人参皂苷Rg1通过抑制Wnt/β-catenin通路促进退变人腰椎间盘髓核细胞的生长及胞外基质合成

目的:探讨人参皂苷Rg1对退变人腰椎间盘髓核细胞(HNPCs)生长的调控及其作用机制。方法:培养正常HNPCs,构建HNPCs的氧糖剥夺(OGD)模型模拟退变HNPCs的微环境。光镜观察正常HNPCs和OGD组细胞的形态。分别给予25、50和100μmol/L人参皂苷Rg1后,用real-time PCR和Western blot法分别检测II型胶原(collagen II)和聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达,CCK-8法检测细胞活力的变化,real-time PCR法检测增殖蛋白Ki67的转录水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,caspase-3试剂盒检测caspase-3活性,Western blot法检测Wnt/β-catenin通路蛋白的表达。加入Wnt/β-catenin通路激活剂Li Cl后,检测其对Wnt/β-catenin通路蛋白、细胞活性、细胞凋亡及基质合成蛋白表达的影响。结果:正常HNPCs细胞贴壁快,形态呈类圆形,胞质丰富;OGD组细胞贴壁较慢,形态多为长梭形,胞质减少,初步证实了退变HNPCs模型构建成功。与HNPCs组相比,OGD组中collagen II和aggrecan的m RNA和蛋白表达均显著降低(P0.05),人参皂苷Rg1可升高collagen II和aggrecan的表达(P0.05)。与HNPCs组相比,OGD组的细胞活力显著降低(P0.05),Ki67表达下调(P0.05),而不同浓度的人参皂苷Rg1可增加细胞活力和上调Ki67的表达(P0.05)。同时,不同浓度的人参皂苷Rg1可减少OGD增加的细胞凋亡和caspase-3活性(均P0.05)。此外,100μmol/L人参皂苷Rg1可显著减弱OGD触发的Wnt/β-catenin通路的活化(P0.05)。而用Wnt通路激动剂Li Cl处理后可明显减弱人参皂苷Rg1对OGD细胞的保护作用(P0.05),提示该通路参与人参皂苷Rg1对退变HNPCs的保护作用。结论:人参皂苷Rg1可通过抑制Wnt/β-catenin通路促进HNPCs的生长和胞外基质合成。本研究将为退变HNPCs的防治提供新的思路。     

黄精皂苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT、补体系统和PI3K/AKT/NF-κB信号通路的影响

目的分析黄精皂苷通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路调控补体系统对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的HK-2细胞上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的影响及机制。方法 HK-2细胞分为4组:对照组、黄精皂苷组、TGF-β1组、TGF-β1+黄精皂苷组。在培养基中加入终质量浓度为10 ng/ml的TGF-β1处理48 h诱导。黄精皂苷终质量浓度为20 ng/ml,培养48 h。检测各组细胞迁移和侵袭的能力,并检测E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)、波形蛋白(Vimentin,Vim)mRNA和蛋白水平评估EMT。通过RT-qPCR和Western blot检测C3aR、C5aR、PI3K、AKT、NF-κB m RNA和蛋白表达量。结果 4组细胞的上述指标比较差异显著(P<0.05)。黄精皂苷组细胞的迁移能力(22.75%±1.98%)、C3aR、C5aR、PI3K、AKT、NF-κB、N-cad、Vim的mRNA和蛋白表达量显著低...     

人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠NF-κB磷酸化水平及炎症相关通路的影响北大核心CSCD

