Janus激酶2/信号转导和转录激活子3信号通路在心肌细胞缺氧损伤中的作用

目的探讨Janus激酶2/信号转导和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在心肌细胞缺氧损伤中的作用。方法体外培养的新生大鼠心肌细胞,构建缺氧模型,按随机数字表法分为正常对照组、缺氧组、JAK2抑制剂AG490处理组和STAT3抑制剂Statti c处理组。采用细胞计数试剂盒CCK-8检测心肌细胞活力,采用比色法检测细胞上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,并采用缺口末端标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡率。采用蛋白质印迹(Western blot)检测JAK2及STAT3蛋白表达及磷酸化情况。结果与正常对照组相比,缺氧组心肌细胞成活率明显降低,为对照组的30.14%±6.23%(P<0.01),细胞上清液中LDH、MDA含量升高明显,分别为(50.11±2.58)U/L和(19.55±1.81)mol/L(均为P<0.01),SOD活力则显著降低,为(10.21±0.57)U/ml(P<0.01),缺氧组凋亡率明显升高,为24.24%±4.37%(P<0.01),JAK2、STAT3磷酸化水平上调。AG490及Stattic预处理后,JAK2及STAT3磷酸化水平降低,心肌细胞成活率明显升高(P<0.01),LDH、MDA含量显著低于缺氧组(均为P<0.01),SOD活力则高于缺氧组(P<0.01)。结论 JAK2/STAT3信号通路参与了缺氧所致心肌细胞损伤,抑制JAK/STAT通路有助于减轻缺氧所致心肌损伤。     

姜黄素后处理通过JAK2/STAT3信号通路拮抗心肌缺血/再灌注损伤

目的:观察姜黄素（curcumin,Cur）后处理对离体心肌缺血/再灌注损伤(ischemia and reperfusion injury,I/RI)的拮抗作用及其可能的机制。方法: 40只SD大鼠随机分为5组(n=8),即空白对照(Ctl组)、缺血/再灌注组(I/R组)、I/R+姜黄素后处理组(I/R+Cur组)、I/R+姜黄素后处理+AG490组(I/R+Cur+AG组)及AG490组（AG组）,AG490为JAK2/STAT3信号通路特异性阻断剂。采用离体大鼠心脏Langendoff逆行灌注模型,缺血60 min,再灌注60 min。分别于缺血前及再灌注后15 min、30 min、45 min和60 min,测定血流动力学各项指标,包括:心率（HR）、左心室发展压（LVDP）、左心室内压力上升的最大速率(+dp/dtmax)、冠脉流量（CF）、计算出心率压力指数（DP,LVDP×HR/1000）。用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定各组心肌梗死(MI)的面积,用Western blot检测各组JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3以及磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达。结果: 与Ctl组比较,I/R组各时间点的收缩及舒张功能均显著降低(P<0.01),MI面积显著增加(P<0.01),磷酸化JAK2和STAT3的表达明显升高(P<0.01)。与I/R组比较,I/R+Cur组各时间点的心肌收缩及舒张功能下降程度明显减轻(P<0.01),MI的面积明显减少(P<0.01),p-JAK2和STAT3的表达更高(P<0.01)。与I/R+Cur组相比,I/R+Cur+AG组各时间点的收缩及舒张功能显著降低(P<0.01),MI的面积显著增加(P<0.01),p-JAK2和STAT3的表达显著下降(P<0.01);和Ctl组相比,AG组血流动力学和MI的面积无统计学差异。结论: Cur后处理对I/R大鼠心肌具有保护作用,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路的活化有关。     

山药多糖对脓毒症大鼠心肌损伤及JAK2/STAT3信号通路的影响

[目的]探索山药多糖(RDPS-Ⅰ)对脓毒症大鼠心肌损伤及酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。[方法]将90只大鼠随机分为RDPS-Ⅰ低(1.0 g/kg)、中(2.0 g/kg)、高(3.0 g/kg)剂量组及模型组、阳性对照组、假手术组。通过取出盲肠进行结扎、穿孔的方法复制脓毒症大鼠,造模完成后,RDPS-Ⅰ低、中、高剂量组分别给予相应剂量RDPS-Ⅰ灌胃,阳性对照组予以200 mg/kg剂量皮下注射4 mL/kg的氨苄西林溶液,其余两组给予生理盐水,每12 h干预1次,连续干预6天。干预结束后,检测大鼠血流动力学指标平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、心率(HR);苏木精-伊红(HE)染色观察脓毒症大鼠心肌组织病理学变化;TUNEL染色检测脓毒症大鼠心肌细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中炎症因子水平;Western blot检验大鼠心肌组织中JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平。[结果]相比于假手术组,模型组大鼠心肌组织排列紊乱,出现严重炎症细胞浸润现象,LVSP、HR、MAP降低56%、54%、5...     

