中的作用

目的研究p53基因在电离辐射诱导的非小细胞肺癌细胞死亡中的作用。方法选取H1299（p53-/-）,H1299-P53,H1299-175H细胞为研究对象。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,WESTERN BOLT方法检测相关蛋白表达情况。结果在H1299（P53-/-）细胞中,4GY、8GY照射后细胞凋亡率分别是假照组的68.4%、50%。在H1299-P53细胞中,4GY、8GY照射后细胞凋亡率分别是假照组的1.7倍、8.1倍。在H1299-175H细胞中,4GY8、GY照射后细胞凋亡率分别是假照组的1.5倍、2倍。LC3蛋白表达在H1299呈现剂量依赖性升高,在H1299-175H呈现剂量依赖性降低,在H1299-P53中,OGY表达最高,4 GY表达最低,8 GY表达低于假照组但比4 GY高。AKT表达在H1299细胞呈剂量依赖性降低,H1299-P53在4GY表达量升高而在8GY又降低但仍高于假照组,在H1299-175H细胞中AKT表达呈剂量依赖性降低。MDM2在H1299的表达呈剂量依赖性升高,在H1299-P53细胞中呈现与AKT相同的变化趋势,在H1299-175H细胞中4GY时表达量最高8GY最低。Caspase-3在H1299细胞中随着照射剂量的增加变化不明显,在H1299-P53细胞中呈现剂量依赖性升高,在H1299-175H细胞中,0 GY表达最高,4 GY表达最低,8 GY低于假照组但高于4 GY组。结论 X射线促进P53（-/-）的H1299细胞时发生自噬,而促进H1299-P53及H1299-175H中发生凋亡。     

转化生长因子β调节体外培养人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达

目的：观察转化生长因子β对体外培养人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响。方法：实验在青岛海慈医疗集团检验科完成。选择2005—02／03在青岛海慈医疗集团骨科住院的无其他疾患的骨折患者3例，年龄30～50岁，经患者知情同意后，取其髂骨松质骨，剪碎，Ⅳ型胶原酶消化后，将骨片贴于25cm^2培养瓶，加入MEM培养液约15d后，可见细胞游出，约25d达汇片，胰酶消化，按1&;#215;10^6个细胞接种培养后第2天，换含1g/L BSA MEM培养液继续培养24h后，加入10ng／L转化生长因子β干预培养0，3，6，12，24h，或在转化生长因子β作用峰值时，分别给予不同浓度（0，5，10，25ng／L）干预，抽提总RNA，采用半定量反转录-聚合酶链反应和Northern blot法检测干预后成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达水平。结果：①半定量反转录-聚合酶链反应检测转化生长因子β对体外培养成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响：与0ng／L对照组相比，5,10和25ng／L转化生长因子β干预后结缔组织生长因子mRNA表达水平显著升高（P〈0．01），呈明显剂量依赖关系；10ng／L转化生长因子β干预6h时转化生长因子β上调作用达高峰（P〈0．01），然后下降，至24h时转化生长因子β对结缔组织生长因子的上调作用基本消失（P〉0．05）。②Northern blot法检测转化生长因子β对体外培养成骨细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响：与0ng／L对照组相比，10和25ng／L转化生长因子β干预后结缔组织生长因子mRNA表达水平显著升高（P〈0．01），但无明显剂量依赖关系（P〉0．05）；10ng／L转化生长因子β干预6h时转化生长因子β上调作用达高峰（P〈0．01），然后下降，至24h时转化生长因子β对结缔组织生长因子的上调作用基本消失（P〉0．05）。结论：转化生长因子β可呈剂量依赖性上调人成骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达。     

2-甲氧基雌二醇对慢性髓系白血病K562细胞Caspase-3及Survivin表达的影响

本研究探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对慢性髓系白血病（CML）K562细胞caspase-3和survivin表达的影响。实验分3组：对照组,培养基中不含2-ME;实验组,分别用1、2、4、8及16μmol／L的2-ME处理K562细胞;阴性对照组,培养液中以不合RNase的灭菌蒸馏水代替K562细胞。应用TUNEL、流式细胞术（FCM）、半定量RT—PCR分别检测K562细胞凋亡率、caspase-3及survivin蛋白及其基因表达水平。结果表明：2-ME在一定的浓度范围内呈剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）,且TUNEL和FCM方法检测的K562细胞凋亡率呈正相关（γ=0．845,P=0．034）。随着2-ME浓度增加,caspase-3蛋白表达量逐渐增加,而survivin蛋白表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;且caspase-3与survivin蛋白表达量之间呈负相关（γ=-0．956,P=0．001）。随着2-ME浓度增加,caspase-3基因表达量逐渐增加,而survivin基因表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（p均〈0．01）,且caspase-3与survivin基因表达量之间呈负相关（γ=0．966,P=0．001）。结论：2-ME能够以剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,显示了其对CML有潜在的治疗价值。     

电离辐射对肺腺癌A549细胞血管内皮生长因子C基因表达的影响

目的:探讨不同剂量电离辐射对人肺腺癌A549细胞表达血管内皮生长因子C(VEGF-C)的影响.方法:肺腺癌A549细胞接受不同剂量60Coγ射线照射后,培养12、48 h后提取细胞总RNA,RT-PCR测定VEGF-C基因表达变化,熔解曲线及琼脂糖凝胶电泳分析产物特异性,采用2(-△△CT)法及SPSS 13.0软件进行相关分析.结果:肺腺癌A549细胞射线照射后12 h和48 h,与对照组比较,除0.5、2 Gy照射剂量外VEGF-C表达明显增高;48 h与12 h相比,0.5、1、5 Gy照射剂量组VEGF-C表达明显升高.结论:电离辐射可诱导A549细胞高表达VEGF-C,在放疗早期阶段联合应用抑制VEGF-C基因表达技术既可杀伤癌细胞又可抑制癌细胞远处转移,是一种值得深入研究的新模式.