目的：探究人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠核因子-κB(NF-κB)磷酸化水平及炎症相关通路的影响。方法：盲肠结扎穿孔法（CLP）构建大鼠脓毒症心肌损伤模型,60只大鼠随机分为假手术（sham）组、CLP组、人参皂苷Rg1低剂量（CLP+Rg1L）组、人参皂苷Rg1中剂量（CLP+Rg1M）组、人参皂苷Rg1高剂量（CLP+Rg1H）组、瑞沙托维（CLP+TAK-242）组,每组10只。LPS构建体外脓毒症心肌细胞模型,H9C2细胞分为对照（control）组、LPS组、LPS+Rg1L组、LPS+Rg1M组、LPS+Rg1H组、LPS+TAK-242组。右颈总动脉插管法检测各组大鼠平均动脉压（MABP）、心率×左心室发展压（LVDP×HR）、左心室压力最大上升/下降速率（±dp/dtmax）水平;HE染色观察心肌组织病理学改变;Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌组织和H9C2细胞凋亡;ELISA检测大鼠血清和H9C2细胞肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、天冬氨酸转氨酶（AST）、肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-1β含量;CCK-8及EdU染色检测H9C2细胞增殖能力;RT-qPCR检测心肌组织Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK） mRNA表达;Western blot检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p38MAPK、p-p38MAPK、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达。结果：人参皂苷Rg1能够提高MABP、LVDP×HR、±dp/dtmax水平,降低CK、LDH、AST活力,降低cTnⅠ、TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB p65、p38MAPK mRNA与TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38MAPK/p38MAPK、NLRP3蛋白水平（P<0.05）,促进心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡与炎症水平,改善心肌损伤。结论：人参皂苷Rg1能够抑制心肌组织细胞凋亡及炎症水平,提高心功能,从而减轻脓毒症所致心肌损伤,其机制可能与TLR4/NF-κB、p38MAPK信号通路有关。     

银杏素调节TGF-β1/Smad通路对ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨银杏素调节转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路对ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤的影响。方法 将人脐静脉血管内皮细胞HUVEC分为对照组（未处理的HUVEC细胞）、模型组（50μg/mL ox-LDL处理的HUVEC细胞）、银杏素组（50μg/mL ox-LDL+12.5μmol/L银杏素处理HUVEC细胞）、SRI-011381组（50μg/mL ox-LDL+10μmol/L的TGF-β1/Smad激活剂SRI-011381处理HUVEC细胞）、银杏素+SRI-011381组（50μg/mL ox-LDL+12.5μmol/L银杏素+10μmol/L的SRI-011381共同处理HUVEC细胞）。ELISA试剂盒检测HUVEC细胞丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、IL-6、IL-1β、TNF-α水平;CCK-8法检测HUVEC细胞增殖;流式细胞术检测HUVEC细胞凋亡率;Western blot检测细胞上皮间质转化（EMT）、TGF-β1/Smad通路相关蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α、M...     

人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠HMGB1/NF-κB通路的影响北大核心CSCD

目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对脓毒症所致心肌损伤大鼠的保护作用及其对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/核因子-κB(NF-κB)通路的调节机制。方法:腹腔注射20 mg/kg脂多糖(LPS)构建脓毒症大鼠模型,并分为5组,每组10只,假手术组(Sham组)大鼠造模过程中腹腔注射等量生理盐水;造模前2 h,LPS+Rg1组大鼠灌胃15 mg/kg Rg1,心脏冠脉注射NF-κB-mimic-NC;LPS+Rg1+NF-κB-mimic组大鼠灌胃15 mg/kg Rg1,心脏冠脉注射NF-κB-mimic;LPS+NF-κB-mimic组大鼠灌胃等量生理盐水,心脏冠脉注射NF-κB-mimic;Sham组和LPS组大鼠灌胃等量生理盐水,心脏冠脉注射NF-κB-mimic-NC。心脏彩超检测大鼠左室收缩末内径(LVDs)、左室舒张末内径(LVDd)、左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS),TUNEL染色检测大鼠心肌细胞凋亡率;试剂盒检测大鼠血清TNF-α、IL-1β、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)含量;免疫荧光染色观察大鼠心肌组织caspase-3表达;免疫组化染色观察大鼠心肌组织HMGB1表达;Western blot心肌组织HMGB1、NF-κB表达。结果:与Sham组相比,LPS组、LPS+Rg1组、LPS+Rg1+NF-κB-mimic组、LPS+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、心肌细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显升高,LVEF、FS明显降低(均P<0.05);与LPS组相比,LPS+Rg1组、LPS+Rg1+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显降低,LVEF、FS明显升高,LPS+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、心肌细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显升高,LVEF、FS明显降低(均P<0.05);与LPS+Rg1组相比,LPS+Rg1+NF-κB-mimic组、LPS+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、心肌细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显升高,LVEF、FS明显降低(均P<0.05)。结论:Rg1可明显抑制脓毒症诱导的心肌组织炎症应激,降低心肌细胞凋亡率,改善心功能,可能与抑制HMGB1/NF-κB信号有关。     