N-乙酰半胱氨酸通过抑制JAK2/STAT3信号通路对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否通过抑制JAK2/STAT3信号通路对高糖诱导的内皮细胞损伤起保护作用。方法 体外分别应用不同浓度NAC对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行预处理,筛选出NAC减轻高糖诱导的HUVEC细胞毒性的最佳浓度。使用最佳浓度的NAC预处理高糖诱导的HUVEC,通过CCK-8检测细胞存活率,Hoechst33258核染色荧光显微镜照相法检测内皮细胞凋亡的形态学改变,Western blot检测JAK2/STAT3信号通路的蛋白表达水平,DCFH-DA检测细胞内活性氧水平,ELISA检测相关炎症因子细胞间黏附分子1(ICAM-1)、核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的含量;荧光探针JC-1检测线粒体膜电位的变化。结果 应用7 mmol/L NAC预处理HUVEC 30 min可明显减轻高糖诱导的HUVEC损伤,使细胞存活率升高,细胞凋亡数量减少,细胞凋亡蛋白cleaved Caspase-3表达减少,胞内活性氧堆积及线粒体膜电位丢失减少(P＜0.01)。NAC能抑制高糖对p-JAK2、p-STAT3表达的上调作用(P＜0.01),同时可抑制高糖诱导的炎症反应,使炎症因子ICAM-1、NF-κB、TNF-α及白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的水平下降(P＜0.01)。结论NAC能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路对高糖诱导的HUVEC损伤起到保护作用。     

茵陈蒿汤抑制JAK2/STAT3信号通路调控肝癌细胞增殖与凋亡

目的 探索茵陈蒿汤的抗肝癌作用及其机制.方法 体外培养HepG2肝癌细胞,分为对照组和茵陈蒿汤低、中、高浓度(12.5、25、50μg/mL)组.通过CCK-8检测细胞活力、EdU染色观察茵陈蒿汤对HepG2肝癌细胞增殖的影响,钙黄绿素/PI细胞染色观察茵陈蒿汤对肝癌细胞存活能力的影响.通过Western blot检测...     

尼古丁通过抑制JAK/STAT通路对HUVECs增殖和凋亡的影响研究

目的探究尼古丁通过抑制JAK/STAT通路促进人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的作用机制。方法将HUVECs分为4组,即对照组、尼古丁1组、尼古丁2组、尼古丁3组,分别在培养基中加入终浓度为0、10-8、10-7、10-6 mol/L的尼古丁培养24 h。显微镜观察细胞形态。CCK-8和流式细胞术分别用于检测细胞活力和凋亡。Western blot和PCR分别用于检测蛋白和mRNA的表达水平。结果显微镜观察尼古丁会使HUVECs呈现萎缩状态。尼古丁可剂量依赖性的抑制HUVECs活力,并且剂量依赖性的促进HUVECs凋亡。尼古丁可显著的抑制p-JAK/t-JAK和p-STAT/t-STAT的水平。尼古丁可显著的提高Caspase-3和Bax mRNA的水平,抑制Bcl-2 mRNA的水平。结论尼古丁可能通过下调JAK/STAT通路调节凋亡相关蛋白的表达,抑制HUVECs活力并促进其凋亡。     

