纳米递送系统在mRNA肿瘤疫苗中的研究进展

肿瘤疫苗是肿瘤免疫治疗中极具发展前景的治疗策略之一,其通过递送肿瘤抗原促进抗原递呈过程,进而激活抗肿瘤免疫反应。信使RNA (messenger RNA, mRNA)疫苗是一种新型疫苗,通过向体内递送特定抗原的mRNA序列并表达相应抗原蛋白,从而激活机体免疫系统达到免疫治疗的目的。mRNA疫苗与传统疫苗相比具有生产周期短、有效性高和免疫原性强等优势,近年来mRNA疫苗在肿瘤免疫治疗中的应用引起广泛关注,但mRNA的不稳定性和低递送效率限制了其应用。纳米递送系统能有效解决mRNA疫苗递送的难题,极大地促进mRNA肿瘤疫苗的研究进程和临床应用,已成为mRNA疫苗研究的热点。本文对mRNA肿瘤疫苗进行介绍,重点对纳米递送系统在mRNA肿瘤疫苗中的应用进行综述,以期为mRNA肿瘤疫苗高效递送及肿瘤免疫治疗提供新思路和新方法。     

基于脂质载体的mRNA疫苗递送系统研究进展

转录信使RNA（mRNA）具有安全有效的蛋白质表达谱,在遗传病新疗法、表达功能性蛋白和抗体、疫苗或基因编辑的开发上具有良好的应用前景。随着病原生物学与免疫学的发展,mRNA疫苗凭借其高效性与稳定性而愈发被重视。目前,有效的体内递送手段是mRNA疫苗所面临的较大挑战,脂质载体的mRNA疫苗递送系统具有靶向性强、包封率高、细胞亲和性好的特点,部分脂质载体能够使mRNA疫苗在体内以非侵入性的方式进行靶向递送。从mRNA疫苗递送的主要难点、脂质载体在mRNA疫苗递送中的研究现状以及针对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的mRNA脂质载体疫苗开发进展,共3个方面总结了目前基于脂质载体的mRNA疫苗递送系统研究进展,并对未来的基因疫苗递送系统研究方向进行展望。     

应用于mRNA疫苗的非病毒载体递送系统研究进展

核酸疫苗相较传统疫苗,能诱导更加全面、持久的免疫应答反应,且易于快速生产。其中,mRNA疫苗抗原设计精确,耐受性良好,免疫应答强烈,表达机制比DNA疫苗更为安全和简单,具有十分广泛的应用前景。然而,mRNA疫苗稳定性较差,且难以穿过细胞膜,设计能够保护mRNA疫苗并将其运送到靶细胞发挥作用的递送系统至关重要。综述目前应用于mRNA疫苗体内递送的脂质、聚合物、肽类及其他非病毒载体和（或）递送系统的特点及研究现状,并对其研究前景进行展望。     

mRNA疫苗技术概述及新型冠状病毒肺炎mRNA疫苗的研究进展

mRNA疫苗技术的发展受到分子本身不稳定、自身免疫原性高以及体内递送效率低等因素的限制,经过30多年的研究,近年来随着其稳定性、高效传递系统方面的技术日趋成熟,肿瘤和传染病mRNA疫苗研究进展明显。与传统疫苗技术相比,该技术可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫,疫苗生产工艺简单、研发周期短、成本低,便于标准化生产,适用于大流行疾病和传染病暴发流行期间的疫苗开发和生产,是一种应用前景广阔的疫苗。在当前新型冠状病毒肺炎全球大流行的背景下,本文从mRNA疫苗的特征、疫苗递送系统入手,结合新型冠状病毒肺炎mRNA疫苗的研究现状进行了分析和阐述,以期为后续的mRNA疫苗研究开发提供参考依据。     

mRNA疫苗工程设计要点分析

介绍mRNA疫苗的产品工艺及生产特性,从规范角度介绍mRNA疫苗生产场所的工程工艺和空调系统设计,供m RNA疫苗生产企业和设计同行参考。     

脂质和聚合物载体作为mRNA递送系统的研究进展

信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA）作为一种非常有潜力的基因药物,在蛋白质替代疗法、疫苗、基因编辑等方面具有广阔的应用前景。而安全高效的mRNA递送系统是其临床转化成药的关键。脂质和聚合物载体因其结构多样、制备简便等优势,被广泛用于mRNA递送。两者均能有效负载mRNA并保护其不被降解,促进其被靶细胞摄取,快速逃逸并释放mRNA,提升mRNA递送效率。通过对不同类型脂质和聚合物载体在mRNA递送中研究进展进行综述,以期为后续设计新型mRNA递送载体提供思路及参考。     