内毒素诱导退变人椎间盘髓核细胞凋亡

目的观察内毒素(LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kapp B(NF-κB)的活化与细胞凋亡的相互关系。方法体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,采用CCK-8法测定LPS在不同浓度下(100、200、500和1 000μg/m L)对髓核细胞增殖影响,并筛选合适的刺激浓度;设立空白对照组,单纯LPS(500μg/m L)刺激组,NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500μg/m L)刺激组,以Hochest33258染色以及Annexin V-PI双标法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、PARP、NF-κB结合蛋白P65以及磷酸化P-P65的表达。结果 CCK-8实验结果显示当LPS浓度为500μg/m L能明显降低细胞的活力。与空白对照组相比,单纯LPS刺激组细胞凋亡率上升(P0.05),P-P65表达明显增加,其凋亡蛋白活化型caspase-3和PARP降解产物表达也增高(P0.05)。而与单纯LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组细胞凋亡率下降(P0.05),P-P65表达明显降低,其凋亡蛋白活化型caspase-3和PARP降解产物表达也降低(P0.05)。结论 NF-κB信号通路可能与椎间盘退变时髓核细胞凋亡的发生密切相关,值得进一步研究。     

人参皂苷Rg1通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ调控脂多糖诱导的炎症反应中BV2小胶质细胞的极化

目的 通过脂多糖刺激BV2小胶质细胞建立炎症模型,探讨人参皂苷Rg1是否通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)受体蛋白对炎症的调控作用。方法 BV2小胶质细胞随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg1组、罗格列酮组、GW9662组。对照组不做任何处理,模型组加入1 mg/L脂多糖,其他组在加入脂多糖处理后,再分别加入0.4 mmol/L人参皂苷Rg1、10μmol/L罗格列酮或10μmol/L GW9662。CCK-8法检测各组BV2小胶质细胞增殖情况;采用免疫荧光和免疫印迹法检测PPARγ、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κB p65)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和人精氨酸酶1(ARG-1)蛋白的表达。ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果 与对照组相比,模型组细胞增殖率明显上升,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α炎症因子含量明显增高,免疫荧光和免疫印迹结果显示,iNOS和p-NF-κB p65阳性表达明显增多,PPARγ和ARG-1阳性表达明显减少(均P...     

miR-21通过NF-κB信号通路影响血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞炎症因子表达

目的探讨miR-21对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小球系膜细胞增殖和炎症因子的影响。方法以AngⅡ诱导体外培养人肾小球系膜细胞HMC,在AngⅡ诱导的HMC细胞中转染miR-21模拟物。采用实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,Western blot检测NF-κB信号通路核心分子IκBα和p65蛋白及磷酸化水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症相关因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。采用NF-κB信号通路激活剂PMA处理,检测对炎症因子表达的影响。结果 AngⅡ组HMC细胞中miR-21表达水平较Control组降低(P0.05),细胞增殖能力明显升高(P0.05),炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达升高(P0.05)。进一步在AngⅡ组过表达miR-21后,IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著降低(P0.05),细胞增殖能力明显降低(P0.05),IL-6、IL-1β和TNF-α的表达亦降低(P0.05)。NF-κB信号通路激活剂处理后,IL-6、IL-1β和TNF-α的含量较AngⅡ+miR-21组升高(P0.05)。结论过表达miR-21能够通过NF-κB信号通路调控AngⅡ诱导的HMC细胞增殖和炎症因子的表达。     