温阳通脉方通过JAK2/STAT3信号通路保护大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨温阳通脉方是否通过Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号转导通路,调节水通道蛋白(AQP)的表达,发挥对缺血再灌注心肌组织的保护作用。方法将30只雄性SD大鼠随机分为5组,每组6只:假手术组、模型组及温阳通脉方低剂量治疗组、中剂量治疗组和高剂量治疗组。将大鼠灌胃给药14天后,结扎心脏左冠状动脉前降支,按缺血30 min再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。全自动生化分析仪检测各组大鼠的血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH);心电图检测大鼠ST段抬高情况;HE染色观察心脏组织病理形态学变化;免疫组织化学染色检测心肌组织中AQP1、AQP4蛋白的表达;Western blot检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、AQP1、AQP4的蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清中的CK-MB、LDH含量显著上升(P0.01),缺血30 min与再灌注120 min后心电图的ST段显著抬高(P0.01),HE染色显示模型组的心肌细胞损伤严重,AQP1、AQP4免疫组织化学表达明显增多(P0.01),JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、AQP1、AQP4的蛋白表达均明显升高(P0.01)。与模型组相比,给药大鼠CK-MB、LDH水平明显降低(P0.01),缺血30 min与再灌注120 min后的ST段均降低(P0.01),心肌细胞损伤均可见不同程度减轻,AQP1、AQP4免疫组织化学表达明显减少,JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3整体的表达呈升高趋势,尤其是p-JAK2和p-STAT3的表达(P0.01),AQP1、AQP4的水平均有不同程度降低(P0.01)。结论温阳通脉方的心肌保护作用可能与激活JAK2/STAT3信号通路,下调AQP1和AQP4的表达有关。     

铁皮石斛多糖对缺血性脑卒中大鼠脑组织JAK/STAT3信号通路的影响

[目的]探讨铁皮石斛多糖(DOP)对缺血性脑卒中大鼠脑组织Janus激酶(JAK)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路的影响。[方法]以线栓法建立大脑中动脉闭塞大鼠模型。SD大鼠随机分为模型组、DOP低剂量(25μg/g)组、DOP中剂量(50μg/g)组、DOP高剂量(100μg/g)组、依达拉奉组,每组12只;另取12只SD大鼠设为假手术组。经药物干预后,以Longa分级法对各组大鼠进行神经功能缺损评分;通过三苯基氯化四氮唑染色检测大鼠脑梗死情况;苏木精-伊红染色观察大鼠海马神经组织病理形态变化;酶联免疫吸附法检测大鼠脑组织炎性细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、环氧合酶2(COX-2)、白细胞介素6(IL-6)水平;Western blot检测大鼠脑组织JAK/STAT3信号通路相关蛋白表达水平。[结果]与假手术组相比,模型组大鼠海马神经元皱缩、变小,变性坏死,结构破损,排列紊乱,且数目明显减少,海马神经组织整体呈现明显病理损伤,神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织IFN-γ、COX-2及IL-6水平、p-JAK/JAK、p-STAT3/STAT3明显升高(P<0....     

Epigenetic dysregulation of the Jak/STAT pathway by frequent aberrant methylation of SHP1 but not SOCS1 in acute leukaemias

SOCS1 and SHP1 are negative regulators of the Jak/STAT signalling pathway that is implicated in leukaemogenesis. We studied if aberrant methylation of SOCS1 and SHP1 might be involved in the pathogenesis and prognostication of acute leukaemias by methylation-specific polymerase chain reaction (MSP). At diagnosis, methylation of SHP1 occurred more frequently in acute myeloid leukaemia (AML) (n=26, 52%) than acute lymphoblastic leukaemia (ALL) (n=6, 24%) (p=0.02). Methylation of SOCS1 was absent in both AML and ALL patients. SHP1 methylation was not associated with specific clinicopathologic features and had no prognostic impact on AML patients. Frequent methylation of SHP1, but not SOCS1, may be important in the pathogenesis, but not prognosis, of acute leukaemias.     

JAK/STAT信号通路及其负调控因子SOCS与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化是多因素疾病,也是心脑血管疾病的重要病理基础.JAK/STAT信号通路与动脉粥样硬化的发生、发展以及防治密切相关,本文就该通路及其负调控因子SOCS与动脉粥样硬化的关系作一概述.     

miR-140-3p通过靶向趋化因子受体4和抑制JAK2/STAT3通路减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤

目的]探讨miR-140-3p对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制。[方法]构建体外心肌细胞H/R模型,使用miR-140-3p mimics、趋化因子受体4(CXCR4)过表达质粒转染H9c2细胞。噻唑蓝法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;反转录聚合酶链反应和Western blot检测细胞中miR-140-3p、CXCR4、Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的激活以及凋亡相关蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与CXCR4的靶向关系。相应试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性和炎症因子、活性氧(ROS)的水平。[结果]体外H/R可抑制miR-140-3p的表达,上调CXCR4表达和JAK2/STAT3通路的磷酸化,诱导H9c2细胞凋亡而抑制H9c2细胞增殖,促进炎症因子和ROS的释放并上调LDH的活性。miR-140-3p可以通过靶向CXCR4 3′UTR抑制CXCR4表达,从而抑制JAK2/STAT3通路的磷酸化激活,抑制炎症因子和ROS的释放,下调LDH的活性,促进H9c2细胞增殖而抑制其凋亡。[结论]miR-140-3p可能通过靶向抑制CXCR4而抑制JAK2/STAT3通路,从而减轻缺血再灌注诱导的心肌细胞损伤。     