冠状病毒疫苗全球相关专利分析

基于以往涉及冠状病毒疫苗的相关专利信息,对其现状和发展趋势进行分析。自从2002年严重急性呼吸道系统综合征（SARS）暴发以来,冠状病毒疫苗专利申请量在2003年达到高峰;自从2012年中东呼吸综合征暴发以来,冠状病毒疫苗专利申请量在2012~2015年有小幅增长。从重点申请人和疫苗类型的分析得出,目前针对冠状病毒以核酸疫苗、灭活疫苗和病毒载体疫苗为主,这也与我国和美国已经进入临床试验的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）3类疫苗类型相吻合。     

不同条件对RiboGreen法检测mRNA疫苗中mRNA含量的影响

目的 探讨RiboGreen法检测mRNA疫苗中mRNA含量可能的影响因素。方法 在不同裂解液浓度、裂解时间、样品稀释浓度和参比品条件下,使用RiboGreen荧光染料法对不同生产工艺的mRNA疫苗的mRNA含量进行检测。结果 在裂解液为0.1%〜2.5% Triton X-100、裂解5〜30 min、样品稀释至mRNA含量0.5〜1.5 μg/ml时,mRNA含量检测结果的差异无统计学意义;不同参比品序列下样品mRNA含量检测结果差异有统计学意义。结论 根据检测样品的mRNA含量的回收率,初步确定了mRNA疫苗中mRNA含量检测的最适条件。     

mRNA疫苗纳米递送系统研究进展及监管考量

目的:汇总分析国内外信使核糖核酸(mRNA)疫苗纳米递送系统的研究进展及关键技术,为mRNA疫苗产品开发、质量控制及上市后监管提供参考.方法:通过文献调研,对已上市产品/临床试验阶段产品进行分析,并参考国内外指导原则,梳理目前研究较多的mRNA疫苗纳米递送系统的特点及质量控制要点.结果 与结论:对纳米递送平台,包括聚合...     

三款mRNA疫苗制备工艺技术分析

与传统的灭活疫苗相比,mRNA疫苗免疫原性强,可同时激活体液免疫和细胞免疫,另外还具有开发周期短、广谱性、成本低和可大规模快速量产等优势,可有效应对突发性、变异快以及大规模的疫情。作为一种新的疫苗开发路径,mRNA疫苗在技术工艺上有很多新的特色和挑战。该研究以Pfizer/BioNTech公司的mRNA疫苗BNT162b2、Moderna公司的mRNA-1273,以及国内多家单位联合开发的ARCoV这3款新型冠状病毒疫苗为例,从抗原选择、核苷修饰及脂质体纳米颗粒(LNP)制剂制备等方面,对mRNA疫苗的开发设计和制备工艺进行了梳理分析,并讨论了当前面临的挑战和未来的发展方向,旨在为mRNA疫苗技术的开发和应用提供参考。     

在美国申请的艾滋病疫苗专利分析

目的:了解在美国申请的艾滋病(即获得性免疫缺陷综合征,AIDS)疫苗专利情况,为我国艾滋病疫苗的研发提供参考。方法:采用HIV vaccine(s)、AIDS vaccine(s)、Vaccine of HIV(AIDS)等关键词和A61K、A61P、C12P等分类号相结合的方法,在Thomson Innovation平台检索1981年1月-2015年3月的相关专利,对检索到的专利数据及其专利申请发展趋势、机构研发能力概况、专利技术领域分布等进行分析。结果:共检索到1 272项专利,其中有效专利405项。AIDS疫苗专利申请量从1985-2014年经历了缓慢上升期、快速上升期和缓慢下降期,总体呈上升趋势;研发实力较强的机构有杜克大学、美国卫生及公共服务部、巴斯德研究所、康诺特公司以及默克公司;AIDS疫苗的研发重点集中在医药配制品、药物治疗活性、微生物、酶等方面,其中美国科研机构在医药配制品和多肽的研究上关注较多。结论:艾滋病疫苗领域虽整体发展缓慢,但还有很大的上升空间。美国的科研机构在该领域具备较强的专利优势和科研实力。艾滋病疫苗的研发以医药配制品、药物治疗活性及组合物为主。     