RAD51相关蛋白1在宫颈癌组织中的表达及通过TGF-β/Smad 通路 参与调控人宫颈癌细胞的增殖和凋亡*

目的：探讨RAD51相关蛋白1（RAD51AP1）通过调节转化生长因子β（TGF-β）/Smad 信号通路对人宫颈 癌细胞（SiHa）增殖和凋亡的影响。方法：收集2018 年7 月至2021 年3 月间南阳市中心医院51 例宫颈癌组织与 癌旁组织标本,免疫组织化学法检测宫颈癌组织RAD51AP1蛋白表达。筛选RAD51AP1高表达宫颈癌细胞系, 体外培养SiHa 细胞,分为对照组、si-RAD51AP1 组（ 转染si-RAD51AP1 质粒）、si-NC 组（ 转染si-NC 质粒）、 抑制剂组（TGF-β/Smad 通路抑制剂LY2109761）、si-RAD51AP1+ 激活剂组（ 转染si-RAD51AP1 质粒+TGF-β/ Smad 通路激活剂人重组TGF-β1）。采用MTT法与平板克隆形成实验检测各组SiHa 细胞增殖;流式细胞术检测 细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测细胞中RAD51AP1、TGF-β1 mRNA 水平;免疫印迹检测细胞中RAD51AP1 蛋白、TGF-β/Smad 通路相关蛋白及增殖、凋亡相关蛋白表达。结果：RAD51AP1在宫颈癌组织与SiHa 细胞系中 均显著高表达;抑制RAD51AP1表达或抑制TGF-β/Smad 通路后,细胞增殖活性、细胞克隆形成率及cyclin D1、 TGF-β1、p-SMAD2、p-SMAD3 蛋白表达水平显著减低,细胞凋亡率、Bax、caspase-3、cleaved caspase 3 蛋白 表达水平显著升高,而抑制RAD51AP1表达基础上使用TGF-β/Smad 通路激活剂后,可部分逆转上述变化。结 论：RAD51AP1在宫颈癌中表达上调,抑制RAD51AP1表达可通过抑制TGF-β/Smad 通路而抑制宫颈癌细胞增殖, 促进细胞凋亡。     

柴胡皂甙D通过调控TGF-β1/Smads信号通路抑制人胚肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白产生

目的研究柴胡皂甙D(SSD)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖、转分化以及TGF-β1/果蝇抗生物皮肤生长因子蛋白家族(Smads)信号通路的影响。方法体外培养HELF,设立正常对照组、 1 ng/mL TGF-β1处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合0.5μmol/L SSD处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合1μmol/L SSD处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合2μmol/L SSD处理组。采用CCK-8法检测HELF的增殖情况,荧光定量PCR法检测Smad2、 Smad3、 Smad7的mRNA水平, Western blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 1型胶原蛋白(Col1)、 Smad2、 Smad3、磷酸化的Smad2(p-Smad2)、 p-Smad3、 Smad7的蛋白水平。结果与正常对照组比较, TGF-β1处理组细胞增殖明显, Col1、α-SMA蛋白水平增加, Smad2和Smad3 mRNA和蛋白磷酸化水平显著增加, Smad7 mRNA和蛋白水平显著降低;与TGF-β1处理组比较,不同浓度SSD处理组细胞增殖降低,可逆转以上各指标的改变,呈一定的量效关系。结论 SSD通过调控TGF-β1/Smads信号通路,发挥抗肺纤维化的作用。     

佐剂性关节炎大鼠心肺功能损伤与NF-κBp65/TNF-α、TGF-β1/Smads信号通路激活的相关性研究

目的研究佐剂关节炎(AA)大鼠心肺功能变化与NF-κBp65/TNF-α、TGF-β1/Smad通路的关系。方法将30只大鼠随机均分为正常对照(NC)组和模型对照(MC)组,向MC组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml致炎,复制成AA模型。致炎19 d后,观察大鼠足跖肿胀度、关节炎指数(AI),采用超声诊断仪检测大鼠心功能、小动物肺功能仪检测肺功能变化,免疫印迹法检测大鼠心肺NF-κBp65、TNF-α、TGF-β1、Smad2、Smad4、Smad7蛋白表达。结果与正常组比较,AA大鼠足趾肿胀,AI升高,心肺功能参数降低,心肺组织NF-κBp65、TNF-α、TGF-β1、Smad2、Smad4蛋白表达升高,Smad7降低(P0.01或P0.05);相关性分析显示,AA大鼠心肺功能参数与NF-κBp65/TNF-α、TGF-β1/Smad通路存在关联。结论 AA大鼠心肺功能损伤可能与NF-κBp65/TNF-α、TGF-β1/Smad通路过度激活有关。     