抑制JAK/STAT信号通路对心力衰竭大鼠心功能的 影响抑制JAK/STAT信号通路对心力衰竭大鼠心功能的 影响

目的：通过使用AG490抑制JAK/STAT信号通路探讨抑制该通路对心力衰竭大鼠血流动力学及BNP的影响。方法：实验大鼠随机分为3组,对照组(n=15);心力衰竭组(n=15),缩窄腹主动脉直径至0.45mm;AG490药物干预组(n=15),腹主动脉缩窄术后每周经腹腔注射AG490。术后观察大鼠生存情况,分别在4周和8周后应用超声心动图检测IVSd 、LVPWd 、LVEDd、LVEDs和LVEF,并于第8周测量BNP的变化。结果：4周时心衰组大鼠IVSd、LVPWd、LVEDs、LVEDd、LVEF与对照组和AG490干预组均有差异(P<0.05),IVSd、LVEDd、LVEF干预组和对照组差异无统计意义(P>0.05)。8周时3组大鼠各项超声检测指标均有明显差异(P<0.05),心衰组变化更明显(P<0.05)。心衰组大鼠血清BNP明显高于其余两组(P<0.01),AG490干预组BNP高于对照 组,低于心衰组,差异具有统计学意义 (P<0.05)。结论： JAK/STAT信号通路参与慢性心力衰竭进程,干预JAK/STAT信号通路可减轻腹主动脉缩窄大鼠心力衰竭的严重程度。     

JAK/STAT信号通路在大鼠类风湿关节炎模型发病过程中的表达

目的探讨JAK／STAT信号通路在大鼠类风湿关节炎（RA）发病过程中的表达及意义。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为6组，对照组8只，其余均建立胶原诱导的关节炎（CIA）模型，分别在致敏后2、3、4、5、6周分批处死，应用苏木素-伊红（HE）染色、免疫组织化学及免疫印迹法检测发病不同时期滑膜组织的病理变化及P—STAT1、P—STAT3的表达。结果致敏后2周大鼠出现关节炎表现，HE染色可见滑膜组织增生及炎性细胞浸润；第4周关节肿胀达到高峰，病理显示典型血管翳形成；第6周部分软骨及骨组织受到破坏。在CIA发病过程中STAT1、STAT3均处于激活状态．与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。但二者表达存在时间上的差异．STAT3处于持续激活状态，而STAT1的激活只局限在疾病的中晚期。结论JAK／STAT信号通路参与了CIA的病理过程，针对性阻断JAK／STAT通路可能达到改善RA病理过程的目的。     

骨髓增生异常综合征患者JAK2和STAT5基因表达的变化

目的:比较骨髓增生异常综合征(MDS-RA)型与MDS-RAEB型患者外周血JAK2、STAT5基因表达水平,探索JAK2和STAT5信号转导在MDS发病中的作用。方法:建立JAK2、STAT5基因表达的荧光定量FQ-PCR检测方法,检测10例正常人、15例MDS-RA患者和10例MDS-RAEB患者外周血JAK2、STAT5基因表达水平及其自细胞介素(IL)-2、IL-3、γ干扰素(γ-INF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)细胞因子水平。结果:正常人IL-2、IL-3、γ-INF、TNF-α分别为50．28±14．19、29．15±5．47、26．17±5．36、31．12±8．73;MDS-RA患者分别为51．16±13．44、67．72±10．19、43．39±13．08、62．36±12．78;MDS-RAEB患者为19．55±21．86、28．74±15．52、64．34±27．35、82．13±17．79。正常人JAK2、STAT5基因不表达或低表达,拷贝数分别为480．07±609．17、116．05±173．87,MDS-RA患者分别为4 725．63±3 931．59、1 265．36±1 087．80,显著高于正常人(均P<0．01); MDS-RAEB患者分别为23006．11±11 311．10、13 144．55±8 493．36,显著高于MDS-RA患者(均P<0．01)。结论:细胞因子及其相关的JAK2和STAT5基因参与了MDS的发病及其恶性转变,JAK和STAT可能是MDS细胞由低危MDS-RA型向高危MDS-RAEB型恶性转化的信号通路之一。     