mRNA疫苗创造的经济与社会价值分析

信使RNA（mRNA）疫苗可创造显著经济价值,其研发过程相对简单,可以快速投入生产、快速部署,相比其他技术路线的疫苗,mRNA疫苗具有一定的成本优势,且疗效好,可节约一定的社会医疗成本,作为肿瘤疫苗、新型冠状病毒肺炎及其他传染病疫苗都将产生巨大的经济价值。同时,mRNA疫苗作为一门新技术,具有显著社会价值,可带动上下游相关产业的发展、相应企业的技术升级与转型、以及相应基础科研的蓬勃发展,促进我国持续健全创新体系,完善产业创新生态;并且,mRNA疫苗国产化有利于提升产业链稳定性。通过对mRNA疫苗所创造的社会与经济价值进行分析,同时对于其相关产业链以及国产化情况进行梳理,以期更好地认识mRNA疫苗可创造的价值及在我国的发展现状,为我国公共卫生事业的发展提供参考。     

mRNA疫苗作用机制的研究进展

信使RNA（messenger RNA,mRNA）疫苗属于第三代疫苗,即核酸疫苗,具有细胞内表达速度快、有效性和安全性高、反应速度快、易规模化扩大和极具成本效益比等特点,在近30年中取得了突飞猛进的发展,越来越多的证据表明可以用合理的方法来提高这类现代疫苗的有效性和安全性。2020年暴发的由新型冠状病毒引起的新型冠状病毒肺炎大流行给全世界带来了巨大的灾难,导致了过亿例感染和数百万例死亡,疫苗被认为是阻断传播和控制疾病的唯一希望。在所有的疫苗种类中,mRNA疫苗极快的研发速度和有效性引起了广泛的关注。此综述就mRNA疫苗的体内摄取和抗原表达、固有免疫的作用、适应性免疫的激活、mRNA疫苗递送系统以及注射途径的效应等角度进行阐述,以期为mRNA疫苗的设计提供有价值的参考。     

预防传染病mRNA疫苗原材料、原液质控要点分析

目的：梳理归纳预防传染病mRNA疫苗原材料和原液质控要点,为我国此类产品质量控制提供参考。方法：通过梳理世界卫生组织及相关标准和审评机构关于预防传染病mRNA疫苗原材料、原液质控指导文件,以及相关监管指南和文献,总结归纳预防传染病mRNA疫苗原材料和原液关键质量控制属性及相关要求。结果与结论：作为新型生物制品,mRNA疫苗核酸结构和脂质体包裹制剂的特性决定了该类疫苗质控特点,序列和完整性、含量及纯度、加帽率和包封率是mRNA疫苗特有的、决定有效性和安全性的关键质量参数。从原材料和原液制备阶段就建立多个与mRNA特性相关的质控要点及其检测方法,将有助于保障预防传染病mRNA疫苗安全有效、质量可控。     

新型冠状病毒肺炎疫苗专利分析及研发策略研究

依据专利数据分析全球及我国目前在新型冠状病毒肺炎疫苗(简称新冠疫苗)领域的研究进展,对现有疫苗的主要类型和热点技术进行统计,为未来疫苗的研发提供合理建议。使用Innojoy专利搜索引擎和Baiten专利网进行专利数据检索,并利用技术预测概念模型进行技术预测。目前新冠疫苗的研究热点主要分布在利用抗原、抗体、肽类与基因工程相关技术的领域,我国对于新冠疫苗的研究多集中于重组蛋白/表位/多肽/亚单位疫苗与核酸疫苗,技术热点集中于抗原改进技术。全球及我国目前在新冠疫苗领域的研究已经取得了一些进展,且专利市场活跃,短期内新冠疫苗相关专利市场与技术格局有望趋于成熟。     

预防传染病mRNA疫苗成品质量控制要点分析

mRNA疫苗已经开发近30年,但由于生产环节、稳定性和反应原性存在一定的技术瓶颈,导致mRNA疫苗发展较为缓慢。如今,基于预防COVID-19的mRNA疫苗的应用,充分验证了预防传染病mRNA疫苗的有效性和安全性。本文通过梳理WHO及药品监管和标准化机构关于预防传染病mRNA疫苗成品质控的指导文件,总结归纳预防传染病mRNA疫苗成品关键质量控制属性及相关要求,旨在为中国预防传染病mRNA疫苗质量控制提供参考。     