人参皂苷Rg1和Rb1对流感病毒感染细胞的影响及其机制研究

目的 研究人参皂苷Rg1和Rb1对流感病毒感染所致的细胞氧化应激损伤、细胞内转录因子(NF-κB和AP-1)转录活性及前炎症细胞因子IL-8释放的影响.方法 甲型流感病毒H3N2作为刺激因素,以DCFH-DA为探针,流式细胞仪检测细胞内活性氧(iROS)产生水平.利用双荧光素酶顺式报告系统,检测人参皂苷Rg1和Rb1对NF-κB-luc及AP-1-luc相对荧光素酶值的影响.RT-PCR法进一步验证人参皂苷Rg1和Rb1对IL-8 mRNA表达水平的影响.结果 病毒感染后细胞中ROS产生增加45%～55%,而给予有效浓度人参皂苷Rg1和Rb1后,荧光强度降低,与正常细胞内自由基含量基本相同.通过NF-κB及AP-1双荧光素酶报告系统检测发现,与正常对照组比较,病毒感染的细胞中NF-κB及AP-1荧光素酶报告活性明显升高;与病毒损伤组比较,人参皂苷Rg1、Rb1治疗组NF-κB及AP-1荧光素酶报告活性明显受到抑制.RT-PCR结果显示人参皂苷Rg1和Rb1能明显抑制病毒诱导的IL-8 mRNA表达水平的变化,使之趋近于正常对照组水平.结论 人参皂苷Rg1和Rb1可拮抗病毒感染细胞中ROS产生水平、降低氧化应激敏感的信号传导通路NF-κB及AP-1的转录活性,并抑制二者下游靶基因IL-8表达.     

人参皂苷Rg1通过自噬抑制Raw 264.7巨噬细胞凋亡

目的探讨人参皂苷Rg1在血清剥夺诱导的Raw 264.7巨噬细胞自噬和凋亡中的作用及其机制。方法体外培养小鼠Raw 264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、不同时间(12、24、36、48和60h)血清剥夺处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+不同时间(24、36和48h)血清剥夺处理组;依据最佳血清剥夺时间进一步分为空白对照组、血清剥夺(36h)处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+血清剥夺(36h)处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+血清剥夺(36h)+3-甲基腺嘌呤(3-MA)(5mmol/L,1h)处理组。采用Western blotting检测LC3、Atg 5、Beclin 1、cleaved Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白水平的表达变化;采用免疫荧光双标记检测细胞内LC3蛋白水平表达的变化;采用Hoechst 33342/PI荧光双染检测细胞凋亡的变化。结果不同时间(12、24、36、48和60h)血清剥夺诱导Raw264.7巨噬细胞凋亡;与血清剥夺处理组相比,人参皂苷Rg1处理组LC3、Atg 5及Beclin 1蛋白表达水平显著上调;加入3-MA抑制剂后,凋亡细胞较人参皂苷Rg1处理组明显增多,且Bcl-2蛋白表达水平明显下调的同时,cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达水平则显著上调。结论人参皂苷Rg1通过促进血清剥夺诱导的Raw 264.7巨噬细胞自噬,发挥抗凋亡的保护作用。     

NF-κB在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达组织因子中的作用探讨

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:使用一定剂量的抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物处理THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR(RT-qPCR)检测细胞TF mRNA水平,TF活性试剂盒检测TF活性;Western blot检测细胞NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65及NF-κB抑制蛋白IκB-α的表达情况;进一步采用NF-κB抑制剂(PDTC)观察是否能干预抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的刺激效应,并利用上游信号分子MAPKs的抑制剂观察抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对NF-κB p65磷酸化的影响。结果:抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)能够诱导THP-1细胞表达TF mRNA及活性,与对照相比差异显著(P<0.05);能够增强细胞内NF-κB p65磷酸化(P<0.05 vs media),降低IκB-α水平(P<0.05 vs media);NF-κB抑制剂PDTC(20μmol/L)能够抑制抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF及NF-κB磷酸化的效应;MAPKs抑制剂均能影响抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞NF-κB p65磷酸化。结论:在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,NF-κB被激活并发挥重要作用,MAPKs为NF-κB的关键上游分子。     