JAK2/STAT3 activation by melatonin attenuates the mitochondrial oxidative damage induced by myocardial ischemia/reperfusion injury

Ischemia/reperfusion injury (IRI) is harmful to the cardiovascular system and causes mitochondrial oxidative stress. Numerous data indicate that the JAK2/STAT3 signaling pathway is specifically involved in preventing myocardial IRI. Melatonin has potent activity against IRI and may regulate JAK2/STAT3 signaling. This study investigated the protective effect of melatonin pretreatment on myocardial IRI and elucidated its potential mechanism. Perfused isolated rat hearts and cultured neonatal rat cardiomyocytes were exposed to melatonin in the absence or presence of the JAK2/STAT3 inhibitor AG490 or JAK2 siRNA and then subjected to IR. Melatonin conferred a cardio‐protective effect, as shown by improved postischemic cardiac function, decreased infarct size, reduced apoptotic index, diminished lactate dehydrogenase release, up‐regulation of the anti‐apoptotic protein Bcl2, and down‐regulation of the pro‐apoptotic protein Bax. AG490 or JAK2 siRNA blocked melatonin‐mediated cardio‐protection by inhibiting JAK2/STAT3 signaling. Melatonin exposure also resulted in a well‐preserved mitochondrial redox potential, significantly elevated mitochondrial superoxide dismutase (SOD) activity, and decreased formation of mitochondrial hydrogen peroxide (H₂O₂) and malondialdehyde (MDA), which indicates that the IR‐induced mitochondrial oxidative damage was significantly attenuated. However, this melatonin‐induced effect on mitochondrial function was reversed by AG490 or JAK2 siRNA treatment. In summary, our results demonstrate that melatonin pretreatment can attenuate IRI by reducing IR‐induced mitochondrial oxidative damage via the activation of the JAK2/STAT3 signaling pathway.     

汉黄芩素调节JAK/STAT信号通路并诱导肺癌A549细胞凋亡及周期阻滞的作用及机制研究

目的 研究汉黄芩素对肺癌A549细胞凋亡、周期及对JAK/STAT信号通路的调节作用.方法取对数生长期的肺癌A549细胞,采用低(20μmol/L)、中(40μmol/L)、高(80μmol/L)剂量的汉黄芩素分别干预24 h、48、72 h,MTT法测定不同浓度汉黄芩素对肺癌A549细胞的增殖抑制率,实时定量PCR检...     

肝复康对肝纤维化大鼠肝组织JAK2和STAT3表达的影响

目的观察中药肝复康对肝纤维化大鼠肝组织Janus激酶2（JAK2）及信号转导子和转录激活子3（STAT3）表达的影响,并对其在JAK2/STAT3信号通路上治疗肝纤维化的作用机制进行初步探讨。方法采用10%四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型,于造模第9周给予肝复康治疗12周。通过测定血清中ALT、AST活性及白蛋白和总蛋白的含量来反映肝脏功能,HE染色法观察肝组织病理学变化,RT-PCR观察JAK2和STAT3 mR-NA的表达。结果经肝复康治疗后,中剂量治疗组与模型组相比较,肝脏的组织学和血清学指标均明显改善,肝组织JAK2、STAT3 mRNA的表达显著减少（P〈0.01）。结论 （1）JAK2/STAT3信号通路在肝纤维化的形成过程中起重要作用;（2）肝复康对肝纤维化有疗效,其作用机制可能与降低肝组织JAK2和STAT3的表达,阻断JAK2/STAT3信号通路有关。     

JAK2-STAT3信号通路在大鼠脑出血模型中的作用

目的探讨大鼠脑出血后JAK2-STAT3信号通路的作用机制及与脑水肿的关系。方法健康雄性SD大鼠108只,经尾动脉取血缓慢注射到尾状核区制作大鼠脑出血模型。根据出血时间不同,采用随机数字表法将其分为3 h、9 h、1 d、3 d、5 d和7 d 6组,每个组又分为3个亚组:模型组、假手术组和AG490组。采用免疫组织化学和Western印迹检测JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3的表达,并测定脑组织含水量。结果与假手术组和AG490组相比,模型组中p-JAK2和p-STAT3大量表达,并于24 h时达到高峰;与模型组相比,AG490组大鼠脑组织含水量在各时间点均较低。结论脑出血后能够激活JAK2-STAT3信号通路,并导致脑组织水肿。