幽门螺杆菌疫苗递送系统的研究进展

幽门螺杆菌感染是慢性胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃肠癌等消化道疾病的主要病因。目前疫苗已成为控制幽门螺杆菌感染的一种有效手段,但需一定的递送系统才能发挥出预期药效。因此,疫苗递送系统成为近年来研究活跃的领域之一。本文总结了近年来幽门螺杆菌疫苗递送系统的研究进展,并主要对微粒、脂质体、冻干粉、复乳及凝胶、纳米疫苗等方面的研究进行综述。     

抗病毒纳米颗粒疫苗的研究进展

疫苗是防控传染病最为经济有效的手段之一。通过疫苗接种,人类已消灭天花和脊髓灰质炎疾病。然而大多数危害人类的病毒仍缺乏有效的疫苗,同时某些RNA病毒,如流感病毒、新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的高突变性致使现有疫苗效力不断减弱,因此开发安全、高效的通用疫苗十分必要。纳米颗粒疫苗可展示多重不同优势抗原表位从而诱导更强更广谱的免疫保护,故纳米颗粒疫苗备受关注。综述纳米颗粒疫苗给药方式及其在激发宿主免疫应答、递呈抗原和递送药物方面的优势,重点介绍几种常用纳米颗粒疫苗载体及其优缺点,以及针对SARS-CoV-2的纳米颗粒疫苗的最新临床进展,旨在为新型抗病毒疫苗的研发提供参考。     

小核酸药物配体缀合递送技术专利分析

目的 为中国小核酸药物研发企业的研发战略规划和专利战略制定提供参考。方法 通过智慧芽专利数据库检索小核酸药物配体缀合技术相关专利,通过人工标引的方式筛选获得该领域的核心专利及外围专利。首先对相关专利整体进行申请趋势分析,其次对小核酸药物配体缀合3类技术的核心专利进行详细分析。结果与结论 从整体来看,小核酸药物配体缀合递送技术绝大多数核心专利均掌握在Ionis、Alnylam、Arrowhead、Arbutus等国际顶尖核酸药物研发企业手中,而中国企业的研究能力和专利布局强度较弱。小核酸药物配体缀合递送技术主要包括半乳糖衍生物缀合递送技术、脂质衍生物缀合递送技术、细胞穿透肽缀合递送技术。其中最具发展潜力的是半乳糖衍生物缀合递送技术。脂质衍生物缀合递送技术近年来相对于半乳糖衍生物缀合递送技术所受到的关注度相对较低,多数专利布局时间过早,大都处于失效状态。细胞穿透肽缀合递送技术近年来越来越受到重视。     

中和抗体检测应用于新型冠状病毒mRNA疫苗效力分析

目的 通过对新型冠状病毒（2019 novel coronavirus,2019-nCoV）mRNA疫苗（简称新冠mRNA疫苗）免疫小鼠后产生的中和抗体进行检测,探索中和抗体检测法应用于mRNA疫苗体内效力评价的可行性。方法 采用6～8周BALB/c小鼠进行后肢肌肉免疫,检测不同免疫剂量和不同免疫程序的中和抗体滴度。并对8家企业生产的新冠mRNA疫苗免疫的小鼠血清进行中和抗体和IgG抗体检测。结果 2 µg、5 µg、10 µg不同剂量mRNA疫苗按照不同免疫程序免疫小鼠后中和抗体检测结果显示,抗体阳转率均为100%,中和抗体反应有明显的剂量-效应关系。2针间隔14 d加强免疫组抗体滴度显著高于间隔7d加强免疫组及一针组（F=57.13, P<0.001）。2 µg剂量间隔7 d加强免疫和间隔14 d加强免疫产生的中和抗体几何平均滴度（geometric mean titer,GMT）分别为218和468,差异有统计学意义（t=3.40, P=0.003）;5 µg剂量间隔7 d加强免疫和间隔14 d加强免疫产生的中和抗体GMT分别为499和1 436,差异有统计学意义（t=3.62,P=0.002）;10 µg剂量间隔7 d加强免疫和间隔14 d加强免疫产生的中和抗体GMT分别为608和1 909,差异有统计学意义（t=3.23,P=0.005）。国内8家企业生产的新冠mRNA疫苗免疫小鼠后均可产生高滴度的IgG抗体(104.5～107.5)和中和抗体(102.6～104.8),效力测定结果均符合企业质量标准。各企业生产的mRNA疫苗的中和抗体滴度结果差异有统计学意义（F=70.03,P＜0.001）。结论 小鼠免疫后中和抗体检测可用于mRNA疫苗的体内效力评价。