人参皂苷Rg1对H_2O_2诱导的293T细胞NF-κB转录活性影响

目的:观察人参皂苷Rg1对H_2O_2诱导HEK293T细胞损伤过程中NF-κB转录活性的影响,探讨人参皂苷Rg1的抗氧化机制.方法:H_2O_2模拟氧化应激条件,MTT法和台盼蓝染色法检测人参皂苷Rg1对细胞生长的影响;以DCFH-DA为探针流式细胞仪检测细胞内ROS水平;利用双荧光素酶顺式报告系统,检测人参皂苷Rg1对荧光素酶报告基因NF-κB-Luc相对荧光素酶值的影响,以检测人参皂苷Rg1是否具有下调H_2O_2诱导的NF-κB转录激活的作用.结果:H_2O_2诱导损伤的293T细胞存活率随H_2O_2浓度的增高而下降,相同H_2O_2浓度下,人参皂苷Rg1预保护组细胞存活率较损伤组显著提高(P＜0.05);H_2O_2处理后细胞内自由基明显增加,其荧光强度增加了40%～50%,而给予有效浓度的人参皂苷Rg1后,荧光强度降低35%～40%;与正常对照组比较,H_2O_2模拟氧化应激条件下,HEK293T细胞中NF-κB荧光素酶报告活性明显升高(P＜0.05),而在人参皂苷Rg1预保护组则明显受到抑制(P＜0.05).结论:人参皂苷Rg1对H_2O_2所致的细胞氧化应激损伤具有明显的保护作用,其可能机制是有效地清除了细胞内过多的自由基,下调了转录因子NF-κB的转录活性,继而抑制了NF-κB通路的激活.     

葛根素通过TLR4/NF-κB诱导结肠癌sw480细胞死亡的作用机制

目的探讨葛根素(puerarin,Pue)通过TLR4/NF-κB信号通路诱导结肠癌sw480细胞死亡的作用机制。方法结肠癌sw480细胞给予50μmol/L Pue培养24 h,48 h和72 h后,细胞计数CCK-8法检测结肠癌sw480细胞的存活率;TUNEL法检测结肠癌sw480细胞凋亡;Real-Time PCR法和Western blot法检测结肠癌sw480细胞中TLR4、NF-κB和Caspase 3的基因和蛋白表达水平。结果与对照组相比,葛根素组中sw480细胞存活率显著降低,细胞凋亡显著增加,差异有统计学意义(P0.05);与对照组相比,葛根素组中TLR4、NF-κB和Caspase 3 m RNA水平和蛋白表达含量均明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论葛根素可以显著抑制结肠癌sw480细胞生长,诱导细胞凋亡的发生,且TLR4/NF-κB信号通路在此过程中起到重要作用。     

赖氨大黄酸通过抑制EGFR信号通路诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡

目的 研究赖氨大黄酸(RHL)对人宫颈癌CaSki细胞增殖、凋亡的影响及EGFR信号通路在其中的作用.方法 应用MTT法检测RHL对CaSki细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot检测EGFR信号通路蛋白表达水平及其蛋白磷酸化水平.结果 RHL能有效抑制宫颈癌CaSki细胞增殖,48和72 h的ⅠC50值分别是84.57 μmol/L和74.79μmol/L,RHL能诱导CaSki细胞凋亡,随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐升高;RHL能够抑制EGFR、AKT蛋白磷酸化,并显著下调NF-κB、BCL-2及Survivin蛋白的水平(P＜0.01),同时RHL还上调BAX蛋白的表达(P＜0.01).结论 RHL可能通过EGFR/AKT/NF-κB/Survivin信号通路诱导CaSki细胞凋亡.     

白桦脂醇对Aβ25-35诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用

目的探讨白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用。方法 MTT法预实验证实10μmol/L Aβ_(25-35)的浓度对细胞活力无影响,但是影响炎症因子分泌,遂以10μmol/L Aβ_(25-35)作用于BV2细胞,实验随机分为对照组、模型组、白桦脂醇5、10和20μmol/L组,采用MTT法检测细胞的存活率、Western blotting检测NF-κB信号通路蛋白(NF-κB P65、IκBα、p-NF-κB P65、p-IκBα)表达水平及炎症诱导酶环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的水平,以及炎症因子白细胞介素1β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α)及IL-10水平。结果 Aβ_(25-35)浓度为10μmol/L时,对BV2细胞存活率无影响。白桦脂醇浓度在0～20μmol/L时低毒性、细胞活力无变化。白桦脂醇预处理组IκBα、NF-κB P65的蛋白表达水平升高,p-NF-κB P65和p-IκBα的蛋白表达水平显著降低,COX-2、iNOS的水平显著降低,促炎因子IL-1β、TNF-α的表达降低,而抑炎因子IL-10的表达升高。结论白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的BV2细胞的炎症反应有抑制作用,通过NF-κB信号通路,抑制iNOS及COX-2蛋白表达,并抑制TNF-α和IL-1β水平,提高IL-10水平。     

转化生长因子β1诱导胃癌细胞AGS分泌VEGF-C的机制研究

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导胃癌细胞AGS分泌血管内皮生长因子C(VEGF-C)的分子机制。方法体外培养胃癌细胞系AGS细胞,将其分为未刺激组、TGF-β1刺激组、TGF-βR抑制剂组、DMSO组、Smad3抑制剂组、NF-κB抑制剂组、MEK1/2抑制剂组、p38/MAPK抑制剂组以及JNK抑制剂组。除未刺激组外,其余各组均用TGF-β1刺激细胞,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中VEGF-C的水平。结果TGF-β1刺激组的VEGF-C分泌水平显著高于未刺激组,差异有统计学意义(P<0.05),TGF-β1能够诱导AGS细胞分泌VEGF-C,并具有剂量和时间依赖性。在TGF-β1刺激的条件下,TGF-βR抑制剂组及Smad3抑制剂组AGS细胞分泌的VEGF-C水平均显著低于DMSO组,差异有统计学意义(P<0.01);而NF-κB、MEK1/2、p38/MAPK和JNK抑制剂组中VEGF-C水平与DMSO组比较差异则无统计学意义(P>0.05)。结论TGF-β1可通过其受体及下游的Smad3信号通路诱导AGS细胞分泌VEGF-C,从而有助于胃癌的淋巴转移。     

去乙酰化酶1在人参皂苷Rg1体内正向调控造血干/祖细胞衰老中的作用

目的:探讨去乙酰化酶1(SIRT1)在人参皂苷Rg1体内正向调控造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老中的作用。方法:免疫磁性分选法分离纯化雄性供体小鼠Sca-1~+HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。~(60)Coγ射线致死剂量辐射雌性受体鼠后分4组,照射对照组、衰老模型组、Rg1治疗衰老组和Rg1预防衰老组。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养和细胞周期分析检测Rg1体内调控Sca-1~+HSC/HPC衰老的作用。荧光定量PCR及免疫印迹检测衰老调控分子SIRT1、核因子-κB(NF-κB)mRNA及蛋白的表达。结果:连续移植后受体鼠Sca-1~+HSC/HPC出现细胞衰老特征,随移植代数的增加,Sca-1~+HSC/HPC G_0/G_1期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降。与同代衰老模型组相比,Rg1治疗衰老组及Rg1预防衰老组受体鼠Sca-1~+HSC/HPC G_0/G_1期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高;SIRT6 mRNA及蛋白表达上调,NF-κB mRNA及蛋白表达下调;Rg1预防衰老组各指标变化均较Rg1治疗衰老组明显。结论:Rg1可能通过调控SIRT1/NF-κB信号轴发挥其在连续移植过程中抗Sca-1~+HSC/HPC衰老的作用。